CC BY
17
Bo3iaHoea С. В. ЕКСПРЕС1Я ПРОЛ1ФЕРАТИВНОГО ЯДЕРНОГО АНТИГЕНУ В ЕП1ДЕРМ1С1ХВОРИХ.
УДК 616.53-002.282
Експресiя пролiферативного ядерного антигену в ешдермш хворих на розацеа
Возiанова С.В.
Нацюнальна медична amdeMiH тслядипломног oceimu iM. П.Л.Шупика, Кигв
ЭКСПРЕССИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНОГО ЯДЕРНОГО АНТИГЕНА В ЭПИДЕРМИСЕ БОЛЬНЫХ РОЗАЦЕА Возианова С.В.
Розацеа - хронический дерматоз с преимущественным поражением кожи лица, характеризущийся сосудистыми нарушениями, развитием воспаления в дерме, разрастанием соединительной ткани и гиперплазией сальных желез. Исследовано экспрессию пролиферативного ядерного антигена (РОЫА, или циклина) в эпидермисе больных розацеа. Выявлено достоверное повышение экспрессии циклина эпидер-мальными клетками больных с ринофимой, что свидетельствует об активации процессов пролиферации в эпидермисе этой группы больных и может иметь прогностическое значение.
THE EXPRESSION OF THE PROLIFERATIVE CELL NUCLEUS ANTIGEN IN EPIDERMIS OF ROSACEA PATIENTS Vozianova S.
Rosacea is a chronic dermatitis characterised by the preferential inflammation of the facial skin, vascular abnormalities, development of inflammation in derma, conjunctive tissue overgrowth and sebaceous glands hyperplasia. The expression of proliferative cell nucleus antigen (PCNA; also called cyclin) in the epidermis of rosacea patients has been examined. The reliable elevation of cyclin expression by epidermal cells of patients with rhinophyma has been revealed. These results indicate the activation of PCNA-expression in the epidermis of that group of patients and may have the prognostic value.
Розацеа - розповсюджений хрошчний дер матоз з переважним ураженням шюри об-личчя, який характеризуемся рецидивним переб^ом та важко тддаеться класичнш те-рапп. За частотою розацеа по^дае сьоме мюце серед хрошчних дерматозiв. В останш роки спостер^аеться тенденщя до росту ще! нозологп як в нашш кра!ш, так i за кордоном. У патогенезi розацеа важлива роль на-лежить [1-6]:
- судинним розладам;
- патологи шлунково-кишкового тракту;
- дисфункщям ендокринно! системи;
- психосоматичним порушенням;
- змшам в iмунному статут оргашзму;
- дiяльностi клiщiв роду Оетойех тощо.
Незважаючи на велику кшьюсть робщ що
присвячеш вищезазначенш проблем^ етюло-пя та патогенез захворювання залишають-ся до кшця не з'ясованими.
Науковий пошук дослщнимв у нашому столки спрямований на вивчення молеку-лярних механiзмiв розвитку мультифактор-них захворювань, до яких належить i розацеа. Увагу вчених привертають дослщжен-
1-4 (10)' 2007
ня факторiв росту клiтин (судинний ендоте-лiальний фактор росту, фактор росту фiбро-бластiв), пролiферативного ядерного антигену кл^ин при рiзних дерматолопчних па-тологiях
Пролiферативний ядерний антиген кл^и-ни (РС№4)/циклш - ушкальний ядерний про-те!н, який шдукуеться в пролiферуючих клiтинах i являеться антигеном мшенню для аутоантитiл, що були виявлеш в сироватцi кровi хворих на системний червоний вовчак [13, 15, 18]. Ц аутоантитша використовува-лися для дослiдження розповсюдження про-лiферативного ядерного антигену протягом кл^инного циклу. Було встановлено: пере-важне виявлення РСЫЛ мало мюце у кл^и-нах, де вщбувався синтез ДНК, що дало тдстави припустити участь цього протешу в клггиннш реплшаци ДНК [10, 12].
