CC BY
0
При л о ж ен и е 1
Решетова А. И.1, Грозов Р. В.1, Бадаев Р. Ш.1, Заммоева Д. Б.1, Ломаиа Е. Г.1, Трофимов П. Н.2, Самцов А. В.2, Хайрутдинов В. Р.2,
Головкин А. С.1, Моторин Д. В.1
ЭПИДЕРМАЛЬНЫЙ ЭЛАФИН КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЙ БИОМАРКЕР ОСТРОЙ КОЖНОЙ РЕАКЦИИ
«ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА»
1ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург, 2ФГБВОУ ВО «BMA им. С.М. Кирова» Минобороны России, Санкт-Петербург
Введение. Острая реакция «трансплантат против хозяина» (оРТПХ) является одной из основных причин смерти пациентов после гаплоидентичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (гапло-ТГСК), несмотря на использование посттрансплантационного циклофосфамида (ПТЦ). Поражение кожи различной степени тяжести отмечается в 40—60% случаев оРТПХ и определяет до 15% смертности. Определение биомаркеров и их роли в развитии оРТПХ важно для улучшения клинической и гистопатологической диагностики, прогнозирования возникновения данного осложнения и оценке ответа на терапию. На сегодняшний день существуют ограниченные доказательства в поддержку их использования в клинической практике. Одним из перспективных биомаркеров, связанных с диагностикой кожной оРТПХ, является элафин (ингибитор пепти-дазы 3) эпителиальный белок, секретируемый кератиноцитами в ответ на IL-1 и TNF-a.
Цель работы. Оценить диагностический потенциал элафина как маркера острой кожной реакции «трансплантат против хозяина».
Материалы и методы. В исследовании было включено 15 пациентов с оРТПХ кожи I-IV степени (I ст., n=4; II ст., n=5; III-IV ст., n=6) после гапло-ТГСК. Биопсия кожи выполнялась в день появления клинических признаков оРТПХ. Экспрессия эпидермального элафина оценивалась иммуногистохимическим методом: высоко положительным считалось окрашивание >90% кератиноцитов, положительным считалось окрашивание >50%, слабоположительным — <50% кератиноцитов и отрицательным — окрашивание <20% кератиноцитов эпидермиса. Окончательный диагноз оРТПХ устанавливался на основании клинических проявлений и полученных гистопатологических признаков (Glucksberg grade, Lerner et al., 2015). В качестве положительного контроля было проанализировано 18 образцов кожи пациентов с псориазом (Tanaka et al., 2000; Kamsteeg et al., 2010), в качестве отрицательного контроля оценены 5 образцов кожи от здоровых доноров.
Результаты и обсуждение. Кожная оРТПХ возникала в среднем через 20 дней после гапло-ТГСК (5—45 дней). Гистологический диагноз РТПХ был поставлен в 14 случаях (93%). У пациентов с легкой (я=9) и тяжелой степенью (^=6) РТПХ были выявлены различные уровни экспрессии элафина. В образцах здоровой кожи была выявлена слабая экспрессия элафина (<50%), а в коже пациентов с псориазом — экспрессия была высоко положительной (>90%). У пациентов с оРТПХ кожи I и II степени экспрессия элафина незначительно превышала данный показатель здоровых реципиентов (^=0,024), в то время как при оРТПХ III—IV степени она приближалась к таковой при псориазе (^=0,031). Дискератоз и вакуолизация не ассоциировались с более высокой экспрессией элафина, а утолщение эпидермиса (среднее количество слоев), коррелировало с повышенной экспрессией элафина при РТПХ III— IV степени.
Заключение. Уровень экспрессии элафина кератиноцитами достоверно выше у пациентов с оРТПХ III-IV степени, что позволяет рассматривать его как дополнительный диагностический биомаркер тяжелой оРТПХ. При этом, уровни экспрессии элафина в коже здоровых реципиентов и в коже пациентов с легкой РТПХ имели минимальные отличия, что ставит под сомнение возможность использования данного метода для диагностики начальных проявлений оРТПХ кожи.
- <
V
■ '"ТЙ - -'--'i
А
-К' Ь-*
: >5"
' v. *
Различные уровни экспрессии элафина при острой кожной реакции «трансплантат против хозяина» (оРТПХ): а ) тяжелая оРТТТХ; б) легкая оРТПХ (1-И ст) Рис.
Романенко Н. А.
ОСЛОЖНЕНИЯ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С ПОСТТРАНСФУЗИОННОЙ ПЕРЕГРУЗКОЙ ЖЕЛЕЗА
ФГБУ «РосНИИГТ ФМБА России«
Введение. Коррекция анемии в категории пациентов с заболеваниями системы крови требует нередко многочисленных трансфузий эритроцитов (ТЭ), что может приводить к перегрузке железом с развитием гемосидероза внутренних органов.
Цель работы. Определить частоту перегрузки железом и ассоциированные с ней осложнения.
