CC BY
238
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616.24-002-053.1-053.32-078.33
И.В. Нестерова1, ГА. Чудилова2, Л.В. Ломтатидзе2, С.В. Ковалева2, О.И. Сапун2
фенотипические характеристики субпопуляций моноцитов
CD64+CD16-CD32+CD11B+, CD64+CD16+ CD32+CD11B+, CD64-CD16+ CD32+CD11B+ пРИ
врожденной пневмонии у глубоко недоношенных новорожденных
1ГБОУ ВПО Российский университет дружбы народов Министерства образования и науки России, 117198, г Москва, Россия; 2ГБОУ ВПО Кубанский государственный медицинский университет Минздрава России, 350063, г Краснодар, Россия
Ранняя диагностика инфекционно-воспалительных и гнойно-септических процессов у недоношенных новорожденных весьма затруднительна и крайне актуальна в современной неонатологии. Целью настоящей работы явилось выявление фенотипических характеристик субпопуляций моноцитов (Мон) CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+ CD32+ CD11b+, CD64"CD16+ CD32+ CD11b+ с определением их диагностической значимости у глубоко недоношенных новорожденных с врожденной пневмонией на фоне респираторного дистресс-синдрома. Исследованы одномоментная экспрессия молекул поверхностной цитоплазматической мембраны Мон СD64, CD32, СD16, CD11b методом проточной цитометрии и уровень плотности экспрессируемых молекул по интенсивности флюоресценции (MFI). Впервые показаны наличие субпопуляций Мон CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD64-CD16+CD32+CD11b+ у доношенных новорожденных и трансформация фенотипа этих субпопуляций у глубоко недоношенных новорожденных с врожденной пневмонией разной степени тяжести на фоне респираторного дистресс-синдрома. Выявленные особенности количественной и качественной трансформации этих субпопуляций Мон у глубоко недоношенных новорожденных коррелируют с тяжестью течения врожденной пневмонии. При этом исследование субпопуляции CD64-CD16+CD32+CD11b+ может быть использовано в качестве раннего диагностического и прогностического маркера наличия и тяжести инфекционно-воспалительного процесса у глубоко недоношенных новорожденных с тяжелой и крайне тяжелой врожденной пневмонией на фоне респираторного дистресс-синдрома.
Ключевые слова: моноциты; фенотип; субпопуляции; глубоко недоношенные новорожденные.
I.V Nesterova1, G.A. Chudilova2, L.V Lomtatidze2, S.V Kovaleva2, O.I. Sapun2.
phenotypic CHARACTERISTICS of THE monocyte subpopulations CD64+CD16-CD32+CD11B+, CD64+CD16+ CD32+CD11B+, CD64-CD16+ CD32+CD11B+ IN DEEPLY PREMATURE NEWBoRNS WITH
congenital pneumonia
[SBEI HPE Peoples’ Friendship University of Russia of Ministry of education and science of Russian Federation, 117198, Moscow, Russia; 2SBEI HPE Kuban State Medical university of Health Ministry of Russian Federation, 350063, Krasnodar, Russia
Early detection of infectious-inflammatory and purulent-septic processes in deeply premature newborns is very difficult and extremely urgent in modern neonatology. The aim of our study was to identify the phenotypic characteristics of subpopulations CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD64-CD16+CD32+CD11b+ monocytes (Mon) with definition of their diagnostic value in deeply premature newborns with the congenital pneumonia varying severity and the respiratory distress syndrome. There was investigated a momentary expression of molecules СР64, CD32, СР16, CD11b on the surface membrane of Mon by the flow cytometry. The testing of the level of their density was done, using detection of the mean intensity of the fluorescence (MFI). For the first time demonstrated the existence of different subpopulations CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD64-CD16+CD32+CD11b+ Mon in healthy newborn infants and transformation of the phenotype of these subpopulations in deeply premature newborns with the congenital pneumonia varying severity and the respiratory distress syndrome. These features of quantitative and qualitative transformation of 3 subpopulations of Mon were correlated with the severity of congenital pneumonia in deeply premature newborns. The study of the level of the subpopulation CD64-CD16+CD32+CD11b+ Mon can be used as an early diagnostic marker of gravity of inflammatory process in severe congenital pneumonia in deeply premature newborns.
