CC BY
54
УДК 615.322
С.М. Николаев, Б.Г. Бальжиров, З.Г. Самбуева, Я.Г. Разуваева, А.В. Федоров
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ТОНКОПЛОДНИКА ДЫМЯНКОВОГО НА ВНЕШНЕСЕКРЕТОРНУЮ ФУНКЦИЮ ПЕЧЕНИ У БЕЛЫХ КРЫС
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ) Бурятский государственный университет (Улан-Удэ) Иркутский государственный институт усовершенствования врачей (Иркутск)
Установлена желчегонная активность экстракта сухого тонкоплодника дымянкового. Экстракт Leptopyrum. fumarioides (L.) в экспериментально-терапевтической дозе 0,1 г/кг при токсическом гепатите у белых крыс оказывает, выраженное гепатопротекторное действие, характеризующееся нормализацией желчеобразовательной и желчевыделительной функции и деструктивных изменений в печени.
Ключевые слова: тонкоплодник дымянковый, экстракт, желчегонное, гепатопротекторное действие
EFFECT OF EXTRACT OF THE LEPTOPYRUM FUMARIOIDES (L.) ON EXOCRINE LIVER FUNCTION IN WHITE RATS
S.M. Nikolayev, B.G. Balzhirov, Z.G. Sambuyeva, Ya.G. Razuvayeva, A.V. Fedorov
Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude
Buryat State University, Ulan-Ude Irkutsk State Institute of Postgraduate Medical Education, Irkutsk
On the rats discovered choleretic action extracts of the Leptopyrum. fumarioides (L.) Reichenb. The dry extract derived from Leptopyrum. fumarioides in experimental-therapeutic dose 0.2 g/kghas shown pharmacothera-peutic efficiency in CCI4-hepatitis induced, to white rats.
Key words: Leptopyrum fumarioides L., extract, choleretic, hepatoprotective action
Целью настоящей работы явилось определение: а) желчегонной активности экстрактов сухих тонкоплодника дымянкового, полученных водной и водно-спиртовой экстракцией; б) гепатозащитного действия экстракта тонкоплодника, полученного экстракцией 40% этиловым спиртом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Указанный вид сырья собран в Селенгинском районе Бурятии в 2007 году. Эксперименты проведены зимой 2007 — 2008 гг. Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола с массой 170 — 200 г [9]. Для определения желчегонной активности экстракты в виде водного раствора вводили однократно в двенадцатиперстную кишку наркотизированных крыс (0,8 мл 1% раствора барбамила внутрибрюшинно). Желчь получали с помощью канюли, вставленной в общий желчный проток в течение 5 часов через каждый час. Интенсивность секреции и биохимический состав желчи определяли со 2-го часа опыта. Токсический гепатит воспроизводили подкожным введением крысам 50% (v/v) масляного раствора четыреххлористого углерода (CCl4) из расчета 0,4 мл на 100 г массы, 1 раз в сутки, в течение четырех дней подряд. Экстракт тонкоплодника в дозе 0,1 г/кг (экспериментально-терапевтическая доза) в форме водного раствора вводили внутрижелудочно, 1 раз в сутки в течение 10 дней, начиная со второго дня начала опыта. Животным контрольной группы вводили эквиобъемное количество воды очищенной по аналогичной схеме. Через 7, 14 и 21 день от начала
ВВЕДЕНИЕ
Одним из направлений медицинской науки и фармации является использование местного растительного сырья для получения лекарственных средств. Растительные метаболиты по своей сущности близки к метаболитам человеческого организма человека, и главный эффект от применения растительных средств заключается в регулировании нарушенных обменных процессов, а также желчеобразования и желчевыделения — составной части внешнесекреторной функции печени, угнетением которых сопровождаются многие заболевания. В этой связи, изыскание и расширение номенклатуры желчегонных и гепатозащитных лекарственных средств за счет новых и малоизученных до настоящего времени растительных видов сырья, произрастающих в регионах Сибири, является важной задачей. В этом плане особый интерес представляют перспективные виды растительного сырья, применяемые в практике тибетской медицины для лечения и профилактики заболеваний печени [6, 7 8], одним из которых является тонкоплодник дымянковый — Leptopyrum fumarioides ^.) Reichenb. из семейства Ranunculaceae. Химический состав данного вида растения мало изучен. Лишь установлено, что трава содержит алкалоиды, сапонины [1, 5], 0,25 % аскорбиновой кислоты [2] цианогенные гликози-ды [3, 10], фенольные соединения. В тибетской медицине указанное сырье применяется в составе многокомпонентных препаратов при лечении заболеваний гепатобилиарной системы.
введения СС14 оценивали желчеобразовательную и желчевыделительную функцию и структурное состояние печени крыс [9].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В результате проведенных исследований установлено, что экстракты тонкоплодника дымянкового обладают выраженной желчегонной активностью (табл. 1, 2).
