CC BY
14
УДК616.36-099:615.212-06:612.128]-092.9 Крижна С.1.
ВМ1СТ ЦИТ0Л1ТИЧНИХ ФЕРМЕНТ1В У ПЛАЗМ1 КР0В1 Б1ЛИХ ЩУР1В ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬН1Й П0РФ1РИН0ПАТ11 ТА IX К0РЕКЦ1Я
Нацiональний фармацевтичний унiверситет, м. Харкiв
Метою роботи була оц1нка ступеню впливу предукталу на вмгст цитолгтичних ферментгв - маркер1в пошко-дження печгнки в умовах порушеного порфгринового обмту. Дослгдження проведено на безпородних бших щу-рах-самцях, у яких Их викликали на тл1 гепатиту порушення порфгринового обмту шляхом бензольноI IнтоксикацИ. Визначали промгжнг та юнцевI показники синтезу гему в плазмI кров! та печтщ: АЖ та ПБГ, КП IПП; та маркери пошкодження клтин печгнки: АлАТ, АсАТ, ЛФ, тимолову пробу. Запропоновано застосування предукталу, який стабшзуе енергетичний метаболгзм в клтинах. Доведено, що порушення порфгринового обмту викликае гостре токсичне ураження печгнки, про що свгдчили зростаючI показники активностг в плазмI кровI щур1в 1ндикатор1в цитолгзу, холестазу I паренх1мального запалення. Встановлено, що профтактичне вве-дення предукталу протягом 7 дтв до моделювання гострого бензольного гепатиту достов1рно зменшувало активтсть як цитолтичних ферментгв, так I показник тимолово'1 проби. Найкращий коригуючий вплив пре-дуктал мав на показники активностг АлАТ, АсАТ, ЛФ та тимолово'1 проби у групах тварин, яким його вводили одночасно як з проф1лактичною, так I з лгкувальною метою.
Ключовi слова: порфiринопатiя, гепатит, цитолiтичнi ферменти, щури, предуктал.
Робота виконана у рамках науково-до^дно'Т програми Национального фармацевтичного унiверситету «Фармакологь чнi до^дження бiологiчно активних речовин i лiкарських засобiв синтетичного та природного походження, Тх застосування у медичшй практииц» (№ держ. реестр. 010300909418).
Вступ
Останшм часом велику увагу клЫщиспв привер-тае група захворювань з загальною назвою порфiрií, головною ланкою патогенезу яких е порушення одного з 8-ми етатв синтезу гему ^ як наслщок, накопи-чення його промiжних продукпв. Подiбнi порушення виникають в будь-яких кштинах оргашзму, але спира-ючись на той факт, що переважна доля гемовмюних молекул синтезуеться в кютковому мозку або печшщ розрiзняють печЫкову або еритропоетичну форми порфiрiй [12, 14]. Це, в свою чергу, обумовлюе той факт, що будь-як патолопчш процеси в печЫц (запа-льн або токсичш) можуть приводити до рiзноманiтних кшшчних проявiв порфiринопатiй, що пщтверджено кшшцистами рiзних спецiалiзацiй: терапевтами, невропатологами, дерматологами та Ышими [11, 14]. Наразi юнуе певний перелк лкарських засобiв, побiч-ними ефектами яких е гепатотоксичне ураження печь нки та порушення при цьому процеав синтезу гему [7, 13, 15]. Безперервно зростаюча ктькють повщомлень про дю багатьох лкарських препаратiв свщчить про те, що медикаментознi ураження печЫки стають одш-ею з найважливших проблем гепатологií [4, 7, 12] та визначають напрямок пошуку нових безпечних засо-бiв. Застосування предукталу, який стабозуе енергетичний метаболiзм в клiтинах та пщтримуе належний рiвень аденозинтрифосфату всерединi штин [5, 10], в умовах порушеного порфiринового обмiну е патогене-тично об^рунтованим засобом фармакотерапií порфь рп. Тому метою роботи була оцшка ступеню впливу предукталу на вмют цитолiтичних ферментiв (маркерiв пошкодження печшки в умовах порушеного порфiри нового обмЫу).
