CC BY
42
experimental gastroenterology
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА LEPTOPYRUM FUMARIOIDES (RANUNCULACEAE) НА ХОЛЕРЕЗ У БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ
Николаев С. М., Занданов А. О., Самбуева З. Г., Разуваева Я. Г., Федоров А. В.
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ
Разуваева Янина Геннадьевна E-mail: [email protected]
РЕЗЮМЕ
Проводили исследования фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта Leptopyrum fumarioides (L.) Reichenb. при токсическом гепатите. Установлено, что курсовое введение экстракта Leptopyrum fumarioides в дозе 200 мг/кг при экспериментальном токсическом гепатите у белых крыс сопровождается выраженным гепатопротекторным влиянием, характеризующимся ингибировани-ем нарушений желчеобразовательной и желчевыделительной функции и деструктивных изменений в печени.
Ключевые слова: Leptopyrum fumarioides (L.) Reichen., экстракт, гепатопротектрное действие. SUMMARY
It was established pharmacotherapeutic efficiency of Leptopyrum fumarioides (L.) Reichenb. dry on the toxic hepatitis model. The Leptopyrum fumarioides extract was shown expressed caused of inhibiting of cholerforming and choleretic function of liver and their destructive changes. Keywords: Leptopyrum fumarioides (L.) Reichenb., extract, hepatoprotective activity.
В комплексной фармакотерапии заболеваний органов гепатобилиарной системы, наряду с имеющимся арсеналом лекарственных препаратов — химиотерапевтических, гормональных и других средств, важное место принадлежит растительным лекарственным средствам. В этом плане особый интерес представляют перспективные виды растительного сырья, применяемые в практике тибетской медицины для лечения и профилактики заболеваний печени [8, 9], одним из которых является тонкоплодник дымянковый Ьер^рутыт ^таттйе$ К.е1сЬепЬ. Химический состав данного вида растения мало изучен. Лишь установлено, что трава содержит алкалоиды, сапонины [2, 6], 0,25% аскорбиновой кислоты, цианогенные гликозиды [4, 5, 11]. В тибетской медицине применяется указанное сырье в составе многокомпонентных препаратов при лечении заболеваний гепатобилиарной системы.
Цель настоящего исследования — определение влияния сухого экстракта Ь. /ытатю14е$, полученного экстракцией 40% спиртом этиловым, на хо-леретическую реакцию при токсическом гепатите.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Трава тонкоплодника дымянкового собрана в Селенгинском районе Бурятии в 2007 году. Экспериментальная работа выполнена на 70 белых крысах обоего пола линии с исходной массой тела 170-200 г и на 56 белых беспородных мышах обоего пола с исходной массой тела 20-23 г. Животные находились в стандартных условиях содержания и кормления в виварии (Приказ МЗ № 1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
Токсический гепатит воспроизводили на белых крысах путем подкожного введения 50% масляного раствора четыреххлористого углерода (СС14) из расчета 0.4мл/100 г массы, 1 раз в сутки, в течение четырех дней подряд [3]. Экстракт Ь. /ытапо14е$ в дозе 200 мг/кг (экспериментально — терапевтическая доза) в форме водного раствора вводили
OJ
Таблица 1
сс =с ш ■и" 1 ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ЬЕРТОРУЯиМ РиМАШОЮЕБ НА СКОРОСТЬ СЕКРЕЦИИ ЖЕЛЧИ 1 У БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ
1С сц Условия опыта Скорость секреции желчи в течение 4 часов, мг/мин на 100 г
сс 1 ч 2 ч 3 ч 4 ч
е 1С .о Интактные крысы 5,4±0,3 5,2±0,4 5,2±0,4 5,2±0,4
1С О О 7 -е сутки
Е £ 2 ° Контроль (СС14+Н2О) 3,8±0,3 4,2±0,2 4,1±0,3 3,5±0,2
ш С ГС § Опыт (СС14+тонкоплодник) 4,3±0,2 4,6±0,2 4,9±0.2 4,1±0,1
1 Опыт (СС14+холосас) 5,2±0,2* 4,9±0,4 4,8±0,3 4,6±0,3*
14-е сутки
М Контроль (СС14+Н2О) 4,6±0,1 4,1±0,5 4,6±0,3 4,4±0,4
м Опыт (СС14+тонкоплодник) 4,4±0,2 5,3±0,5 6,0±0,5* 5,0±0,3
г Опыт (СС14+холосас) 4,9±0.4 5,6±0,4* 5,6±0,5 5,4±0,4
21-е сутки
Контроль (СС14+Н2О) 4,4±0,3 5,0±0,1 4.7±0,1 4,6±0,2
Опыт (СС14+тонкоплодник) 4,4±0,1 6,3±0,3* 6,3±0,2* 5,8±0,3*
Опыт (СС14+холосас) 5,4±0,5 5,6±0,4 5,2±0,1* 4,5±0,2
Таблица 2
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ЬЕРТОРУЯиМ РиМАЫОЮЕЗ НА ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО И ОСНОВНЫЕ ИНГРЕДИЕНТЫ ЖЕЛЧИ У БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ
Условия опыта Общее кол-во желчи за 1-4 ч Желчные кислоты Билирубин Холестерин
мг/ 100 г
Интактные крысы 1242±78 8,1±0,5 0,10±0,003 0,11±0,008
7-е сутки
Контроль (СС14+Н2О) 936±51 6,8±0,3 0,07±0,006 0,07±0,004
Опыт (СС14+тонкоплодник) 1074±44* 10,0±0,5* 0,07±0,004 0,09±0,003*
Опыт (СС14+холосас) 1090±76 7,2±0,4 0,06±0,004 0,08±0,007
14-е сутки
Контроль (СС14+Н2О) 1062±32 4,6±0,3 0,08±0,006 0,10±0,007
Опыт (СС14+тонкоплодник) 1332±66* 11,3±0,9* 0,09±0,005 0,13±0,009*
Опыт (СС14+холосас) 1170±71 4,0±0,4 0,09±0,001 0,11±0,003*
21-е сутки
Контроль (СС14+Н2О) 1122±61 5,8±0,3 0,10±0,008 0,09±0,005
Опыт (СС14+тонкоплодник) 1368±45* 7,0±0,5* 0,10±0,005 0,19±0,011*
Опыт (СС14+холосас) 1242±68 6,4±0,1* 0,1±0,007 0,12±0,007*
ОЛ
Примечание к табл. 1и 2. *- различия статистически достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р 0,05.
внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение 10 дней, начиная со второго дня опыта. В предварительных опытах были установлены экспериментально-терапевтические дозы полученного экстракта, соответствующие 150 - 500 мг / кг. В качестве препарата сравнения отдельной группе крыс по аналогичной схеме вводили холосас в объеме 1.0 мл/кг массы (экспериментально-терапевтическая доза). Животным контрольной группы вводили эквиобъ-емное количество воды очищенной по аналогичной схеме. Через 7, 14 и 21 суток от начала введения СС14 оценивали желчеобразовательную и желчевыдели-тельную функцию и структурное состояние печени крыс [3, 7].
В дополнительной серии экспериментов на беспородных белых мышах определяли острую токсичность экстракта сухого Ь. /итатш4е$ при вну-трибрюшинном введении. За общим состоянием и поведением животных наблюдали в течение 14 дней. DL50 определяли по методу Кербера в диапазоне доз с интервалом 250 мг/кг [1].
Значимость различий между указанными параметрами среди опытной и контрольной групп животных оценивали с помощью непараметрического критерия Манна — Уитни. Различия считали существенными при Р<0,05 [10].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При токсическом поражении печени, вызванном СС14, значительные изменения желчевыделитель-ной функции развиваются уже на 7-е сутки опыта. В частности, скорость секреции желчи у крыс снижалась в среднем на 25%, вследствие чего уменьшалось общее количество выделенной желчи. На 14 и 21-е сутки наблюдения скорость секреции желчи замедлялась соответственно на 27 и 23% (табл. 1). Более выраженные изменения выявлены в холатообразовательном процессе (табл. 2). Суммарное содержание желчных кислот в желчи уменьшалось на 24, 46 и 44% соответственно на 7-21-е сутки опыта. Одновременно отмечали уменьшение содержания билирубина в желчи, более выраженное на 7-е сутки наблюдения (на 41%). Наряду с этим, снижалась экскреция холестерина с желчью.
При фармакотерапии экстрактом Ь./итатю14е$ крыс с токсическим гепатитом скорость секреции желчи у животных на 7-е сутки опыта умеренно повышалась, нарастая к 14-м суткам с превышением контроля на 30% (табл. 1). При этом отмечена высокая степень стимуляции синтеза и выделения желчных кислот. Уже на 7-е сутки наблюдения содержание холатов почти в 1,5 раза превышала показатели у крыс контрольной группы, а на 14-е сутки — в 2,5 раза. На фоне введения крысам экстракта Ь./итапо14е$ экскреция холестерина с желчью, начиная с ранних сроков опыта, возрастала, а на 21-е сутки опыта содержание холестерина
в желчи по сравнению с контролем повышалось в 2,0 раза (табл. 2).