Key words: monocytes; phenotype; subpopulations; deeply premature newborns.
Моноциты (Мон) периферической крови играют большую роль в осуществлении противомикробной защиты. Ранее считалось, что Мон периферической крови представляют собой гомогенную фракцию клеток. Однако в настоящее время получены доказательства, того, что существует несколько субпопуляций Мон с различными фенотипами, размером, морфологией ядра, гранулярностью, свойствами и генным профилем. Пластичность Мон сопряжена с их способностью перестраиваться и реагировать на изменяющиеся условия экстрацеллюлярного окружения. В настоящее время среди несколько видов активации Мон, выделяют и гуморальную, которая реализуется через FcR- и cR-рецепторы.
FcR - семейство мембранных рецепторов. Мон распознает Fc-фрагменты IgG и IgA, находящиеся в мономерном
Нестерова Ирина Вадимовна (Nesterova Irina vadimovna), e-mail: [email protected]
состоянии или включенные в иммунные комплексы. Наличие высокоаффинного рецептора CD64 (ТсуМ)с является характерной чертой Мон. CD64 связывается как с Мономерным, так и с аггрегированным IgG. CD32 (FcyRII) - низкоаффинный рецептор, он связывается только с полимеризованным или агрегированным IgG. Их связывание предопределяет активацию фагоцитарных процессов. CD16 (FcyRIII) - низкоаффинный рецептор к Fc-фрагменту IgG. CD11b - рецептор к СЗ-компоненту комплемента, относится к семейству интегри-нов, вовлекаемых в клеточно-клеточные и клеточно-экстра-целлюлярно-матриксные взаимодействия. В результате комплексной гуморальной активации Мон через эту группу рецепторов происходят распознавание корпускулярных частиц, опсонизированных соответствующими иммуноглобулинами или комплементом, а далее их поглощение, кислородный взрыв, дегрануляция с образованием фаголизосомы, процессы киллинга, элиминации антигенов (АГ), и т. д. [1-3]. В настоя-
- 33 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2014
щее время в соответствии с номенклатурой Мон и дендритных клеток (ДК) крови, разработанной ведущими экспертами мира, которые входят в Nomenclature committee of the International union of Immunological Societies, Мон и клетки дендритных линий человека и мыши, циркулирующие в крови и со временем мигрирущие в ткани, где они в дальнейшем созревают и выполняют различные функции преимущественно в иммунной защите, подразделяются на три типа Мон (классические, промежуточные, неклассические) и три типа ДК (плазмацито-идные и два типа миелоидных ДК). В течение последних лет эти клетки детально охарактеризованы с использованием поверхностных маркеров методом проточной цитометрии, благодаря этому были описаны их субпопуляции [4].
Тем не менее необходимо отметить, что разные авторы выделяют и классифицируют разнообразные фенотипы субпопуляций Мон, которые могут отличаться и функционально. В 1993 г G. Fingerle и соавт. выделили две субпопуляции Мон: большую мажорную субпопуляцию Мон с высокой экспрессией АГ cD14 и полным отсутствием одновременной экспрессии Мон CD16- - CD14++CD16-, а также минорную субпопуляцию Мон с низкой экспрессией АГ cD14 и одновременной экспрессией АГ CD16 - Мон CD14+CD16+. При септицемии количество Мон CD14+CD16+ повышалось, при этом у большинства пациентов имело место уменьшение плотности экспрессии CD14 на классических - регулярных Мон CD14++ CD16-. Кроме того, при сепсисе снижался уровень экспрессии CD11b. Авторы предположили, что значительные изменения со стороны субпопуляционного состава Мон при септицемии связаны с повышенным уровнем интерлейкина ИЛ-6 [5].