Методи дослiдження
Дослiдження проведено на 30-ти безпородних бших щурах-самцях масою 280-320 г, яких утримува-ли на стандартному рацюш вiварiю. Методом рандомiзацií щурiв подiлили на 5 груп по 6 тварин у кожшй: 1 -ша група - Ытактш тварини; 2-5 групи - тва-рини з гострим порушенням порфiринового обмiну на
гепатиту. Щурам 3-Т групи вводили предуктал 7 дшв до моделювання бензольного гепатиту. Щурам 4-I групи 7 днiв пюля моделювання гепатиту (лiкування). Тваринам 5-I групи предуктал вводили 7 дшв до та 7 дшв пюля моделювання гострого гепатиту. Порушення порфiринового обмЫу викликали пщшфними Ы'ега^ями бензолу [6] дозами i3 розрахунку 0,1 мл на 1 кг маси тварини кожен день протягом тижня (7 дшв). У Ытактних щурiв i щурiв з бензольним гепатитом та по-рушеним порфiриновим обмiном визначали в плазмi кровi i в печiнцi рiвень ö-амiнолевулiновоí кислоти (АЛК) та порфобiлiногену (ПБГ), рiвень ефiророзчинних порфiринiв: копропорфiрину (КП) i протопорфiрину (ГШ). Рiвень АЛК та ПБГ визначали в безбтковому центрiфугатi за допомогою iонообмiнноí хроматографа Кiнцеве вимiрювання АЛК та ПБГ проводили вимiрюванням iнтенсивностi ю^ру ix продуктiв в реакцií з ртутним реактивом Ерлixа. Оп-тичну щтьнють кiнцевиx продуктiв АЛК та ПБГ зшмали на спектрофотометрi «Specord UV VIS» (Германiя, 1999) пюля 15 хвилинно! витримки з реактивом Ерлixа. Рiвень копропорфiринiв та протопорфiринiв визначали за методикою Koskelo. Фотометрiю солянокислих розчинiв цих речовин проводили на спектрофотометрi «Specord UV VIS» (Гермашя, 1999) [1,2, 8].
Пюля завершення дослiду тварин декаттували. Для дослiджень маркерiв пошкодження 1^тин печiнки: аланiн- i аспартатамЫотрансферази (АлАТ, АсАТ), а також лужно! фосфатази (ЛФ), тимолову пробу [2] ви-користовували плазму кровi, де визначали активнють означених ферментiв. Предуктал розводили фiзiологiчним розчином та вводили пщшгарно 1 раз на добу в дозi 1 мг/кг.
Ус манiпуляцií на тваринах проводили пщ етамiнал-натрieвим наркозом (60 мг/кг пщшюрно), згiдно з Мiжнародними принципами Свропейсько!' конвенцií про захист хребетних тварин, яких викори-стовують для експеримен^в та iншиx наукових цiлей (Страсбург, 18.03.1986) [3]. Статистичну обробку да-них проводили з використанням пакету статистичного аналiзу електронних таблиць ЕхеГ Розраховували
В1СНИК ВДНЗУ «Украгнська медична стоматологгчна академя»
середн значення показникв та стандартну помилку (). Вiрогiднiсть рiзниць помiж середнiми визначали за т-критерieм Ст'юденту та оцiнювали на рiвнв значност не менше 95% (р<0,05) [9].
Результати й обговорення
У результат проведених дослщжень встановле-но, що порушення порфiринового обмiну у щурiв (введення бензолу) викликало достовiрне пщвищення активностi АлАТ i АсАТ у плазмi 1'х кровi - у 5 та 2,6 рази вщповщно (р<0,05) порiвняно з iнтактними тва-ринами. Зростання активностi АлАт i АсАТ в плазмi кровi тварин вказуе на розвиток цитолiтичного проце-су в |'х печiнцi: оскльки данi ферменти розташованi в ^тинах печiнковоí паренхiми i при Тх некротичному ушкодженнi виходять у кров. У щурiв контрольно'' гру-пи з експериментальним гепатитом вiдмiчено пщвищення активност ЛФ у 1,8 рази (р<0,05) порiвняно з iнтактними тваринами, що може бути оз-накою розвитку внутрiшньопечiнкового холестазу. Та-кож вiдмiчено зростання тимоловоТ проби в 3 рази (р<0,05) у тварин з бензоловим гепатитом (контрольна група) порiвняно з Ытактними. Ц данi можна пояс-нити розвитком запального процесу, що супроводжуе ураження паренхiми печiнки (табл. 1, 2).
У груш тварин, яким з профтактичною метою протягом 7 днв до моделювання гострого порушення порфiринового обмiну вводили предуктал, активнiсть АлАТ, АсАТ, ЛФ та показник тимоловоТ проби змен-шились, вiдповiдно, в 1,9, 1,7, 1,3 та 1,6 рази (р<0,05). При згодовуванн предукталом тваринам 4-Т та 5-Т
Прим1тка: * -
Лггература
1. ДокпУчы дослiдження лкарських 3aco6iB: Методичнi реко-мендацií / За ред. О.В. Стефанова. - К. : МОЗ УкраТни, Дер-жавний фармакопогiчний центр, 2001. - 527 с.
дослщних груп спостер^алось зменшення активностi АлАТ, АсАт, ЛФ i показникiв тимоловоТ проби практично до норми, що свщчить про вщновлення бтоксинтезувальноТ, ферментативноТ функцiй печiнки, а також про зниження запального процесу.
