CC BY
3Материалы и методы
В дебюте заболевания у пациентов с ЛКМ (n=18) были получены клетки периферической крови (ПК) (n=11), костного мозга (n=6) или биоптат лимфоузла (n=1). В качестве контроля были использованы клетки ПК пациентов с неопухолевыми заболеваниями системы крови (n=3). Из клеток выделяли ДНК и проводили бисульфитную конверсию. Амплифицировали CpG cg03425785, cg07769421 и cg23892310 c помощью подобранных условий реакции и праймеров, фланкирующих локусы интереса в традиционной ПЦР. Очищали продукт ПЦР и секвенировали его по Сэнгеру. Степень метилирования CpG определяли по ранее разработанной методике [3].
Результаты
В 5 образцах ПК был обнаружен лимфоцитоз. Разработанный метод позволил верно определить подтип ЛКМ в 80% (4/5) из них: по 2 случая С1- и С2-подтипов. В образцах костного мозга метод позволил верно определить подтип только в 50% случаев (3/6). Стоит отметить, что в норме доля лимфоцитов в костном мозге ниже, чем в ПК, и искажение клеточного состава костного мозга вследствие его лейкемизации обычно менее выражено, чем искажение формулы крови. Вероятно, с этим связана меньшая точность метода в костном мозге. В единственном образце, где в качестве источника ДНК была биопсия лимфоузла, подтип ЛКМ был определен верно (С1).
Выводы
Эпигенетический метод определения подтипа ЛКМ показал свою перспективность, но нуждается в доработке. Для повышения точности метода представляется целесообразным выделять ДНК не из суммарной клеточной популяции ПК или костного мозга, а из мононуклеарных клеток или из фракции В-лимфоцитов. Это позволит увеличить долю опухолевых клеток в образце и повысит точность метода.
Список литературы
1. Queirös, A. C . et al . Cancer Cell 30, 806-821 (2016) . DOI: 10 ,1016/j . ccell . 2016 . 09 . 014.
2 . Duran-Ferrer, M . et al . Nat . cancer 1, 1066-1081 (2020) . DOI: 10 ,1038/s43018-020-00131-2 .
3 . Karpenko, D . et al . DNA Cell Biol . 39, 790-800 (2020) . DOI: 10 ,1089/dna . 2019 . 5310 .
Исследование эффективности нового соматоклеточного противоопухолевого препарата «Мукоплазмин-ovа» для CAR-T терапии СА125-позитивных опухолей
Авторы:
(1) Боженко Владимир Константинович, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгено-радиологии» Минздрава России, Москва
(2) Киселева Яна Юрьевна, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадио-логии» Минздрава России, Москва
(3) Шишкин Александр Михайлович, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиоло-гии» Минздрава России, Москва
(4) Кулинич Татьяна Михайловна, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(5) Большакова Оксана Борисовна, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(6) Кудинова Елена Александровна, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России, Москва
(7) Солодкий Владимир Алексеевич, [email protected], ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадио-логии» Минздрава России, Москва
Ключевые слова
иммунотерапия, рак яичников, соматоклеточный лекарственный препарат, CAR-T терапия
Актуальность
Опухоль-специфичный антиген рака яичников СА125 считается привлекательной терапевтической антигенной мишенью для таргетной терапии [2]. В работе приведены результаты исследования противоопухолевой
эффективности нового соматоклеточного лекарственного препарата (СКЛП) «Мукоплазмин-ova», предназначенного для CAR-T терапии СА125-позитивных опухолей. СКЛП представляет собой аутологичные донорские Т-лимфоциты, экспрессирующие CAR-Т рецептор к СА125 [1].
Цель
Изучение специфической противоопухолевой эффективности in vivo СКЛП «Мукоплазмин-ova».
Материалы и методы
В качестве тест-системы использовалась ксенографтная модель СА125-позитивной опухоли клеток линии рака яичника человека OVCAR-3, перевитая мышам линии BALB/c(NUDE). Для получения СКЛП использовались аллогенные лимфоциты, трансфецированные плазмидной конструкцией, несущей ген CAR рецептора к СА125. СКЛП вводили 3-кратно, 1 раз в неделю, внутрибрюшинно, в дозах 1-105, 5105, Ы06 клеток в инъекцию. Эффективность оценивалась на основании продолжительности жизни животных и характеристик опухоли (масса тела животного, объем асцита, наличие опухолевых узлов). Для оценки специфичности воздействия СКЛП проведено сравнение с эффектом введения LAK-клеток мышей в тех же дозах. Контрольной группе проводили инъекции NaCl 0,9%.
Результаты
Наблюдаемое увеличение продолжительности жизни при воздействии «Мукоплазмин-ova» составило 28,7; 34,3; 54,5% соответственно введенным дозам (Ь105, 5-105, 1-106). Введение LAK-клеток также привело к увеличению продолжительность жизни животных (14,6; 36,5; 40,3% соответственно дозам введенных LAK-клеток). Прирост асцита был наиболее выражен в контрольной группе, наименьшие его значения были отмечены в группе с введением СКЛП в дозе 1-106. При некропсии показано, что в контрольной группе у всех животных присутствует асцитная жидкость от 1,5 до 5 мл, опухолевые узлы на внутренних органах (стенки брюшной полости, печень, диафрагма, селезенка); у животных группы «СКЛП в дозе 1-106» в 17% обнаружены опухолевые узлы на внутренней стенке брюшной полости, в 50% была обнаружена асцитная жидкость в объемах 1,3; 1,6 и 4,5 мл, в 50% случаев показано полное отсутствие признаков опухолевого поражения и асцита.
Выводы
Введение СКЛП «Мукоплазмин-ova» при 3 дозах продемонстрировало достоверное торможение роста опухоли асцитной формы рака яичника (OVCAR-3), а также достоверное увеличение продолжительности жизни животных при дозах применения СКЛП 5-105 и 1^106 лимфоцитов в инъекцию.
Список литературы
1. Сравнение эффективности плазмид 1 и 3 поколения, кодирующих химерный Т- клеточный рецептор к опухолевому
маркеру рака яичников / Я . Ю . Киселева, О . Б . Большакова, Т М . Кулинич [и др . ] // Вестник Российского научного
центра рентгенорадиологии . 2021. Т. 21, № 2 . С . 25-40 . EDN AFEKFA. 2 . Gao R, Lou N, Han X, Shi Y [MUC16: The Novel Target for Tumor Therapy] . Zhongguo Fei Ai Za Zhi . 2022 Jul 20;25(7):452-
459 . Chinese . doi: 10.3779/j . issn .1009-3419 . 2022 .101.31. PMID: 35899441; PMCID: PMC9346149.
Особенности экспрессии ^П-подобных рецепторов при раке ободочной кишки в зависимости от распространенности процесса
Авторы:
(1) Кит О.И., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(2) Дженкова Е.А., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России,Ростов-на-Дону
(3) Мирзоян Э.А., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(4) Новикова И.А., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(5) Сагакянц А.Б., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России,Ростов-на-Дону
(6) Златник Е.Ю., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(7) Бондаренко Е.С., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
(8) Шапошников А.В., [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
