CC BY
46
© н. В. Ширинбекова
ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России
Резюме. В статье приводятся данные сравнительного анализа клинико-генетических маркеров у больных с пурпурой Шенлейн-Геноха и здоровых детей. По результатам проведенного исследования, наличие аллеля А гена бета цепи фибриногена и аллеля А2 гена GPШa, возможно, является фактором риска развития тромботических осложнений у детей с пурпурой Шенлейн-Геноха, имеющих в структуре кожного синдрома некротический компонент, что следует учитывать при проведении антикоагулянтной и антиагрегантной терапии.
Ключевые слова: тромбофилия; дети; пурпура Шенлейна-Геноха.
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТРОМБОФИЛИЙ У ДЕТЕЙ
с пурпурой шенлейна-геноха
Пурпура Шенлейна-Геноха (ПШГ) является одним из наиболее часто встречающихся системных васкулитов с образованием JgA-иммунных депозитов и преимущественным поражением микрососудов кожи, суставов, желудочно-кишечного тракта, почек у детей и лиц молодого возраста. Данное заболевание характеризуется пальпируемой пурпурой, артралгиями и болями в животе, в большинстве случаев имеет благоприятный исход и заканчивается полным выздоровлением. Но иногда может осложняться желудочно-кишечными и легочными кровотечениями, развитием нефрита и редко неврологической симптоматикой [5]. Пурпура Шенлейна-Геноха возникает внезапно и в большинстве случаев имеет доброкачественное течение с последующим регрессом заболевания в течение 2-4 недель. Восстановление почечной функции может идти более длительно [2]. Точная этиология данного заболевания не известна. Предполагается, что иммунокомплексный механизм имеет наибольшее значение при ПШГ, который рассматривают как опосредуемое JgA-содержащими циркулирующими иммунными комплексами и активированными компонентами системы комплемента асептическое воспаление микрососудов с дезорганизацией эндотелия сосудистых стенок и развитием микротромбоваскулита [9].
Одной из причин развития тромбоваскулита при данной патологии можно предположить наличие наследственной тромбофилии, которая в той или иной степени может способствовать более тяжелому течению заболевания. Потенциально наиболее опасны абдоминальный и почечный синдромы. Первый связан с тромбированием мелких сосудов стенки кишечника и может осложниться ее перфорацией и инвагинацией, определяя ургентность возникшей ситуации. Почечный синдром обусловлен асептическим воспалением почечных сосудов и их тромбиро-ванием, что сопровождается микро- либо макрогематурией [1].
Существуют единичные работы по изучению генетических маркеров тромбофилий при ПШГ [3, 4]. Однако их роль в патогенетическом механизме микротромбоваскулитной реакции при ПШГ у детей остается малоизученной. Между тем изучение этого вопроса представляется нам весьма важным, так как позволит не только улучшить диагностику гемостазиологических нарушений, развивающихся у детей с иммуно-комплексным микротромбоваскулитом, но и проводить патогенетически обоснованные методы коррекции выявленных нарушений.
Цель исследования — провести сравнительный анализ клинико-анамнестического, лабораторного и молекулярно-генетического исследования у детей пурпурой Шенлейна-Геноха.
УДК: 616.151.5-053.2
материалы и методы исследования
Обследован 41 ребенок: 21 мальчик и 20 девочек, находившихся на лечении в гематологическом отделении ДГБ №1 г. Санкт-Петербурга. Возраст обследованных составил от 2 до 17 лет (средний возраст 8,2 года). Диагностику ПШГ осуществляли на основании клинико-анамнестических и лабораторных данных. В зависимости от течения заболевания были сформированы две группы: I группа — дети с острым течением ПШГ (23 пациента); II группа — дети с рецидивирующим течением (18 пациентов). В качестве контрольной была выбрана группа из практически здоровых детей (20 мальчиков и 11 девочек) в возрасте от 4 до 17 лет (средний возраст 12,5 лет).
♦ педиатр
том III № 3 2012
ISSN 2079-7850
Выделение ДНК осуществляли модифицированным фенольно-хлороформным методом из лейкоцитов периферической крови. Молекулярно-гене-тическое исследование включало тестирование генов, кодирующих компоненты плазменного звена гемостаза: инсерционно-делеционного полиморфизма 4G/5G гена PAI-1, мутации фактора V Лейден G1691A (FVL), мутации G20210A гена протромбина (G20210A FII), полиморфизм -455 G/A гена бета цепи фибриногена (-455 G/A FGB); гена кодирующего компонент тромбоцитарного рецептора, опосредующего процесс агрегации тромбоцитов: полиморфизм P1A1A2 (Leu33Pro) гена GpIIIa мембраны тромбоцита и гена компонента, вовлеченного в патогенез эндотелиальной дисфункции: полиморфизма С677Т гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR).
Определения мутации Лейден, мутации G20210A протромбина и полиморфизма С677Т MTHFR осуществляли методом мультиплексной полимераз-ной цепной реакции с помощью набора реагентов «ТромбоГЕН» (ООО «ГЕН», Россия).
Идентификацию I/D полиморфизма 4G/5G -675 гена PAI-1 определяли методом проведения ПЦР с последующим электрофоретическим разделением в 2 % агарозном геле [7].
Идентификацию аллелей генов -455 G/A FGB и P1A1A2 GpIIIa проводили при помощи ПЦР с последующим рестрикционным анализом [6, 8].
