CC BY
0
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
у 18 больных ПНГ («=18), из них у 8 диагноз, в соответствии с национальными клиническими рекомендациями, установлен впервые (группа нелеченых больных), остальные получали патогенетическую терапию ингибитором С5-компонента комплемента более 6 месяцев, в том числе 3 пациента — более 12 месяцев. Соотношение мужчин и женщин составило 10:8, медиана возраста — 42 года (20—69 лет). Контрольная группа включала 40 доноров крови, в возрасте от 20 до 60 лет, медиана — 37 лет (м/ж 28:12). Иммунофенотипирование лимфоцитов крови проводили методом проточной цитометрии с использованием панели моноклональных антител к Т-хелперам общим (ТН, СШ+С04+), Т-регуляторным клеткам (Тге§, СОЗ+С04+С025Ы£ЬС01271о"^), а также Тге§, несущим иммунофено-типы Т-хелперов 17 типа (Тге§ТН17, СОЗ+С04+С025Ы£ЬС01271о"^С СК6+ССК4+ССК10+) и Т-хелперов 22 типа (Тге^ТН22, СШ+С04+С02 5Ы£ЬС01271о"^ССК.6+ССК4+ССК10~). Статистическая обработка результатов выполнена с помощью /'-критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение. Анализ субпопуляционного состава Т-лимфоцитов показал, что абсолютное число Тге§ТН17 и Тге§ТН22 у больных ПНГ было достоверно ниже, чем в контрольной группе (^<0,0001 и ^2<0,0001). Графики распределения данных показателей для пациентов и контрольной группы представлены ниже. Однофакторный анализ изученных лабораторных показателей у нелеченых больных ПНГ и пациентов, получающих патогенетическую терапию, достоверных различий не выявил (^>0,05).
Заключение. Выявленные изменения в субпопуляционном составе Т-лимфоцитов у больных ПНГ могут свидетельствовать о дефиците регуляторной функции специализированных субпопуляций Т-лимфоцитов, ответственных за контроль иммунной толерантности к собственным антигенам, что обосновывает целесообразность дальнейшего изучения взаимосвязи выявленных нарушений с особенностями течения ПНГ и ответом на патогенетическую терапию.
Хабибуллин Н. Р., Мальчикова А. О., Хрульнова С. А., Коваль Н. О., Ликольд Е. Б., Клясова Г. А. ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЕДКИХ ВИДОВ ASPERGILLUS sPP. ПРИ ИНВАЗИВНОМ АСПЕРГИЛЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
ФГБУ«НМИЦгематологии» Миздрава России
Введение. Основными возбудителями НАЛ являются Aspergillus fumigatus, A. flav&d и -A. nigerr однако за последние годы наблюдается увеличение других видов Aspergillus spp., включая штаммы с природ-нойустойчивостью к противогрибковым препаратам. Так, природной резистентностью к амфотерицину В обладают A. nidulans, A. terreus и .A. alUaceus, а к вориконазолу — -A. lentulus иА. calidouatua.
Цель работы. Провести с помощью таргетного ДНК-секвенирования верификацию до вида штаммов Aspergillus spp., которые на основании морфологической идентификации (микроскопии) были отнесены к категории штаммов с природной резистентностью к противогрибковым препаратам.
Материалы и методы. В исследование были включены штаммы Aspergillus spp., выделенные из жидкости бронхоальвеолярного лава-жа (БАЛ) от больных ФГБУ «НМИЦ гематологии» с НАЛ и гематологическими заболеваниями (2000—2022 гг). КультуруА^л////«^ spp. получали на среде Чапека или Сабуро с декстрозой. Идентификацию Aspergillus spp. проводили на основании микроскопии с использованием атласа (de Hoog G.S. et al., 2021). Во всех случаях одновременно проводили идентификацию методом MALDI-TOF масс спектрометрии (МВТ Filamentous Fungi Library 2.0, Bruker). В качестве критерия надежной идентификации мицелиальных грибов использовали коэффициент совпадения (КС)>1,9, если два и более результата идентификации совпадали по виду, или КС>1,2 при совпадении по виду четырех первых идентификаций микроорганизмов. В качестве стандарта идентификации Aspergillus spp. использовали таргетное ДНК секвенирование фрагментов генов внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS), (3-тубулина, кальмодулина и актина.