Материалы и методы. Выполнен ретроспективный анализ медицинской документации пациентов с апластической анемией (АА) в возрасте (Же) 36 лет (я=117), миелодиспластическим синдромом (МДС), в возрасте 66 лет (я=239), первичным миелофиброзом (ПМФ), в возрасте 67 лет (я=35) и (3-талассемией 28 лет (п=78), получивших множественные ТЭ (не менее 4 доз в сумме). Оценена связь количества ТЭ суровнем сывороточного ферритина (СФ) и частотой осложнений.
Результаты и обсуждение. ТЭ больным АА проведены в количестве (суммарно доз) 5—134 единиц, >20 переливаний получили 70,9% пациентов. Перегрузка железом (СФ > 1000 нг/мл) выявлена в 55,4% случаев. Уровень СФ был нижеу больных, получивших менее 20 доз эритроцитов 319±56 нг/мл против пациентов, получивших > 20 доз — 2950±208 (^<0,001). Больные МДС получили 4-164 ТЭ, более > 20
перелито 59,4%. Перегрузка железом наблюдалась у 63,5% больных. Лица, получившие менее 20 доз пациенты имели СФ 590±67 нг/мл, а получившие > 20 ТЭ, уровень ферритина составил 2920±79 нг/мл (^<0,001). Больным ПМФ проведено 5—181 ТЭ, более 20 доз перелито 62,9% больным. Перегрузка выявлена у 65,8% больных. Пациенты, получившие менее 20 доз эритроцитов, имели СФ 612+99 нг/мл, пациенты, получившие > 20 доз — значительно выше — 2808±287 нг/ мл (р<0,001). Больным р-талассемией проведено 4—764 переливаний эритроцитов: >20 ТЭ получили 57,7% пациентов. Перегрузка железом отмечалась у 57,6% больных. У пациентов, получивших <20 доз СФ составил 1978±187 нг/мл, получивших > 20 доз — 3290±44 нг/мл (^<0,001). У пациентов с АА существенно чаще наблюдались нарушения со стороны сердечнососудистой системы (24,8%) и печени (22,2%) по сравнению с патологией иммунной (12,8%) и эндокринной систем (7,7%) (^<0,05). У больных МДС нарушения иммунной (30,4%) и сердечно-сосудистой системы (20,1%) превалировали над патологией печени (14,0%) и эндокринной системы (5,8%) (^<0,05); аналогично при ПМФ — чаще были нарушения со стороны сердечно-сосудистой (62,9%) и иммунной системы (40%) по сравнению с печеночной (22,9%) и эндокринной дисфункцией (20,0%) (^<0,05). При (3-талассемии
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
чаще имела место печеночная дисфункция (54,7%) (^<0,05) по сравнению с сердечно-сосудистой (35,9%), эндокринной (30,8%) и иммунной систем (19,2%).
Заключение. Перегрузка железом констатирована преимущественно у пациентов, получивших более 20 ТЭ. При АА количество
больных с перегрузкой железом было меньше, хотя они получили более 20 доз, что обусловлено частыми проявлениями геморрагического синдрома. Чаще превалировали осложнения, ассоциированные с перегрузкой железом, в виде дисфункции сердечно-сосудистой, иммунной системы и печени, реже — эндокринной системы.
Садовская А. В., Петинати Н. А., Сац Н. В., Дризе Н. И., Васильева А. Н., Алешина О. А., Кузьмина Л. А., Карасева Л. А.,
Паровичникова Е. Н.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ФАКТОРОВ АНТИОКСИДАНТНОГО ОТВЕТА В МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ
СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. При острых лейкозах (ОЛ) нарушаются нормальное кроветворение и свойства регулирующего его стромального микроокружения костного мозга. В построении и функционировании последнего участвуют мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (ЖСК). Изучение изменений в ЖСК важно для понимания патогенеза ОЛ и разработки новых подходов к терапии. В жизнедеятельности ЖСК, как и любой клетки, важную роль играют митохондрии. Центральные белки биогенеза митохондрий -PGC-la и Nrf2. PGC-la стимулирует экспрессию генов, связанных с окислительным фосфорилированием, и пролиферацию митохондрий. Nrf2 — активатор антиоксидантного ответа, кодируемый геном NFE2L2. Среди мишеней Nrf2 - гены N&Ol, HOl a GCLC.
Цель работы. Анализ метаболизма митохондрий в ЖСК больных ОЛ и здоровых доноров.
Материалы и методы. ЖСК из костного мозга 26 пациентов с ОЛ (15 больных ОЖЛ, 11 больных ОЛЛ) и 30 здоровых доноров выделяли стандартным методом. С помощью ПЦР в реальном времени исследовали относительныйуровень экспрессии (ОУЭ) генов PGC1A, NFE2L2, NQ01r HOl и GCLC, а также соотношение митохондриальной и ядерной ДНК (мтДНК/яДНК) в ЖСК от больных ОЛ до начала лечения и в ремиссии заболевания. Для контроля использовали ЖСК здоровых доноров соответствующего возраста. В качестве маркера я ДНК был использован участок нетранскрибируемой ДНК — энхан-сер VISTA hs71 (LOC110120583) на 16-й хромосоме, в качестве марке-рамтДНК— ген ЖТ-NDl, кодирующийМАОН-дегидрогеназу-1.