Позднее были получены данные, свидетельствующие о том, что в периферической крови человека в циркуляции действительно находятся две субпопуляции Мон: классические Мон - CD14++CD16-DR+, и провоспалительные Мон - CD14+CD16+DR++, которые составляют около 10% количества всех Мон. После стимуляции липополисахаридом (ЛПС) в системе in vitro интенсивность флюоресценции фактора некроза опухоли (ФНОа) возрастала в 3 раза больше в провоспалительных Мон CD14+CD16+, чем в классических Мон. Авторы пришли к выводу о том, что минорная субпопуляция провоспалительных Мон - главный продуцент ФНОа в человеческой крови [6]. Таким образом, появление молекул CD16+ на мембране Мон сопряжено с повышением продукции важнейшего провоспалительного цитокина - ФНОа.
Результаты экспериментальных исследований на модели иммунокомпрометированных мышей было также показали существование двух субпопуляций Мон. Их идентификация базировалась на определении экспресии молекул cD14 и CD16. Так же, как и у человека, мажорная субпопуляция классических Мон, которые не несут на поверхностной мембране cD16 и минорная субпопуляция, которая имеет одномоментное несение CD14+CD16+. При моделировании процессов воспаления, индуцированного растворимым ЛПС или частицами зимозана, были установлены определенные особенности функционирования этих субпопуляций. Мон CD16+ обладали большей способностью к фагоцитозу и продуцировали значительно большее количество ФНОа и ИЛ-6, чем Мон СЭ16,-в ранний период после введения зимозана. Мон CD16+ также продуцировали высокий уровень Р2-дефенсина, который, по мнению авторов, может являться новым маркером для этой субпопуляции Мон. В противоположность этому дифференцированные Мон CD16- (через 24 ч после введения индуктора) приобретали большие возможности клеток АПК при ЛПС-индуцированном перитоните. При стимуляции зимозаном субпопуляции Мон не приобретали такой способности. Подобные субпопуляции Мон находили также при перитоните у человека. Результаты этих исследований позволили авторам высказать идею о том, что субпопуляция Мон CD16+ играет большую роль в реализации врожденного иммунного ответа, в то время как Мон субпопуляции Мон CD16- могут играть большую роль, как АПК [7].
Е. Grage-Griebenow и соавт. в своих ранних исследованиях показали, что пул Мон состоит из мажорной субпопуля-
ции позитивных МОН cD64+, проявляющих высокую фагоцитарную активность, но низкую способность активировать Т-лимфоциты, и из минорной субпопуляции негативных Мон cD64, проявляющих дендритоподобную активность с высокими возможностями активации Т-лимфоцитов и низкой фагоцитарной активностью. Позднее, в 2000 г, эти же авторы [8] установили наличие четырех различных субпопуляций Мон. Две субпопуляции были позитивны по CD16+ (CD16+CD64+ и CD16+CD64-) и обладали высокой способностью стимулировать Т-лимфоциты. Две другие субпопуляции Мон были негативны по CDl6 (CD16-CD64+ и CD16-CD64-), их отличала низкая способность стимулировать Т-лимфоциты. В дальнейшем были получены данные, свидетельствующие о том, эти четыре субпопуляции могут отличаться друг от друга по способности фагоцитировать опсонизированные бактерии (Staph. aureus and E.coli) и генерировать активные формы кислорода (АФК). Две субпопуляции Мон, позитивные по CD64 (CD64+CD16+ и CD64+CD16-), проявляли высокую фагоцитарную активность, ассоциированную с хорошей генерацией АФК. В обеих субпопуляциях Мон, позитивных по cD64+, наблюдали высокий уровень люминолзависимой, преимущественно миелопероксидазо-медиированной, хемилюминесценции в ответ на стимуляцию латексом и FMLP (формилметиониллей-цилфенилаланин). Фагоцитарная активность и низкий уровень хемилюминесценции выявлены у Мон CD64-CD16+, но они отсутствовали у Мон CD64-CD16-, что продемонстрировало, что каждая субпопуляция Мон, за исключением Мон cD64-cD16-, может в той или иной степени поглощать бактерии и проявлять активность миелопероксидазы. Таким образом, все четыре субпопуляции Мон отличались по своим способности активировать Т лимфоциты, а также проявлять фагоцитарную активность и способность генерировать АФК [8]. В то же время C. Sanchez-Torres и соавт. (2001) продемонстрировали, что и Мон CD16+, и Мон CD16- в разной степени способны индуцировать пролиферацию Т лимфоцитов, а при культивировании in vitro с ГМ - КСФ, ИЛ-4 и ФНОа обе субпопуляции приобретали морфологию ДК [9].