Результаты и обсуждение. Было проведено исследование 8 Aspergillus spp. (A. nidulans n=3, A.terreus n=3 и А. alllaceus n=2), которые по результатам морфологической идентификации были отнесены к категории штаммов с природной резистентностью к амфотерицину В (табл.). Несоответствие между морфологической идентификацией и секвенированием наблюдалось по 5 (62,5%) из 8 Aspergillus spp.,
между результатами масс-спектрометрии и таргетным ДНК секвенированием — по 3 (37,5%) из 8 штаммов. Всеми использованными методами была подтверждена только видовая принадлежность A. nidulans (n=S). Все штаммы, исходно идентифицированные на основании микроскопии как Л. terreus (n=3) иА. alllaceus (n=2), имели другую видовую принадлежность на основании таргетного ДНК секвенирования. При сравнении MALDI-TOF MS с таргетным ДНК секвенированием было совпадение по 5 штаммам (A. nidulans n=3, A. tamarii n=2), в то время как A tnicronesiensis U.A. chevalieri не удалось идентифицировать с помощью масс спектрометрии, a A. citrinoterre^ был идентифицирован как A terreus.
Заключение. Отмечено совпадение результатов идентификации разными методами только для A. nidulans, в то время как по другим видам Aspergilli^ spp. выявлены несоответствия, особенно при сравнении морфологической идентификации и идентификации с помощью таргетного ДНК секвенирования. Безусловно, исследование необходимо продолжать, но для истинной идентификации редких видов Aspergillus spp. и проведения адекватной терапии следует применять таргетное ДНК-секвенирование.
Таблица. Результаты видовой идентификации Aspergillus spp. с природной устойчивостью к антимикотикам
№ штамма Идентификация Aspergillus spp.
Морфологическая (микроскопия) MALDI-TOF MS Таргетное ДНК-секвенирование
Вид Коэффициент совпадения
A. nidulans A. nidulans 2,0 A. nidulans
2 A. nidulans A. nidulans 2,0 A. nidulans
3 A. nidulans A. nidulans 1,8 A. nidulans
4 A. ferreus A. ferreus 17 A. clfrinoferreus
5 A. ferreus A. tamarii 1,5 А. tamarü
6 A. ferreus Не идентифицирован A. mlcronesiensls
7 A. alllaceus Не идентифицирован A. chevalieri
A. alllaceus A. tamarü 1,4 А. tamarü
Хабибуллин Н. Р.1, Мальчикова А. О.1, Ветохина А. В.2, Хрульнова С. А.1, Ликольд Е. Б.1, Коваль Н. О.1, Клясова Г. А.1 МУТАЦИИ В ГЕНЕ Ш У САШЮА ОЬАБЯАТА'. ПЕРВОЕ СООБЩЕНИЕ В РОССИИ
1ФГБУ «НМИЦ гематологии» Миздрава России, 2ГБУЗ «Иркутская ордена «Знак Почета» областная клиническая больница»
Введение. Candu)aglabrata входит в число ведущих возбудителей инвазивного кандидоза. Препаратами выбора в лечении инвазив-ного кандидоза, вызванного С. glabrata, являются эхинокандины. Доказано, что мутации в высококонсервативных «bot spot»y4acTKax генов FKS являются причиной неэффективного лечения эхинокан-динами.
Цель работы. Выявить мутационные изменения в «hot spot» участках генов FKS среди С. glabratar выделенных из гемокультуры и других стерильных в норме образцов.
