CC BY
0
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
чаще имела место печеночная дисфункция (54,7%) (^<0,05) по сравнению с сердечно-сосудистой (35,9%), эндокринной (30,8%) и иммунной систем (19,2%).
Заключение. Перегрузка железом констатирована преимущественно у пациентов, получивших более 20 ТЭ. При АА количество
больных с перегрузкой железом было меньше, хотя они получили более 20 доз, что обусловлено частыми проявлениями геморрагического синдрома. Чаще превалировали осложнения, ассоциированные с перегрузкой железом, в виде дисфункции сердечно-сосудистой, иммунной системы и печени, реже — эндокринной системы.
Садовская А. В., Петинати Н. А., Сац Н. В., Дризе Н. И., Васильева А. Н., Алешина О. А., Кузьмина Л. А., Карасева Л. А.,
Паровичникова Е. Н.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ФАКТОРОВ АНТИОКСИДАНТНОГО ОТВЕТА В МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ
СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. При острых лейкозах (ОЛ) нарушаются нормальное кроветворение и свойства регулирующего его стромального микроокружения костного мозга. В построении и функционировании последнего участвуют мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (ЖСК). Изучение изменений в ЖСК важно для понимания патогенеза ОЛ и разработки новых подходов к терапии. В жизнедеятельности ЖСК, как и любой клетки, важную роль играют митохондрии. Центральные белки биогенеза митохондрий -PGC-la и Nrf2. PGC-la стимулирует экспрессию генов, связанных с окислительным фосфорилированием, и пролиферацию митохондрий. Nrf2 — активатор антиоксидантного ответа, кодируемый геном NFE2L2. Среди мишеней Nrf2 - гены N&Ol, HOl a GCLC.
Цель работы. Анализ метаболизма митохондрий в ЖСК больных ОЛ и здоровых доноров.
Материалы и методы. ЖСК из костного мозга 26 пациентов с ОЛ (15 больных ОЖЛ, 11 больных ОЛЛ) и 30 здоровых доноров выделяли стандартным методом. С помощью ПЦР в реальном времени исследовали относительныйуровень экспрессии (ОУЭ) генов PGC1A, NFE2L2, NQ01r HOl и GCLC, а также соотношение митохондриальной и ядерной ДНК (мтДНК/яДНК) в ЖСК от больных ОЛ до начала лечения и в ремиссии заболевания. Для контроля использовали ЖСК здоровых доноров соответствующего возраста. В качестве маркера я ДНК был использован участок нетранскрибируемой ДНК — энхан-сер VISTA hs71 (LOC110120583) на 16-й хромосоме, в качестве марке-рамтДНК— ген ЖТ-NDl, кодирующийМАОН-дегидрогеназу-1.
Результаты и обсуждение. ОУЭ PGC1A и соотношение мтДНК/ яДНК в ЖСК больных не отличались от ЖСК здоровых доноров,
что указывает на отсутствие значительного ухудшения биогенеза митохондрий при ОЛ. В ЖСК пациентов в дебюте ОЛ наблюдается повышенный ОУЭ генов, отвечающих за антиоксидантный ответ: ОТЕ2Ь2, N001 и ССЬС. По достижению ремиссии ОУЭ ОТЕ2Ь2 и N001 снижается, и даже наблюдается тенденция к снижению относительно клеток здоровых доноров. Экспрессия ОСЬС нормализуется в ремиссии. Злокачественные клетки при лейкозе, как правило, полагаются на окислительное фосфорилирование, в отличие от нормальных кроветворных клеток, использующих гликолиз в состоянии покоя. Окислительное фосфорилирование обеспечивается митохондриями. При высокой интенсивности этого процесса накапливается его побочный продукт — активные формы кислорода. Усиление антиоксидантного ответа в дебюте ОЛ может быть ожидаемо, так как ЖСК перепрограммируются для поддержки опухолевых клеток. Жожно было бы предполагать повышение экспрессии генов антиок-сидантов и в ремиссии, поскольку при лечении ОЛ используются препараты, вызывающие окислительный стресс, однако наблюдается противоположный эффект — ОУЭ МЕЕ2Ь2 и его мишеней падает. Эти результаты предполагают, что при ОЛ в ЖСК нарушается антиоксидантный ответ клеток, но не происходит значительных изменений в основном биогенезе митохондрий.
Заключение. Исходя из полученных результатов, применение антиоксидантов может способствовать поддержанию и восстановлению стромального микроокружения костного мозга после проведения химиотерапии. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант № 22-15-00018, https://rscf.ru/ Рго^ес1/22-15-00018/
Сальман Р., Сердюк Я. В., Ненашева Т. А., Фефелова Е. И., Иванова Н. О., Боголюбова А. В.
ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ, ИСТОЩЕНИЕ И ИММУНОФЕНОТИП АНТИ-СБ19 CAR-Т-КЛЕТОК ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ
РЕСТИМУЛЯЦИИ IN VITRO
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. CAR-T-клетки — это генетически модифицированные Т-клетки, экспрессирующие химерный антигенный рецептор (CAR). Эти рецепторы распознают конкретный опухолевый антиген, например, CD19 в контексте CD19+ острого лимфобластного лейкоза В-клеток (В-ОЛЛ). CAR-T-клеточная терапия может быть проведена как в аутологичном, так и в аллогенном формате, соответственно, параметры продукта, полученного от здоровых доноров и пациентов, могут существенно различаться. Эффективность лечения напрямую зависит от иммунофенотипического и функционального профиля CAR-T-клеток. Таким образом, иммунофенотипирование и оценка цитотоксичности являются ключевыми параметрами для контроля качества получаемого CAR-T продукта. При хронической антигенной стимуляции CAR-T-клетки истощаются и начинают терять эф-фекторную функцию.
Цель работы. Целью данного исследования было изучение истощения, иммунофенотипического профиля и цитотоксичности анти-С019 CAR-T-клеточных продуктов, полученных от здоровых доноров и пациентов, в условиях длительной стимуляции целевым антигеном CD19.
Материалы и методы. Образцы мононуклеарных клеток периферической крови (РВЖС) были получены от 3 здоровых доноров и 2
пациентов с В-ОЛЛ. CAR-T-клетки были получены путем сепарации CD3+ Т-клеток, активации и трансдукции лентивирусным вектором третьего поколения, несущим анти-С019 CAR конструкт. После трансдукции клетки экспандировали в течение 9—10 дней в бессывороточной среде или в среде с человеческим альбумином (HSA). Далее CAR-T-клетки рестимулировали каждые 3—4 дня в течение 10—14 дней с использованием клеточной линии NALM6 в качестве CD19+ мишени. Использовали различные соотношения эффектор:таргет (Е:Т). Цитотоксичность, истощение и иммунофенотип CAR+ клеток оценивали методом проточной цитофлуорометрии при окрашивании клеток флуоресцентно-мечеными антителами к CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD 197, PD1, TIM3 и рекомбинантным белком CD19-Fc, конъюгированным с красителем AF647.
Результаты и обсуждение. Результаты цитотоксического теста показали, что количество опухолевых клеток уменьшалось при всех соотношениях (Е:Т) с наиболее значимым эффектом при соотношении 1:1 независимо от источника клеток для производства CAR" Т-клеток. Иммунофенотип был специфичен для каждого пациента, однако у всех присутствовали CAR+ Т-клетки центральной памяти (15—90% от CAR+ Т-клеток) и наивные клетки (0,1—60% от CAR+ Т-клеток). При длительной сокультивации с клетками-мишенями
При л о ж ен и е 1
CAR" Т-клетки истощались; популяция PD1+TIM3+CAR+kлеток достигала 60—90% на 10—14-й день культивирования для здоровых доноров и пациентов. Добавление в среду HSA не оказало значимого влияния на фенотип и истощение CAR-T-клеток.
Заключение. Мы показали, что иммунофенотип CAR-T-клeтoк пациентоспецифичен, а истощение клеток доноров и пациентов происходит с разной динамикой вне зависимости от соотношения Е:Т и присутствия НЭА.
Сергеева А. М.1, Грибкова А. К.2, Суримова В. А.1, Сунцова М. В.3, Менделеева Л. П.1, Буздин А. А.3, Шайтан А. К.2 ПРОФИЛИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ В ДЕБЮТЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
1ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, 2Биологический факультет, МГУ им. М.В. Ломоносова, 3Первый Московский государственный медицинский университет
имени И. М. Сеченова
Введение. Множественная миелома (ММ) — неизлечимое злокачественное лимфопролиферативное заболевание, характеризующееся высокой степенью гетерогенности. Диагностика основывается на клинических, иммунохимических, иммунофенотипических и цитогенетических методах исследования опухоли, однако моле-кулярно-генетические признаки, такие как профили экспрессии генов, в настоящее время не учитываются. Технология секвенирования РНК позволяет идентифицировать и проанализировать большое количество генов, вовлеченных в формирование профиля экспрессии генов, специфичного для ММ как заболевания и увидеть маркеры экспрессии, характерные для каждого больного.
Цель работы. Провести функциональный анализ дифференциально экспрессирующихся генов в опухолевых клетках у больных ММ на моментустановления диагноза.
Материалы и методы. Образцы костного мозга (КМ) были получены от 58 пациентов с впервые установленным диагнозом ММ (29—78 лет, 33 м и 25 ж). В качестве контроля использовались образцы КМ от 11 здоровых доноров (24— 41 год, 5ми6 ж). Мононуклеары КМ, обогащенные CD138+ клетками, использовали для выделения РНК в соответствии с методикой, описанной ранее (Sergeeva et al. 2019). Подготовку библиотек и секвенирование транскриптома выделенных клеток проводили по опубликованному протоколу (Borisov et al. 2021). Полученные последовательности в файлах FASTO обрабатывались с применением биоинформатических алгоритмов пакетов Salmon и DESeq2 для выявления статистически значимо (^<0,05 с поправкой Бенджамини-Хохберга) дифференциально экспрессирующихся генов (ДЭГ). К ДЭГ относили гены, экспрессия которых
изменилась более чем в четыре раза (llog2FCl>2). Мы использовали два онлайн ресурса, Gene Ontology и DAVID для функциональной классификации и анализа обогащения ДЭГ, соответственно. Анализ обогащения по их молекулярным функциям, биологическим процессам и клеточным компонентам проводился в DAVID путем кластеризации терминов, в которых не менее 5 генов из полученного списка ДЭГ, и^<0,05 с поправкой Бенджамини-Хохберга).
