СЛУЧАЙ ТЯЖЕЛОЙ ФОРМЫ ГЕМОФИЛИИ А, ВЫЗВАННОЙ ВСТАВКОЙ МОБИЛЬНОГО ЭЛЕМЕНТА В ЭКЗОН 14 ГЕНА F8 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

При л о ж ен и е 1

Саломашкина В. В.1, Пшеничникова О. С.1, Перина Ф. Г.2, Сурин В. Л.1 СЛУЧАЙ ТЯЖЕЛОЙ ФОРМЫ ГЕМОФИЛИИ А, ВЫЗВАННОЙ ВСТАВКОЙ МОБИЛЬНОГО ЭЛЕМЕНТА В ЭКЗОН 14 ГЕНА Е8

1ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, Москва, 2ОДКБ № 1, Екатеринбург

Введение. Патогенные варианты, вызывающие гемофилию А (ГА), в основном представляют собой уникальные события де по^о, чаще всего это однонуклеотидные замены. Случаи крупных инсер-ций при ГА редки, а случаев вставки мобильных элементов до сих пор не было описано.

Цель работы. Подробная характеристика мобильного элемента, встроившегося в кодирующую область гена^^.

Материалы и методы. ДНК выделяли из цельной крови стандартным фенол-хлороформным методом. Проверка распространённых инверсий 1^22 и проводилась с использованием ранее описанных праймеров (Bagna.ll еЪ а1., 2006; Bagna.ll еЪ а1., 2002). Секвенирование по Сэнгеру всех функционально важных участков гена Г8 проводили с использованием праймеров, разработанных ранее в нашей лаборатории (8а1отазЬк1па еЪ а1., 2022).

Результаты и обсуждение. Пациент с тяжелой формой ГА (Г'УН1:С<1%, отсутствие ингибиторов в анамнезе) был направлен в наш центр для генетической консультации. В ход поиска мутации у него не было обнаружено инверсий, однонуклеотидных вариантов или делеций, однако было замечено устойчивое отсутствие амплификации фрагмента 14-го экзона между позициями с.2940 и с.3183. После измененияусловий амплификации сучетом возможной вставки ГЦ-богатого фрагмента и при использовании ПЦР-системы для длинных фрагментов был амплифицирован экзон 14 гена целиком. Полученный фрагмент был примерно на 1500 п.н. длиннее, чем ожидалось. После секвенирования по Сэнгеру мы идентифицировали вставку человеческого ретротранспозона 81МЕ-У^ТК.-А1и (ЭУА) семейства

Е между нуклеотидами с.3117 и с. 3118, фланкированную дупликацией целевой последовательности длиной 15 п.н. (нуклеотиды с.3103—3117). Точную длину вставленного мобильного элемента невозможно определить из-за сложной повторяющейся структуры ЭУА и длинного поли-А-хвоста, которые препятствуют секвенированию. Мобильные элементы ДНК распространены по всему геному человека и обычно их называют «мусорной» ДНК. В тех случаях, когда они встраиваются в кодирующие области, они приводят к большим делециям, сдвигу рамки считывания, преждевременной терминации трансляции или аберрантному сплайсингу (см. синдром Барде — Бидля, синдром Линча, нейрофиброматоз типа 1 и т. д.). Есть сообщение о вставке 8УА_Г в экзон гена^-Р, вызвавшей гемофилию В, однако до сих пор не было сообщений о подобных событиях для гена ДО. В нашем случае 8УА_Е был вставлен в антисмысловой ориентации — характерный хвост — поли-Т-тракт, расположенный за позицией с.3117, содержит как минимум 54 последовательных тимина. Вставка вырожденного мобильного элемента такой длины неизбежно должна приводить к тяжелой форме ГА, что соответствует клинической картине пациента. Ни один из известных ЭУА элементов в геноме человека не был полностью идентичен описываемой нами вставке, однако в двух ЭУА, расположенных на хромосомах 12 и 22, гомологичные фрагменты отличались от нее на один нуклеотид. Таким образом, мы не можем точно установить, из какой части генома происходит мобильный элемент, вставившийся в экзон 14 гена .ДО.