Ранняя диагностика инфекционно-воспалительных и гнойно-септических процессов у недоношенных новорожденных весьма затруднительна и крайне актуальна в современной неонатологии. С одной стороны, проведены немногочисленные исследования, в которых предприняты попытки оценить диагностическую значимость некоторых субпопуляций Мон при сепсисе и бактериальной инфекции. С другой стороны имеются данные, отрицающие диагностическую значимость изменений экспрессии, например, Мон HLA-DR+, в сравнении с изменением уровня НГ, экспрессирующих НГ cD64+, и повышением диагностического уровня СРБ при пневмонии у доношенных новорожденных в первые 24 ч после рождения [10]. В то же время, исследований, посвященных изучению субпопуляций Мон с различными фенотипами, выполненных с оценкой одномоментной экспрессии CD64, CD16, CD32, CD11b на их мембране у глубоко недоношенных новорожденных с врожденной пневмонией, не проводилось.
Целью настоящей работы явилось выявление фенотипических характеристик субпопуляций Мон CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+ CD32+ CD11b+, CD64-CD16+ CD32+CD11b+ с определением их диагностической значимости у глубоко недоношенных новорожденных с врожденной пневмонией на фоне респираторного дистресс-синдрома.
Материал и методы. Под нашим наблюдением находили 11 глубоко недоношенных новорожденных (6 мальчиков, 5 девочек) с гестационным возрастом от 25 до 32 нед (средний срок гестации 30 нед), массой от 930 до 1900 г с диагнозом: врожденная пневмония на фоне респираторного дистресс-синдрома недоношенных, церебральная ишемия II степени, синдром угнетения недоношенных и неонатальная желтуха, находящиеся в Краснодарском краевом перинатальном центре. Клинически пациентов рандомизировали на две группы (1-я - 8 детей с тяжелым течением инфекционного процесса и дыхательных нарушений; 2-я - 3 человека с очень тяжелым течением инфекционного процесса и дыхательных нарушений). Средняя масса
- 34 -
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
а
б
Рис. 1. Абсолютное (а) и относительное (в %) (б) содержание субпопуляций Мон при врожденной пневмонии у глубоко недоношенных новорожденных.
Здесь и на рис. 2: * -p < 0,01 и ** -p < 0,001 по сравнению с показателями в контроле; Л -p < 0,01 и лл -p < 0,001 при сравнении показателей в 1-й и 2-й группах.
тела в 1-й группе составила 1400 г, во 2-й - 1220 г Все дети были рождены от матерей с неблагоприятным инфекционным анамнезом. В контрольную группу вошли 11 практически здоровых доношенных новорожденных (5 девочек и 6 мальчиков) в возрасте от 3 до 6 сут, массой тела 2880-4370 г (гестационный возраст - 38-40 нед). Клинико-иммунологическое исследование проводили на 1-2-е сутки жизни пациентов. Исследовали одномоментную экспрессию молекул поверхностной цитоплазматической мембраны Мон CD64, CD32, CD16, CD11b методом проточной цитометрии на CYTOMICS FC500 (Beckman Coulter, США) с помощью двойного гейтирования, используя панель моноклональных антител: CD64-FITC, CD32-PE, CD16-ECD, CD11b-PC5 (Beckman Coulter, США). Оценивали количественные характеристики различных субпопуляций Мон (процент, абсолютное значение) и уровень плотности всех экспрессируемых молекул по интенсивности флюоресценции (MFI).
