CC BY
0
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
Пыхтеева М. В.1, Трухина Д. А.1, Мамаев А. Н.2, Томилина О. П.1, Кошеед И. В.1, Терехов С. С.1, Тараненко И. А.3, Григорьева Е. В.3,
Кудинов А. В.3, Момот А. П.3
РЕЗУЛЬТАТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФИБРИН-МОНОМЕРА У БОЛЬНЫХ С СЕПТИЧЕСКИМ ДВС-СИНДРОМОМ МЕТОДАМИ,
ОСНОВАННЫМИ НА ИММУНОТУРБОРИМЕТРИИ
1КГБУЗ «Краевая клиническая больница», г. Барнаул, 2Алтайский филиал ФГБУ«НМИЦ
Введение. Определение фибрин-мономера (ФМ), находящегося в плазме крови человека в свободной форме, либо в составе растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК), имеет клиническое значение в ряде клинических ситуаций — при диагностике артериальных и венозных тромбозов, диссеминированного внутрисосуди-стого свертывания крови (ДВС-синдром), а также для мониторинга антикоагулянтной пофилактики и терапии.
Цель работы. Заключалась в сравнительном определенииуровня ФМу пациентов с септическим ДВС (на основе иммунотурбодимет-рии) при использовании отечественной и зарубежной тест-систем.
Материалы и методы. В исследование были включены образцы крови 60 пациентов обоего пола, направленных для обследования в лабораторию патологии гемостаза КГБУЗ «Краевая клиническая больница» (г. Барнаул), в том числе 37 наблюденийу пациентов с септическим
Набор реагентов №1 Набор реагентов №2
Рис. Уровень фибрин-мономера у больных с септическим ДВС-синдромом при использовании различных тест-систем.
гематологии» Минздрава России, 3ФГБУ«НМИЦ гематологии», Минздрава России
ДВС-синдромом из отделения гнойной хирургии и 23 условно здоровых пациента контрольной группы. Кровь забирали из локтевой вены в пластиковую пробирку, содержащую 3,2—3,8% раствора цитрата натрия в соотношении 9:1. Стабилизированную кровь центрифугировали при 1200—1600 g в течение 15 минут, в результате получали бедную тромбоцитами плазму (БТП) и осуществляли её отбор на анализ непосредственно после центрифугирования. Исследование проводилось с использованием следующих наборов: «TS-Фибрин-мономер» (ООО фирма «Технология-Стандарт», Россия — набор реагентов № 1), «STA Liatest FM» («Diagnostica STAGO», Франция — набор реагентов № 2). Измерения проводились на коагулометре «Technology Solution 190» («Technology Solution», Россия). Статистическая обработка полученных данных осуществлена с использованием компьютерных алгоритмов «Microsoft Excel» 2003 и «Statistica» v.6.0. Статистически значимыми считали различия^<0,05. Дляучета сопоставимости результатов определения разными диагностическими системами использовали ранговый коэффициент корреляции Спирмена (R)-
Результаты и обсуждение. В группе контроля содержание ФМ в плазме крови не превышало нормальные значения (менее 6,0 мкг/мл). В то же время у пациентов с септическим ДВС-синдромом уровень данного высокомолекулярного производного фибриногена был статистически значимо выше контрольных значений (^<0,0001) — при использовании обеих задействованных тест-систем (набор реагентов № 1: Ме=9,7; 025=4,9; 075=23,6; набор реагентов № 2: Ме=8,2; 025=4,1; 075=30,0). Как следует из представленного рисунка, не было обнаружено статистически значимых различий между полученными данными. При сравнении данных тест-систем (я=60) была выявлена статистически значимая корреляционная связь (R=0,87, ^<0,0001).
Заключение. У пациентов с септическим ДВС-синдромом было выявлено повышение уровня ФМ с помощью как зарубежных, так и отечественных тест-систем. Несмотря на определенные различия в использовании тех или иных моноклональных антител, представленные методы исследованияуровня ФМ в плазме крови демонстрируют сопоставимость результатов исследования, что документируется высокими показателями корреляции между ними.