Обработка результатов исследования проведена с использованием следующих методов статистической обработки: критерий %2, критерий Фишера.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Распределение аллелей и генотипов исследуемых полиморфизмов не отличалось в группах детей с ПШГ и контрольной группе и соответствовало распределению Харди-Вайберга. Различий в распределении аллелей и генотипов в зависимости от пола также найдено не было.
Мутация Лейден в группе контроля и группе ПШГ не была обнаружена.
Генотип GA мутации + 20210 G/A гена протромбина, обнаружен у одного пациента из группы с острым течением ПШГ.
При анализе полиморфизмов P1A1A2 (Leu33Pro) гена GpIIIa рецептора мембраны тромбоцита и -455 G/A гена FGB были найдены отличия в распределении генотипов и аллелей у детей с наличием (1) и без (2) некротического компонента в структуре кожного синдрома.
Генотип А1А2 и аллель А2, достоверно чаще (р < 0,05) встречался в группе детей с некротическим компонентом в отличие от детей без некротического компонента (рис. 1). Других отличий в распределении генотипов и аллелей данного полиморфизма в группах найдено не было.
Генотип GG и GA в первой группе встречался в 50 % и 28,6 %, а во второй в 70 % и 30 % случаев и не имел статистически значимой разницы. Генотип АА достоверно чаще (21,4 %, р < 0,05) встречался в группе детей имеющих некротический компонент, в отличие от детей без некротических элементов, где данный генотип не был обнаружен (рис. 2).
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
А1А1 89 %
А1А1 64 %
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
GG 50 %
GG 70 %
1 - кожный синдром с некротическим компонентом
2 - кожный синдром без некротического компонента
1 - кожный синдром с некротическим компонентом
2 - кожный синдром без некротического компонента
Рис. 1. Распределение генотипов PL А1А2 гена GpIIIa у Рис. 2. Распределение генотипов-455С/А полиморфиз-
детей ПШГ
ма гена FGB у детей ПШГ
1
2
1
2
♦ ПЕДИАТР ТОМ III № 3 2012 ISSN 2079-7850
66
оригинальные статьи
Таким образом, по результатам проведенного нами исследования, наличие аллеля А гена бета цепи фибриногена и аллеля A2 гена GpIIIa является фактором риска развития некрозов кожи у детей с ПШГ, что следует учитывать при проведении антикоагулянтной и антиагрегантной терапии.
список литературы
1. Кривошеев О. Г., Семенкова Е. Н., Гуляев С. В. Абдоминальные ката строфы при системных васкулитах // Клиническая медицина. - 2002. - № 8. - С. 65- 68.
2. Насонов Е. Л., Баранов А. А, Шилкина Н. П. Васкулиты и васкулопатии. - Ярославль: Верхняя Волга, 1999. - 616 с.
3. Dagan E., Brik R., Broza Y, Gershoni-Baruch R. He-noch-Schonlein purpura: polymorphisms in thrombophilia genes // Pediatr Nephrol. - 2006. - Vol. 21, № 8. - P. 1117-1121.
4. Emre S, Sirin A, Ergen A et al. Methylenetetrahydro-folate reductase C677T polymorphism in patients with Henoch-Schonleinpurpura // Pediatr Int. -2011. - Vol. 53, N 3. - P. 358-362.
5. Gedalia A. Henoch-Schonlein purpura // Curr. Rheumatol. Rep. - 2004. - Vol. 6, № 3. - Р. 195-202.
6. Mannucci P M, Mari D, Merati G. et al. Gene polymorphisms predicting high plasma levels of coagulation and fibrinolysis proteins. A study in centenarians // Ar-terioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 1997. - Vol. 17, N 4. -P. 755-759.
7. Mansfield M. W, Stickland M. H., Grant P. J. Plasminogen activator inhibitor-1 PAI-1 promoter polymorphism and coronary artery disease in non-insulin-dependent diabetes // Thrombosis and Haemostasis. - 1995. -Vol. 74. - P. 1032-1034.
8. Newman P. J., Valentin N. Human platelet alloantigens: recent findings, new perspectives // Thromb Hae-most. - 1995. - Vol. 74, N 1. - P. 234-239.
9. Rostoker G. Schönlein-henoch purpura in children and adults: diagnosis, pathophysiology and management // Bio-Drugs. - 2001. - Vol. 15, № 2. - P. 99-138.
genetic aspects of thrombophilia in children with henoch-schonlein purpura
Shirinbekova N. V.
♦ Resume. The article shows a comparative analysis of clinical and genetic markers of patients with Henoch-Schonlein purpura and healthy children. According to the results of the study, the presence of allele A FGB and allele A2 gene GpIIIa probably is a risk factor of thrombotic complications in children with He-noch-Schonlein purpura with the structure of skin necrosis syndrome components that should be taken into account in anticoagulant and antiplatelet therapy.
♦ Key words: trombophilia; children; Henoch-Schonlein purpura.
♦ Информация об авторах
Ширинбекова Наталья Валерьевна - aспирант кафедры педиатрии им. И. М. Воронцова ФПК и ПП. ГБОУ ВПО СПБГПМУ Минздрав РФ. 194100, Санкт-Петербург, ул. Литовская, д. 2. E-mail: docnata78 @mail.ru.
Shirinbekova Natalya Valeryevna - postgraduate student at the department of pediatrics named by Vorontsov I. M. postgraduate education. Saint-Petersburg State Pediatric Medical Academy of Health Ministry of Russia. 2 Litovskaya st., St. Petersburg, 194100, Russian Federation. E-mail: docnata78 @mail.ru.
♦ педиатр
Том III № 3 2012
ISSN 2079-7850