Результаты и обсуждение. Показано, что у глубоко недоношенных новорожденных с врожденной пневмонией на фоне глубоких дыхательных расстройств в 1-й группе общее количество лейкоцитов было снижено и составило 8,23±0,72 • 109/л против 12,06±1,03 • 109/л в контроле (здоровые новорожденные) (р < 0,01). Относительное и абсолютное количество Мон в данной группе, достоверно не отличалось от показателей у здоровых новорожденных (соответственно, - 11,12±2,02% и 1,18±0,17 • 109/л против 7,83±1,17% и 0,91±0,14 • 109/л в контроле (р > 0,05; р2 > 0,05)). У глубоко недоношенных новорожденных 2-й группы с врожденной пневмонией на фоне глубоких дыхательных расстройств с более тяжелым течением заболевания имел место гиперлейкоцитоз - 82,83±7,64 • 109/л (р <
0,001), который сопровождался значительным относительным и абсолютным моноцитозом (соответственно - 25,3±1,14% и 22,34±1,14 • 109/л в 1мл (р1 < 0,001; р2 < 0,001), что было достоверно выше, чем у здоровых новорожденных и пациентов 1-й группы
(р < 0,001).
При сравнительном фенотипическом анализе Мон выделили три основные субпопуляции клеток: CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+ и CD64-CD16+CD32+CD11b+ во всех исследуемых группах (рис. 1).
В контрольной группе здоровых доношенных новорожденных относительное количество субпопуляции Мон с фенотипом CD64+CD16-CD32+CD11b составило 74,18±3,3%. У недоношенных новорожденных 1-й группы относительное количество Мон с фенотипом CD64+CD16-CD32+CD11b было незначительно снижено - до 65,88 ± 3,34% (р > 0,05), во 2-й группе с более тяжелым течением заболевания значительно снижено - в 1,7 раза, до 44,67± 4,23% (р < 0,01). Однако при этом в циркуляции у недоношенных новорожденных 2-й группы находилось в 18 раз больше Мон данной популяции - 9,83±1,23 • 109/л против 0,54±0,08 • 109/л в контроле (р < 0,001) (смс. рис. 1). Плотность экспрессии молекул CD64 по MFI в 1-й и 2-й группах оставалась на уровне контроля (р1 > 0,05; р2 > 0,05). В то же время имело место повышение плотности экспрессии CD32, CD11b по MFI по отношению к контролю - в 2 раза в 1-й группе и в 1,7 раза во 2-й (рис. 2).
У здоровых новорожденных субпопуляция Мон с фенотипом CD64+CD16+CD32+CD11b+ составила 23,7± 4,72%, при этом в циркуляции находились 0,23±0,06 -109/л Мон этой субпопуляции. На фоне развития инфекционного процесса у недоношенных детей количество Мон с фенотипом CD64+CD16+CD32+CD11b+ практически не изменялось в 1-й группе, составив 22,2±4,72%, а в абсолютных значениях - 0,32±0,07 • 109/л (р1 < 0,001; р2 < 0,001). В то же время у недоношенных 2-й группы, имеющих очень тяжелое течение инфекционного процесса и дыхательных расстройств, количество Мон этого фенотипа достоверно возросло в 1,7 раза, достигнув 40,07±2,09% (р < 0,01), а их абсолютное содержание в 40 раз превысило контрольные значения, достигнув 9,2±1,5 • 109/л (р < 0,001) (см. рис. 1). Несмотря на увеличение количества Мон с фенотипом CD64+CD16+CD32+CD11b+ в 2-й группе и отсутствие такового в 1-й группе, плотность экспрессии мембранных молекул CD64, оцениваемая по уровню MFI в обеих группах, не менялась, оставаясь на уровне контроля. В то же время уровень плотности экспрессии молекул CD16, оцениваемый по MFI, достоверно увеличился в 1,8 раза в 1-й группе, что стало адекватным ответом на воспалительный процесс, но он оставался на уровне контрольных значений во 2-й группе, что может свидетельствовать о неадекватном реагировании. При этом средняя плотность экспрессии молекул CD32 и CD11b по MFI как в 1-й, так и во 2-й группах достоверно возросла в 2 раза по отношению к контролю (р1 < 0,001; р2 < 0,001) и не отличалась между таковой в 1-й и 2-й группах (р > 0,05) (см. рис. 2).
