CC BY
55
УДК 616.36-099:615.9:547.241]-085.244.015.42
© В.А Мышкин, А.И.Савлуков, В.А. Катаев, Д.А. Еникеев, Ш.Ф. Фасхутдинов, С.А. Сергеева, 2008
В. А Мышкин, А.И.Савлуков, В.А. Катаев,
Д.А. Еникеев, Ш.Ф. Фасхутдинов, С.А. Сергеева ВЛИЯНИЕ ТИЕТАЗОЛА НА ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ ПРИ ПОДОСТРОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ТРИХЛОРМЕТАФОСОМ ФГУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека» Роспотребнадзора, г. Уфа ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава, г. Уфа ГУ «НИИ фармакологии РАМН», г. Москва
В условиях эксперимента проведена сравнительная оценка гепатопротекторной активности литиевой соли тиетазола (50мг/кг) и силимарина (200мг/кг) при подостром отравлении крыс трихлорметафосом (ТХМ). Опыты проведены на крысах - самцах. Токсикант вводили в дозе 50 мг/кг (0,2 ЛД50) в желудок ежедневно в течение 30 суток. Исследовали выживаемость, активность ферментов - маркеров цитолиза, холестаза, состояние антиокислительной защиты (АОЗ), количество продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), а также уровень биоэнергетических процессов в печени. Выявлено преимущество тиетазола по сравнению с препаратом сравнения по большинству исследованных показателей: препарат ограничивает в печени отравленных крыс развитие цитолиза, холестаза, активность процессов ПОЛ, активизирует АОЗ и биоэнергетические процессы.
Ключевые слова: трихлорметафос, производные бензимидазола, гепатопротекторы, тиетазол.
V.A. Myshkin, A.I. Savlukov, V.A. Kataev,
D.A. Enikeev, Sh.F. Fashutdinov, S.A. Sergeeva
THE INFLUENCE OF THYETHAZOLE ON FUNCTIONAL-METABOLIC STATE OF LIVER IN ACUTE INTOXICATION BY TRICHLORMETAPHOSE
Under experimental conditions the comparative assessment of hepatoprotective activity of lithium salt thyetha-zole (50 mg/kg) and silimarin (200 mg/kg) in acute intoxication of rats by trichlormetaphose (TCM) has been carried out. Rat-males have been experimentalized. Toxicant been injected of 50 mg/kg into the stomach daily during 30 days. Survival rate, enzymes activity - markers of cytolysis, cholestasis, the state of antioxidative protection, the number of perioxidative lipids products as well as the level of bioenergetic processes of liver have been investigated.
The advantage of thyethazole in comparison with the comparative preparation by the most investigated markers: the preparation limits the development of cytolysis, cholestasis, the activity of perioxidative lipids products, promotes the state of antioxidative protection and bioenergetic processes in the liver of intoxicated rats.
Key words: trichlormetaphose, derivatives of benzimidazole, hepatoprotectors, thyethazole.
Установлено, что трихлорметафос званной введением некоторых ФОС [6].
(ТХМ), обладающий свойствами, харак- В развитии данного направления ис-
терными как для фосфорорганических со- следований мы поставили цель изучить
единений (ФОС), так и хлорорганических гепатопротекторную активность нового
соединений (ХОС), вызывает тяжелые по- производного бензимидазола - литиевой
ражения печени, в патогенезе которых ли- соли тиетазола, сочетающего противоги-
дирующую роль играет гипоксия (ише- поксическую и антиоксидантную актив-
мия) [2, 9], что требует адекватной фарма- ности [5], в сравнении с известным гепа-
кологической защиты. топротектором силимарином (карсилом).
Ранее нами было показано, что неко- Материалы и методы
торые производные бензимидазола, в том Эксперименты проведены на белых
числе бемитил, этомерзол, соединение Б- беспородных крысах - самцах массой 230
16, обладающие протекторными видами - 260 г. Поражение печени вызывали пу-
активности, снижают или нормализируют тем ежедневного введения в желудок 50%
активность избыточно активированных раствора ТХМ в дозе 50 мг/кг в течение
процессов перекисного окисления липи- 30 суток. Литиевую соль тиетазола
дов (ПОЛ) в органах крыс при комплекс- (50мг/кг) и препарат сравнения силимарин
ной по механизму развития гипоксии, вы- (карсил) в дозе 200мг/кг вводили двум
группам крыс внутрижелудочно за 2 часа до токсиканта согласно вышеприведенной схеме (контролем служили интактные животные того же возраста). Анализ периферической крови, отражающей метаболизм и функцию печени (активность аланина-минотрансферазы - АлАТ, аспартатами-нотрансферазы - АсАТ, щелочной фосфа-тазы - ЩФ, кислой фосфатазы - КФ), осуществляли на биохимическом анализаторе, активность органоспецифического фермента уроканиназы (УрН) исследовали по методу [4], состояние антиокислитель-ной защиты (АОЗ) печени изучали по активности ферментов каталазы (КаТ) [3] и глюкозо - 6 - фосфат дегидрогеназы (Г -6 - ФДГ) [13], активность сукцинатдегид-рогеназы (СДГ) и НАДН - дегидрогеназы (НАДН - ДГ) определяли гистохимическими методами [1,7]. Уровень диеновых коньюгатов (ДК) определяли спектрофотометрическим методом [12], ТБК-реагирующие продукты (ТБК - РП) - ме-
тодом И.Д. Стальной и Т.Г. Гаришвили [8]. Литиевая соль тиетазола (2 - [1 - (1,1 -диоксотиетанил - 3) - бензимидазол 2 -тио]) синтезирована доктором х.-ф. наук В. А. Катаевым в Башкирском государственном медицинском университете. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием Ї -критерия Стьюдента и х2 [10]. Различия считали достоверными при Р<0,05.