Результаты и обсуждение. В результате анализа транскриптома клеток ММ пациентов и плазматических клеток здоровых доноров было выявлено 464 ДЭГ, экспрессия которых увеличивается, и 626 ДЭГ, экспрессия которых снижается (без учета генов иммуноглобулинов). По нашим данным, наиболее значительно была повышена экспрессия у генов: NOL4, ММР16, KCNS3, GRIA3, USH2A, CTNNA3, GALNT13, NBPF4, GPR37, CFAP47; понижена: PPP1R14C, KRT2, CACNA1H, GRK1, OR6N1, BEGAIN, НМНВ1, ТМЕМ179, PLP1, DEFA3.
Анализ функционального обогащения ДЭГ выявил статистически значимые кластеры генов: высокая экспрессия обнаружена у генов, связанных с активностью ионных каналов, внеклеточными взаимодействиями и активностью рецепторных комплексов. Наблюдалась пониженная экспрессия генов, участвующих в организации хроматина, врожденной и адаптивной иммунных системах, транспорте кислорода.
Заключение. В результате проведенного исследования мы выявили гены, экспрессия которых значительно изменена вследствие малигнизации плазматической клетки. С помощью анализа функционального обогащения генов выявлены основные функциональные группы генов,участвующих в патогенезе ММ.
Синяев А. А., Попова М. О., Рогачева Ю. А., Власова Ю. Ю., Смирнова А. Г., Бондаренко С. Н., Моисеев И. С., Кулагин А. Д.
КОЛОНИЗАЦИЯ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ БАКТЕРИЯМИ С МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ «ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА«
НИИ ДОГиТ им. Р. М. Горбачевой
Введение. РТПХ увеличивает риск и тяжесть инфекционных осложнений (ПО). Колонизация грамотрицательными (ГО) бактериями с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) коррелирует с более высокой частотой ПО.
Цель работы. Изучить колонизацию ГО бактериями с МЛУу пациентов с хронической РТПХ: эпидемиологию, влияние на частоту ПО, а также влияние на исходы.
Материалы и методы. В нашем центре мы провели анализ ИО у пациентов с РТПХ. Ретроспективное исследование включало 128 взрослых пациентов с хронической РТПХ (табл.) после алло-ТГСК со медианой наблюдения 1160 дней (176—2854). Анализ проводился в соответствии с статистическими рекомендациями ЕВМГ.
Результаты и обсуждение. Кумулятивная частота (КЧ) бактериальных инфекций (БИ) в группе с хронической РТПХ составила 22,8% (95%ДИ 15,8—30,6). В многофакторном анализе поражение ЖКТ при хронической РТПХ увеличивает риск БИ: ОР 2,9 (95%ДИ 1,3— 6,3), ^<0,01 соответственно. Частота колонизации ESBL-продуцирующими ГО бактериями составила 65,6% (я=84), СРЕ — 26,5% (я=34). Преимущественно представлена К. pneumonías (я=34, 63%) и Е. cotí (я=14, 17%). КЧ ГО бактериальных инфекций 16,9% (95%ДИ 10,9—24,1), основные возбудители К. pneumonías (я=9, 39%), Pdeudomonad spp. (n=5, 22%) и Е. cotí (n=5, 22%). Колонизация ESBL значимо увеличивает КЧ ГО бактериальных инфекций:
22,2% (95%ДИ 13,9 - 31,8) против 6,8% (95%ДИ 1,8-16,7),^=0,0373.
Однако колонизация СРЕ не оказало значимого влияния,^=0,19. КЧ ГО инфекций кровотока — 4,7% (95%ДИ 1,9—9,5). Колонизация СРЕ значимо увеличивает КЧ ИК: 14,8% (95%ДИ 5,4-28,7) против 1,0%
Таблица. Характеристика пациентов
Хроническая РТПХ (п=128)
N %
Возраст, медиана 37(18-67]
Мужчины Женщины 67 61 52,3 47,7
Стандарт Терапия «спасения» 102 26 79,7 20,3
Донор Haplo MRD MUD MMUD 8 32 59 29 6,2 25 45,9 22,9
Источник СК PBSC вм 70 58 54,7 45,3
Режим кондиционирования RIC MAC 104 24 81,2 18,8
СтепеньРТПХ 1 II III 25 55 48 19,5 43 37,5
Follow-up, медиана 1160 дней (176-2854)
