CC BY
0
соответствуют друг другу (^-квадрат= 0,52), нет смещения. При этом существует ряд наблюдений, в которых количество С034+ клеток по данным спутника было ниже допустимого для клинического использования в соответствии с протоколами трансплантации, однако это не было подтверждено исследованием данного показателя в крио-контейнере. Был проведен многофакторный анализ, при котором вывод о наличии аномальной пары криоконтейнер-спутник делается на основе анализа совокупности показателей. С помощью методов ро-бастной регрессии было построено общее распределение признаков
При л о ж ен и е 1
и выделены наблюдения, выпадающие из общей зависимости. Было обнаружено порядка 10% аномальных пар криоконтейнер-спутник, то есть для 90% пар содержимое спутника соответствует содержимому криоконтейнера в пределах существующей вариабельности, а в 10% содержимое спутника значимо отличается от содержимого контейнера, преимущественно в сторону снижения показателей.
Заключение. В 10% наблюдений абсолютное число СИ34+ клеток в паре криоконтейнер-спутник значимо различается, что не позволяет опираться только на. данные спутника при оценке качества трансплантата.
Спицын В. К., Накастоев И. М., Чабаева Ю. А., Давыдова Ю. О., Байтерякова О. Н., Теляшов М. А., Куликов С. М.,
Гальцева И. В., Гапонова Т. В.
ВЛИЯНИЕ ДОЛИ ИЕЙТРОФИЛОВ В ЛЕЙКОКОНЦЕИТРАТЕ ИА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ ВСЕХ ЯДРОСОДЕРЖАЩИХ КЛЕТОК
ПОСЛЕ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО ХРАНЕНИЯ
ФГБУ«НМИЦгематологии» Минздрава России
Введение. Основными типами ядросодержащих клеток (ЯСК), составляющими лейкокон цен трат, являются нейтрофилы, моноциты, лимфоциты и CD34+ клетки, при этом, разные фракции по-разному переносят низкотемпературное хранение. Нейтрофилы имеют самую низкую жизнеспособность после криоконсервирования. Одним из критериев оценки качества трансплантата по данным ЕВМ.Т (European Society for Blood and Marrow Transplantation) является жизнеспособность ядросодержащих клеток (ЯСК). Данный показатель оценивается методом проточной цитометрии и должен быть выше 50%.
Цель работы. Оценить жизнеспособность ЯСК после низкотемпературного хранения в зависимости от исходной доли нейтрофилов в лейкоконцентрате.
Материалы и методы. В анализ было включено 44 криоконтейнера с лейкоконцентратом с известной долей нейтрофилов от всех ЯСК до заморозки. Жизнеспособность всех ЯСК и их различных фракций оценивали методом проточной цитометрии с использованием красителя 7-аминоактиномицина D. Долю нейтрофилов определяли при помощи автоматического гематологического анализатора.
Результаты и обсуждение. Была исследована ассоциация доли живых ЯСК после размораживания лейкоконцентрата и доли
нейтрофилов до криоконсервирования. По результатам регрессионного анализа установлено, что доля жизнеспособных ЯСК ассоциирована с начальным содержанием нейтрофилов (^-квадрат= 0,38). Сувеличением доли нейтрофилов в лейконцентратеуменьшается доля жизнеспособных ЯСКпосле низкотемпературного хранения. Это объясняется, по всей видимости тем, что нейтрофилы существенно хуже переносят заморозку по сравнению с другими фракциям. В среднем выживает 30,74% нейтрофилов, 83,63% лимфоцитов, 82,75% моноцитов, 82,86% СШ4+ клеток. Во всех контейнерах с жизнеспособностью ЯСК менее 50% исходная доля нейтрофилов была более 60% (рис. 1). При этом ассоциации жизнеспособности С034+ клеток отуровня нейтрофилов в исходном лейкоконцентрате не обнаружено (рис. 2). Можно предположить, что доля жизнеспособных ЯСК не всегда является объективным показателем качества трансплантата, так как не отражает жизнеспособность различных фракций и может объясняться высокой долей нейтрофилов в исходном лейкоконцентрате.
Заключение. Исходное содержание нейтрофилов в лейкоконцентрате является одним из факторов, влияющих на жизнеспособность ЯСК после низкотемпературного хранения, что стоит учитывать при оценке качества трансплантата. Ассоциации жизнеспособность С034+ клеток отуровня нейтрофилов в лейкоконцентрате не обнаружено.
