CC BY
12
УДК 616.517: 612.017.1: 616.018-07
Влияние лечения метотрексатом на локализацию гликополимеров в коже больных псориазом
Жумыкина О.И.
Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского, Симферополь.
ВПЛИВ Л1КУВАННЯ МЕТОТРЕКСАТОМ НА ЛОКАЛ1ЗАЦ1Ю ГЛ1КОПОЛ1МЕРОВ У ШК1Р1 ХВОРИХ НА ПСОР1АЗ Жумикина О. I.
Дослщжено у 7 oci6, хворих на ncopia3, якi отримали лiкування метотрексатом. Для розшифровки вугле-водних детермЫант структури шкiри обробляли з ви-користанням панелi з 6 лектиыв, кон'югованих з пер-оксидазою хрону. Лкування метотрексатом приводить до пстотопографи та кiлькостi рецепторiв лек-тинiв зародкiв пшеницi, бузини чорноТ та арахiсу, ана-логiчним здоровш шкiрi. Для рецепторiв лектинiв соТ, чечевицi та золотого дощу такоТ вiдповiдностi немае.
INFLUENCE OF METHOTREXAT TREATMENT ON LOCALIZATION OF GLYCO-POLYMERS IN SKIN OF PSORIATIC PATIENTS Zhumykina O. I.
An examination of 7 persons suffering psoriasis and getting treatment by Methotrexat has been conducted. Carbohydrate determinants of skin structures have been decoded using the panel of 6 lectins conjugated with the Horse-radish peroxidase. Methotrexat treatment results in histotopography and amount of receptors of the Wheat germ, Sumbucus nigra and Peanut lectin similar to the healthy skin. For the receptors of the Soy bean, Linse and Golden shower lectins such an accordance is lacking.
Введение. Этиология псориаза пока еще остается белым пятном в дерматологии. Многие звенья патогенеза этого заболевания уже расшифрованы, хотя отсутствует четкое представление об отдельных патогенетических механизмах на молекулярно-биологическом уровне, что не позволяет разработать оптимальные и эффективные методы терапии и добиться длительной клинической ремиссии. Лечение псориатической болезни остается одной из наиболее сложных и актуальных проблем клинической медицины [5, 7].
Основными патофизиологическими процессами, сопровождающими данное заболевание, являются:
- гиперпролиферация эпидермиса с нарушением дифференцировки кератиноцитов;
- воспалительные изменения в дерме.
Гиперплазия кератиноцитов может быть
обусловлена дисбалансом цитокинов, а именно - доминирование цитокинового профиля по пути ТН 1-типа ростовых факторов и их рецепторов, отвечающих за эпидер-
мальную пролиферацию.
Накопленные в настоящее время экспериментальные и клинические данные дают возможность сформулировать новые подходы к пониманию патогенеза псориаза, а также оценить эффективность наиболее распространенных в настоящее время методов лечения.
Каковы бы ни были взгляды на этиологию и патогенез псориаза, очевидно одно: морфологической основой дерматоза является нарушение (ускорение) деления клеток эпидермиса. Исследования митотической активности клеток в очагах поражения свидетельствуют о достоверном увеличении числа метафаз, метафазно-про-фазного индекса и числа патологических форм митоза, особенно при прогрессирующей стадии этого дерматоза.
Исходя из развиваемых представлений о ведущей роли донорно-акцепторного состояния ткани в регуляции интенсивности пролифератив-ных процессов, клеточной дифференцировки и структурной организации ткани, псориаз следует рассматривать, как проявление гиперпласти-
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 (10)' 2007
ческого потенциала [11].
Именно поэтому активное лечение псориаза сегодня опирается на лекарственные средства, подавляющие гиперактивность иммунных реакций - иммуносупрессоры. Последние позволяют с разной степенью специфичности прервать или затормозить развитие каскада цитокинового взаимодействия при псориатическом процессе. Любой из перечисленных ниже препаратов, применяемых при псориазе:
- Метотрескат;
- циклоспорин А;
-лефлунамид;
- системные глюкортикоиды;
- фотосенсибилизаторы, -
при их различной эффективности, не лишен серьезных побочных эффектов.
