CC BY
10
6
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
для разработки новых методов вакцинотерапии, поскольку их селективная экспрессия в опухоли может минимизировать иммунологическую толерантность и риск аутоиммунных реакций.
Цель исследования. Разработка способа иммунотерапии у больных РМЖ с исчерпанными возможностями стандартного лечения.
материалы и методы. В исследование после подписания информированного согласия были включены 14 больных. Критерии включения: 1) трижды негативный РМЖ после как минимум 4 линий химиотерапии с включением препаратов платины, таксанов, антрациклинов и фторпи-римидинов; 2) люминальные НЕК2--подтипы РМЖ после как минимум 3 линий гормонотерапии (с включением антиэстрогенов и ингибиторов ароматазы) и как минимум 3 линий химиотерапии; 3) НЕК2/пеи+-подтипы РМЖ после прогрессирования на фоне анти-НЕК2 терапии и после как минимум 3 линий химиотерапии с включением препаратов платины, таксанов, антрациклинов и фторпири-мидинов. Критерии проведения иммунотерапии включали представление письменного информированного согласия, возраст старше 18 лет, гистологический подтвержденный диагноз РМЖ, наличие биологического материала для оценки генетических маркеров, объективно оцениваемые опухолевые очаги, функциональный статус 0—1 балл по шкале ECOG, ожидаемая продолжительность жизни не менее 12 нед, прогрессирование после стандартной терапии РМЖ, предшествующее лечение не менее 4 нед, восстановление после нежелательных явлений предшествующего лечения, отсутствие прогрессирующих метастазов в головном мозге (после радио- или хирургического лечения), отсутствие необходимости применения глюкокорти-костероидов. Лабораторные показатели: отсутствие признаков токсичности >П степени (в том числе лимфопении >П степени), допускается повышение трансаминаз II степени при поражении печени, повышение щелочной фосфата-зы III степени при поражении костей, снижение гемоглобина II степени (для повышения гемоглобина допустимы гемотрансфузии). Больные получили от 3 до 12 введений аутологичных дендритных клеток, нагруженных РТА. Клиническую эффективность оценивали с помощью системы RECIST 1.1 — набора стандартизированных критериев, используемых для оценки уменьшения размеров опухоли в ответ на проводимую терапию.
результаты. Получен клинически значимый противоопухолевый эффект у 70 % больных: частичный регресс у 3 (20 %) пациенток, у 2 из них — люминальный В-подтип и у 1 — трижды негативная форма после 7 линий химиотерапии. Стабилизация опухолевого процесса зарегистрирована у 7 (50 %) пациенток: у 5 из них в опухоли экспресси-ровались рецепторы эстрогена и прогестерона, но эти больные уже были резистентными к эндокринной терапии; 1 больная с трижды негативной формой и 1 пациентка с НЕЯ2/пеи+ РМЖ, с продолжительностью эффекта >10,5 мес. Прогрессирование заболевания отмечено у 4 (30 %) больных: 3 пациенток с люминальными подтипами и 1 пациентки с трижды негативной формой РМЖ. Медиана безрецидивной выживаемости составила 8,3 мес (95 % ДИ 6,5—9,9). Осложнения Ш—ГУ степени не
зарегистрированы, осложнения I—II степени отмечены у 57 % пациенток. Иммунологический эффект в лабораторных тестах зарегистрирован у 92 % больных.
Заключение. Аутологичные дендритные клетки, нагруженные РТА, могут рассматриваться в качестве паллиативной иммунотерапии у больных метастатическим РМЖ с исчерпанными возможностями стандартного лечения.
А.А. Башарина2, Т.А. Богуш1, Е.А. Богуш1, В. Т. Заркуа1, А.С. Тюляндина1, С.А. Тюляндин1
коэкспрессия эстрогеновых рецепторов а и ß в ткани и клетках серозного рака яичников
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
введение. Лечение рака яичников (РЯ) требует пересмотра и выбора новых тактик терапии. Одним из перспективных путей решения проблемы является гормональная терапия. Однако, в отличие от рака молочной железы, мишень антиэстрогенов в РЯ до настоящего времени точно не установлена. Ранее мы показали, что в ткани РЯ экспрессируются 2 типа эстрогеновых рецепторов (ЭР) — ЭРа и ЭРр. Возможность их коэкс-прессии в разных и/или в одной и той же клетке остается невыясненной, хотя это принципиально важно для дальнейшего выяснения клинической значимости ЭРа и ЭРр в прогнозе эффективности гормональной терапии РЯ.