Стародуб С. М.1, Сидорова Ю. В.2, Северина Н. А.2, Бидерман Б. В.2, Февралева И. С.2, Глинщикова О. А.2,
Лукьянова И. А.2, Судариков А. Б.2
N08 ПРИ ОМЛ: ВЫЯВЛЕНИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ РЬТЗ И КЛОНАЛЬНОЙ ГЕТЕРОГЕННОСТИ
1ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
(Сеченовский Университет), 2ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. При острых миелоидных лейкозах (ОМЛ) выделяют два наиболее важных типа мутаций гена FLT3: FLT3-ITD и FLT3-TKD. Мутация FLT3-ITD (Internal Tandem Duplication) встречается
у 25—30% пациентов, представляет собой внутреннее тандемное удвоение в пределах экзонов 14 и 15 гена-F-^ZU, соответствующих околомембранному домену белка. Мутации FLT3-TKD (Tyrosine Kinase
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
Domain) — это точечные мутации в тирозинкиназном домене, среди которых наиболее часто встречается мутация D835, обнаруживаемая с частотой 7—10%. В последние годы растет интерес именно к мутациям FLT3-TKD. Следует отметить, что у 1—12% пациентов с ОМ Л мутации FLT3-ITD и FLT3-TKD обнаруживаются одновременно. Согласно литературным данным, у этих пациентов может быть обнаружена резистентность к ингибиторам тирозинкиназ и некоторым цитостатикам. Золотым стандартом определения FLT3-ITD считается фрагментный анализ, который выявляет большинство вставок самой разной длины. Для определения мутаций FUFZ-TKD применяют методы фрагментного анализа и аллель-специфичной ПЦР, которые выявляют точечные замены только в горячей точке D835, хотя спектр мутаций .FLZI-TKD может быть существенно шире.
Цель работы. Определить роль секвенирования нового поколения (NGS) при исследовании мутаций гена^-£\0"в домене TKDy первичных пациентов с ОЖЛ.
Спектр мутаций FLT3-TKD
21 экзон
16 +17 экзоны
I 1 I в I I I I 11
✓ ✓ ✓ S / J> S / y4 f
I
4F
Рис.
Материалы и методы. В исследовании использовали образцы костного мозга, полученные от пациентов с ОЖЛ (л=61), наблюдавшихся в ФГБУ «НМИЦ гематологии» ЖЗ РФ в период с 2021 по 2023 г. В соответствие с классификацией ELN 2022 пациентам были присвоены группы риска: 14 — благоприятная, 33 — промежуточная, 14 — неблагоприятная. FLT3-ITD определяли методом фрагментного анализа, мутации FLT3-TKD — методом аллель-специфичНОЙ ПЦР (АС-ПЦР) И NGS (16, 17, 21 экзоны).
Результаты и обсуждение. Жетодом NGSy 22 (36%) пациентов были выявлены мутации FLT3-TKD и/или FLT3-ITD: только FLT3-ITD у 11 пациентов (18%), только .F.LZT-TKD у 6 пациентов (9,8%), одновременно мутации .F£ZT-TKD H.F£ZT-ITDy 5 пациентов (8,2%). Большинство (15 из 61 — 24,6%) пациентов с мутациями .F.LZT-TKD и/или .ÎLZT-ITD были выявлены в группе промежуточного риска. На благоприятную и неблагоприятную группу приходилось 6,6% и 4,9% пациентов, соответственно. Большая часть мутаций ^Z/Z^-TKD пришлась на 21 экзон (Рис.1). Из них в положении D835 выявлено только 6 аминокислотных замен: 3 D835H, 1 D835V 1 D835Y, 1 D835E. Интересно, что у 6 (9,8%)
пациентов выявлялась субклональная гетерогенность по мутациям в TKD домене FLT3: множественные клоны у 4 (6,5%), клоны с частотой мутантного аллеля <5% — у 2 (3,3%). Сравнение NGS и АС-ПЦР показывает, что последний метод выявляет существенно меньше мутаций. В нашей когорте пациентов только у 3-х были выявлены мутации FLT3-TKD методом АС-ПЦР: 2 D835H, 1 D835Y.
Заключение. NGS позволяет выявить широкий спектр мутаций в TKD домене гена FLT3 в том числе выявить носителей одновременно мутаций FLT3-TKD и .FZ\Z!T-ITD, что позволяет уточнить риски возможной резистентности к ингибиторам тирозинкиназ. Жножественный и низкопроцентный характер мутаций FLT3-TKD говорит о том, что мутация часто происходит на поздних этапах лей-козогенезаи обеспечивает субклона льну ю гетерогенность опухоли.
Старцев А. А., Панасенко М. Н., Соловьев М. В., Соловьева М. В., Абакумова А. В., Мамаева Е. А., Хышова В. А., Иругова Э. 3.,
Двирнык В. Н., Менделеева Л. П.