Заключение. Впервые обнаружена и подробно охарактеризована инсерция мобильного элемента ЭУА в кодирующую последовательность гена Г8, приводящая к тяжелой форме гемофилии А.

Самойлова Е. В., Миронова Т. П., Давыдкин И. Л., Наумова К. В., Степанова Т. Ю., Кривова С. П. ВЗАИМОСВЯЗЬ ГЕНОТИПОВ Ьу8198А8п ЕОШ г85370 И УРОВНЯ ЭНДОТЕЛИНА-1 У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ

ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России

Введение. Эндотелин-1 (ЭТ-1) — мощный сосудосуживающий пептид, продуцируемый эндотелиальными клетками. Следствием его повышенной продукции может стать развитие окислительного стресса и воспалительного процесса в сосудистой стенке с последующим развитием эндотелиальной дисфункции. Эндотелиальная дисфункция и сосудистый окислительный стресс — предикторы прогрессирования атеросклероза и связаны с повышением частоты сердечно-сосудистых событий. В связи с вышесказанным становится актуальным изучение генетической предрасположенности кувеличе-нию сывороточного ЭТ-1. Известно о нескольких единичных нуклео-тидных полиморфизмах гена ЭТ-1, но только два из них считаются наиболее тесно связанным с патофизиологией сердечно-сосудистых заболеваний — rs5370 и rsl0478694. rs5370 содержит замену (G/T) и (Lys/Asn) в кодоне 198 экзона 5 ЭТ-1. Генотип GG — дикий тип, ТТ — мутантный тип и GT -гетерозигота.

Цель работы. Оценить влияние генотипов Lysl98Asn EDN1 rs5370 на уровень сывороточного ЭТ-1 у пациентов с впервые выявленной множественной миеломой (ММ) до начала противоопухолевой терапии.

Материалы и методы. В проспективное исследование были включены 42 пациента с MM IIA стадии по Durie-Salmon в сочетании с артериальной гипертензией (АГ) 1 степени, образовавшие исследуемую группу и 44 пациента с АГ 1 степени, вошедших в контрольную группу, сопоставимых по полу и возрасту. Проводилась оценка содержания сывороточного ЭТ-1 и однонуклеотидного полиморфизма Lysl98Asn EDN1 rs5370 на основании данных метода ИФА и ПЦР Исследования проводили с помощью лабораторного набора «СЕА482Ни, Cloud-Clone Corp.» (США) и «SNP-Экспресс-Кардиогенетика» (Россия), соответственно.

Протокол исследования одобрен Этическим комитетом ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России. У всех пациентов получено письменное информированное согласие.

Результаты и обсуждение. При анализе концентрации сывороточного ЭТ-1 в сравниваемых группах, были установлены существенные различия 0,001). В основной группе концентрация ЭТ-1 составила 305,86 ± 90,21 пг/мл [95%; 276,03 — 329,68], в то время как в контрольной группе данный параметр составил 227,21 ± 87,85 пг/мл [95%; 200,81 — 253,51], что значительно ближе к референсным значениям (8,5-45,1 пг/мл). В результате анализа генотипов исследуемых групп на наличие полиморфизма в гене ЭТ-1 (Еуэ^вАэп ЕОМ1 гэ5370) были выявлены статистически значимые различия (^=0,040). В исследуемой группе распределение генотипов было следующим: дикий тип составил 14,29%, мутантный тип-28,57%, гетерозигота — 57,14%. В то время как в контрольной группе оно выглядело иначе: 38,64%, 25,00% и 36,36%, соответственно. При анализе зависимости

Исследуемая группа

Контрольная группа

25%

' LysLys ■ LysAsn ■ AsnAsn

i LysLys ■ LysAsn ■ AsnAsn

Рис. Концентрация ЭТ-1 в зависимости от генотипа Lysl98Asn EDN1 rs5370.