Материалы и методы. Проведено изучение штаммов С. glabrata, выделенных из стерильных в норме образцов от больных с инвазивным кандидозом в рамках многоцентрового проспективного исследования (2005—2022 гг.). Все штаммы были идентифицированы методом М.ALDI TOF масс-спектрометрии на анализаторе Microflex (Bruker Daltonics, Германия) в отделе микробиологии и антимикробной терапии ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ. Чувствительность к эхинокандинам исследовали методом серийных микроразведений в бульоне RPMI-1640 (Sigma Aldrich, США) согласно рекомендациям Института
При л о ж ен и е 1
клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI, M27M44S, 2022 г.). Чувствительность С. glabrata к анидулафунгину и каспофунгину определяли на основании пограничных значений минимальных подавляющих концентраций (МПК), CLSI, M27M44S, 2022 г. Штаммы оценивали как «чувствительные» при МПК<0,12 мкг/мл, «умеренно-резистентные» — при МПК 0,25 мкг/мл и «резистентные» — при МПК >0,5 мкг/мл. Для контроля использовали С. parapöilodLd АТСС22019 и С. albœaiu AT С С90028. Методом ПЦР (методика Dudiuk et al., 2014)у всех штаммов С. glabrata исследовали наиболее распространенные мутации в высококонсервативном «bot spot» 1 участке гена FKS1 (мутации F625S, S629P, D632E/ G/Y) и гена FKS2 (мутации F659S/V/Y, S663F/P). Секвенирование по Сэнгеру «bot spot» 1 и «bot spot» 2участков генов FKS проводили среди штаммов с мутациями, детектированными при ПЦР-исследовании, а также среди эхинокандин-резистентных штаммов. Нуклеотидные последовательности анализировали с помощью программного обеспечения Vector NTI Advance.
Результаты и обсуждение. Всего в исследование было включено 55 С. glabrata. Резистентность к анидулафунгину и каспофунгину была определенау 3 (5,5%) штаммов, значения МПК которых варьировали от 0,5 мкг/мл до >8 мкг/мл (табл.), все штаммы были выделены
от больных в ОРИТ без гематологического заболевания. В одном из трех эхинокандин-устойчивых изолятов была обнаружена мутация S663P в «bot spot» 1 гена FKS2. Значение МПК каспофунгина у штамма с мутацией S663P в гене FKS2 было наиболее высоким и составило >8 мкг/мл. Штамм С. glabrata с мутацией S663P в гене FKS2 был выделен из крови от больной с панкреонекрозом без гематологического заболевания, находившейся в отделении реанимации и интенсивной терапии.
Заключение. Впервые в России нами был обнаружен штамм С. glabrata с мутацией S663P в гене FKS2. Изолят характеризовался устойчивостью к эхинокандинам и имел экстремально высокое значение МПК каспофунгина (>8 мкг/мл). В этой связи должна быть настороженность при отсутствии эффекта от терапии эхинокандинами.
Таблица. С. glabrata, устойчивые к эхинокандинам
№ штамма Образец Отделение Дата выделения Значения МПК (мкг/мл) Мутации bFKSÎ Мутации в FKS2
Анидулафунгин Каспофунгин HS1 HS2 HS1 HS2
Кровь ОРИТ 06.03.2019 >8 нет нет S663P нет
2 Кровь ОРИТ 10.06.2013 0,5 нет нет нет нет
3 Кровь ОРИТ 12.06.2013 0,5 0,5 нет нет нет нет
Примечание: HS — «hot spot».
Хайретдинов Р. К., Гиматдинова Г. Р., Кривова С. П., Чибашова А. В., Давыдкин И. Л., Рогозина Л. А., Данилова О. Е. ОТ-ргоВОТ КАК ПРОГНОСТИЧЕСКИЙ ФАКТОР ТЕЧЕНИЯ ОМЛ
Самарский государственный медицинский университет
Введение. Острые миелоидные лейкозы (ОМЛ) — клональные опухолевые заболевания кроветворной ткани, связанные с мутацией в клетке-предшественнице гемопоэза, следствием которой становятся блок дифференцировки и бесконтрольная пролиферация незрелых миелоидных клеток. Прогноз течения ОМЛ определяют: во-первых факторы основанные на характеристиках пациента и состоянии его общего здоровья и во вторых факторы, обусловленные биологическими характеристиками лейкемического клона. Сопутствующие сердечно-сосудистые заболевания имеют особое значение, поскольку они влияют на переносимость лечения, раннюю смерть и выживаемость пациентов, получающих полихимиотерапию.
Цель работы. Мозговой натрийуретический пептид (МТ-ргоВМР) является общепризнанным маркером нарушения сердечной функции. Определение уровня МТ-ргоВМР в плазме крови помогает оценить степень тяжести хронической сердечной недостаточности, прогнозировать дальнейшее развитие заболевания, а также оценивать эффект проводимой терапии. Однако до сих пор мало что известно о влиянии уровней МТ-ргоВМР на прогноз течениеу пациентов с ОМЛ.