Найбшьше вдалою та доступною модел-лю для вивчення пролiферацil клггин, !х ди-ференщацп е етдермю. У базальному (гер-мiнативному) шарi епiдермiсу клiтини ма-ють штенсивну мiтотичну активнiсть, здатнi на подш, забезпечують оновлення ешдермь
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
су; тут мають мшце процеси пролiферащ! клiтин, а !х диференцiацiя вiдбуваeться у шипуватому та зернистому шарах.
Швидмсть синтезу пролiферативного ядерного антигену дуже низька у кл^инах, що знаходяться у споко!. Вона збiльшуeться у декiлька разiв перед синтезом ДНК у кл^инах, що зазнають впливу рiзниx míto-генних факторiв [8, 9]; при цьому маркер виявлявся в бшьшост трансформованих кл^ин та клiтин культуральних тканин лю-дини [11, 17]. Циклш вважаеться маркером пролiферацi! клггин у пухлинах, використо-вуеться для щентифшацп бласттрасформо-ваних клiтин у хворих на лейкем^ [11]. В ешдерм^ хворих на псорiаз, де мають м^це процеси прискорено! пролiферацil клiтин, пролiферативний ядерний антиген ек-спресуеться в 10 % кл^ин епiдермiсу [19]. Експресiя PCNA/циклшу в культурi етдер-мальних кератиноцитiв in vitro в^^зняеться вiд епiдермальниx кератиноципв in vivo. Myigava S et al припускають, що така рiзни-ця в кiнетицi клiтинниx популяцш та екс-пресп РС№4/циклшу зумовлена наявшстю велико! кiлькостi клiтин у G-0 перiодi клiтинного циклу в гермшативному шарi епiдермiсу людини [16].
Мета дослiдження - провести iмуногiсто-xiмiчне дослiдження експреси пролiфератив-ного ядерного антигену клiтинами ешдермь су у хворих на запальну форму та шфшьтра-тивно-продуктивну форми розацеа, ощнити роль PCNA у патогенезi захворювання.
Матерiали та методи. Дослщжено 24 бюп-тати шюри хворих на розацеа:
{Iнтенсивнiсть забарвлення} X
При цьому кожний iз цих параметрiв ощ-нювався за трьохбальною шкалою:
- розповсюдженiсть:
0 - вщсутш забарвленi ядра;
1 - менше 10 % забарвлених ядер;
2 - бшьше 10 %, але менше 50 % забар-влених ядер;
3 - гомогенне забарвлення бшьше 50 % гомогенно забарвлених ядер у шарц
- штенсившсть:
0 - вщсутне видиме забарвлення;
1 - слабке забарвлення;
2 - помiрне забарвлення;
3 - сильне забарвлення. Результати дослщження. При iмуногiсто-
хiмiчному дослщженш експрешя пролiфера-тивного ядерного антигену визначалась у виглядi гомогенного темно-коричневого за-
- 6 бюптапв шкiри хворих на запальну форму (група 2);
- 8 бюптаив шюри хворих на ринофiму (група 3);
- 10 бюшапв шкiри здорових людей (група 1), -
як були забраш пiд час планових плас-тичних операцiй на обличчi.
Парафiновi зрiзи 4-5 мкм завтовшки фар-бувалися гематоксилiном та еозином (H&E)
за стандартною методикою (Рис. 1 на вклад-щ)
Iмуногiстохiмiчне (1ГХ) дослiдження про-водилося за стандартною авщин-бютиновою пероксидазною методикою з використанням Vectastain ABC Elite rabbit & Mouse kit (Vector, Burlingame, CA). Пюля депарафшу-вання зрiзiв блокували ендогенну перокси-дазу протягом 5 хв. у 3-вщсотковому водному розчиш перекису водню. Демаскуван-ня антигену проводили шляхом шкубацп зрiзiв у цитратному буферному розчиш (pH 6.1) протягом 30 хв. при температурi 90°С. Неспецифiчну iмунну активнiсть блокували 5-вiдсотковою нормальною конячою сироваткою протягом 30 хв. при юмнатнш температурi. Iнкубацiю зрiзiв iз Mouse antihuman monoclonal Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA PC-10) Daco Cytomation в розведенш 1:200 проводили протягом 16 годин при температурi +2°С. Вiзуалiзацiя проводилась iз використанням розчину 3,3' - дiамiнобезидину iз дофарбу-ванням ядер гематоксилшом.
