CC BY
19
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунологические проблемы в педиатрии Immunological problems in pediatrics
фосфатдегидрогеназы (ГФДГ) в лф. периферической крови с помощью проточной цитофлуориметрии на приборе CYTOMICS FC500 (Beckman Coulter, США). Активность ферментов оценивали в популяциях Т-лф (CD3+CD45+), включая ТЫ7-лф. (CD3+CD4+CD161+CD45+), регуля-торные Т-клетки (CD3+CD4+CD127low+CD45+), активированные хелперы (CD3+CD4+CD127h+CD45+) и ТЪ2-лф (CD3+CD4+CD294+CD45+), в В-лф (CD3-CD19+CD45+) и в NK-клетках (CD3-CD16+CD56+). Статистическая обработка полученных результатов была выполнена с помощью пакета Statistica 6.0, критерий Манна—Уитни.
Результаты. Было выявлено, что популяции Т-лф и NK-клеток характеризуются более высоким уровнем активности СДГ и ГФДГ, чем популяция В-лф (табл.). Активность СДГ в субпопуляциях лимфоцитов у пациентов с ГБ была достоверно ниже таковой в гр.ср. Активность ГФДГ была достоверно выше во всех исследованных популяциях по сравнению с гр.ср., что может свидетельствовать об активации иммунокомпетентных клеток и переключении энергообмена на аэробный гликолиз (эффект Варбурга). В популяциях ТЫ7-лф и активированных хелперах (основных эффекторных клеток) активность СДГ была выше, чем активность ГФДГ, тогда как в популяциях регуляторных Т-клеток и ^2-лф активности ферментов были приблизительно одинаковыми. Учитывая, что для активации эфекторных функций клетки требуется высокий уровень окислительного фос-форилирования, а у пациентов с ГБ отмечается сниженная активность СДГ, иммунокомпетентные клетки не могут выполнять свои эффекторные функции в полном объеме, что и приводит к частым интеркуррентным заболеваниям.
Выводы. Показатели активности внутриклеточных ферментов в популяциях лимфоцитов у пациентов с ГБ значимо отличались от показателей гр.ср. Рекомендуется проведение исследования метаболической активности иммунокомпетентных клеток во время плановой госпитализации пациентов в стационар для возможной коррекции выявленных нарушений с целью профилактики интеркуррентных заболеваний.
ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ У ДЕТЕЙ С КАРИЕСОМ
Милехина С.А., Климкина Т.Н.
ФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет», Владивосток. Россия
Введение. Кариес зубов относится к числу наиболее распространенных болезней человечества, существенно влияющих на состояние здоровья. Как свидетельствуют материалы исследований, стоматологическая заболеваемость среди детского населения России на протяжении нескольких лет остается весьма высокой (Кисельнико-ва Л.П., 2009; Кузьмина Э.М., 2010).
Цель. На основе анализа стоматологического статуса и мониторинга локального иммунитета дать клинико-им-мунологическую характеристику при кариесе зубов у детей.
Материалы и методы. Углубленно обследовано 104 человека с установленным диагнозом кариес в возрасте 7-14 лет, разного пола и 20 человек с интактными зубами (здоровые дети, группа контроля). Материалом исследования служили сыворотка крови и нестимулированная слюна. Исследование включало: изучение стоматологического статуса, определение секреторного IgА в слюне, оценки уровня TNFa, IL-ф, IL-6, IL-10, IL-13 в слюне и в сыворотке крови, оценки содержания растворимых рецепторов к цитокинам (sTNFa RII, IL-6 SR) в слюне
и в сыворотке крови методом ИФА. Использовали методы корреляционного анализа между количественным (г Пирсона) и качественными признаками — критерий х2, Спирмена.
