CC BY
0
I ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
у 18 больных ПНГ («=18), из них у 8 диагноз, в соответствии с национальными клиническими рекомендациями, установлен впервые (группа нелеченых больных), остальные получали патогенетическую терапию ингибитором С5-компонента комплемента более 6 месяцев, в том числе 3 пациента — более 12 месяцев. Соотношение мужчин и женщин составило 10:8, медиана возраста — 42 года (20—69 лет). Контрольная группа включала 40 доноров крови, в возрасте от 20 до 60 лет, медиана — 37 лет (м/ж 28:12). Иммунофенотипирование лимфоцитов крови проводили методом проточной цитометрии с использованием панели моноклональных антител к Т-хелперам общим (ТН, СШ+С04+), Т-регуляторным клеткам (Тге§, СОЗ+С04+С025Ы£ЬС01271о"^), а также Тге§, несущим иммунофено-типы Т-хелперов 17 типа (Тге§ТН17, СОЗ+С04+С025Ы£ЬС01271о"^С СК6+ССК4+ССК10+) и Т-хелперов 22 типа (Тге^ТН22, СШ+С04+С02 5Ы£ЬС01271о"^ССК.6+ССК4+ССК10~). Статистическая обработка результатов выполнена с помощью /'-критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение. Анализ субпопуляционного состава Т-лимфоцитов показал, что абсолютное число Тге§ТН17 и Тге§ТН22 у больных ПНГ было достоверно ниже, чем в контрольной группе (^<0,0001 и ^2<0,0001). Графики распределения данных показателей для пациентов и контрольной группы представлены ниже. Однофакторный анализ изученных лабораторных показателей у нелеченых больных ПНГ и пациентов, получающих патогенетическую терапию, достоверных различий не выявил (^>0,05).
Заключение. Выявленные изменения в субпопуляционном составе Т-лимфоцитов у больных ПНГ могут свидетельствовать о дефиците регуляторной функции специализированных субпопуляций Т-лимфоцитов, ответственных за контроль иммунной толерантности к собственным антигенам, что обосновывает целесообразность дальнейшего изучения взаимосвязи выявленных нарушений с особенностями течения ПНГ и ответом на патогенетическую терапию.
Хабибуллин Н. Р., Мальчикова А. О., Хрульнова С. А., Коваль Н. О., Ликольд Е. Б., Клясова Г. А. ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЕДКИХ ВИДОВ ASPERGILLUS sPP. ПРИ ИНВАЗИВНОМ АСПЕРГИЛЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
ФГБУ«НМИЦгематологии» Миздрава России
Введение. Основными возбудителями НАЛ являются Aspergillus fumigatus, A. flav&d и -A. nigerr однако за последние годы наблюдается увеличение других видов Aspergillus spp., включая штаммы с природ-нойустойчивостью к противогрибковым препаратам. Так, природной резистентностью к амфотерицину В обладают A. nidulans, A. terreus и .A. alUaceus, а к вориконазолу — -A. lentulus иА. calidouatua.
Цель работы. Провести с помощью таргетного ДНК-секвенирования верификацию до вида штаммов Aspergillus spp., которые на основании морфологической идентификации (микроскопии) были отнесены к категории штаммов с природной резистентностью к противогрибковым препаратам.
Материалы и методы. В исследование были включены штаммы Aspergillus spp., выделенные из жидкости бронхоальвеолярного лава-жа (БАЛ) от больных ФГБУ «НМИЦ гематологии» с НАЛ и гематологическими заболеваниями (2000—2022 гг). КультуруА^л////«^ spp. получали на среде Чапека или Сабуро с декстрозой. Идентификацию Aspergillus spp. проводили на основании микроскопии с использованием атласа (de Hoog G.S. et al., 2021). Во всех случаях одновременно проводили идентификацию методом MALDI-TOF масс спектрометрии (МВТ Filamentous Fungi Library 2.0, Bruker). В качестве критерия надежной идентификации мицелиальных грибов использовали коэффициент совпадения (КС)>1,9, если два и более результата идентификации совпадали по виду, или КС>1,2 при совпадении по виду четырех первых идентификаций микроорганизмов. В качестве стандарта идентификации Aspergillus spp. использовали таргетное ДНК секвенирование фрагментов генов внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS), (3-тубулина, кальмодулина и актина.
