CC BY
0
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
Кузьмина Е. А., Бидерман Б. В., Челышева Е. Ю., Шухов О. А., Степанова Е. А., Петрова А. Н., Немченко И. С., Быкова А. В.,
Гурьянова М. А., Кохно А. В., Туркина А. Г., Судариков А. Б.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОМАТИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ ГЕНОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Факторы риска неблагоприятного течения хронического миелолейкоза (ХЖЛ) активно изучаются в мире. Показано, что мутации генов, ассоциированных с миелопролиферативными заболеваниями (МПЗ), чаще выявляются в продвинутых фазах ХЖЛ и редко на момент диагностики в хронической фазе (ХФ). Для больных ХМЛ-ХФ с неудачей >2 линий терапии ингибиторами тиро-зинкиназ (ИТК) выбор тактики лечения остается трудной задачей, и поиск неблагоприятных прогностических молекулярных маркеров представляет интерес.
Цель работы. Определить спектр соматических мутаций в генах, ассоциированных с ЖПЗ, у больных ХЖЛ на разных этапах течения болезни.
Материалы и методы. Из>200 больных ХЖЛ, получающих терапию ИТК, сформированы две группы в зависимости от ответа на терапию: группа 1 (я=29) — больные в ХФ с резистентностью к >2 ИТК (я=21) и в фазе бластного криза (БК)(я=8); и группа 2 больные с молекулярным ответом (ЖО)(я=12). Для проведения высокопроизводительного секвенирования (ВПС) из биобанка лаборатории молекулярной гематологии НЖИЦ гематологии отобраны образцы ДНК, полученной из крови больных на момент оценки ответа на терапию. Для оценки динамики клонову части больных проводился анализ образцов во второй ретроспективной точке. В авторскую таргетную панель включены гены: ASXLl, DNMT3, FLT3, IDH1, IDH2,NPM1, RUNX1, SF3B1, SRSF2, ТЕТ2, ТР53, U2AF2, KIT, WT1, СЕВРА, ZRSR2, JAK2,
GATA2, АВЫ. Пробоподготовка проводилась с применением модулей Prep&SeqTM Utarget (PARSEOLAB, Россия), ВПС выполняли с использованием платформы Illumina.
Результаты и обсуждение. В группе 1 медиана относительной экспрессии ВСК::АВЫ на момент анализа составила 54% (диапазон 4—150%). У 19/29 (66%) больных обнаружено >1 мутации. Всего выявлена 31 мутация в 7 генах, от 1 до 4 мутаций на пациента (рис. 1). Жедиана аллельной нагрузки составила 29% (диапазон 5—50%). Наиболее часто определялись мутации в генах АВЫ — у 10 (35%) и-Лб'^Х/ув (28%) больных. Из 10 пациентов с мутацией АВЫ, 6 (60%) имели также другую мутацию. Сочетание мутаций АВЫ и А8ХЫ встречалосьу 3/29 пациентов (10%). Среди 8 больных с БКу 6 определялись >1 мутации: в генах .АВЫ у Зг КиМХ1 у 2 больных, в генах СЕВРА, ШМ! — по 1 больному. Из группы 1 у 19 пациентов
материал был доступен во второй ретроспективной точке, что позволило оценить динамику клонов. Из них у 8/19 обнаружено 10 мутаций на момент диагностики либо ранее на фоне лечения, и у 15/19 больных выявлено 27 мутаций на момент ответа.(рис. 2) В группу 2 включено 12 больных с уровнем ВСК::АВЫ<0,1%, всем анализ также проводился в динамике на момент диагностики. У 1/12 (8%) больных выявлена мутация .Д^^ТЭД на момент ЖО, которая не выявлялась при диагностике ХЖЛ. Еще у 1 больного на момент диагностики обнаружена мутация .ЛЛХА/, исчезнувшая при достижении ЖО.
Заключение. У резистентных больных ХЖЛ наиболее часто встречались мутации в генах ВСК::АВЫ и .ЛЛХА/, в т.ч. их сочетание у 10% больных. Показано, что мутации появляются со временем, что связано с генетической нестабильностью опухолевого клона. В группе 1 частота соматических мутаций составила 66%, в группе 2 — 8%. Для сравнения данных о частоте мутаций между группами требуется расширение выборки.
Рисунок 2. Динамика мутантных клонов у резистентных больных (п=19).