Результаты. При оценке цитокинового профиля смешанной слюны у детей с кариесом установлено, что в общей группе статистически значимо повышен уровень как провоспалительных (TNFa, ГЬ-ф), так и противовоспалительных (Ш-10, Ш-13) цитокинов по сравнению с контролем. При субкомпенсированном кариесе увеличено содержание в слюне ТОТа (г = 0,8; р < 0,05) с недостаточностью его растворимого рецептора (г = -0,64; р < 0,05) в группе детей, нуждающихся в санации. В этой группе детей также установлено повышение ГЬ-6 (г = 0,76; р < 0,76) и его растворимого рецептора (г = 0,81; р < 0,02). Установлено, что уровень ГЬ-10 в слюне был выше при компенсированном кариесе, как в группе детей с санированной полостью рта, так и в группе, нуждающихся в лечении. Наиболее выраженное нарушение цитокинового профиля крови зарегистрировано у детей с субкомпен-сированным кариесом и несанированной полостью рта. Установлена гиперпродукция ТОТа, ^-1р, существенное увеличение растворимого рецептора Ш-6 и дефицит растворимого рецептора ТОТа II типа. Корреляционный анализ выявил прямую зависимость интенсивности кариеса с уровнем ГЬ-1р (г = 0,44; р < 0,05); растворимым рецептором ГЬ-6 (г = 0,63; р < 0,05) и обратную — с содержанием растворимого рецептора TNFa II типа (г = -0,72; р < 0,05) в сыворотке крови.
Заключение. Активация противовоспалительных цитокинов (Ш-10, Ш-13), индуцирующих выработку секреторного IgА (г = 0,82; 0,81; р < 0,05) определена при компенсированном кариесе. При субкомпенсиро-ванном кариесе зафиксировано истощение продукции противовоспалительных цитокинов, увеличение TNFa, Ш-6, его растворимого рецептора и дефицит растворимого рецептора TNFa II типа. Установлено увеличение sIgА в слюне детей с кариесом, особенно в возрастной группе 11-14 лет. У детей с кариесом выявлен дисбаланс цитокинового профиля сыворотке крови с превалированием провоспалительных медиаторов.
ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ КРОВИ У НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ
Осиков М.В., Альмухаметова О.Н.
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
Изменения иммунного статуса у недоношенных новорожденных (НН) сопряжены с высоким риском развития гнойно-септических осложнений и летальности. В то же время, сведения о регуляции иммунного ответа у НН, представленные в литературе, неоднозначны и противоречивы. Плейотропные эффекты эритропоэтина (ЭПО), в том числе иммунотропные, при различной патологии у взрослых, продемонстрированные в клинических и в экспериментальных условиях, а также сведения об эффектах ЭПО у НН в отношении коррекции анемии, неврологических расстройств, позволяют предположить его влияние на иммунный статус у НН.
Цель. Исследовать влияние ЭПО на концентрацию некоторых цитокинов в крови у НН.
Материалы и методы. Работа выполнена на 30 новорожденных в Клинике ФГБОУ ВО ЮУГМУ Мини-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ТАБЛИЦА. ВЛИЯНИЕ ЭПО НА КОНЦЕНТРАЦИЮ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ У НН С ОНМТ, Ме №0 25^075) (К ТЕЗИСАМ ОСИКОВА М.В. И АЛЬМУХАМЕТОВОЙ О.Н. «ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ КРОВИ У НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ»)
Показате-ли, пг/мл 8 сутки 18 сутки
Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 1 Группа 2 Группа 3
IFNy 0 0 0 0 0 0
IL-4 1,39 7,03 0 0,02 1,85 1,03
(0,98-2,02) (4,21-9,08)* (0-1,64) # (0-1,82) (1,92-1,85)* (0-2,80)*
IL-10 16,10 28,94 13,21 16,74 25,41 17,39
(4,64-30,36) (24,60-33,47)* (10,89-14,33)*# (12,36-24,04) (25,41-31,76)* (8,51-19,75) #
Примечание. * — значимые (р < 0,05) различия с группой 1, # — с группой 2.
стерства здравоохранения РФ. Группа 1 (n = 10) — доношенные новорожденные (ДН), группа 2 (n = 10) — НН с очень низкой массой тела (ОНМТ) (ГВ от 29 недель до 31 недели и 6 дней включительно), группа 3 (n = 10) — НН с ОНМТ, которым вводили ЭПО с 6 суток после рождения в дозе 200 МЕ/кг через 48 часов. Показатели оценивали на 8 сутки и 18 сутки после рождения, когда суммарная доза введенного ЭПО составила соответственно 400 МЕ/кг и 1400 МЕ/кг. Концентрацию в сыворотке IL-4, IL-10, IFNy определяли на автоматическом иммуноферментном анализаторе PersonalLAB (Италия) с применением тест-систем фирмы «Вектор-Бест» (Россия). Уровень цитокинов выражали в пг/мл. Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica for Windows v. 10.0.