Результаты и обсуждение
Результаты экспериментов показали (табл. 1), что выживаемость крыс, защищенных литиевой солью тиетазола, сохраняется на уровне 100% к контролю, в то время как аналогичный показатель в группе животных, которым вводили тие-тазол в виде калиевой соли, составляет 84,6% (х2 =21,0 , р < 0,05). Силимарин, так же как и калиевая соль тиетазола, не оказывает влияния на выживаемость отравленных крыс.
Таблица 1
Влияние антиоксидантов на выживаемость крыс в условиях подострой интоксикации трихлорметафосом в дозе 0,2 РЬ5о в течение 30 суток
Серия опыта Группы крыс п Доза, мг/кг х кратность введения Выжило
особей %
1 Контроль - интактные крысы 20 20 100
2 Трихлорметафос (ТХМ) 15 0,2 БЬ50 х 30 11 73,3
3 Силимарин + ТХМ 12 200 х 30 9 75
4 Тиетазол калиевая соль + ТХМ 13 50 х 30 11 84,6
5 Тиетазол литиевая соль + ТХМ 16 50 х 30 16 100
Введение ТХМ в организм животным сопровождалось существенным нарушением процессов ПОЛ. Так, в 1,8 раза увеличилось количество ДК и в 1,6 раза -содержание ТБК - РП по сравнению с показателями интактных животных (табл. 2). Повышение количества первичных и вторичных продуктов ПОЛ сопровожда-
лось снижением активности каталазы и Г
- 6 - ФДГ. При введении животным литиевой соли тиетазола и силимарина зафиксировано достоверное улучшение показателей ПОЛ, однако силимарин, в отличие от тиетазола, лишь в незначительной степени изменял активность ферментов антиоксидантной защиты.
Таблица 2
Влияние препаратов на показатели перекисного окисления липидов, антиоксидантной защиты, активность НАДН - дегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы в печени крыс при подострой интоксикации трихлорметафосом (М±т, п=8)
Группы крыс ДК, Ё 232 ТБК - РП ммоль/ г тк. печени КаТ, ммоль/мин на 1 г белка Г-6-ФДГ, нмоль/мг белка НАДН-ДГ, усл. ед. СДГ, усл. ед.
К!- контроль 0,454±0,022 5.18±0,13 302±16 66,5±2,6 9,18±0,02 8.10±0,04
К2 - ТХМ 0,806±0,017* 8.20±0,33* 202±17* 30,2±4,2* 7,5±0,03* 6.8±0,04*
3. силимарин 0,502± 0,018** 6.6±0,2** * 220±24* 38,6±7,7* 7,4±0,10* 6.9±0,12*
4. тиетазол 0,502±0,015** 5.8±0,22** 280±14** 56,6±3,2** 7,8±0,11* 7.9±0,03**
* Р<0,05 по сравнению с группой К!; ** Р<0,05 по сравнению с группой К2
Можно заключить, что тиетазол предупреждает активирующее действие ТХМ на свободнорадикальное окисление липидов в печени к 30 - м суткам эксперимента. Наряду со значительными и, вероятно, первичными изменениями свободнорадикального окисления липидов печени при токсическом поражении органа, имеет место нарушение биоэнергетических процессов в гепатоцитах. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при действии ТХМ в клетках печени крыс снижается активность НАДФН
- ДГ и СДГ. Тиетазол, но не силимарин, в режиме сопроводительной коррекции предупреждает вызываемое ТХМ уменьшение активности СДГ: так, если у за-
травленных крыс активность фермента равнялась 6.8±0,04 условных единиц, то у животных, которым вводили тиетазол, показатели достигали 7.9±0,03 условных единиц (Р<0,05).
