Разработка способа иммунотерапии у больных раком молочной железы с исчерпанными возможностями стандартного лечения Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 5

тивного вещества зарегистрировано микроскопом с цифро- В реакции использовали эквимолярные (10-2М) растворы вой видеокамерой (14 Мпикс) для микроскопа на USB, под- АТФ и ПЕН в бидистиллированной воде. Выпавший в оса-считано число клеток, попадающих в поле зрения, док продукт реакции выделяли и дважды промывали би-синхронно в «секунда-интервале». дистиллированной водой. Электронные спектры регистри-результаты. При инкубации инфузорий в интактных ровали на спектрофотометре Perkin Elmer UV—VIS условиях с арглабином и его производными исследуемые со- Spectrometer Lambda EZ 210 (PerkinElmer, США). ИК-единения не проявили токсического действия, не влияли спектры образцов исходных веществ и продуктов реакции на рост и жизнеспособность инфузорий, дафний, а также в диапазоне от 4000 до 40 см-1 регистрировали на ИК-спек-не изменяли скорость их движения, кроме образца бромкар- трометре VERTEX 70v (Bruker Corporation, США) в сухих бенпроизводного арглабина. Инфузории, подвергнутые ин- порошках под вакуумом. кубации с бромкарбенпроизводным арглабина, обладали результаты. В ИК-спектре исходного комплекса ПЕН высокой чувствительностью к действию вещества, было за- сильный дублет 1779 и 1735 см-1 принадлежит валентным регистрировано изменение траектории движения по сравне- колебаниям связи N-O. Их исчезновение в спектре про-нию с интактными клетками. В то же время бромкарбенпро- дукта указывает на полное их отщепление в процессе ре-изводное арглабина снижало выживаемость клеток. Степень акции. Группа сильных полос поглощения в спектре исход-выживаемости Paramecium caudatum, Daphnia magna, ной АТФ 1704, 1650 и 1603 см-1 мы отнесли к валентным Ceriodaphnia affinis при действии бромкарбенпроизводного колебаниям связей P=O и P—O—P. В спектре продукта арглабина была в 2,2 раза ниже, чем в контроле. реакции эти полосы сохраняюся, что указывает на присут-Заключение. Экспериментальные исследования по- ствие в продукте всех 3 фосфорнокислых групп. В продук-казали, что инфузории Paramecium caudatum, клетки те реакции появляются новые полосы поглощения. Их мы Daphnia magna, Ceriodaphnia affinis, а также Saccharomyces относим к колебаниям вновь возникающих при образова-cerevisiae чувствительны для проведения тестов на цито- нии продукта реакции связей Fe-N и S-N. Выполненный токсичность. анализ ИК-спектров подтвержден квантово-механически- ми рассчетами. Таким образом, при взаимодействии с АТФ А.Л. Баиров1, Е.А. Саратовских2, Н.С. Емельянова2, комплекс ПЕН теряет группы NO, диссоциирует на 2 мо-Б.Л. Психа2, Н.А. Санина2 ножелезных комплекса. Молекула АТФ сохраняет фосфор-иССлЕдовАниЕ Строения Продуктов ный «хвост» и связывается с остатками ПЕН за счет адени-рЕАкции нитрозильныХ комплексов нового кольца. ЖЕЛЕЗА - доноров NO - С АДЕнозин- Заключение. В результате анализа ИК-спектров исход-ТриФоСФорноЙ Кислотой ных веществ и образующегося соединения показано, что 1МГУ им. М.В. Ломоносова, факультет фундаментальной в ходе реакции между АТФ и ПЕН возникает новое соеди-физико-химической инженерии, Москва, Россия; нение за счет образования связей Fe-N атома N-7 и S-N 2ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область, терминальной NH2-группы аденинового кольца. Предло-Россия жена гипотетическая схема протекания реакции и строе- введение. Известно, что аденозинтрифосфорная кис- ния образующихся продуктов реакции. лота (АТФ) играет исключительно важную роль в обмене энергии и веществ в организмах. АТФ является носителем И.А. Балдуева, В.Ф. Семиглазов, Н.П. Пипиа, 2 высокоэнергетических связей и служит универсальным Т.Л. Нехаева, А.Б. Данилова, Н.А. Авдонкина, А.В. Новик, источником энергии для множества биохимических и фи- С.А. Проценко, Т.Ю. Семиглазова, А.П. Карицкий, зиологических процессов. Исследование механизмов ре- А.М. Беляев гуляции энергетического метаболизма и стабилизация разработка СПоСоБА иММУНотЕрАПии уровня АТФ в клетках при различных формах сердечно- У БолЬНЫХ рАКоМ Молочной ЖЕлЕЗЫ сосудистых заболеваний, заболеваний легких, крови С иСЧЕрПАННЫМи воЗМоЖНоСТЯМи и при процессах старения и ряда других представляет со- СТАНДАртНоГО лЕЧЕНиЯ бой актуальную задачу современной биологии и медици- ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Петрова» ны. Нитрозильные комплексы железа - NO-доноры - яв- Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия ляются потенциальными лекарственными препаратами, введение. Прошедшее десятилетие изучения биологии проявляя вазодилатационные, антиметастатические и про- рака было отмечено растущей оценкой роли иммунитета тивоопухолевые свойства. у больных раком молочной железы (РМЖ). Было показано: Цель исследования. Изучение реакционной способно- 1) мутации в геноме раковой клетки могут привести к экс-сти потенциального лекарственного препарата онкологи- прессии в опухоли мутантных раково-тестикулярных ан-ческой направленности - нитрозильного комплекса желе- тигенов (РТА), экспрессия которых подавлена в нормаль-за с пенициламиновым лигандом (ПЕН) - донора NO, ных тканях, но может аберрантно реэкспрессироваться в отношении АТФ методами электронной и ИК-спектро- в опухоли, особенно после нескольких линий лекарствен-скопии. ного воздействия; 2) экспрессия РТА коррелирует с небла-Материалы и методы. Использовали АТФ чистоты 99 % гоприятным прогнозом, диссеминацией опухоли, поздней (Sigma) без дополнительной очистки. Комплекс ПЕН об- стадией болезни; 3) РТА экспрессируются в трижды нега-щей формулы {Fe2[S(C5HuNO2]2(NO)4}SO4-5H2O синтези- тивных, люминальных и других биологических подтипах рован согласно методике (Н.А. Санина и др., 2005). РМЖ; 4) РТА являются чрезвычайно интересной мишенью