Таким чином, отриман результати свщчать про цитопротекторну дiю предукталу, яка найбтьш вира-жена при введеннi препарату з лкувальною та, одно-часно, профтактичною i лiкувальною метою тваринам з порушеним порфiриновим обмiном. Одержан нами дан узгоджуються з результатами Ыших дослiдникiв щодо з'ясування ролi предукталу при хворобах печiнки [7].
Висновки
1. Порушення порфiринового обмЫу викликае гостре токсичне ураження печЫки, що супроводжува-лося зростанням активност в плазмi кровi щурiв шдикат^в цитолiзу, холестазу i паренхiмального за-палення.
2. У труп тварин, яким з профтактичною метою протягом 7 див до моделювання гострого бензольного гепатиту вводили предуктал, активнсть цит^тичних ферментв та показник тимоловоТ проби достг^рно зменшувались.
3. Найкращий коригуючий вплив предуктал мав на показники активност АлАТ, АсАТ, ЛФ та тимоловоТ проби у групах тварин, яким його вводили одночасно як з профтактичною, так i з лкувальною метою.
Таблиця 1
Активнсть АлАТ, АсАТ i ЛФ у плазмi кровi блих щурв
2. Камышников B.C. Справочник по кпинико-биохимической и лабораторной диагностике / Камышников B.C. - М., 2004. -834 с.
3. Кожем'яин Ю.М. Науково-методичн рекомендацТ з утриман-ня лабораторних тварин / Ю.М.Кожем'якн, О.С. Хромов, M.A. Фтоненко, Г.А.СайфетдЫова. - К. : АвЩена, 2002. - 156 с.
Групи тварин АлАТ од./л АсАТ од./л ЛФ од./л
1 група Ытакты тварини 88±3,5 115±5,3 492±15,0
2 група - тварини з порушенням порфiриново-го обмЫу (бензольний гепатит) 423±12,3* 315±4,9* 935±13,8*
3 група тварини з порушенням порфiринового обмЫу (бензольний гепатит) + предуктал з профтактичним введенням 223±15,6*/** 189±21,5*/** 695±14,5*/**
4 група тварини з порушенням порфiринового обмЫу (бензольний гепатит) + предуктал ль кувальне введення 92±11,2** 143±10,4** 583±15,2*/**
5 група тварини з порушенням порфiринового обмЫу (гепатит) + предуктал з профтактичним i лкувальним введенням 91,6±13,4** 138±10,1** 538±16,7**
р<0,05 по в'дношенню до ¡нтактноГ групи ш,ур1в * - р<0,05 по вдношенню до 2-гоГ групи шур'в - р<0,05 по вдношенню до 2-гоГ групи шурв
Таблиця 2
Тимолова проба у плазмi кровi блих шурв
Групи тварин Тимолова проба Од. 8-Н
1 група Ытакты тварини 0,83±0,16
2 група - тварини з порушенням порфiринового обмiну (гепатит) 2,48±0,11*
3 група тварини з порушенням порфiринового обмЫу (гепатит) + предуктал з профтактичним введенням 1,43±0,17*/**
4 група тварини з порушенням порфiринового обмЫу (гепатит) + предуктал л^вальне введення 1,16±0,13*/**
5 група тварини з порушенням порфiринового обмЫу (гепатит) + предуктал з профтактичним i лiкувальним введенням 0,91±0,32
Том 11, Выпуск 2 49
1 Мур М.Р. Порфирии / М.Р. Мур // Гематол. и трансфузиол. - 10. Сыркин А.Л. Антиишемические препараты метаболического
1994. - №6. - С. 28-37. действия / А.Л.Сыркин, А.В. Добровольский // Consilium
5. Окислительный стресе. Прооксиданты и антиоксиданты / Mtedbum. - 2°°2 - Т.4, №11. - 572-575.
[Е.Б. Меньшикова, В.З. Ланкин, Н.К. Зенков и др.]. - М. : 11. Ткачишин B.C. Профеайн захворювання опорно-рухового
«Слово», 2006. - 556 с. апарату та прилеглих структур, спричинен впливом ряду
5. Петренко А.Ю. Внутривенное введение эмбриональных нер- шкщливих виробничих фактс^в. Лекция 6. Физические, хи-
вных клеток крысам с хроническим отравлением бензолом / мические и биологические факторы в процессе производст-
А.Ю.Петренко, Г.А.Ковалев, И. Грищенко // Проблемы крио- венной деятельности / B.C. Ткачишин // УкраТнський ревма-
биологии. - 2005. - Т.5, №1. -С. 71-78. толопчний журнал. - 2006. - № 2(24). - С.26-29.