Результаты и обсуждение. ОУЭ PGC1A и соотношение мтДНК/ яДНК в ЖСК больных не отличались от ЖСК здоровых доноров,
что указывает на отсутствие значительного ухудшения биогенеза митохондрий при ОЛ. В ЖСК пациентов в дебюте ОЛ наблюдается повышенный ОУЭ генов, отвечающих за антиоксидантный ответ: ОТЕ2Ь2, N001 и ССЬС. По достижению ремиссии ОУЭ ОТЕ2Ь2 и N001 снижается, и даже наблюдается тенденция к снижению относительно клеток здоровых доноров. Экспрессия ОСЬС нормализуется в ремиссии. Злокачественные клетки при лейкозе, как правило, полагаются на окислительное фосфорилирование, в отличие от нормальных кроветворных клеток, использующих гликолиз в состоянии покоя. Окислительное фосфорилирование обеспечивается митохондриями. При высокой интенсивности этого процесса накапливается его побочный продукт — активные формы кислорода. Усиление антиоксидантного ответа в дебюте ОЛ может быть ожидаемо, так как ЖСК перепрограммируются для поддержки опухолевых клеток. Жожно было бы предполагать повышение экспрессии генов антиок-сидантов и в ремиссии, поскольку при лечении ОЛ используются препараты, вызывающие окислительный стресс, однако наблюдается противоположный эффект — ОУЭ МЕЕ2Ь2 и его мишеней падает. Эти результаты предполагают, что при ОЛ в ЖСК нарушается антиоксидантный ответ клеток, но не происходит значительных изменений в основном биогенезе митохондрий.
Заключение. Исходя из полученных результатов, применение антиоксидантов может способствовать поддержанию и восстановлению стромального микроокружения костного мозга после проведения химиотерапии. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант № 22-15-00018, https://rscf.ru/ Рго^ес1/22-15-00018/
Сальман Р., Сердюк Я. В., Ненашева Т. А., Фефелова Е. И., Иванова Н. О., Боголюбова А. В.
ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ, ИСТОЩЕНИЕ И ИММУНОФЕНОТИП АНТИ-СБ19 CAR-Т-КЛЕТОК ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ
РЕСТИМУЛЯЦИИ IN VITRO
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. CAR-T-клетки — это генетически модифицированные Т-клетки, экспрессирующие химерный антигенный рецептор (CAR). Эти рецепторы распознают конкретный опухолевый антиген, например, CD19 в контексте CD19+ острого лимфобластного лейкоза В-клеток (В-ОЛЛ). CAR-T-клеточная терапия может быть проведена как в аутологичном, так и в аллогенном формате, соответственно, параметры продукта, полученного от здоровых доноров и пациентов, могут существенно различаться. Эффективность лечения напрямую зависит от иммунофенотипического и функционального профиля CAR-T-клеток. Таким образом, иммунофенотипирование и оценка цитотоксичности являются ключевыми параметрами для контроля качества получаемого CAR-T продукта. При хронической антигенной стимуляции CAR-T-клетки истощаются и начинают терять эф-фекторную функцию.
Цель работы. Целью данного исследования было изучение истощения, иммунофенотипического профиля и цитотоксичности анти-С019 CAR-T-клеточных продуктов, полученных от здоровых доноров и пациентов, в условиях длительной стимуляции целевым антигеном CD19.
Материалы и методы. Образцы мононуклеарных клеток периферической крови (РВЖС) были получены от 3 здоровых доноров и 2
пациентов с В-ОЛЛ. CAR-T-клетки были получены путем сепарации CD3+ Т-клеток, активации и трансдукции лентивирусным вектором третьего поколения, несущим анти-С019 CAR конструкт. После трансдукции клетки экспандировали в течение 9—10 дней в бессывороточной среде или в среде с человеческим альбумином (HSA). Далее CAR-T-клетки рестимулировали каждые 3—4 дня в течение 10—14 дней с использованием клеточной линии NALM6 в качестве CD19+ мишени. Использовали различные соотношения эффектор:таргет (Е:Т). Цитотоксичность, истощение и иммунофенотип CAR+ клеток оценивали методом проточной цитофлуорометрии при окрашивании клеток флуоресцентно-мечеными антителами к CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD 197, PD1, TIM3 и рекомбинантным белком CD19-Fc, конъюгированным с красителем AF647.
Результаты и обсуждение. Результаты цитотоксического теста показали, что количество опухолевых клеток уменьшалось при всех соотношениях (Е:Т) с наиболее значимым эффектом при соотношении 1:1 независимо от источника клеток для производства CAR" Т-клеток. Иммунофенотип был специфичен для каждого пациента, однако у всех присутствовали CAR+ Т-клетки центральной памяти (15—90% от CAR+ Т-клеток) и наивные клетки (0,1—60% от CAR+ Т-клеток). При длительной сокультивации с клетками-мишенями
