CC BY
0
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
Пыхтеева М. В.1, Трухина Д. А.1, Мамаев А. Н.2, Томилина О. П.1, Кошеед И. В.1, Терехов С. С.1, Тараненко И. А.3, Григорьева Е. В.3,
Кудинов А. В.3, Момот А. П.3
РЕЗУЛЬТАТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФИБРИН-МОНОМЕРА У БОЛЬНЫХ С СЕПТИЧЕСКИМ ДВС-СИНДРОМОМ МЕТОДАМИ,
ОСНОВАННЫМИ НА ИММУНОТУРБОРИМЕТРИИ
1КГБУЗ «Краевая клиническая больница», г. Барнаул, 2Алтайский филиал ФГБУ«НМИЦ
Введение. Определение фибрин-мономера (ФМ), находящегося в плазме крови человека в свободной форме, либо в составе растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК), имеет клиническое значение в ряде клинических ситуаций — при диагностике артериальных и венозных тромбозов, диссеминированного внутрисосуди-стого свертывания крови (ДВС-синдром), а также для мониторинга антикоагулянтной пофилактики и терапии.
Цель работы. Заключалась в сравнительном определенииуровня ФМу пациентов с септическим ДВС (на основе иммунотурбодимет-рии) при использовании отечественной и зарубежной тест-систем.
Материалы и методы. В исследование были включены образцы крови 60 пациентов обоего пола, направленных для обследования в лабораторию патологии гемостаза КГБУЗ «Краевая клиническая больница» (г. Барнаул), в том числе 37 наблюденийу пациентов с септическим
Набор реагентов №1 Набор реагентов №2
Рис. Уровень фибрин-мономера у больных с септическим ДВС-синдромом при использовании различных тест-систем.
гематологии» Минздрава России, 3ФГБУ«НМИЦ гематологии», Минздрава России
ДВС-синдромом из отделения гнойной хирургии и 23 условно здоровых пациента контрольной группы. Кровь забирали из локтевой вены в пластиковую пробирку, содержащую 3,2—3,8% раствора цитрата натрия в соотношении 9:1. Стабилизированную кровь центрифугировали при 1200—1600 g в течение 15 минут, в результате получали бедную тромбоцитами плазму (БТП) и осуществляли её отбор на анализ непосредственно после центрифугирования. Исследование проводилось с использованием следующих наборов: «TS-Фибрин-мономер» (ООО фирма «Технология-Стандарт», Россия — набор реагентов № 1), «STA Liatest FM» («Diagnostica STAGO», Франция — набор реагентов № 2). Измерения проводились на коагулометре «Technology Solution 190» («Technology Solution», Россия). Статистическая обработка полученных данных осуществлена с использованием компьютерных алгоритмов «Microsoft Excel» 2003 и «Statistica» v.6.0. Статистически значимыми считали различия^<0,05. Дляучета сопоставимости результатов определения разными диагностическими системами использовали ранговый коэффициент корреляции Спирмена (R)-
Результаты и обсуждение. В группе контроля содержание ФМ в плазме крови не превышало нормальные значения (менее 6,0 мкг/мл). В то же время у пациентов с септическим ДВС-синдромом уровень данного высокомолекулярного производного фибриногена был статистически значимо выше контрольных значений (^<0,0001) — при использовании обеих задействованных тест-систем (набор реагентов № 1: Ме=9,7; 025=4,9; 075=23,6; набор реагентов № 2: Ме=8,2; 025=4,1; 075=30,0). Как следует из представленного рисунка, не было обнаружено статистически значимых различий между полученными данными. При сравнении данных тест-систем (я=60) была выявлена статистически значимая корреляционная связь (R=0,87, ^<0,0001).
Заключение. У пациентов с септическим ДВС-синдромом было выявлено повышение уровня ФМ с помощью как зарубежных, так и отечественных тест-систем. Несмотря на определенные различия в использовании тех или иных моноклональных антител, представленные методы исследованияуровня ФМ в плазме крови демонстрируют сопоставимость результатов исследования, что документируется высокими показателями корреляции между ними.
Пятиизбянцев Т. А., Шакирова А. И., Сергеев В. С., Лепик К. В., Попова М. О., Кулагин А. Д.
НОВАЯ ПРОГРАММИРУЕМАЯ НУКЛЕАЗА ЕВСЬПА-ЕМРи-ТАЬЕК ДЛЯ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ СЕРПОВИДНОКЛЕТОЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
И Р-ТАЛАССЕМИИ
ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Введение. Серповидноклеточные болезни и ß-талассемии относятся к одной из наиболее распространенных в мире группе наследственных заболеваний — гемоглобинопатий Генетическая модификация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) с целью коррекции генетического дефекта обладает потенциалом излечения их тяжелых форм. Реактивация экспрессии фетальной формы гемоглобина (HbF) является одной из приоритетных стратегий в этом направлении. Ключевую роль в регуляции генов HBG1/2, ответственных за формирование у-субъединиц HbF, в ходе онтогенеза отводят трансрегу-ляторному фактору транскрипции BCL11A, который ответственен за прекращение их экспрессии и формирование взрослой формы гемоглобина. Генная терапия посредством нарушения энхансерной последовательности гена, кодирующего BCL11A (eBCLlla), в ГСК способствует значительному снижению его экспрессии иувеличению продукции HbF в ходе эритропоэзау больных.
Цель работы. Целью настоящей работы было создание новой программируемой нуклеазы TALEN для высокоэффективного внесения мутаций в локус eBCLlla для разработки генной терапии СКБ и ß-таласемии на платформе аутологичной трансплантации ГСК.
Материалы и методы. Дизайн нуклеазы TALEN (eBCLlla-FMPU-TALEN) производили с использованием онлайн-инструмен-та PROGNOS с учетом минимизации числа in ditico предсказанных
потенциальных внецелевых мишеней для ДНК-распознающего домена и гетеродимерной архитектуры нуклеазного домена. In vitro транскрипцию мРНК eBCLlla-FMPU-TALEN для трансфекции осуществляли с помощью комплекта реагентов mMessage mMachine Т7 ULTRA Transcription kit (Invitrogen, США) на матрице синтетическои плазмид-ной ДНК, кодирующей левое и правое плечо нуклеазы. Эффективность формирования коротких инсерций и делеций (InDels) в целевом ло-кусе оценивали в модельных клетках К562 после их трансфекции методом электропорации с использованием набора двух мРНК, кодирующих левое и правое плечи eBCLlla-FMPU-TALEN, в соотношении 1:1 в суммарной концентрации 25 мкг/мл. Для оценки эффективности трансфекции проводили одновременную электропорацию мРНК GFP. После этапа посттрансфекционного культивирования при 320Св течение 24 часов и далее при 370С в течение 96 часов, из клеток выделяли ДНК. Анализ целевой активности eBCLlla-FMPU-TALEN проводили методом цифровой капельной ПЦР
Результаты и обсуждение. Была разработана нуклеаза eBCLlla-FMPU-TALEN гетеродимерной архитектуры, специфичная к локусу +58 DHS эритроидного энхансера BCL11A. Анализ подтвердил возникновение мутаций типа InDels в целевом локусе в образцах, транс-фицированных мРНК eBCLlla-FMPU-TALEN. Рассчитанная относительно доли трансфицированных клеток целевая эффективность