Изучение процессов гликозилирования и выяснение причин их нарушений представляет значительный интерес для расшифровки механизмов возникновения различных патологических процессов, и, следовательно, для их диагностики и лечения [4]. На основании данных литературы и собственных исследований [2, 9], можно утверждать, что различные патологические состояния человека сопровождаются изменениями углеводной части гликоконъюгатов и, как следствие [4]:
- модификацией межклеточного узнавания;
- нарушением иммунного ответа, ассоциации и агрегации отдельных клеток;
- возникновением новообразований.
По мнению ряда авторов, нарушенное глико-зилирование наблюдается и при псориазе [12].
Современными гистохимическими маркерами гликоконъюгатов клеток и неклеточных тканевых структур являются лектины, которые с высокой избирательностью связываются с концевыми нередуцирующими моно- или олигосахаридными остатками гли-кополимеров [3]. Литературные данные по вопросам гистотопографии гликополимеров - рецепторов лектинов в коже больных псориазом после проведенной терапии мето-трексатом отсутствуют, хотя известно, что
рецепторы лектинов в коже меняются при различной патологии [10].
Целью работы явилось изучение репрессии и дерепрессии гликополимеров на поверхности и в цитоплазме клеток и в тканевых экстрацеллюлярных структурах кожи больных псориазом после лечения метотрек-сатом.
Материал и методы. У 7 больных псориазом была применена лектинная гистохимия, как высокоселективный метод, позволяющий оценивать изменение состава и свойств глюкоконъюгатов клеток и тканей после проведенного лечения метотрексатом. Для расшифровки углеводных детерминант проводилась окраска структур кожи с использованием панели из шести лектинов, конъюгированных с пероксидазой хрена, включавших:
- лектин завязей пшеницы (WGA), специфичный к ^-ацетил-^-глюкозамину и в меньшей мере - к сиаловым кислотам;
- лектин бузины черной (SNA), специфичный к сиаловым кислотам;
- лектин арахиса (PNA), специфичный к бета-^-галактозе;
- лектин чечевицы (LCA), специфичный к альфа-^-маннозе;
- лектин сои (SBA), специфичный к N-ацетил-.D-галактозамину;
- лектин золотого дождя (LABA), специфичный к альфа^-фукозе.
Парафиновые срезы наносились на стекла без овальбумина и высушивались в термостате в течение 48-72 часов при температуре 420-45°С. Депарафинизация осуществлялась в двух ксилолах, после чего проводилась дегидратация в спиртах. Препараты обрабатывали с применением стандартных наборов НПК «Лектинотест», г. Львов, в разведении лектина 1:50 по рекомендуемой методике [6]. Визуализацию мест связывания лектина проводили в системе «Диаминобензидин -Перекись водорода». Контроль специфичности реакции осуществляли путем исключе-
1-4 (10)' 2007
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
ния из схемы обработки препаратов диами-нобензидина. Специфичность лектинов к терминальным нередуцирующим моносаха-ридным остаткам гликоконъюгатов дана в соответствии с данными [1]. Интенсивность окрашивания срезов различными лектинами оценивалась в баллах двумя исследователями независимо друг от друга:
- отсутствие реакции - 0;
- слабая реакция - 1 балл;
- умеренная реакция - 2 балла;
- сильная реакция - 3 балла;
- очень сильная реакция - 4 балла.
Результаты лектиногистохимического
окрашивания подвергнуты статистическому анализу на предмет принадлежности к одной или разным генеральным совокупностям с помощью непараметрического статистического парного Г-критерия Уилкоксона.