Число мутаций у больных с резистентностью или с бластным кризом (БК)
30 25 20 15 10 5
дНл^^
ABL1; 10
30 25 20 15 10 5
Ранее при диагностике/на На момент резистентности/Б К фоне лечения
Кузьминова Е.П., Урыбин И. Ю., Абдрахимова А. Р., Леонов Е. А., Хижинский С. П., Хамаганова Е. Г. ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИ-НЬА АНТИТЕЛ У ПАЦИЕНТОВ С ПОКАЗАНИЯМИ К АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В связи с широким распространением в последние годы аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) от гаплоидентичных родственных доноров и частично-совместимых неродственных доноров, актуален стал вопрос о пред-существующей анти-НЬА аллоиммунизации больного (наличии ан-ти-НЬА антител — АТ), которая в свою очередь может вызывать такое осложнение, как несостоятельность трансплантата (ИТ). Частота выявления анти-НЬА АТу больных с показаниями к алло-ТГСК может колебаться от 19,6 до 39,4%. Основными причинами анти-НЬА иммунизации могут быть предшествующие беременности, терапия компонентами крови, предыдущие трансплантации и в редких случаях присутствие «естественных» анти-НЬА АТ. Кроме того, по некоторым данным анти-НЬА АТ могут обнаруживаться после перенесенных
инфекций и даже после введения некоторых вакцин (в том числе против COVID-19). Однако не все выявляемые анти-НЬА АТ являются донор-специфическими (ДСА), то есть направленными к антигенным вариантам НЬА донора.
Цель работы. Определить частоту выявления анти-НЬА антител, включая донор-специфические, у больных с запланированной алло-ТГСК.
Материалы и методы. В работу были включены 292 пациента (138 мужчин и 154 женщины), с направлением на алло-ТГСК в ФГБУ «НЖИЦ гематологии» ЖЗ РФ от гаплоидентичного или частично-совместимого донора (за 01.2021—11.2023). Определение анти-НЬА АТ перед трансплантацией проводили наборами для скринингово-го анализа LIFECODES LifeScreen Deluxe в образцах сыворотки
При л о ж ен и е 1
крови с использованием технологии Luminex. Далее позитивные по результатам скрининга образцы тестировались с помощью наборов LIFECODES LSA Class I и/или Class II (Immucore, USA) для выявления AT к конкретной HLA-специфичности. После чего результаты последнего анализа сравнивались с результатами HLA-типирования доноров для выяснения, являются ли выявленные AT донор-специфическими. Для статистического анализа использовались методы описательной статистики.
Результаты и обсуждение. Среди 292 пациентов после проведения скрининга положительные результаты на наличие анти-HLA антител показали 65 человек (22,3%). Большую часть из них составили женщины. Специфичности выявленных антител показаны в табл. В 12 образцах (4,2% от общего числа больных) обнаруживались анти-HLA антитела к обоим классам HLA генов. При сравнении результатов по спектру обнаруживаемых антител у больного с результатами типирования предполагаемого донора ДСА были определены у 13 человек (4,5% от общего числа обследованных больных). Спектр ДСА включал специфичности к HLA-A, В, С, DRB1,3,5, DOA1, DOB1 антигенам. У 3 пациентов из 13 положительных по ДСА антитела определялись к обоим классам HLA антигенов.
Заключение. В нашем исследовании анти-HLA AT среди пациентов с показаниями к гаплоидентичной алло-ТГСК были выявлены к широкому спектру антигенов HLA, в том числе и к тем антигенам,
которые не входят в рутинную практику типирования при стандартном подборе донора (ООА1, ИР, ОКВЗ,4,5). Таким образом, в HLAтипиpoвaниe для гапло- и частично совместимых алло-ТГСК необходимо включать все полиморфные гены донора, по причине того, что они могут являться мишенями для донор-специфических антител пациента.
Таблица. Спектр выявленных предсуществующих анти-HLA антител у пациентов перед алло-ТГСК
Пациенты перед алло-ТГСК за период 01.2021 -11.2023 Негативные поАТ % Позитивные по AT %
п п
Число пациентов 227 77,7 65 22,3
Женщины 99 43,6 55 85
Мужчины 128 56,4 10 15
Антитела к молекулам:
Н1А-А - - 28 43,1
Н1А-В - - 31 47,7
Н1А-С - - 7 10,8
HLA-DR (DRB1) - - 22 33,8
(DRB3,4,5) - - 17 26,2
HLA-DQ - - 24 36,9
HLA-DP - - 8 12,3
Кулемина О. В.1, Яковлева Ю. С.2, Кудрявцева Е. С.1, Богданов К. В.1, Лазорко Н. С.1, Читанава Т. В.1, Сиордия Н. Т.1, Шналиева Н. А.1,
Точеная Е. Н.1, Матейкович П. А.1, Ломаиа Е. Г.1
¿Ш-НЕМУТИРОВАННЫЙ ЭРИТР0ЦИТ03 ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ НА ФОНЕ ТЕРАПИИ ИНГИБИТОРАМИ
ТИРОЗИНКИНАЗ
].А. Алмазова,
1ФГБУНМИЦим
Введение. Эритроцитоз редко встречается при хроническом ми-елоидном лейкозе (ХМЛ) и в ряде случаев ассоциирован с наличием истинной полицитемии (ИП). В нашем наблюдении описаны случаи развития эритроцитоза без подтвержденной ИП.
