ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ НЕЙРОЛЕЙКЕМИИ У ПАЦИЕНТОВ С Т-КЛЕТОЧНЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

При л о ж ен и е 1

затрудняет быстрое разрушение эритроцитов, лейкоцитов и тканевых клеточных элементов в образце, которое происходит из-за низкого содержания белка, оказывающего стабилизирующее действие на клеточные мембраны. По литературным данным рекомендуется перед центрифугированием ликвора добавлять 22% раствор альбумина, однако методика не стандартизована и, вероятно, не всегда выполняется в лабораториях. В данном исследовании мы использовали бычий сывороточный альбумин (БСА) в качестве белкового субстрата, добавляемого в СМЖ, и провели сравнительный анализ качества полученных мазков с БСА и без него.

Цель работы. Сравнить количество клеточных элементов в цитологических препаратах спинномозговой жидкости низкой клеточно-сти, приготовленных с добавлением бычьего сывороточного альбумина и без него.

Материалы и методы. Образцы СМЖ были получены при выполнении люмбальной пункции пациентов, находящихся на стационарном лечении в ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России в марте 2023 года, и доставлены в централизованную клинико-диагностическую лабораторию в течение 30 минут. Исследования проводили в срочном порядке. В анализ включены 13 образцов СМЖ с невысоким цитозом (медиана — 2,2 кл/мкл, среднее — 2,4 кл/мкл, разброс от 2,0 до 6,3 кл/мкл). Для стабилизации мембран клеток использовали 22% раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА), Bovine Serum Albumin (Sigma-ALDRICH) в фосфатном буфере.

Каждый образец СМЖ. делили на две аликвоты (по 1000 мкл каждая). В первую порцию добавляли раствор БСА в объеме 100 мкл, вторую брали в работу без добавления белка. Далее образцы центрифугировали 10 мин при 200g, снимали надосадочную жидкость и тщательно перемешивали осадок. Затем готовили цитологические препараты с помощью цитоцентрифуги Cytospin 4 (Thermo Fisher Scientific). Препараты окрашивали по Паппенгейму. Для оценки качества полученных мазков проводилось микроскопическое исследование с подсчетом количества всех клеточных элементов, доступных к анализу. Сравнение двух групп выполнили с помощью критерия Стьюдента (/'-test), статистическая обработка данных проводилась с использованием пакета SAS.

Результаты и обсуждение. Количество клеточных элементов в микропрепаратах, приготовленных с добавлением БСА, составило от 2 до 254 клеток в одном препарате (медиана — 50 клеток, среднее — 65 клеток), и от 0 до 79 клеток в одном препарате без БСА (медиана — 3 клетки, среднее — 10 клеток). Таким образом, медиана клеток, доступных для анализа в препаратах СМЖ с БСА была в 16 раз выше. Различия между группами образцов статистически достоверны (/-test, ^<0,0017).

Заключение. Приготовление препаратов СМЖ с добавлением БСА значимоувеличивает клеточность образца для цитологического анализа, что повышает качество диагностики специфического поражения ЦНС.

Захарько Е. И., Двирнык В. Н., Яцык Г. А., Алешина О. А., Рыбкина Е. Б., Дрокова Д. Г., Лавришинец К. А., Наумова И. Н.,

Чабаева Ю. А., Куликов С. М., Паровичникова Е. Н.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ НЕЙРОЛЕЙКЕМИИ У ПАЦИЕНТОВ С Т-КЛЕТОЧНЫМ

ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

ФГБУ«НМИЦгематологии» Минздрава России

Введение. Классический метод диагностики нейролейкемии включает общеклиническое исследование с определением цитоза спинномозговой жидкости (СЖЖ.) и цитологическое исследование (ЦИ) микропрепаратов, приготовленных с помощью цитоцентрифуги. Протокол Российского многоцентрового исследования «ОЛЛ-2016» предполагает массивную профилактику специфического поражения центральной нервной системы, а также коррекцию терапии при выявлении нейролейкемии в дебюте заболевания. В настоящее время применяются дополнительные диагностические подходы — иммунофенотипирование методом проточной цитометрии (ИФТ), магнитно-резонансная томография (МРТ) с контрастным усилением, но влияние дополнительных данных, полученных этими методами на клиническое течение ОЛ не до конца изучено.

Цель работы. Сопоставить данные цитологического и иммунофе-нотипического исследования ликвора и магнитно-резонансной томографии головного мозга с контрастным усилением для диагностики поражения ЦНС при Т-ОЛЛ.

Материалы и методы. В исследования было включено 29 первичных пациентов с Т-ОЛЛ, находящихся на стационарном лечении в отделениях ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России по протоколу «ОЛЛ-2016 с декабря 2018 по октябрь 2022 года». Соотношение мужчин и женщин составляло 19/9, медиана возраста — 32 года. Лабораторные исследования ликвора были выполнены в дебюте заболевания до интратекального введения препаратов. ЦИ выполнялось после приготовления микропрепаратов с помощью цитоцентрифуги Cytospin 4 (Thermo Scientific). ИФТ — с использованием 10-цветного проточного цитометра BD Canto. Диагноз нейролейкемии и соответствующие изменения терапевтической

ЦИ 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

ИФТ 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

MP т 1 1 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0

Рисунок I, Сопоставление данных лабораторных методов и МРТ в детекции нейролейкемии у пациентов с Т-ОЛЛ

тактики проводились на основании ЦИ. МРТ головного мозга (ГМ) с контрастным усилением выполнялось до проведения люмбальной пункции 20/29 пациентам.

Результаты и обсуждение. По результатам лабораторных исследований пациенты были поделены на 3 группы: 1) «ЦИ+, ИФТ+»у8/29 бластные клетки в СМЖ выявлялись двумя лабораторными методами; «ЦИ—, ИФТ—» у 16/29 бластные клетки в СМЖ не определялись двумя лабораторными методами; «ЦИ—, ИФТ+»у 5/29 бластные клетки СМЖ обнаружены только методом ИФТ. В группе «ЦИ—, ИФТ+» пациентов были выявлены статистически более низкие показатели цитоза, наихудшие показатели минимальной измеряемой болезни (МИБ) на 70-й день терапии и худшие показатели общей выживаемости (таблица). МРТ выполнялось 20/29 пациентам, обнаружены изменения у 8/20 больных (утолщение менингеальных оболочек, постконтрастное усиление, отек вещества головного мозга), данные МРТ в большинстве случаев (6/8) не совпадали с данными лабораторных исследований (рисунок).

Заключение. Мы обнаружили бластные клетки СМЖ методом ПЦ у пациентов с низким цитозом и отрицательным результатом цитологического исследования в 5 из 29 больных с Т-ОЛЛ (17%). Изменений МРТ картины ГМу них также не было обнаружено. Эти пациенты не получали дополнительную специфическую терапию по поводу нейролейкемии и имели худшие показатели МИБ и общей выживаемости. Мы предполагаем, что выявление специфического поражения ПЦ может быть причиной для соответствующего изменения терапевтической тактики. Интерпретация данных МРТ исследования требует дальнейшего исследования.

Таблица. Сравнение данных лабораторных исследований и общей выживаемости у пациентов с Т-ОЛЛ

Цитоз, Me, кл/мкл МИБна 70Й день, Ме,% OB, Ме,%

ЦИ+, ИФТ+(п=8) 4,15 37,5 100

ци -, ифт- |п=1б] 1,35 21,4 90

ци-, ифт+ (п=5) 1,1 100 50

р 0,017 0,01 0,028