Пятиизбянцев Т. А., Шакирова А. И., Сергеев В. С., Лепик К. В., Попова М. О., Кулагин А. Д.
НОВАЯ ПРОГРАММИРУЕМАЯ НУКЛЕАЗА ЕВСЬПА-ЕМРи-ТАЬЕК ДЛЯ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ СЕРПОВИДНОКЛЕТОЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
И Р-ТАЛАССЕМИИ
ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Введение. Серповидноклеточные болезни и ß-талассемии относятся к одной из наиболее распространенных в мире группе наследственных заболеваний — гемоглобинопатий Генетическая модификация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) с целью коррекции генетического дефекта обладает потенциалом излечения их тяжелых форм. Реактивация экспрессии фетальной формы гемоглобина (HbF) является одной из приоритетных стратегий в этом направлении. Ключевую роль в регуляции генов HBG1/2, ответственных за формирование у-субъединиц HbF, в ходе онтогенеза отводят трансрегу-ляторному фактору транскрипции BCL11A, который ответственен за прекращение их экспрессии и формирование взрослой формы гемоглобина. Генная терапия посредством нарушения энхансерной последовательности гена, кодирующего BCL11A (eBCLlla), в ГСК способствует значительному снижению его экспрессии иувеличению продукции HbF в ходе эритропоэзау больных.
Цель работы. Целью настоящей работы было создание новой программируемой нуклеазы TALEN для высокоэффективного внесения мутаций в локус eBCLlla для разработки генной терапии СКБ и ß-таласемии на платформе аутологичной трансплантации ГСК.
Материалы и методы. Дизайн нуклеазы TALEN (eBCLlla-FMPU-TALEN) производили с использованием онлайн-инструмен-та PROGNOS с учетом минимизации числа in ditico предсказанных
потенциальных внецелевых мишеней для ДНК-распознающего домена и гетеродимерной архитектуры нуклеазного домена. In vitro транскрипцию мРНК eBCLlla-FMPU-TALEN для трансфекции осуществляли с помощью комплекта реагентов mMessage mMachine Т7 ULTRA Transcription kit (Invitrogen, США) на матрице синтетическои плазмид-ной ДНК, кодирующей левое и правое плечо нуклеазы. Эффективность формирования коротких инсерций и делеций (InDels) в целевом ло-кусе оценивали в модельных клетках К562 после их трансфекции методом электропорации с использованием набора двух мРНК, кодирующих левое и правое плечи eBCLlla-FMPU-TALEN, в соотношении 1:1 в суммарной концентрации 25 мкг/мл. Для оценки эффективности трансфекции проводили одновременную электропорацию мРНК GFP. После этапа посттрансфекционного культивирования при 320Св течение 24 часов и далее при 370С в течение 96 часов, из клеток выделяли ДНК. Анализ целевой активности eBCLlla-FMPU-TALEN проводили методом цифровой капельной ПЦР
Результаты и обсуждение. Была разработана нуклеаза eBCLlla-FMPU-TALEN гетеродимерной архитектуры, специфичная к локусу +58 DHS эритроидного энхансера BCL11A. Анализ подтвердил возникновение мутаций типа InDels в целевом локусе в образцах, транс-фицированных мРНК eBCLlla-FMPU-TALEN. Рассчитанная относительно доли трансфицированных клеток целевая эффективность
При л о ж ен и е 1
нуклеазы еВСЬИА составила 83,3%. 1п ¿¿Исо поиск потенциальных внецелевых мишеней для еВСЫ1а-ЕМРи-ТАЬЕМ показал отсутствие таковых для пары из двух плечей-мономеров с количеством несовпадений с целевой мишенью 4 и менее.
Заключение. Разработана еВСЬПа-ЕМРи-ТАЬЕМ обладающая эффективностью более 80%, и низкой потенциальной внецелевой активностью, которая является перспективной для доклинической разработки и клинического применения.