Таким образом, в условиях поражения крыс ТХМ тиетазол оказал положительное влияние не только на систему ПОЛ - АОЗ, но и на важный показатель, характеризующий энергетические процессы, - активность СДГ гепатоцитов. Тиета-зол в виде литиевой соли положительно влиял и на активность АлАТ, АсАТ, ЩФ и КФ. В то же время силимарин был эффективен только по показателям АсАТ и ЩФ (табл. 3).
Биохимические показатели крови крыс в условиях подострой интоксикации трихлорметафосом на фоне сопроводительной коррекции тиетазолом и силимарином(М±т, п=8)
Таблица 3
Группы крыс УрН АлАТ АсАТ ЩФ КФ
К1- контроль 2,6±0,33 3,3±0,18 10,7±0,14 15,1±0,40 15,2±0,24
К2 - ТХМ 24,5±0,3,4* 10,2±1,4* 18,9±2,3* 24,2±8,8* 29,5±3,4*
3. тиетазол 18,8±1,8* 6,4±0,33** * 11,0±1,1** 16,6±3,3** 18,9±3,2**
4. силимарин 19,8±9,9* 8,2±1,1* 11,2±1,2** 18,2±1,6** 26,6±4,4*
* Р<0,05 по сравнению с группой Кь ** Р<0,05 по сравнению с группой К2.
Более высокая эффективность тиета-зола по сравнению с силимарином, возможно, связана с его противогипоксиче-ской активностью, что нами было экспериментально установлено [5].
Можно констатировать, что литиевая соль тиетазола в условиях подострого поражения печени ТХМ, с одной стороны,
оказывает регулирующее влияние на систему ПОЛ - АОЗ и отчасти биоэнергетические реакции, а с другой - проявляет гепатопротекторную активность. В заключение приводим схему гепатопротек-торного действия литиевой соли тиетазола при подострой интоксикации ТХМ (см. схему)
Схема
Гепатопротекторное действие литиевой соли тиетазола при подострой интоксикации трихлорметафосом
|| Трихлорметафос ||
|| Силимарин || 1
|| Поражаемый орган: печень ||
• снижение количества ДК и ТБК-РП Постинтоксикационные нарушения: • увеличение смертности • активация ПОЛ • подавление антиоксидантной защиты • уменьшение энергетического потенциала гепатоцитов • гиперферментемия
|| Тиетазола литиевая соль Ц
повышение выживаемости снижение количества ДК и ТБК-РП
увеличение активности СДГ уменьшение гиперфермен-темии
сохранение интегральной устойчивости организма
гепатопротекторный эффект
С учетом полученных данных мы моделях токсического поражения печени считаем целесообразным дальнейшее изу- ФОС, в патогенезе которых важную роль чение литиевой соли тиетазола на других играет гипоксия (ишемия) органа.
ЛИТЕРАТУРА
1. Берстон М. Гистохимия ферментов. - М.: Мир, 1965.
2. Голиков С.Н., Саноцкий Н.В., Тиунов Л. А. Общие механизмы токсического действия. - М., 1986. - 279 с.
3. Королюк М. А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. Метод определения активности катала-зы // Лабораторное дело. - 1988. - № 1. - С 16-18.
4. Мордашев С.Р., Буробин В. А. Обнаружение уроканиназы в крови при отравлении четыреххлористым углеродом // Вопросы медицинской химии. - 1963. - №7. - С 93-94.
5. Мышкин В.А., Савлуков А.И., Катаев В.А. и др. Противогипоксические и антиокси-дантные свойства некоторых производных бензимидазола // Медицинский вестник Башкортостана. Приложение. - 2008. - № 2 - С. 53-55
6. Мышкин В.А., Сергеева С.А., Алехин Е.К. Влияние актопротекторов на перекисное окисление липидов в мозге при отравлении крыс карбофосом // Человек и лекарство: IY Рос. нац. Конгресс. - М., 1997 С. - 278
7. Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная: Пер. с англ. / под ред. В.В. Пор-тугалова. - М., 929 с.
8. Стальная И. Д., Гаришвили Т. Г. Метод определения диальдегида с помощью тио-барбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. - М., 1988. - С 66-68.
9. Терехин Г.А. Влияние антигипоксантов на острую и хроническую токсичность ФОС: дисс. ... канд. мед. наук. - Пермь, 1991.
10. Хафизьянова Р. Х., Бурыкин И. Н., Алеева Г. Н. Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии. - Казань: Медицина, 2006.
11. Чумаков В. Н., Осинская Л. Ф. Количественный метод определения Zn, Cu - зависимой супероксиддисмутазы в биологическом материале // Вопросы медицинской химии. - 1977. - № 5. - С 712-716.
12. Волчегорский И. А., Долгушин И. И., Колесников О. А. и др. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма. - Челябинск, 2000.
13. Gloc G., Melean P. Futurt studies on the properties and assny of glucose - 6 - phosphate degidrogenaze and 6 - phospogluconate degidrogenaze of rat liver. Biochemistry 1953; 55 (3): 400-408.