Результаты. Установлено, что у ДН, а также у НН с ОНМТ, в том числе после применения ЭПО на 8 и 18 сутки жизни уровень IFNy в сыворотке находится ниже пороговых значений для его определения на анализаторе. Концентрация противоспалительных цитокинов IL-4 и IL-10 в сыворотке у НН с ОНМТ на 8 сутки превышает соответствующие значения у ДН в 5 и 1,8 раз соответственно, а на 18 сутки — в 5, 8 и 1,5 раза соответственно. Применение ЭПО в суммарной дозе 400 МЕ/ кг на 8 сутки после рождения приводит к снижению концентрации в сыворотке IL-4, IL-10, их значения не отличаются от соответствующих значений у ДН. На 18 сутки жизни после введения ЭПО в суммарной дозе 1400 МЕ/кг концентрация IL-4 в сыворотке значимо не отличается от значений в группе 2 и превышала значения в группе ДН; концентрация IL-10 на 18 сутки в условиях применения ЭПО снижалась и не отличалась от значений в группе ДН.
Заключение. Таким образом, у НН с ОНМТ изменения цитокинового профиля в крови на 8 и 18 сутки жиз-
ни включают низкие значения IFNy, увеличение концентрации в сыворотке IL-4 и IL-10. Применение ЭПО в суммарной дозе 400 МЕ/кг на 8 сутки жизни приводит к снижению концентрации в сыворотке IL-4 и IL-10, а после применения ЭПО в суммарной дозе 1400 МЕ/кг на 18 сутки жизни — к снижению концентрации в сыворотке только IL-10. Полученные данные свидетельствуют об изменениях цитокиновой регуляции ммунного ответа у НН с ОНМТ, укладываются в концепцию функциональной незрелости иммунной систкмы НН, могут вносить вклад в патогенез инфекционных и других осложнений у НН, а также об иммунотропных эффектах ЭПО, его роли в коррекции иммунного статуса у НН с ОНМТ.
ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ГИБЕЛЬ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ В УСЛОВИЯХ IN VITRO
Осиков М.В., Альмухаметова О.Н., Федоров И.А.
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
Введение. Ежегодно более 4 млн. новорожденных умирают из-за последствий инфекций, из них более 1 млн (35%) приходится на недоношенных детей, эти показатели неуклонно растут на протяжении последних 20 лет (Shane A.L. et al., 2014). Ранее нами было показано, что у недоношенных новорожденных (НН) наблюдается лимфоцитопения, ассоциированная с гнойно-септическими осложнениями (Осиков М.В. и др., 2016). В связи с этим, актуальным является поиск эндогенных иммуно-модуляторов и обоснование их применения у НН.
Цель. Исследовать влияние различных доз эритропоэ-тина (ЭПО) на показатели гибели лимфоцитов крови НН в экспериментальных условиях in vitro.
ТАБЛИЦА. ВЛИЯНИЕ ЭПО НА ПОКАЗАТЕЛИ ГИБЕЛИ ЛИМФОЦИТОВ У НН С ЭНМТ, Ме (Q025-Q075) (К ТЕЗИСАМ ОСИКОВА М.В. И ДР. «ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ГИБЕЛЬ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ В УСЛОВИЯХ IN VITRO»)
Показатели Контроль + физ. р-р + ЭПО 30 МЕ/л + ЭПО 15 МЕ/л + ЭПО 7,5 МЕ/л + ЭПО 3,75 МЕ/л
Annexin-5-FITC-/7-AAD-, % 89,20 (74,30-91,95) 90,10 (88,80-90,50) 92,30 (90,30-92,45) 90,35 (84,00-92,20) 89,30 (75,05-91,45)
Annexin-5-FITC+/7-AAD-, % 9,55 (6,95-24,35) 9,05 (8,45-10,00)* 7,15 (6,80-8,80)* 3,65 (0,85-6,90)* 7,35 (4,10-9,25)*
Annexin-5-FITC+/7-AAD+, % 0,45 (0,20-0,90) 0,35 (0,20-0,55)* 0,35 (0,15-0,55)* 0,30 (0,20-0,40)* 0,35 (0,25-0,45)*
Примечание. * — значимые (р < 0,05) различия с группой контроля по критерию Вилкоксона.