Результаты и обсуждение. У всех больных, прошедших терапию метотрексатом, наблюдалось появление регрессивной стадии течения заболевания, что согласуется с данными [8]. Лечение матотрексатом оказывает наиболее сильное влияние на гистотопо-графию рецепторов лектина зародышей пшеницы, обеспечивая появление гисто-топографии, свойственной здоровой коже. Исключение составляют эпителиоциты ба-зального слоя, в цитоплазме которых экс-прессируется малое количество рецепторов этого лектина. Цитоплазма клеток перивас-кулярных инфильтратов, которые значительно уменьшились, но не исчезли, богаче WGA-позитивными биополимерами, чем клетки соединительной ткани дермы.
Очень сильна терапия метотрексатом и в отношении локализации и количества сиалоконъ-югатов - рецепторов лектина бузины черной. Такие биополимеры, перераспределяясь, статистически достоверно не отличаются от гисто-топографии и количества в здоровой коже. Немного недостаточно сиалированных макромолекул прослеживается в цитоплазме клеток шиповатого слоя.
После проведенной терапии метотрексатом,
локализация и количество гликополимеров с углеводной детерминантой ^-ацетил-^-галактозамина статистически достоверно не соответствует таковым в здоровой коже. Следы бензидиновой метки обнаруживаются в цитоплазме клеток базального и зернистого слоев, где в норме они отсутствуют.
Терапия метотрексатом оказывает статистически достоверное влияние на гисто-топографию мест связывания лектина арахиса, по сравнению с регрессивной стадией после стандартного лечения, и статистически достоверно не отличается от здоровой кожи. Основное отличие заключается в избыточном синтезе бета-^-галактоконъюга-тов эпителиоцитами зернистого и рогового слоев, где в здоровой коже они отсутствуют. Вместе с тем, количество этих глико-полимеров в клетках зернистого и рогового слоев уменьшается по сравнению с регрессивной стадией после стандартного лечения. В дерме клетки соединительной ткани редуцируют биосинтез таких макромолекул так же, как в здоровой коже. Яркость бензиди-новой метки на коллагеновых волокнах обоих слоев дермы уменьшилась и соответствует нормальной коже. Клетки периваскуляр-ных лимфоидных инфильтратов не просматриваются.
Регрессивная стадия псориаза после лечения метотрексатом характеризуется расположением и количеством гликополимеров с концевыми не-редуцирующими остатками альфа-^-маннозы (рецепторы лектина чечевицы) в эпидермисе и дерме, статистически достоверно отличающимися от таковых в регрессивной стадии после стандартного лечения и от здоровой кожи. Клетки базального, шиповатого и рогового слоев не подавляют полностью биосинтез альфа-,0 -маннозоконъюгатов, как в здоровой коже, но снижают его по сравнению с регрессивной стадией после стандартного лечения. Яркость бензидиновой метки на коллагеновых волокнах сосочкового слоя увеличивается, достигая показателей нормальной кожи. Клетки рыхлой соединительной ткани дер-
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 (10)' 2007
мы сохраняют малое количество мест связывания данного лектина, что не характерно для здоровой кожи. Клетки единичных пе-риваскулярных лимфоидных инфильтратов освобождаются от рецепторов лектина чечевицы.
Терапия метотрексатом не меняет локализацию и количество мест связывания лек-тина золотого дождя по сравнению с таковыми на фоне стандартного лечения (Рис. 1 на вкладке). Характер распределения и количество таких биополимеров статистически достоверно отличается от здоровой кожи.
ЛИТЕРАТУРА
1. Антонюк В. О. Лектини та ix сировинш джерела. - Львiв: ПП «Кварт», 2005. -554 с.
2. Вагин Д. В., Шаповалова Е. Ю., Балабан-цев А. Г. Выявление перераспределения гли-коконъюгатов - рецепторов к лектинам при аллергическом и гнойном воспалении по сравнению с нормой // ЖУНГБ. - 2003. - № 2. -С. 40.