Результаты и обсуждение. Было проведено исследование 8 Aspergillus spp. (A. nidulans n=3, A.terreus n=3 и А. alllaceus n=2), которые по результатам морфологической идентификации были отнесены к категории штаммов с природной резистентностью к амфотерицину В (табл.). Несоответствие между морфологической идентификацией и секвенированием наблюдалось по 5 (62,5%) из 8 Aspergillus spp.,
между результатами масс-спектрометрии и таргетным ДНК секвенированием — по 3 (37,5%) из 8 штаммов. Всеми использованными методами была подтверждена только видовая принадлежность A. nidulans (n=S). Все штаммы, исходно идентифицированные на основании микроскопии как Л. terreus (n=3) иА. alllaceus (n=2), имели другую видовую принадлежность на основании таргетного ДНК секвенирования. При сравнении MALDI-TOF MS с таргетным ДНК секвенированием было совпадение по 5 штаммам (A. nidulans n=3, A. tamarii n=2), в то время как A tnicronesiensis U.A. chevalieri не удалось идентифицировать с помощью масс спектрометрии, a A. citrinoterre^ был идентифицирован как A terreus.
Заключение. Отмечено совпадение результатов идентификации разными методами только для A. nidulans, в то время как по другим видам Aspergilli^ spp. выявлены несоответствия, особенно при сравнении морфологической идентификации и идентификации с помощью таргетного ДНК секвенирования. Безусловно, исследование необходимо продолжать, но для истинной идентификации редких видов Aspergillus spp. и проведения адекватной терапии следует применять таргетное ДНК-секвенирование.
Таблица. Результаты видовой идентификации Aspergillus spp. с природной устойчивостью к антимикотикам
№ штамма Идентификация Aspergillus spp.
Морфологическая (микроскопия) MALDI-TOF MS Таргетное ДНК-секвенирование
Вид Коэффициент совпадения
A. nidulans A. nidulans 2,0 A. nidulans
2 A. nidulans A. nidulans 2,0 A. nidulans
3 A. nidulans A. nidulans 1,8 A. nidulans
4 A. ferreus A. ferreus 17 A. clfrinoferreus
5 A. ferreus A. tamarii 1,5 А. tamarü
6 A. ferreus Не идентифицирован A. mlcronesiensls
7 A. alllaceus Не идентифицирован A. chevalieri
A. alllaceus A. tamarü 1,4 А. tamarü
Хабибуллин Н. Р.1, Мальчикова А. О.1, Ветохина А. В.2, Хрульнова С. А.1, Ликольд Е. Б.1, Коваль Н. О.1, Клясова Г. А.1 МУТАЦИИ В ГЕНЕ Ш У САШЮА ОЬАБЯАТА'. ПЕРВОЕ СООБЩЕНИЕ В РОССИИ
1ФГБУ «НМИЦ гематологии» Миздрава России, 2ГБУЗ «Иркутская ордена «Знак Почета» областная клиническая больница»
Введение. Candu)aglabrata входит в число ведущих возбудителей инвазивного кандидоза. Препаратами выбора в лечении инвазив-ного кандидоза, вызванного С. glabrata, являются эхинокандины. Доказано, что мутации в высококонсервативных «bot spot»y4acTKax генов FKS являются причиной неэффективного лечения эхинокан-динами.
Цель работы. Выявить мутационные изменения в «hot spot» участках генов FKS среди С. glabratar выделенных из гемокультуры и других стерильных в норме образцов.
Материалы и методы. Проведено изучение штаммов С. glabrata, выделенных из стерильных в норме образцов от больных с инвазивным кандидозом в рамках многоцентрового проспективного исследования (2005—2022 гг.). Все штаммы были идентифицированы методом М.ALDI TOF масс-спектрометрии на анализаторе Microflex (Bruker Daltonics, Германия) в отделе микробиологии и антимикробной терапии ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ. Чувствительность к эхинокандинам исследовали методом серийных микроразведений в бульоне RPMI-1640 (Sigma Aldrich, США) согласно рекомендациям Института