При патоморфологическом исследовании печени животных, получавших экстракт Ь. /итапо14е$, на 7-е сутки наблюдения сохранялись явления нарушения микроциркуляции, которые сочетались с дис-комплексацией печеночных балок, явлениями зернистой дистрофии гепатоцитов. В гепатоцитах было отмечено накопление гликогена, хотя в меньшей степени, чем у ин-тактных животных, в то время как у крыс контрольной группы его не обнаружено. На 14-е сутки опыта в печени животных контрольной группы сохранялись выраженные изменения гемодинамики с наличием кровоизлияний, круглоклеточной инфильтрации и мелких очагов некроза ткани. Наблюдали выраженную жировую дистрофию, заполняющую паренхиму органа, главным образом, в центре печеночных долек. У животных, получавших экстракт Ь. /итатю1ие$, в паренхиме органа были отмечены лишь мелкокапельные очажки жировой инфильтрации. Умеренная жировая дистрофия гепатоцитов сопровождалась активной фагоцитарной деятельностью купферовских клеток. В паренхиме печени было обнаружено большое количество гипертрофированных гепатоцитов с большими гиперхромными ядрами, а также увеличение содержания гликогена и активности сукцинатдегидрогеназы в гепатоцитах, что свидетельствует об активации внутриклеточной регенерации. На 21-е сутки опыта в печени животных контрольной группы еще сохранялись явления воспалительного характера: полнокровие, наличие очажков некроза, хотя они были менее распространенными и значительно меньшими по размерам, чем в ранние сроки наблюдения. У большинства животных этой группы очаговая жировая дистрофия сочеталась с мелко — и среднекапельной жировой инфильтрацией. Распределение гликогена в дольках печени было неравномерным. У животных, получавших экстракт Ь. /итапо14е$, отсутствовали очаги некроза, благодаря интенсификации холеретической реакции. У крыс, получавших холосас, в этот срок наблюдений сохранялось полнокровие междольковых сосудов, расширение синусоидов и капилляров, мелкие диапедезные кровоизлияния, а также умеренная жировая инфильтрация паренхимы в области центральной вены.
Установленное фармакотерапевтическое влияние сухого экстракта Ь. ¥итатШйе$ обусловлено содержащимися биологически активными веществами [2, 4, 5], способными стимулировать холеретическую реакцию [8, 11] и тем самым предупреждать развитие вторичных некрозов в печени. При введении крысам с токсическим гепатитом желчегонного препарата — холосаса, также наблюдали выраженный эффект,
Б >
ст
5 о
1_ с
0-Ъ
0£ Щ о
Н]Е
21 а.
1- £ и га
I. Б
га х
га
I-
х ш 2 5 а ш с и
V
т
т
который несколько уступал по данным критериям действию экстракта Ь. ¥итатШйе$, что связано с более богатым спектром биологически активных веществ, наличествующих в полученном экстракте.
При исследовании острой токсичности было экстракта сухого Ь. ¥итатШйе$ установлено, что DL50 указанного экстракта при внутрибрюшиннм введении составляет 2500±176 мг/кг. В группах животных с введением высоких доз данного экстракта наблюдали в первые сутки опыта снижение двигательной активности, сонливость. Гибель мышей наступала при явлениях клонико-тонических судорог и остановки дыхания. При вскрытии погибших животных наблюдали гемодинамические нарушения в легких и печени в виде полнокровия сосудов с явлениями стаза. Полученные результаты позволяют отнести
экстракт Ь. /итап&4е$ к группе практически нетоксических веществ [1].
Таким образом, экстракт тонкоплодника дымян-кового ЬерЩутит ^татшйе$ оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при токсическом гепатите, стимулируя синтез и выделение хола-тов, проявляя свойство истинных холесекретиков. Благоприятное влияние указанного растительного средства на течение токсического гепатита обусловлено наличием биологически активных веществ, стимулирующих холерез, предупреждающих деструкцию гепатитов и повышающих функциональную активность органа. Полученные результаты исследований аргументируют целесообразность его дальнейшего изучения в качестве средства для профилактики и комплексного лечения заболеваний печени.
ЛИТЕРАТУРА
1. Арзамасцев Е. В. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ/Е. В. Арзамасцев, Т. А. Гуськова, И. В. Березовская и др. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — С. 41-69.
2. Блинова К. Ф. Качественное фитохимическое исследование некоторых растений тибетской медицины Забайкалья/К. Ф. Блинова, К. Л. Стуккей // Вопросы фармакогнозии. — 1961. — Вып. 1. —
С. 135 -155.
3. Венгеровский А. И. Методические указания по изучению гепа-тозащитной активности фармакологических веществ/А. И. Венгеровский, А. С. Саратиков // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — С. 683-691.
4. Гаммерман А. Ф. Предварительные химические исследования лекарственного сырья тибетской медицины, собранного Сибирской экспедицией ВИЭМ/А. Ф. Гаммерман, М. Д. Шупинская // Фармация и фармакология. — 1937. — № 3. — С. 20-26.
5. Гаммерман А. Ф. Предварительные химические исследования лекарственного сырья тибетской медицины, собранного Сибирской экспедицией ВИЭМ/А. Ф. Гаммерман, М. Д. Шупинская // Фармация и фармакология. — 1937. — № 4. — С. 20-31.
6. Макаров А. А. Растительные лечебные средства Якутской народной медицины/А. А. Макаров. — Якутск, 1974. — 127 с.
7. Микроскопическая техника: Руководство/Под ред. Д. С. Сар-кисова и Ю. Л. Перова. — М., 1996. — 544 с.
8. Николаев С. М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы/С. М. Николаев. — Новосибирск, 1992. — 257 с.
9. Растения и здоровье/Под ред. С. М. Николаева. Улан — Удэ. 1994. — 167 с.
10. Сергиенко В. И. Математическая статистика в клинических исследованиях/В. И. Сергиенко, И. Б. Бондарева. — М., 2006. — 256 с.
11. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflancen/R. Hegnauer. — Basel. Stuttgart., 1973. — Bd 6. — 378р.