3. Волошин Н. А., Григорьева Е. А. Лектины животного и растительного происхождения: роль в процессах морфогенеза// Журнал АМН Украины. - 2005. - Т 11, № 2. -С. 223-237.
4. Галич И. П., Евтушенко Н. В. Изменение гликозилирования при онкогенезе и развитии других патологических процессов // Онкология. - 2003. - Т. 5, № 1. - С. 4-9.
5. Глухенький Б. Т. Вопросы этиологии и патогенеза псориаза / Иммунитет и болезни: от теории к терапии. - М., 2005. -С. 10-12.
6. Луцик А. Д., Детюк Е.С., Луцик М.Д. Лектины в гистохимии. - Львов.: Вища школа, 1989. - 139 с.
7. Опанасенко З.А., Степаненко В.И. Особенности микроциркуляции и изменения сосудов в очагах кожных высыпаний при псориатической болезни (обзор литературы, обоснование необходимости дальней-
Вывод. Лечение метотрексатом приводит к гистотопографии и количеству рецепторов лектинов зародышей пшеницы, бузины черной и арахиса, аналогичным здоровой коже. Для рецепторов лектинов сои, чечевицы и золотого дождя такого соответствия нет.
Перспективы дальнейших исследований. Использование лектинов как структурно-функциональных зондов будет способствовать выяснению значения и характера трансформации углеводных детерминант клеточных мембран и неклеточных тканевых структур кожи в различных стадиях течения псориаза на фоне различных видов медикаментозного лечения.
ших исследований) // Укр. журн. дерма-тол., венерол., косметологии. - 2002. -№ 2. - С. 22-24.
8. Свистунов И.В., Романенко К.В. Патомор-фоз кожи больных распространённым круп-нобляшечным псориазом в процессе терапии метотрексатом и УФО с наружным фотосенсибилизатором // Укр. журн. дер-матол., венерол., косметологии. - 2003. -№ 1 (18). - С. 5-7.
9. Ушаков А. В., Шаповалова Е. Ю. Особенности экспрессии углеводных детерминант кардиомиоцитов при инфаркте миокарда и сахарном диабете // Проблемы, достижения и перспективы развития медико-биологических наук и практического здравоохранения. - 2006. - Т. 142. - Ч. 1. - С. 90-29.
10. Чемоданова Е. И., Притуло О. А. Метод лектиногистохимии в дифференциальной диагностике красной волчанки // Таврический медико-биологический вестник. -2003. - Т. 6, № 3. - С. 132 -133.
11. Шахтмейстер И.Я., Казанцева И.А., Ка-ламкарян А.А. и др. Влияние фотохимиотерапии на митотический режим эпидермиса при псориазе // Вестн. дерматол. и венерол. -1980. - Т. 44. - С. 4-7.
12. Mc Kee E.H., Marsden F., Santa Cruz D.J. Pathology of the skin (with clinical correlations). - Mosby-Wolfe, 1997.
1-4 (10)' 2007
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
Фотографии к статьям
Bo3iaHoea С.В. Експреая пролiферативного ядерного антигену в епщермш хворих на розацеа
Жумыкина О.И. Влияние лечения метотрексатом на локализацию гликополимеров в коже больных псориазом
Рисунок 1. Розацеа, ринофiма. lMyHoricTOxiMi4He дослщження експреси PCNA. Експреая PCNA етдермальними клiтинами; iмyногiстологiчний щдекс 3 х 3 = 9.
Рисунок 1. Эпидермис и дерма в регрессивной стадии псориаза после лечения метотрексатом. Обработка конъюгатом лектина золотого дождя с пероксидазой хрена. Проявление в системе «Диаминобензидин -Перекись водорода». Увеличение: об.х 40, ок. х 10.
Герман А.К. и соавт. Случай легочной формы бластомикоза у ВИЧ-инфицированного пациента
а) б)
Рисунок 3. Изменения в легких при бластомикозе - микропрепараты:
а) гранулема;
б) внутриальвеолярно расположенные Blastomyces dermatitidis.