Райе Н. В., Моор Ю. В., Просвирина Н. В. СКРИНИНГ АНТИТЕЛ К ЯДЕРНОМУ АНТИГЕНУ ВИРУСА ГЕПАТИТА В У ДОНОРОВ ГБУЗ НСО «НКЦК>
ГБУЗ НСО «Новосибирский Введение. Служба крови устанавливает особые требования к стандартам качества при тестировании образцов донорской крови. Несмотря на внедрение высокотехнологичного оборудования, передовых технологий исследований и реагентов с высокой чувствительностью и специфичностью, остается риск передачи гемотрансмиссив-ных инфекций (ГТИ). Согласно требованиям приказа МЗ РФ № 1166 от 28.10.2020 г. помимо скрининговых иммунологических исследований образцов крови доноров на декретированные маркеры ГТИ введен дополнительный маркер, антитела к ядерному антигену (анти-НВс) вируса гепатита В (ВГВ), с целью выявления латентной формы как одной из мер безопасности передачи ГТИ с компонентами крови.
Цель работы. Оценить частоту выявления анти-НВс ВГВ у доноров «НКЦК» запериод 01.2021-09.2023гг.
Материалы и методы. В исследование включено 168662 образца крови доноров. Тестирование проводили методом хемилюминесцент-ного анализа на анализаторе Ah.ni.ty 1 («АЪЪо^»), с использованием реагентов анти-НВс11 реагент («АЪЪо«»).
Результаты и обсуждение. С 01.2021 г. по 09.2023 г. в «НКЦК» исследовано 168662 образца донорской кровинамаркеры ВИЧ, ВГВ, ВГС и сифилиса. Выявлено 1381 (0,82%) положительных образцов от общего количества протестированных образцов. Распределение структуры брака следующее: маркеры ВИЧ (АГ/АТ ВИЧ1,2) — 75 образцов (0,042%), суммарные антитела ВГС-613 образцов (0,36%), НВэА§ — 210 образцов (0,12%), суммарные антитела к возбудителю сифилиса 309 образцов (0,18%), 22 (0,01%) положительных образца полученных методом молекулярно-биологического исследования (МБИ) и анти-НВс 152 (0,09%) образца. Дополнительно
клинический центр крови»
протестированы на антиНВс 1203 образца (87,1% от всех положительных образцов крови), из которых выявлено 152 образца (12,6%) с положительным анти-НВс ВГВ. Согласно приложению № 4 приказа МЗРФ № 1166н дополнительному иммунологическому исследованию на анти-НВс подлежали следующие категории доноров, при повторном сомнительном результате на НВэА§ исследовали 74 образца, из них в 6 образцах выявлен антиНВс (8,1%); при повторном обследовании донора после медицинского отвода 120 дней по ВИЧ, ВГВ и ВГС протестировано 919 образцов, из них в 102 образцах выявлен анти-НВс (11%); образцы из минипула с первичным положительным результатом МБИ на маркеры ВИЧ, ВГВ и ВГС, исследовано 210 образцов, из них в 44 образцах выявлен анти НВс (20,9%); Анализ донорского контингента с наличием анти-НВс показал следующее,по половой принадлежности преобладают мужчины — 61%, женщин — 39%. Распределение доноров по возрасту смещается на старшие возрастные группы, преобладающий возраст 41—50 лет (41%), доля повторных доноров 74%, первичных — 26%.
Заключение. Проведение исследований образцов крови доноров на анти НВсВГВ показывает актуальность. При анализе исследований выявлена зависимость получения положительного результата на ан-ти-НВс от возрастной группы доноров. С уменьшением возраста снижается встречаемость анти-НВс, что связано с профилактическими мероприятиями в рамках массовой иммунизации против ВГВ с 2001 г. Приоритетной группой доноров следует рассматривать лиц молодого возраста. Тестирование на анти-НВс ВГВ всех образцов донорской крови позволит исключить из числа доноров лиц с латентной формой ВГВ, снижая остаточный риск передачи ВГВ до минимального уровня.