■7 12. Bont A. Acute hepatic porphyria and its neurological syndrome /
/. Полунина Т.В. Медикаментозные гепатиты / Т.В.Полунина, a Bont AJSteck VA Meyer // Schweiz Med Wochenschr -
И.В.Маев // Фарматека. - 2006. - № 12 (127). - С. 63-71. 1996. _ v. 126, №1. - Р.6-14.
3. Руководство по клинической лабораторной диагностике. Ч.З. 13 Cullinan S B Nrf2 is a direct PERK substrate and effector of
Клиническая биохимия: Учеб. пособие / [М.А.Базарнова, PERK-dependent cell survival / S.B.Cullinan, D.Zhang,
3.11.1^-1-^ Л.И.Кальнова и др. ] ; Под ред. проф. M.Hannink [et al.] // МоТ. Cell. Biol. - 2003. -V.23. - P.7198-7209.
М.А.Базарновой, проф. В.Т.Морозовой. -2-е изд., перераб. и 14. Desnick R.J. Congenital erythropoietic porphyria: advances in
доп. - К. : Вища шк., 2000. - 319 с. pathogenesis and treatment. / R.J.Desnick, K.H. Astrin // Br J
Э. Лапач С.Н. Статистические методы в медико-биологических Haematol Jun - 2002 - №117(4) - P779-795
исследованиях с использованием ЕхеТ / С.КЛапач, 15. Kirkman H.N. Mechanisms of protection of catalase by NADPH: А.В.Чубенко, П.Н.Бабич. - К. : «Морион», 2000. - 320с. kinetics and stoichiometry / H.N.Kirkman, M.R.Ferraris, G.F.
Gaetani // J. Biol. Chem. - 1999. - №20. - P. 13908-13914.
Резюме
КОЛИЧЕСТВО ЦИТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПОРФИРИНОПАТИИ И ИХ КОРРЕКЦИЯ Крыжная С. И.
Ключевые слова: порфиринопатия, гепатит, цитолитические ферменты, крысы, предуктал.
Целью работы была оценка степени влияния предуктала на количество цитолитических ферментов - маркеров повреждения печени в условиях нарушенного порфиринового обмена. Исследования проведены на беспородных белых крысах-самцах, у которых вызывали на фоне гепатита нарушения порфиринового обмена путем бензольной интоксикации. Определяли промежуточные и конечные показатели синтеза гема в плазме крови и печени: АПК и ПБГ, КП и ПП; и маркеры повреждения клеток печени: АлАТ, АсАТ, ЛФ, тимоловую пробу. Предложено использование предуктала, который стабилизирует энергетический метаболизм в клетках. Установлено, что нарушения порфиринового обмена вызывает острое токсическое поражение печени, о чем свидетельствовали повышенные показатели активности в плазме крови крыс индикаторов цитолиза, холестаза и паренхимального воспаления. Установлено, что профилактическое введение предуктала на протяжении 7 дней до моделирования острого бензольного гепатита достоверно уменьшало активность как цитолитических ферментов так и показателей тимоловой пробы. Наилучшее коррегирующее влияние предуктал оказал на показатели активности АлАТ, АсАТ, ЛФ и тимоловой пробы в группах животных, которым его вводили одновременно как с профилактической, так и с лечебной целью.
Summary
CONCENTRATION OF CYTOLYTIC ENZYMES IN BLOOD PLASMA OF WHITE RATS WITH EXPERIMENTAL PORPHYRINOPATHY AND THEIR CORRECTION. Kryzhnaya S.I.
Keywords: porphyrinopathy, hepatitis, cytolytic enzymes, rats, preductal.
The aim of the work was to identify the degree of preductal influence on the concentration of cytolytic enzymes known as markers of liver damage in conditions of disturbed porphyrin metabolism. The investigation was carried out on outbred white male rats, which were induced porphyrin metabolic disturbances by benzene poisoning against the background of hepatitis. We determined the intermediate and final indices of heme synthesis in plasma and liver: ALA and PBG, KP and PP, and markers of liver cell injury: ALT, AST, LF, thymol turbidity test. So, we suggested to use preductal to stabilize the cell energetic metabolism. It was found out the porphyrin metabolic disturbances resulted in acute toxic liver affection, that was proved by the increased indices of cytolysis, cholestasis in rats' plasma as well as parenchymal inflammation. It was also established the preventive administration of preductal for 7 days prior the modeling of acute benzene-induced hepatitis reliably reduced the activity of both cytolytic enzymes and indicators of thymol turbidity test. The best corrective effect was produced by preductal on the activity of ALT, AST, LF and thymol turbidity test in the groups of animals, who were administered preductal with both preventive and therapeutic purposes.