Материалы и методы. Мы провели проспективное исследование и наблюдение за 156 пациентами с ОМЛ (медиана возраста 62 года диапазон возраста 21—79 лет; из них моложе 60 лет — 74, старше 60 лет — 82 пациента; женщин 59 человек, мужчин 53). Период
наблюдения: 2018—2022 годы. Индукционная терапия (1—2 курса) проводилась по схеме 7+3 или при наличии противопоказаний малыми дозами цитарабина, консолидация по схемам 7+3 Ida, цитарабин в высоких дозах, FLAG-IDA или продолжалось ведение курсами малых доз цитарабина у коморбидых пациентов. Определение уровня NT-proBNP проводили до начала терапии. Оценивались наступление полной ремиссии, отсутствии ремиссии после 3 курсов химиотерапии и смерть в течении 60 дней от момента начала химиотерапии.
Результаты и обсуждение. У 63,8% выявлен повышенный уровень NT-proBNP, ay 36,2%, уровень находился в пределах нормы (0—125 пг/ мл), а у 6,4% NT-proBNP превышал 1500 пг/мл. Уровни NT-proBNP значительно различались между пациентами в возрасте до 60 лет (146,7±78,3 пг/мл) и пациентами старше 60 лет (226±91,7 пг/мл). У пациентов с ECOG 1 и больше NT-proBNP (325,1±91,9 пг/мл) был значительно выше по сравнению с пациентами с ECOG 0 (133,6±74,1 пг/мл) (^=0,008). После индукционной терапии 70,2% была достигнута полная ремиссия,у 20,2% не было ремиссии, а 9,6%умерли в течение 60 дней после начала химиотерапии. Средниеуровни NT-proBNP значительно различались у пациентов с ремиссией, без ответа и ранней летальностью: 153,3, 225,9 и 735,5 пг/мл соответственно (^<0,0001).
Заключение. Таким образом, NT-proBNP может быть одним из прогностических факторов течения и прогноза ОМЛ.
Хамаганова Е. Г., Хижинский С. П., Урыбин И. Ю., Кузьминова Е. П., Абдрахимова А. Р., Леонов Е. А., Лепехина М. А., Васильева В. А., Дроков М. Ю., Покровская О. С., Кузьмина Л. А., Паровичникова Е. Н.
НЬА-БО 02 РЕЦИПИЕНТА И РАЗВИТИЕ НЕСОСТОЯТЕЛЬНОСТИ ТРАНСПЛАНТАТА ПРИ ГАПЛО-ТГСК
ФГБУ«НМИЦгематологии» Минздрава России
Введение. НЬА-молекулы класса II — гетеродимеры, образующиеся при соединении а- и ^-цепей. Полиморфизму НЬА-ОО характерен для обеих цепей. Дополнительное разнообразие НЬА-ОО обеспечивается трансдимеризацией а-цепи от одного родителя с ^-цепью от другого. Науспешную димеризацию НЬА-ОО влияет стабильность гетеро-димера; а-цепи аллелей 00д1*02, 03, 04, 05 и 06 образуютустойчивые гетеродимеры с ^-цепями аллелей ООВГ''"02, 03 и 04 (молекулы группы 01), а а-цепи 00д1*01 с (3-цепями аллелей 0031*05 и 06 (молекулы группы 02). Имеются ограничения, не благоприятствующие трансди-меризации а-цепей 01 с (3-цепями 02 или а-цепей 02 с (3-цепями 01. У человека может быть 1, 2 или 4 уникальные молекулы НЬА-ОО. При неродственной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) носительство НЬА-ОО 02 снижает безрецидивную вы-
живаемость и повышает риск развития рецидива по сравнению с больными с HLA-DO Gl/Gl [Petersdorfet al., 2022].
Цель работы. Цель — исследовать влияние HLA-DO G2 реципиента на развитие несостоятельности трансплантата после га-пло-ТГСК.
Материалы и методы. В исследование вошли 167 больных различными гемобластозами, которым в ФГБУ «НЖИЦ гематологии» Минздрава России было выполнено 192 гапло-ТГСК. HLA-типирование выполнялось методом секвенирования следующего поколения с использованием MiSeq (Illumina, США), повторное — PCR-SSO с использованием Luminex (Immucor, США). Сравнения групп проводили с помощью критерия хи-квадрат, при необходимости — точного критерия Фишера. Различия считали достоверными приуровне значимости^<0,05.