Особый интерес, с нашей точки зрения, представляет субпопуляция Мон с фенотипом CD64-CD16+CD32+CD11b+. Она составляла 7,39± 3% у здоровых доношенных новорожденных, в абсолютных значениях - 0,07±0,04 • 109/л. В 1-й группе выявили снижение как процентного (в 2,8 раза), так и абсолютного (в 3,3 раза) количества Мон CD64-CD16+CD32+CD11b+ по отношению к контролю. В то же время во 2-й группе при сравнении с контролем наблюдали повышение в 1,5 раза относительного количества Мон с данным рецепторным набором (до 11,25± 0,35%) и в 44,9 раза абсолютного количества (3,14±0,47 • 109/л) (см. рис. 1). При этом плотность экспрессии изучаемых поверхностных мембранных молекул
- 35 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2014
2-я группа юш 1-я группа
Контрольная группа
Рис. 2. Уровень плотности экспрессируемых молекул субпопуляций Мон (а, б, в) при врожденной пневмонии у глубоко недоношенных новорожденных, оцениваемый по MFI.
CD16, CD32, cD11b субпопуляции cD64-cD16+cD32+cD11b+ достоверно возрастала в обеих группах, но наиболее значимо - в 1-й. В частности, уровень MFI CD16 1-й группы составил 30,23±2,8, во 2-й - 21,23±1,9 и был достоверно выше контроля (в 2,34 раза (р < 0,001) и 1,78 раза (р < 0,001) соответственно). Следует отметить, что уровень MFI CD16 обеих групп между собой достоверно отличалсяь в 1,5 раза (р < 0,05). Уровень MFI CD32 1-й и 2-й групп был в 2,34 раза (р < 0,001) и 1,78 раза (р < 0,001) достоверно выше контроля, а уровень MFI CD11b - в 4,16 раза (р < 0,001) и 3,5 раза (р < 0,001) превышал уровень MFI CD11b контрольной группы доношенных новорожденных субпопуляции Мон CD64-CD16+ CD32+CD11b+ (см. рис. 2).
Мы впервые показали наличие субпопуляций Мон CD64+CD16-CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD64--CD16+CD32+CD11b+ у здоровых доношенных новорожденных
и трансформацию фенотипа этих субпопуляций у глубоко недоношенных новорожденных с врожденной пневмонией на фоне респираторного дистресс-синдрома. Выявленные особенности количественной и качественной трансформации описанных субпопуляций Мон у глубоко недоношенных новорожденных коррелируют с тяжестью течения врожденной пневмонии. Так, при наиболее тяжелом течении врожденной пневмонии у недоношенных новорожденных 2-й группы в циркуляции находится в 18 раз больше Мон с фенотипом CD64+CD16-cD32+CD11b+ и в 40 раз больше Мон с фенотипом CD64+CD16+CD32+CD11b+, чем у пациентов с более благоприятным течением пневмонии и у здоровых доношенных новорожденных. Оснащенность субпопуляции CD64+CD16-CD32+CDNb+ молекулой CD64+ при отсутствии CD16, по данным S. Agular-Ruiz и соавт. (2011) [7], свидетельствует в пользу ее высокой фагоцитарной активности, но низкой способности активировать Т-лимфоциты, кроме того, она характеризуется низким уровенем продукции ФНОа и ИЛ-6. В то же время, Мон с фенотипом cD64+CD16+CD32+CD11b+ за счет экспрессии CD16+ в соответствии с данными тех же авторов должны продуцировать большое количество ФНОа и ИЛ-8, а также высокий уровень дефенсинов, т. е. они обладают высокой микробицидной активностью и способностью в большом количестве не столько инициировать, сколько усугублять и утяжелять течение воспалительной реакции. Особый интерес, с нашей точки зрения, представляет субпопуляция Мон с фенотипом CD64-CD16+CD32+CD11b+. Количество Мон данной субпопуляции разнонаправленно изменяется при различном течении врожденной пневмонии у недоношенных детей. Так, у детей с более благоприятным течением болезни наблюдали снижение в 3,3 раза абсолютного количества Мон CD64-CD16+CD32+CD11b+ по отношению к контролю. В то же время при крайне тяжелом течении болезни в 2-й группе, при сравнении с контролем выявили повышение в 44,9 раза абсолютного количества Мон CD64-CD16+CD32+CD11b+. Полагаем, что исследование трансформации фенотипа субпопуляции Мон CD64-CD16+CD32+CD11b+может быть использовано в качестве раннего диагностического и прогностического маркера наличия и тяжести инфекционно-воспалительного процесса у глубоко недоношенных новорожденных с тяжелой и крайне тяжелой врожденной пневмонией на фоне респираторного дистресссиндрома недоношенных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Пинегин Б.В., Карсонова М.И. Макрофаги: свойства и функции. Иммунология. 2009; 4: 241-9.