Так, при введении крысам экстракта водного извлечения в дозе 0,2 г/кг массы скорость секреции желчи возрастала на 23 и 30 % по сравнению с таковой у крыс контрольной группы на 3-й и 4-й часы опыта. Общее количество выделенной желчи повышалось на 22 %. Суммарное (за 2 — 5 ч опыта) содержание желчных кислот в желчи повышалось по сравнению с таковым у крыс контрольной группы в 1,5 раза. Холеретическая реакция у крыс
сохранялась в течение всего периода наблюдения (5 часов). При увеличении дозы до 0,5 г/кг скорость секреции желчи возрастала до 41 % с повышением общего количества выделенной желчи на 29 %, а холатов в желчи — на 36 %. Кроме того, экстракт способствовал экскреции холестерина с желчью.
При введении экстракта тонкоплодника водноспиртового извлечения интенсивность секреции желчи еще более возрастала (табл. 3, 4). В частности, при введении данного экстракта ускорялась секреция желчи на 42, 33, 24 и 22 % соответственно на 2 — 5-й ч опыта. При увеличении дозы до 0,3 г/кг данная динамика секреции желчи сохранялась на аналогичном уровне. Общее количество выделенной желчи превышало таковое у крыс контрольной группы на 31 и 28 %. Указанный экстракт оказывал стимулирующее влияние на синтез и выделение желчных кислот, суммарное содержание которых
Таблица 1
Влияние экстракта тонкоплодника дымянкового водного извлечения на скорость секреции желчи у белых крыс
Группы животных Скорость секреции желчи в течение 5 часов, мг/ мин на 100 г
1 ч 2 ч 3 ч 4 ч 5 ч
Контроль (H20), n = 6 5,4 ± 0,4 4,6 ± 0,4 4,0 ± 0,4 3,7 ± 0,3 3,8 ± 0,4
Экстракт, 0,2 г/кг, n = 6 4,4 ± 0,3 5,4 ± 0,1 4,9 ± 0,1 4,8 ± 0,3* 4,6 ± 0,3
Экстракт, 0,5 г/кг, n = 6 5,0 ± 0,2 6,5 ± 0,5* 5,5 ± 0,3* 4,7 ± 0,1* 4,0 ± 0,2
Примечание: * (здесь и далее) - различия значимы по сравнению с контролем при Р < 0,05.
Таблица 2
Влияние экстракта тонкоплодника дымянкового водного извлечения на общее количество и биохимический
состав желчи у белых крыс
Группы животных Общее кол-во желчи за 2-5 ч Желчные кислоты Билирубин Холестерин
мг/100 г
Контроль (Н20), n = 6 966 ± 40 4,38 0,150 0,060
Экстракт, 0,2 г/кг, n = 6 1182±51* 6,63 0,158 0,073
Экстракт, 0,5 г/кг, n = 6 1242±42* 5,97 0,169 0,074
Таблица 3
Влияние экстракта тонкоплодника дымянкового водно-спиртового извлечения на скорость секреции желчи
у белых крыс
Группы животных Скорость секреции желчи в течение 5 часов, мг/ мин на 100 г
1 ч 2 ч 3 ч 4 ч 5 ч
Контроль (Н20), n = 6 4,2 ± 0,2 4,3 ± 0,2 3,9 ± 0,2 3,7 ± 0,4 3,6 ± 0,4
Экстракт, 0,2 г/кг, n = 6 5,3 ± 0,3 6,1 ± 0,4* 5,2 ± 0,3* 4,6 ± 0,2 4,4 ± 0,3
Экстракт, 0,5 г/кг, n = 6 4,2 ± 0,1 6,3 ± 0,5* 5,0 ± 0,1* 4,6 ± 0,2* 3,9 ± 0,1
Таблица 4
Влияние экстракта тонкоплодника дымянкового вводно-спиртового извлечения на общее количество
и биохимический состав желчи у белых крыс
Группы животных Общее кол-во желчи за 2-5 ч Желчные кислоты Билирубин Холестерин
мг/100 г
Контроль (Н20), n = 6 930 ± 38 4,57 0,142 0,058
Экстракт, 0,2 г/кг, n = 6 1218 ± 80* 5,84 0,179 0,067
Экстракт, 0,5 г/кг, n = 6 1188 ± 57* 6,56 0,159 0,069
в желчи повышалось на 28 и 43,5 % соответственно. Экстракт также способствовал экскреции билирубина и холестерина с желчью.
При токсическом поражении печени у белых крыс, вызванном СС14, значительные изменения желчевыделительной функции развиваются уже на 7-й день опыта. В частности, скорость секреции желчи у крыс снижалась в среднем на 25 %, вследствие чего уменьшалось общее количество выделенной желчи. На 14 и 21-й дни наблюдения скорость секреции желчи замедлялась соответственно на 27 и 23 % (табл. 5). Более выраженные изменения выявлены в холатообразовательном процессе (табл. 6). Суммарное содержание желчных кислот в желчи уменьшалось на 24, 46 и 44 % соответственно на 7 — 21-й дни опыта. Одновременно отмечалось уменьшение содержания билирубина в желчи, более выраженное на 7-й день опыта. На этом фоне суммарное содержание билирубина уменьшалось на 41 % по сравнению с таковым у
интактных животных. