CC BY
18
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ТАБЛИЦА. ВЛИЯНИЕ ЭПО НА КОНЦЕНТРАЦИЮ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ У НН С ОНМТ, Ме №0 25^075) (К ТЕЗИСАМ ОСИКОВА М.В. И АЛЬМУХАМЕТОВОЙ О.Н. «ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ КРОВИ У НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ»)
Показате-ли, пг/мл 8 сутки 18 сутки
Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 1 Группа 2 Группа 3
IFNy 0 0 0 0 0 0
IL-4 1,39 7,03 0 0,02 1,85 1,03
(0,98-2,02) (4,21-9,08)* (0-1,64) # (0-1,82) (1,92-1,85)* (0-2,80)*
IL-10 16,10 28,94 13,21 16,74 25,41 17,39
(4,64-30,36) (24,60-33,47)* (10,89-14,33)*# (12,36-24,04) (25,41-31,76)* (8,51-19,75) #
Примечание. * — значимые (р < 0,05) различия с группой 1, # — с группой 2.
стерства здравоохранения РФ. Группа 1 (n = 10) — доношенные новорожденные (ДН), группа 2 (n = 10) — НН с очень низкой массой тела (ОНМТ) (ГВ от 29 недель до 31 недели и 6 дней включительно), группа 3 (n = 10) — НН с ОНМТ, которым вводили ЭПО с 6 суток после рождения в дозе 200 МЕ/кг через 48 часов. Показатели оценивали на 8 сутки и 18 сутки после рождения, когда суммарная доза введенного ЭПО составила соответственно 400 МЕ/кг и 1400 МЕ/кг. Концентрацию в сыворотке IL-4, IL-10, IFNy определяли на автоматическом иммуноферментном анализаторе PersonalLAB (Италия) с применением тест-систем фирмы «Вектор-Бест» (Россия). Уровень цитокинов выражали в пг/мл. Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica for Windows v. 10.0.
Результаты. Установлено, что у ДН, а также у НН с ОНМТ, в том числе после применения ЭПО на 8 и 18 сутки жизни уровень IFNy в сыворотке находится ниже пороговых значений для его определения на анализаторе. Концентрация противоспалительных цитокинов IL-4 и IL-10 в сыворотке у НН с ОНМТ на 8 сутки превышает соответствующие значения у ДН в 5 и 1,8 раз соответственно, а на 18 сутки — в 5, 8 и 1,5 раза соответственно. Применение ЭПО в суммарной дозе 400 МЕ/ кг на 8 сутки после рождения приводит к снижению концентрации в сыворотке IL-4, IL-10, их значения не отличаются от соответствующих значений у ДН. На 18 сутки жизни после введения ЭПО в суммарной дозе 1400 МЕ/кг концентрация IL-4 в сыворотке значимо не отличается от значений в группе 2 и превышала значения в группе ДН; концентрация IL-10 на 18 сутки в условиях применения ЭПО снижалась и не отличалась от значений в группе ДН.
Заключение. Таким образом, у НН с ОНМТ изменения цитокинового профиля в крови на 8 и 18 сутки жиз-
ни включают низкие значения IFNy, увеличение концентрации в сыворотке IL-4 и IL-10. Применение ЭПО в суммарной дозе 400 МЕ/кг на 8 сутки жизни приводит к снижению концентрации в сыворотке IL-4 и IL-10, а после применения ЭПО в суммарной дозе 1400 МЕ/кг на 18 сутки жизни — к снижению концентрации в сыворотке только IL-10. Полученные данные свидетельствуют об изменениях цитокиновой регуляции ммунного ответа у НН с ОНМТ, укладываются в концепцию функциональной незрелости иммунной систкмы НН, могут вносить вклад в патогенез инфекционных и других осложнений у НН, а также об иммунотропных эффектах ЭПО, его роли в коррекции иммунного статуса у НН с ОНМТ.
ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ГИБЕЛЬ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ В УСЛОВИЯХ IN VITRO
Осиков М.В., Альмухаметова О.Н., Федоров И.А.
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
Введение. Ежегодно более 4 млн. новорожденных умирают из-за последствий инфекций, из них более 1 млн (35%) приходится на недоношенных детей, эти показатели неуклонно растут на протяжении последних 20 лет (Shane A.L. et al., 2014). Ранее нами было показано, что у недоношенных новорожденных (НН) наблюдается лимфоцитопения, ассоциированная с гнойно-септическими осложнениями (Осиков М.В. и др., 2016). В связи с этим, актуальным является поиск эндогенных иммуно-модуляторов и обоснование их применения у НН.
Цель. Исследовать влияние различных доз эритропоэ-тина (ЭПО) на показатели гибели лимфоцитов крови НН в экспериментальных условиях in vitro.
ТАБЛИЦА. ВЛИЯНИЕ ЭПО НА ПОКАЗАТЕЛИ ГИБЕЛИ ЛИМФОЦИТОВ У НН С ЭНМТ, Ме (Q025-Q075) (К ТЕЗИСАМ ОСИКОВА М.В. И ДР. «ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ГИБЕЛЬ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ В УСЛОВИЯХ IN VITRO»)
Показатели Контроль + физ. р-р + ЭПО 30 МЕ/л + ЭПО 15 МЕ/л + ЭПО 7,5 МЕ/л + ЭПО 3,75 МЕ/л
Annexin-5-FITC-/7-AAD-, % 89,20 (74,30-91,95) 90,10 (88,80-90,50) 92,30 (90,30-92,45) 90,35 (84,00-92,20) 89,30 (75,05-91,45)
Annexin-5-FITC+/7-AAD-, % 9,55 (6,95-24,35) 9,05 (8,45-10,00)* 7,15 (6,80-8,80)* 3,65 (0,85-6,90)* 7,35 (4,10-9,25)*
Annexin-5-FITC+/7-AAD+, % 0,45 (0,20-0,90) 0,35 (0,20-0,55)* 0,35 (0,15-0,55)* 0,30 (0,20-0,40)* 0,35 (0,25-0,45)*
Примечание. * — значимые (р < 0,05) различия с группой контроля по критерию Вилкоксона.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунологические проблемы в педиатрии Immunological problems in pediatrics
Материалы и методы. Исследование выполнено на 32 новорожденных в Клинике ФГБОУ ВО ЮУГМУ Министерства здравоохранения РФ, разделенных на 2 группы: группа 1 (n = 12) — НН с очень низкой массой тела (ОНМТ) (ГВ от 29 недель до 31 недели и 6 дней включительно); группа 2 (n = 10) — НН с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) (ГВ от 27 недель до 28 недель и 6 дней включительно). К 100 мкл суспензии лимфоцитов (5 х 106/л), выделенных из пуповинной крови, добавляли 100 мкл физиологического раствора (контроль) или ЭПО («Эпокрин», Россия), разведенного в физиологическом растворе в концентрациях 30 МЕ/л; 15 МЕ/л; 7,5 МЕ/л; 3,75 МЕ/л, что соответствует 200%, 100%, 50%, 25% от его нормальной концентрации в крови здоровых взрослых людей. Инкубировали 30 мин при 37 оС. На проточном цитофлуориметре Navios (BeckmanCoulter, США) с использованием тест систем из набора «Annexin5-FITC/7-AAD kit» (BeckmanCoulter, США) дифференцировали клетки: интактные (Annexin-5-FITC-/7-AAD-), с ранними признаками апоптоза (Annexin-5-FITC+/7-AAD-), с поздними признаками апоптоза и частично некротические (Annexin-5-FITC+/7-AAD+).
Результаты. Установлено, что добавление ЭПО в дозах 15 МЕ/л и 30 МЕ/л к лимфоцитам, выделенным из пуповинной крови НН с ОНМТ не изменяет экспрессию маркеров апоптоза и некроза на клетках, а также представительство интактных лимфоцитов (р > 0,05). Применение ЭПО в дозах 7,5 МЕ/л и 3,75 МЕ/л приводит к увеличению количества лимфоцитов с ранними признаками апоптоза (р < 0,05) и увеличению представительства интактных лимфоцитов (р < 0,05). Результаты оценки влияния ЭПО на экспрессию маркеров гибели лимфоцитов у НН с ЭНМТ представлены в таблице. ЭПО во всех используемых дозах снижает представительство клеток с ранними маркерами апоптоза, а также клеток с поздними маркерами апоптоза и некротических клеток. Наиболее выраженный эффект зафиксирован при использовании ЭПО в дозе 7,5 МЕ/л.
Заключение. Таким образом, эффект ЭПО на экспрессию маркеров апоптоза и некроза в лимфоцитах, выделенных из пуповинной крови НН, зависит от степени недоношенности (т.е. структурно-функциональных изменений лимфоцитов) и дозы ЭПО. У НН с ОНМТ ЭПО в средних и малых дозах, не превышающих его 50% уровень в крови, увеличивает количество лимфоцитов с признаками апоптоза, т.е. ЭПО выступает в роли инициатора гибели клеток. В данном случае, по всей видимости, наблюдается феномен негативной селекции дисфункциональных клеток. В отношении лимфоцитов, выделенных из крови НН с ЭНМТ ЭПО с максимальным эффектом в дозе 7,5 МЕ/л выступает в роли протекторного фактора, ограничивающего гибель клеток путем апоптоза/некроза.
ПОЯВЛЕНИЕ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ С ФЕНОТИПОМ CD64+CD32+CD11 b+ - РАННИЙ ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ БИОМАРКЕР ВРОЖДЕННОЙ ПНЕВМОНИИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ У ДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ
Смерчинская Т.В.1, Нестерова И.В.2, Чудилова Г.А.1, Ломтатидзе Л.В.1, Ковалева С.В.1
1ФГОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Краснодар, Россия
2 ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» Министерства образования и науки РФ, Москва, Россия
Дыхательные нарушения различной этиологии — наиболее часто встречающаяся патология в периоде
новорожденности, не всегда не имеют инфекционно-воспалительную этиологию. При этом под маской дыхательных расстройств может протекать врожденная пневмония бактериальной или вирусной этиологии. Иммунная система новорожденных находится в состоянии физиологической супрессии, в связи с чем, при врожденной пневмонии бактериальной этиологии очень важным является своевременное назначение антибактериальной терапии. Используемые в практике неонатолога методы лабораторной диагностики, подтверждающие врожденную пневмонию и другие бактериальные инфекции (ускоренное СОЭ, СРБ, прокальцитонин), не во всех случаях оказываются информативными, что требует поиска новых биомаркеров. Следовательно, разработка новых высокоинформативных методов ранней диагностики врожденной пневмонии у новорожденных с использованием иммунологических биомаркеров является актуальной задачей. Многочисленными исследованиями показано неадекватное функционирование нейтрофиль-ных гранулоцитов (НГ) при инфекционно-воспалитель-ных процессах у новорожденных, описано повышение экспрессии поверхностной мембранной НГ молекулы CD64+ в период развития острого бактериального воспаления. В то же время исследований, посвященных изучению фенотипа НГ, с одномоментной оценкой экспрессии нескольких рецепторов на их мембране, у здоровых новорожденных и у новорожденных с врожденной пневмонией, практически, не проводилось.
Целью исследования явилось изучение особенностей одномоментной экспрессии молекул CD64, CD32, CD11b, с оценкой их возможной диагностической значимости, в субпопуляции НГ с фенотипом CD64+CD32+CD11b+ у здоровых новорожденных, а также у новорожденных, страдающих врожденной пневмонией бактериальной этиологии.
В исследование были включены 32 новорожденных (19 мальчиков, 13 девочек) поступивших в отделение реанимации и интенсивной терапии Краснодарской Детской краевой клинической больницы в возрасте 3-15 суток, массой тела — 2880-4370 г, с гестационным возрастом — 38-40 недель с диагнозом: врожденная пневмония (ВП). Проведение клинических, функциональных, рентгенологических и лабораторных, в том числе иммунологических и микробиологических, исследований осуществлялось в первые сутки поступления новорожденных в стационар. При этом только через 7-10 суток имело место подтверждение бактериальной этиологии врожденной пневмонии. Контрольную группу составили 22 практически здоровых доношенных новорожденных (10девочек и 12 мальчиков) с гестационным возрастом — 38-40 недель, весом — 2880-4370 г на 3-6 сутки жизни. Забор периферической крови для иммунологических исследований производился из периферической венозной сети (подкожные вены тыла кисти). Исследовались маркеры поверхностной цитоплазматической мембраны НГ: проведена одномоментная оценка экспрессии молекул CD64, CD32, CD11b методом проточной цитофлуорометрии на CYTOMICS FC500 (Beckman Coulter, США) с использованием панели моноклональных антител: CD64-FITC, CD32-PE, CD11b-PC5 (фирма Beckman Coulter, США). Оценивался процент НГ (%НГ), одномоментно экспрес-сирующих CD64, CD32, CD11b. Статистическая обработка полученных данных производилась с использованием программы для IBM PC "BIOSTAT". Проведение сравнительного анализа продемонстрировало, что у здоровых доношенных новорожденный контрольной группы коли-