REFERENCES
1. Pinegin B.V., Karsonova M.I. Macrophages: properties and functions. Immunologija. 2009; 4: 241-9 (in Russian).
2. The leukocyte antigen facts-book, Barclay A. N., Brown M. H., Law S. K. L. etal. /2nd ed. San Diego: Academic Press; 1997: 192-3.
3. Seely A.J.E., Pascual J.L., Christou N.V Science review: Cell membrane expression (connectivity) regulates neutrophil delivery, function and clearance. Crit Care. 2003; 7(4): 291-307.
4. Ziegler-Heitbrock L., Ancuta P., Crowe S., Dalod M., Grau V., Hart D. N. et al. Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood. Blood. 2010; 116 (16): 74-80.
5. Fingerle G., Pforte A., Passlick B., Blumenstein M., Strobel M., Ziegler-Heitbrock H.W. The novel subset of CD14+/CD16+ blood monocytes is expanded in sepsis patients. Blood. 1993; 82 (10): 3170-6.
6. Belge K. U., DayyaniF., Horelt A., SiedlarM., FrankenbergerM., Frankenberger B., Espevik T., Ziegler-Heitbrock L. The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF. J Immunol. 2002; 168 (7): 3536-42.
7. Aguilar-Ruiz S. R., Torres-Aguilar H., Gonzalez-Dommguez E., Narvaez J., Gonzalez-Perez G., Vargas-Ayala G. et al. Human CD16+ and CD16- monocyte subsets display unique effector properties in inflammatory conditions in vivo. J. Leukocyte Biol. 2011; 90 (6): 1119-31.
- 36 -
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
8. Grage-Griebenow E., FladH.D., ErnstM., Bzowska M., Skrzec-zynska J., Pryjma J. Human MO subsets as defined by expression of cD64 and cD16 differ in phagocytic activity and generation of oxygen intermediates. Immunobiology. 2000; 202 (1): 42-50.
9. Sanchez-Torres C., Garcia-Romo G.S., Cornejo-Cortes M.A., Ri-vas-Carvalho A., Sanchez-Schmitz G. CD16+ and CD16-human blood monocyte subsets differentiate in vitro to dendritic cells
with different abilities to stimulate CD4+ T cells. Int. Immunol. 2001; 13: 1571-81.
10. Pak Cheung Ng, Geng Li, Kit Man Chui, Winnie Chiu Wing Chu, Karen Li, Raymond Pui On Wong, Tai Fai Fok. Quantitative measurement of monocyte HLA-DR expression in the identification of early-onset neonatal infection. Biol. Neonate. 2006; 89 (2): 75-81.