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

6

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

для разработки новых методов вакцинотерапии, поскольку их селективная экспрессия в опухоли может минимизировать иммунологическую толерантность и риск аутоиммунных реакций.

Цель исследования. Разработка способа иммунотерапии у больных РМЖ с исчерпанными возможностями стандартного лечения.

материалы и методы. В исследование после подписания информированного согласия были включены 14 больных. Критерии включения: 1) трижды негативный РМЖ после как минимум 4 линий химиотерапии с включением препаратов платины, таксанов, антрациклинов и фторпи-римидинов; 2) люминальные НЕК2--подтипы РМЖ после как минимум 3 линий гормонотерапии (с включением антиэстрогенов и ингибиторов ароматазы) и как минимум 3 линий химиотерапии; 3) НЕК2/пеи+-подтипы РМЖ после прогрессирования на фоне анти-НЕК2 терапии и после как минимум 3 линий химиотерапии с включением препаратов платины, таксанов, антрациклинов и фторпири-мидинов. Критерии проведения иммунотерапии включали представление письменного информированного согласия, возраст старше 18 лет, гистологический подтвержденный диагноз РМЖ, наличие биологического материала для оценки генетических маркеров, объективно оцениваемые опухолевые очаги, функциональный статус 0—1 балл по шкале ECOG, ожидаемая продолжительность жизни не менее 12 нед, прогрессирование после стандартной терапии РМЖ, предшествующее лечение не менее 4 нед, восстановление после нежелательных явлений предшествующего лечения, отсутствие прогрессирующих метастазов в головном мозге (после радио- или хирургического лечения), отсутствие необходимости применения глюкокорти-костероидов. Лабораторные показатели: отсутствие признаков токсичности >П степени (в том числе лимфопении >П степени), допускается повышение трансаминаз II степени при поражении печени, повышение щелочной фосфата-зы III степени при поражении костей, снижение гемоглобина II степени (для повышения гемоглобина допустимы гемотрансфузии). Больные получили от 3 до 12 введений аутологичных дендритных клеток, нагруженных РТА. Клиническую эффективность оценивали с помощью системы RECIST 1.1 — набора стандартизированных критериев, используемых для оценки уменьшения размеров опухоли в ответ на проводимую терапию.