Цель работы. Уточнение причины эритроцитоза у пациентов
В ХФ хмл.
Материалы и методы. В ретроспективное исследование включено 9 пациентов (все — мужского пола) с развитием эритроцитоза в хронической фазе (ХФ) ХМЛ, которым проводилась терапия ИТК. Эритроцитоз определялся согласно критериям Всемирной организации здравоохранения 2016 года: гемоглобин (НЪ)>165 г/л и/или гема-токрит (НсТ)>49%. С целью исключения ИП проводилось исследование мутационного статуса ЛАК2 (ЛАК2У617Е, мутации в 12-м экзоне, неканонические мутации в 11-15-м экзонах, 863 п.о.), уровня эритро-поэтина (ЭПО) и гистологическое исследование костного мозга (вы-полненоу 3/9). С целью исключения вторичных причин проводилось: исключение стеноза почечных артерий, кардиоваскулярных заболеваний, Р50, спирометрия, оценка уровня тестостерона, экспрессии
УНЬ, НШа.
Результаты и обсуждение. На момент дебюта эритроцитоза медиана возраста составила 46 (20-55) лет, медиана длительности терапии ИТК — 159 (67— 214) мес. Медиана времени от начала терапии текущим ИТК до дебюта эритроцитоза — 11 (3—61) мес. Количество предшествующих ИТК варьировало от 0 до 4. На момент возникновения эритроцитоза проводилась терапия следующими ИТК: понатиниб (п=6), ни-лотиниб (п=2), бозутиниб (п=1) с достижением наилучших ответов на момент дебюта эритроцитоза: полный гематологический (я=2), молекулярный ответ 2 (я=2), по крайней мере, большой молекулярный ответ (п=5). Ни у кого из пациентов не было лейкоцитоза, тромбо-цитоза или спленомегалии. В анамнезе не было приема анаболических стероидов, допинга ЭПО, гемотрансфу-зий или диуретиков, 5/9 пациентов были курильщиками (не менее 5 лет). Средний прирост нъ с момента начала текущего ИТК составил 18 (4—42) г/л. Медиана пикового уровня НЪ и НсгЬ составила 179 (166—204) г/л и 54Д (50,7—62,4) %, соответственно (рис.). При медиане наблюдения 41 (17—103) мес. с дебюта эритроцитоза рис
ПациентЭ Пациенте Пациент 7 Пзциентб Пациент 5 Пациент4 Пациент 3 Пациент 2 Пациент!
!НИИ ДОГиТ им. P.M. Горбачевой он сохранялсяу всех пациентов, кроме одного, которому была проведена аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток. Проведение флеботомии потребовалось в 2 случаях. Не было отмечено кожных проявлений, микроваскулярных симптомов, а также тром-ботических событий. Ни у кого из пациентов не выявлены мутации JAK2 V617F, в 11-15-м экзонах JAK2. Гиперэкспрессия VHL, HIFla не выявлена в 6 доступных биообразцах. Во всех случаях, кроме од-ного,уровень ЭПО оставался в пределах референсных значений (медиана ЭПО 8,15 (2,19—45,29) miu/ml). Уровень тестостерона во всех случаях оставался также в пределах референсных значений. Данных в пользу ЭПО-продуцирующих опухолей, патологии почек, кардио-пульмональных заболеваний не получено. Гистоморфологических изменений, характерных для ИП, в имеющихся трепан о биоптатах, выявлено не было.
Заключение. Впервые описано развитие эритроцитоза неизвестного происхождения у пациентов в ХФ ХМЛ. Продолжено наблюдение за пациентами, планируется исключение других генетических аберраций дляуточнения причины эритроцитоза.
Сравнение медианы гемоглобина у пациентов с эритроцитозом в ХФ ХМЛ
60
■ Пиковый Hb
110
■ Медиана Hb на фоне ИТК
160 ; Медиана Hb да ИТК