Поступила 21.07.13
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616.438-053.32-073.432-078.33
Л.Л. Панкратьева1, В.Е. Мухин2, Н.В. Чернова3, И.Г. Солдатова2, С.А. Румянцев12,
Н.Н. Володин1, А.г. Румянцев1
вариабельность размера вилочковой железы у недоношенных детей разного гестационного возраста с осложненным течением неонатального периода: ультразвуковые и клиникоиммунологические параллели
Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздрава России , 117997, г Москва, ул. Саморы Машела, д. 1; 2ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 117997, г Москва, ул. Островитянова, д. 1; 3Городская больница № 8 Департамента здравоохранения г. Москвы, 127287, г Москва, 4-й Вятский пер., д. 39
Тимус, являясь центральным органом иммунной системы, в котором осуществляются процессы дифференциров-ки и клональной селекции Т-лимфоцитов, играет важную роль в формировании иммунной системы у детей первых месяцев жизни. Цель. На основании ультразвукового исследования изучить объемную характеристику вилочковой железы у недоношенных детей и установить наличие взаимосвязи полученных данных с количественными и фенотипическими характеристиками Т-лимфоцитов периферической крови и развитием отдельных патологических состояний на 1-м месяце жизни. Материалы и методы. 76 недоношенных новорожденных 25-34 нед гестации в отделении реанимации и интенсивной терапии. Объемная характеристика тимуса оценивалась при помощи ультразвукового метода исследования в возрасте 36 нед постконцептуального возраста и представлена тимическим индексом (ТИ). Забор крови для иммунофенотипирования Т-лимфоцитов проводили в динамике, начиная с пуповинной крови, и далее на 7-8, 14-16-е, 21-23-и сутки и в возрасте 1 мес жизни. Результаты. Объемная характеристика тимуса в возрасте 36 нед скоррегированного постконцептуального возраста может быть крайне вариабельна и не зависит от гестационного возраста и антропометрических данных при рождении. Низкие значения ТИ ассоциированы с большей частотой развития бронхолегочной дисплазии тяжелой степени тяжести и прогрессирующих стадий некротизирующего энтероколита, осложнившихся перфорацией кишечника (р < 0,05). Статистически значимых различий в частоте развития феномена стойкой абсолютной лимфопении на 1-м месяце жизни между группами детей с низкими и высокими значениями ТИ не выявили. Низкие значения ТИ коррелируют с критически низкими показателями как относительного, так и абсолютного количества Т-регуляторных CD4+CD25+Foxp3+-лимфоцитов периферической крови новорожденных (Rs = 0,56; p = 0,001 и Rs = 0,49; p = 0,005 соответственно). Заключение. Дальнейшее изучение процесса формирования адаптивного иммунитета на первых месяцах жизни послужит базой для совершенствования диагностических и превентивных терапевтических стратегий.
Ключевые слова: тимический индекс; недоношенность; экстремально низкая масса тела (ЭНМТ); некротизирующий энтероколит; бронхолегочная дисплазия; CD4+CD25highFoxp3+ Т-регуляторные клетки.
L.L. Pankratyeva1, V.E. Mukhin2, N.V Chernova3, I.G. Soldatova2, S.A. Roumiantsev1,2, N.N. Volodin1, A.G. Roumiantsev1
VARIABILITY IN THYMIC SIZE IN CRITICALLY ILL NEONATES: ULTRASOUND IMAGING, CLINICAL AND IMMUNOLOGICAL PARALLELS
Tederal Research and Clinical Centre of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, 1171981, Moscow, Russian Federation; 2Pirogov’s National Research Medical University, 117997, Moscow, Russian Federation; 3City hospital №8, 127287, Moscow, Russian Federation
The thymus is of extreme importance during the first months of life as it provides the environment for the T-lymphocyte differentiation and maturation. Aim. To assess the variation in size of the thymus in preterm neonates and to identify relations between thymic size, phenotypic characteristics of peripheral blood T-lymphocytes and severity of complications during the first month of life. Patients and methods. We observed 76 preterm neonates (25-34 weeks' gestation) admitted to neonatal intensive care unit. The thymic size was assessed by sonography as a volume estimate, thymic index (Ti), at 36 weeks of postconceptional age. T cells were analyzed on day 1 (cord blood), 7-8, 14-16, 30 by multicolor flow cytometry. Results. A correlation between thymic size and anthropometric measurements and gestational age was not demonstrated. Infants with low Ti values had a significantly higher incidence of progression to severe necrotizing enterocolitis with intestinal perforation and severe bronchopulmonary dysplasia than infants with median and high Ti values (p<0.05). Analyzing abnormal laboratory
- 37 -