результаты. Получен клинически значимый противоопухолевый эффект у 70 % больных: частичный регресс у 3 (20 %) пациенток, у 2 из них — люминальный В-подтип и у 1 — трижды негативная форма после 7 линий химиотерапии. Стабилизация опухолевого процесса зарегистрирована у 7 (50 %) пациенток: у 5 из них в опухоли экспресси-ровались рецепторы эстрогена и прогестерона, но эти больные уже были резистентными к эндокринной терапии; 1 больная с трижды негативной формой и 1 пациентка с НЕЯ2/пеи+ РМЖ, с продолжительностью эффекта >10,5 мес. Прогрессирование заболевания отмечено у 4 (30 %) больных: 3 пациенток с люминальными подтипами и 1 пациентки с трижды негативной формой РМЖ. Медиана безрецидивной выживаемости составила 8,3 мес (95 % ДИ 6,5—9,9). Осложнения Ш—ГУ степени не

зарегистрированы, осложнения I—II степени отмечены у 57 % пациенток. Иммунологический эффект в лабораторных тестах зарегистрирован у 92 % больных.

Заключение. Аутологичные дендритные клетки, нагруженные РТА, могут рассматриваться в качестве паллиативной иммунотерапии у больных метастатическим РМЖ с исчерпанными возможностями стандартного лечения.

А.А. Башарина2, Т.А. Богуш1, Е.А. Богуш1, В. Т. Заркуа1, А.С. Тюляндина1, С.А. Тюляндин1

коэкспрессия эстрогеновых рецепторов а и ß в ткани и клетках серозного рака яичников

ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

введение. Лечение рака яичников (РЯ) требует пересмотра и выбора новых тактик терапии. Одним из перспективных путей решения проблемы является гормональная терапия. Однако, в отличие от рака молочной железы, мишень антиэстрогенов в РЯ до настоящего времени точно не установлена. Ранее мы показали, что в ткани РЯ экспрессируются 2 типа эстрогеновых рецепторов (ЭР) — ЭРа и ЭРр. Возможность их коэкс-прессии в разных и/или в одной и той же клетке остается невыясненной, хотя это принципиально важно для дальнейшего выяснения клинической значимости ЭРа и ЭРр в прогнозе эффективности гормональной терапии РЯ.

Цель исследования. Ответить на ряд вопросов: каковы частота и уровень экспрессии ЭРа и ЭРр в ткани РЯ и возможна ли коэкспрессия ЭРа и ЭРр в разных и/или одних и тех же клетках новообразования.

материалы и методы. Исследование проведено на 74 образцах серозного РЯ с использованием иммунофлуорес-центного анализа и проточной цитофлуориметрии. В работе использованы первичные и вторичные антитела фирмы Abcam: для ЭРа — клон SP1 и ab98510; для ЭРр — клон 14C8 и ab98729. Для оценки частоты и уровня коэкспрес-сии в опухоли ЭРа и ЭРр проведена окраска антителами к ЭРа или к ЭРр разных аликвот суспензии клеток из одного и того же образца опухоли (одиночное окрашивание). Для выявления коэкспрессии ЭРа и ЭРр в одной и той же клетке проведено последовательное окрашивание антителами к ЭРа и ЭРр одной и той же аликвоты суспензии клеток (двойное окрашивание). Количественную оценку специфически окрашенных клеток проводили в программе FlowJo 10.0.8.

результаты. Коэкспрессия ЭРа и ЭРр выявлена во всех исследуемых опухолях, со средним значением уровней маркеров и стандартным отклонением 26,8 ± 13,4 и 43,9 ± 12,2 % соответственно. Можно сделать вывод, что средний уровень ЭРр в целом по опухоли более чем в 1,5 раза превышает данный показатель для ЭРа. Более того, всего в 7 (9,5 %) из 74 образцов опухолей уровень экспрессии ЭРа был выше уровня экспрессии ЭРр.

При двойном флуоресцентном окрашивании суспензий клеток РЯ показано, что ЭРа и ЭРр могут коэкспрес-сироваться в одних и тех же клетках. Причем наблюдается

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