СОПОСТАВЛЕНИЕ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫХ ПАРАМЕТРОВ И КОНЦЕНТРАЦИИ ЦИРКУЛИРУЮЩЕГО БЕЛКА ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА УСАК У БОЛЬНЫХ ММ В ДЕБЮТЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Версикан (VCAN) — белок внеклеточного матрик-са, экспрессирующийся преимущественно на стромальных клетках костного мозга иучаствующий в процессах клеточной адгезии, пролиферации и миграции. Также было обнаружено, что при множественной миеломе (MM) VCAN играет важную роль в трансформации нормальной плазматической клетки в клональную. Поверхностный домен VCAN расщепляется ферментами, циркулирует в крови и может быть обнаружен в сыворотке методом иммуноферментного анализа (ИФА). Однако патофизиологическая роль циркулирующего белка VCAN и взаимосвязь с клинико-диагностическими характери-стикамиу больных ММ практически не изучена.
Цель работы, оценить концентрацию циркулирующего VCAN у больных ММ и сопоставить с клинико-лабораторными параметрами в дебюте заболевания.
Материалы и методы. В исследование включены 64 больных (36-женщин, 28-мужчин) в возрасте от 26 до 80 лет (медиана 55) с впервые выявленной ММ. По ISS I ст. была определена в 35,9% случаев, II ст. — в 28,2%, III ст. — в 35,9%. По R-ISS наиболее часто диагностировали II ст. (51,6%), I и III ст. определялись в 23,4% и 25% случаев, соответственно. Концентрацию циркулирующего VCAN в сыворотке крови оценивали методом ИФА в дебюте заболевания. В качестве контроля использовали сыворотку крови 16 доноров. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы SPSS.
Результаты и обсуждение. Медиана концентрации белка VCAN у доноров составила 2163,9 нг/мл (1335,6—3086,5). Концентрация циркулирующего VCAN у больных ММ в дебюте заболевания была достоверно (¿=0,001) выше: медиана — 3198,4 нг/мл (704,5—15194,4). В зависимости от содержания VCAN больные оыли распределены на 2 группы. I группа включала 29 больных (45,3%), у которых концентрация исследуемого белка не превышала донорских значений; во II группе было 35 больных (54,7%) с повышенным содержанием исследуемого белка в крови: диапазон значений от 3141,1
нг/мл до 15194,4 нг/мл (медиана 4708,7). Проведено сопоставление клинико-лабораторных параметров и детекции циркулирующего VCANy больных ММ в дебюте заболевания (таблица). При обнаружении циркулирующего VCAN в сыворотке крови выявлялись следующие статистически значимые (^<0,05) зависимости — у больных
Таблица. Сопоставление клинико-лабораторных параметров и концентрации циркулирующего УСАЫ у больных ММв дебюте заболевания
Параметры Клинико-лабораторные показатели в зависимости от концентрации циркулирующего УСАЫ в крови (медиана, разброс значений) Р-значе-ние
Нормальная (п=29) Повышенная (п=35)
DS (11/111) 8/21 2/33 0,024
ISS (I/II/III) 16/8/5 7/10/18 0,04
R-ISS (I/II/III) 10/14/3 5/19/11 0,049
Гемоглобин (г/л) 112(65-146) 107(66-143) 0,188
Концентрация общего белка (г/л) 90,8 (57-128) 93(62-151) 0,548
Концентрация общего кальция (ммоль/л) 2,45 (1,23-2,84) 2,5(2,1-3,31) 0,158
Концентрация креатинина (мкмоль/л) 70,2 (34-513) 93,1 (51-571) 0,03
Концентрация альбумина (г/л) 38,9 (25,4-51) 3^6 (22-46,5) 0,299
Активность ЛДГ (Е/л) 166(73-634) 187(71-694) 0,048
Концентрация (52-микроглобулина (мг/л) 2,73 (1,44-38,8) 5,39(2,2-41,5) 0,044
М-градиент (г/л) 26,9 (0-72,5) 35,4(0-82,7) 0,474
Концентрация вовлеченной СЛЦ (мг/л) 151 (26,1 - 2975) 361 (14,1-354500) 0,002
Экскреция белка Бенс-Джонса (г/сут) 0,12(0 - 10,8) 0,58 (0-4,62) 0,192
Плазматические клетки в миелограмме (%) 18(0,4 - 63) 20,8(0,8-91,6) 0,877
Частота выявления цитогенетических аномалий высокого риска(%) 24,1 34,3 0,041
Частота выявления костных плазмоцитом (%) 51,6 59,9 0,304
Частота выявления >2 плазмоцитом (%) 24,1 37,12 0,037
Частота выявления крупных плазмоцитом >5 см (%) 30,1 26,7 0,362
Частота выявления внекостных плазмоцитом (%) 0 14,3 0,034