Отриману експресiю оцiнювали нашв-кiлькiсним методом [14] за допомогою iму-ногiстохiмiчного iндексу:
{Розповсюдженiсть забарвлення}.
барвлення ядер кл^ин епiдермiсу; результати дослщження представлен в Табл. 1.
Таблиця 1 - Експрес1я прол1феративного ядерного антигену кл1тинами ешдерм1су хворих на розацеа
Юльшсть PCNA,
№ Група обстежених, вдекс
n експресн
1 Контроль 10 3,7 ± 0,5
2 Хвор1 на запальну
форму розацеа 6 5,0 ± 1,0
3 Хвор1 на риноф1му 8 5.6 ± 0,7*
ПРИМ1ТКА: * - достов1рне (Р < 0,05) шдвищення в1дносно в1дпов1дних показник1в контрольно! групи
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 (10)' 2007
Фотографии к статьям
Bo3iaHoea С.В. Експреая пролiферативного ядерного антигену в епщермш хворих на розацеа
Жумыкина О.И. Влияние лечения метотрек-сатом на локализацию гликополимеров в коже больных псориазом
Рисунок 1. Розацеа, ринофiма. lMyHoricTOxiMi4He дослщження експреси PCNA. Експреая PCNA епiдермальними клiтинами; iмyногiстологiчний щдекс 3 х 3 = 9.
Рисунок 1. Эпидермис и дерма в регрессивной стадии псориаза после лечения метотрексатом. Обработка конъюгатом лектина золотого дождя с пероксидазой хрена. Проявление в системе «Диаминобензидин -Перекись водорода». Увеличение: об.х 40, ок. х 10.
Герман А.К. и соавт. Случай легочной формы бластомикоза у ВИЧ-инфицированного пациента
а) б)
Рисунок 3. Изменения в легких при бластомикозе - микропрепараты:
а) гранулема;
б) внутриальвеолярно расположенные Blastomyces dermatitidis.
Возанова С.В. ЕКСПРЕС1Я ПРОЛ1ФЕРАТИВНОГО ЯДЕРНОГО АНТИГЕНУ В ЕП1ДЕРМ1С1ХВОРИХ...
У грут хворих на запальну форму роза-цеа шдекс експреси пролiферативного ядерного антигену був вищим (5,0 ± 1,0) за вщ-повiдний показник контрольно! групи (3,7 ± 0,5), але не мав достовiрностi (р = 0,08). Виявлено достовiрне пiдвищення експресi! пролiферативного ядерного антигену кл^инами епiдермiсу хворих на рино-фiму. Так, шдекс експреси PCNA у хворих на ринофiму склав 5,6 ± 0,7; у контрольнш
Л1ТЕРАТУРА
1. Абрагамович Л.С. Клшшо-морфофункщо-нальний стан езофагогастро-дуоденаль-но! системи у хворих з рожевими вугра-ми: аспекти етюлоги, патогенезу i лшу-вання // Лшарська справа .- 1996. - Т. 10, № 12. - С. 84-88.
2. Бутов Ю.С., Демина О.М., Васенова В.Ю., Школьников М.М. К вопросу о патогенезе, клинике и терапии розацеа // Клиническая дерматология и венерология. -2006. - № 2. - С. 95-97.
3. Коган Б.Г., Степаненко В.И. Ращональна комплексна тератя розацеа, демодикозу i дерматиту перюрального з урахуванням етюпатогенезу та особливостей ключного переб^у дерматозiв // Укра!нський журнал дерматологи, венерологи, косметологи. - 2006. - № 1 (20). - С. 14-28.