Рехтина И. Г., Хышова В. А., Зозуля Н. И., Менделеева Л. П. ЭНДОТЕЛИАЛЬНАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ЦИТОРЕДУКТИВНОЙ ТЕРАПИИ СИСТЕМНОГО АЬ-АМИЛОИДОЗА
ФГБУ«НМИЦгематологии» Минздрава России
Введение. Важной проблемой в лечении пациентов системным AL-амилоидозом (AL-А) остается высокая летальность (10—33%) в период индукционной терапии вследствие сердечно-сосудистых осложнений. С целью снижения ранней летальности предлагают риск-адаптированную стратегию терапии со снижением доз и частоты введения химиопрепаратов. При этом патогенетический механизм токсичности применяемых препаратов в терапии AL-амилоидоза остается не известным.
Цель работы. Проанализировать динамику кардиомаркеров и маркеров эндотелиальной дисфункции (ЭД) у пациентов с AL-A в процессе проведения индукционной терапии.
Материалы и методы. В группу исследования вошли 30 пациентов cAL-A. Медиана возраста составила 59 лет (34—73 года). Индукционную терапию проводили по программе бортезомиб, циклофосфамид и декса-метазон (планировали 6 курсов). После каждого курса терапии определяли содержание кардиомаркеров: I тропонина и мозгового натрийуре-тического пептида (NT-proBNP). При повышении кардиомаркеров в 2 раза и более терапию прекращали до восстановления первоначальных значений. Методом имму но ферментного анализа в сыворотке определяли содержание асимметричного диметиларгинина (АДМА), большого эндотелина (6ЭТ) и К-селектина. Исследование выполняли до начала и после окончания химиотерапии. При повышении кардиомаркеров выполняли дополнительное исследование маркеров ЭД.
Результаты и обсуждение. Повышения концентрации тропонина I в период индукционной терапии по бортезомиб-содержащим программам не наблюдали. Однако у 10 (33%) пациентов наблюдали резкое в 2—5 раз нарастание содержания NT-proBNP после 1—3 курсов терапии. Повышение NT-proBNP сопровождалось декомпенсацией сердечной
недостаточности (у 3-х больных), тяжелыми нарушениями ритма (у 3-х пациентов) и у двоих больных наступила внезапная сердечная смерть. У 2-х больных повышение NT-proBNP не сопровождалось клиническими проявлениями. У всех пациентов с резким повышением NT-proBNP была диагностирована амилоидная кардиомиопатия, в 70% случаев — IIIA стадия AL-A. Подъем NT-proBNP во всех случаях сопровождался значимым повышением маркеров ЭД (таблица). Прогрессия AL амило-идоза была исключена ввиду снижения NT-proBNP до исходных значений через месяц после прекращения терапии. У 30% пациентов с AL-А в процессе индукционной терапии по программе бортезомиб, циклофосфамид, дексаметазон наблюдали повышение содержания NTproBNP в 2—5 раз от исходных значений. Нарастание кардиомаркеров сопровождалось повышением содержания маркеров ЭД. После прекращения терапии содержание NT-proBNP снижалось до исходных значений.
Заключение. Терапия системного AL-A с применением борте-зомиба, циклофосфамида, дексаметазона может вызывать дополнительное повреждение эндотелия сосудов, что является причиной развития сердечно-сосудистых осложнений. Пациентам с поражением сердца необходим мониторинг NT-proBNP после каждого курса терапии. Повышение NT-proBNP в 2 и более раз — показание к редукции доз и частоты введения химиопрепаратов.
Таблица. Динамика содержания маркеров ЭД у п ациентов с р езким повышением NT-proBNP на фонелечения
До лечения После лечения Р
Е-селектин, нг/мл, Ме (диапазон) 11,2 (5,5-16,4) 13,5(6,4-20,5) 0,007
6ЭТ, пмоль/л, Ме (диапазон) 0(0-0,8) 0,41 (0-1,26) 0,008
АДМА, мкмоль/л, Ме (диапазон) 0,53 (0,4-1,01) 0,8(0,49-1,8) 0,005
