ВЛИЯНИЕ СРОКОВ ХРАНЕНИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ИХ ВЫЖИВАЕМОСТЬ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

При л о ж ен и е 1

Накастоев И. М., Гальцева И. В., Спицын В. К., Давыдова Ю. О., Байтерякова О. Н., Капранов Н. М., Гапонова Т. В. ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

ФГБУ«НМИЦгематологии» Минздрава России

Введение. Единственным методом длительного хранения стволовых клеток является криоконсервация. Одним из этапов процесса криоконсервации является подготовка полученной клеточной суспензии, включающая центрифугирование и разделение на несколько криоконтейнеров (при планировании 2 и более трансплантаций). По данным литературы хранение лейкоконцентрата до 72 часов при температуре от +2 до +4 0С, не оказывает негативного влияния на качество трансплантата. В 2022 году в ФГБУ «НМИЦ гематологии» при недостаточном количестве С034+ клеток, полученных за один день сбора, мы смешивали лейкоконцентраты полученные в течение 2—3 дней сбора в один криоконтейнер перед заморозкой.

Цель работы. Оценить влияние дополнительных манипуляций в виде смешивания лейкоконцентратов полученных в течение нескольких дней сбора на выживаемость криоконсервированных ге-мопоэтических стволовых клеток (ГСК).

Материалы и методы. В анализ было включено 32 криоконтей-нера заготовленных в течение нескольких дней и смешанных в один криоконтейнер перед криоконсервацией и 42 криоконтейнера, заготовленных за один день. Все исследованные образцы были до 1 года хранения. Методом проточной цитометрии было проанализировано количество ядросодержащих клеток (ЯСК), процент и абсолютное содержание нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов и С034+ клеток. Жизнеспособность оценивали с использованием красителя 7-амино-актиномицина О. Жизнеспособные клетки рассчитывали по отношению к общему количеству соответствующих клеток.

Результаты и обсуждение. Средняя выживаемость всех ЯСК составила 66,6% (34—91) для образцов, полученных из смешанных криоконтейнеров и 77% (32—99) для заготовленных за один день (Р= 0,068). При распределении средней выживаемости по различным популяциям лейкоцитов получены следующие данные: средняя выживаемость нейтрофилов составила 35% (4—70), моноцитов 80% (38—97), лимфоцитов 78% (27—98), стволовых клеток 79% (16—99,5) для смешанных лейкоконцентратов и 31% (5—73), 87% (58—98), 92% (75—99) и 94 (81—99,5) соответственно для заготовленных за один день. Статистически достоверная разница (^<0,05) получена для моноцитов, лимфоцитов и стволовых клеток, которые значимо хуже выживают при использовании смешивания клеток, полученных в течение нескольких дней сбора.

Заключение. По результатам, проведенных ранее исследований, хранение лейкоконцентрата при температуре от +2 до +4 0С в течение 48—72 часов не приводило к снижению выживаемости клеток. В нашем исследовании срок хранения перед криоконсервацией не превышал допустимых значений. По данным некоторых исследований высокая концентрация ЯСК в полученном лейкоконцентрате может оказывать негативное влияние на выживаемость клеток. Возможно сочетание таких факторов как высокая плотность ЯСК, хранение без заморозки более 24 часов и дополнительные манипуляции перед замораживанием (переливание в криоконтейнер, центрифугирование, разделение) приводят к апоптозу части клеток, что может приводить к запуску различных путей апоптоза в других клетках.

Накастоев И. М., Гальцева И. В., Спицын В. К., Давыдова Ю. О., Байтерякова О. Н., Егорова Е. К., Гапонова Т. В., Капранов Н. М.

ВЛИЯНИЕ СРОКОВ ХРАНЕНИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

НА ИХ ВЫЖИВАЕМОСТЬ

ФГБУ «НМИЦ гематоло

Введение. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является важным этапом лечения многих гематологических заболеваний. В некоторых случаях, полученные ГСК переливают не сразу после заготовки, а через несколько месяцев или даже лет. Единственным методом, позволяющим хранить лей-коконцентрат в течение нескольких лет, является криоконсервация. Криоконсервация это процесс низкотемпературного хранения клеток с возможностью восстановления их биологических функций после размораживания. В литературе есть сведения об успешном использовании стволовых клеток после 18 лет хранения. В то же время есть исследования, демонстрирующие негативное влияние длительного хранения на качество трансплантата.

Цель работы. Оценить влияние длительных (более 5 лет) сроков хранения на выживаемость криоконсервированных ГСК.

Материалы и методы. В анализ было включено 33 криоконтейнера со сроком хранения от 5 до 13 лет и 80 криоконтейнеров не более 1 года хранения. Во всех случаях криоконсервация проводилась с использованием диметилсульфоксида в концентрации 7%. Методом проточной цитометрии проанализировали количество ядросодержащих клеток (ЯСК) в образцах, процент и абсолютное содержание С034+ клеток, а также долю нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов от всех ЯСК. Жизнеспособность оценивали так же методом проточной цитометрии с использованием

гии» Минздрава России

красителя 7-аминоактиномицина D. Жизнеспособные клетки рассчитывали по отношению к общему количеству соответствующих клеток.

Результаты и обсуждение. Выживаемость всех ЯСК составила 61,5% (16—95) при сроке хранения более 5 лет и 77% (32—99) при сроке хранения до 1 года (Р=0,003). Выживаемость нейтрофилов составила 26% (4—55), моноцитов 79% (39—97), лимфоцитов 83% (60—96) и CD34+клеток 75% (17—96) при хранении более 5 лет и 31% (5—73), 89% (58-98), 92% (75-99) и 94% (81-99,5) соответственно для клеток, хранившихся менее 1 года. По данным литературы известно, что ней-трофилы значительно хуже переносят криоконсервацию чем другие популяции лейкоцитов. В нашем исследовании мы также получили значимое снижение выживаемости нейтрофилов по сравнению с другими популяциями клеток, однако, это не зависит от сроков хранения (p=0,34). Статистические различия по срокам хранения получены для выживаемости стволовых клеток (^<0,001), лимфоцитов (^<0,01) и моноцитов (p=0,045).

Заключение. Известно, что криоконсервация приводит к повреждению клеток. В литературе противоречивые данные относительно влияния сроков хранения на выживаемость ГСК. В результате нашего исследования мы установили, что длительный срок хранения приводит к достоверному снижению выживаемости CD34+ клеток лимфоцитов и моноцитов.

Наумова К. В., Гриценко Т. А., Носков К. К., Миронова Т. П., Самойлова Е. В. КЛИНИЧЕСКИЙ СЛУЧАЙ РАЗВИТИЯ ТЯЖЕЛЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИИ

ФГБОУ «Самарский государственный медицинский университет» МЗ РФ

Введение. Развитие сосудистых заболеваний, связанных с гипер- Цель работы. Представить клинический случай развития ослож-

гомоцистеинемией, можно предотвратить с помощью лечения фоли- ненийгипергомоцистеинемииупациента40лет.

евой кислоты и витаминами В6 и В12. Однако клиническая картина Материалы и методы. Изучены материалы истории болезни, ам-

некоторых патофизиологических состояний, вызванных гипергомо- булаторной карты и проведенных дополнительных методов исследо-

цистеинемией, может быть довольно тяжелой и необратимой. вания.