4. Разнатовский К.И., Алиев Ф.А. Оценка по-
казателей микроциркуляции в области лица у женщин с розацеа / Тез. науч. работ IX Всерос. съезда дерматовенерол. -М., 2005. - Т. 1. - С. 96.
5. Стоянова Е.В. Клинико-иммунологическая характеристика больных розацеа в динамике лечения // Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология. -2005. -№ 1-2 (8). - С. 63-68.
6. Черкасова М.В., Сергеев Ю.В. Актуальные аспекты патогенеза и терапии розацеа // Российский журнал кожных и венерических болезней. - 1998.- № 6.- С. 59-64.
7. Шармазан С.И. Комплексное лечение боль-
ных розацеа женщин климактерического периода с применением заместительной гормональной терапии // Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология. -2000. - № 2 (3). - С. 57-62.
8. Bravo R., Macdonald-Bravo H. Induction of nuclear protein cyclin in quiescent mouse 3T3 cells stimulated by serum and growth factors // EMBO J. - 1984. - Vol. 3. - P. 31773181.
9. Bravo R., Macdonald- Bravo H. Changes n the nuclear distribution of cyclin (PCNA) but
rpyni - 3,7 ± 0,5 (р < 0,005).
За даними американських вчених, у 30 % хворих на ринофiмy розвиваються пухлинш новоутворення на шкiрi носу. Тому значне тдвищення експреси пролiферативного ядерного антигену кл^инами етдермюу хворих на шфшьтративно-продуктивну форму розацеа (ринофiмy) св^чить про активащю проце^в пролiферащi в клггинах ешдермюу ще! групи хворих, може мати прогностичне значення.
not its synthesis depend on DNA replication // EMBO J. - 1985. - Vol. 43. - P. 655-661.
10. Bravo R. Synthesis of nuclear protein cyclin (PCNA) and its relationship with DNA replication // Exp. Cell. Res. - 1986. - Vol. 163. - P. 287-293.
11. Celis J.E., Bravo R., Larsen P.M., Fey S.J. Cyclin: a nuclear protein whose level correlates directly with the proliferative state of normal as well as transformed cells // Leukemia Res. - 1984. - Vol. 2. - P. 143-157.
12. Celis A., Celis J.E. Cell cycle-dependent variations in the distribution of the nuclear protein cyclin proliferating cell nuclear antigen in cultured cells: subdivision of Sphase // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1985. - Vol. 82. - P. 3262-3266.
13. Fritzler M.J., McCarty G.A., Ryan J.P., Kinsella T.D. Clinical features of patients with antibodies directed against proliferating cell nuclear antigen // Arthritis Rheum. - 1983. -Vol. 26. - P. 140-145.
14. Malmstrum P.U., Busch C., Norlen B.J., Andersson B. Expression of ABH blood group isoantigen as a prognostic factor in transitional cell bladder carcinoma // Scand. J. Urol. Nephrol.- 1998.- Vol. 22.- P.265-270.
15. Mathews M.B., Bernstein R.M., Franza B.R. Jr., Garrels J.I. Identity of the proliferating cell nuclear antigen and cyclin // Nature. -1984.- Vol. 309. - P. 374-376.
16. Miyagawa S., Okada N., Takasaki Y. et al. Expression of Proliferating Cell Nuclear Antigen/Cyclin in Human Keatinocytes // J. Invest. Dermatol.- 1989.-Vol. 93.- P.678-681.
17. Takasaki Y., Deng J.-S., Tan E.M. A nuclear antigen associated with cell proliferation and blast transformation. Its distribution in synchronized cells // J. Exp. Med. - 1981. -Vol. 154. - P. 1899-1909.
18. Tan E.M. Autoantibodies to nuclear antigens (ANA): their immunobiology and medicine // Adv. Immunol.- 1982.- Vol. 33.- P.167-240.
19. Weinstein G.D., Frost P. Methotrexate for psoriasis // Arch. Dermatol. - 1971. -Vol. 103. - P. 33-38.
1-4 (10)' 2007 Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