Цель исследования. Ответить на ряд вопросов: каковы частота и уровень экспрессии ЭРа и ЭРр в ткани РЯ и возможна ли коэкспрессия ЭРа и ЭРр в разных и/или одних и тех же клетках новообразования.
материалы и методы. Исследование проведено на 74 образцах серозного РЯ с использованием иммунофлуорес-центного анализа и проточной цитофлуориметрии. В работе использованы первичные и вторичные антитела фирмы Abcam: для ЭРа — клон SP1 и ab98510; для ЭРр — клон 14C8 и ab98729. Для оценки частоты и уровня коэкспрес-сии в опухоли ЭРа и ЭРр проведена окраска антителами к ЭРа или к ЭРр разных аликвот суспензии клеток из одного и того же образца опухоли (одиночное окрашивание). Для выявления коэкспрессии ЭРа и ЭРр в одной и той же клетке проведено последовательное окрашивание антителами к ЭРа и ЭРр одной и той же аликвоты суспензии клеток (двойное окрашивание). Количественную оценку специфически окрашенных клеток проводили в программе FlowJo 10.0.8.
результаты. Коэкспрессия ЭРа и ЭРр выявлена во всех исследуемых опухолях, со средним значением уровней маркеров и стандартным отклонением 26,8 ± 13,4 и 43,9 ± 12,2 % соответственно. Можно сделать вывод, что средний уровень ЭРр в целом по опухоли более чем в 1,5 раза превышает данный показатель для ЭРа. Более того, всего в 7 (9,5 %) из 74 образцов опухолей уровень экспрессии ЭРа был выше уровня экспрессии ЭРр.
При двойном флуоресцентном окрашивании суспензий клеток РЯ показано, что ЭРа и ЭРр могут коэкспрес-сироваться в одних и тех же клетках. Причем наблюдается
Спецвыпуск / том 17 / 2018
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 7
внутриопухолевая гетерогенность, то есть встречаются материалы и методы. Водорастворимые диады и ис-клетки, содержащие не только ЭРа или ЭРр, но и оба ре- ходные полизамещенные ВПФ синтезированы в ИПХФ цептора. РАН, структура соединений доказана методами ИК- и УФ-Заключение. Учитывая разнонаправленный вклад ЭРа спектроскопии, спектроскопии ядерного магнитного реи ЭРр в реализацию пролиферативных стимулов, важным зонанса на ядрах 'Н и 13С и электроспрей масс-спектроме-прогностическим показателем агрессивности РЯ и чувст- трии. Для регистрации спектров SERS и SEF исследуемых вительности к антиэстрогенам может быть не только уро- веществ использовались оригинальные подложки Ин-вень одиночной экспрессии ЭРа и ЭРр в опухоли, Спектр SERS, в которых поверхностным слоем служило но и уровень их коэкспрессии как в опухоли, так и в одних наноостровковое серебро. и тех же клетках. результаты и заключение. В настоящей работе методы Работа поддержана Российским фондом SERS и SEF впервые применены для детектирования ВПФ фундаментальных исследований и их диад с хлорином е6 в воде. Показано, что хлорин е6 (гранты № 15-04-06991_а, 16-34-01049_мол_а), а также и ковалентные диады фуллерен—хлорин обладают близки-грантом Президента РФМК-7709.2016.7. ми по структуре характерными спектрами SERS. У диад фуллерен—хлорин наблюдается выраженный сигнал SEF, А.Ю. Белик1, В.И. Кукушкин2, А.Ю. Рыбкин1, Н.С. Горячев1, тогда как у свободного хлорина е6 флуоресценция SEF от-Д.А. Полетаева1, В.Ю. Кузнецов13, О.А. Краевая1, сутствует, что согласуется с теорией, предсказывающей П.А. Михайлов4, П.А. Трошин15, А.И. Котельников1 обратную зависимость интенсивности SEF от квантового разработка мЕтодА СПЕктроСкоПии выхода обычной флуоресценции. Концентрационная за-ГиГАнтСкоГо комбинационного рассеяния висимость интенсивности SEF линейна для исследуемых и поверхностно-усиленной диад в диапазоне 0,1-2,0 мкМ. Эти эффекты позволяют ФлУорЕСЦЕнЦии для детектирования с высокой чувствительностью определять содержание ис-водорАСтворимыХ Производных следуемых соединений, обладающих малым квантовым ФУллЕрЕнов и иХ ДиАД С Хлорином Е6 выходом для обычной флуоресценции в растворах. 1ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область, Исследования поддержаны Программой Президиума Россия; РАН № 1«Наноструктуры: физика, химия, биология, 2ФГБУНИФТТРАН, Черноголовка, Московская область, основы технологий», гос. заданием ФАНО (№ гос. регистра-Россия; ции 01201361875) и грантом РФФИ № 18-34-00607мола. 3МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия; 4ФГБУН«ИНХС им. А.В. Топчиева РАН», Москва, Россия; А.П. Бер, А.Э. Мачулкин, М.В. Ковальчук, Н.С. Воробьева, 5Сколковский институт науки и технологий, Москва, Россия Е.К. Белоглазкина, С.В. Ковалев, В.Э. Котелянский, введение. Водорастворимые производные фуллере- А.Г. Мажуга нов (впф) имеют широкий спектр биологической актив- синтез и биологические испытания ности и являются перспективными с точки зрения созда- конЪЮГАТОв ПАклитАкСЕлА нА оСновЕ ния на их основе лекарственных препаратов. В ИПХФ ингибитора ПроСТАтичЕСкоГО РАН разработаны методы синтеза различных ВПХ С60, СПЕЦиФичЕСкоГо мембранного АнтиГЕнА а также водорастворимых ковалентных диад ВПФ-краси- Для тЕрАПии рака ПрЕДСТАтЕлЬной ЖЕлЕЗы тель. В предыдущих работах была показана перспектив- МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия ность использования таких диад в качестве высоко- введение. В 2012 г. рак предстательной железы (РПЖ) эффективных фотосенсибилизаторов для применения был 2-м по распространенности злокачественным новоо-в фотодинамической терапии. В связи с этим разработка бразованием среди мужского населения (1,1 млн новых методов детектирования таких наночастиц в тканях ор- случаев). Широкий спектр методов лечения заболевания, ганизма является актуальной задачей биологии и фунда- таких как радикальная простатэктомия, лучевая терапия, ментальной медицины. Известно, что фуллерены облада- гормональная терапия и химиотерапия, не позволяет про-ют невыраженным спектром поглощения в УФ-области водить эффективное лечение опухолей, имеющих метаста-и не проявляют флуоресцентных свойств, что затрудняет зы. Помимо этого, многие методы обладают различными их детектирование наиболее традиционными спектраль- побочными эффектами. В качестве одного из решений ными методами. Флуоресценция красителей, входящих данной проблемы выступает направленная доставка пров структуру диад ВПФ-краситель, практически полно- тивоопухолевых препаратов. В клетках РПЖ наблюдается стью потушена и также трудно детектируема. Одним повышенная экспрессия простатического специфического путей решения данной проблемы является использо- го мембранного антигена (ПСМА) по сравнению со здо-вание явлений гигантского комбинационного рассеяния ровыми клетками. Существует ряд низкомолекулярных (метод поверхностно-усиленной Рамановской спектро- лигандов, обладающих высокой аффинностью к ПСМА. скопии, surface-enhanced Raman spectroscopy, SERS) и по- Цель исследования. Разработка конъюгатов противо-верхностно-усиленной флуоресценции (surface-enhanced опухолевого препарата паклитаксел с рядом лигандов, fluorescence, SEF). специфично связывающихся с ПСМА. Связь терапевти-Цель исследования. Исследование спектров SERS ческого агента и лиганда осуществлялась посредством и спектров SEF хлорина е6 и водорастворимых ковалент- углеродного линкера, который обеспечивает высвобожде-ных диад фуллерен—хлорин. ние лекарства внутри клетки. Часть лигандов содержали
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
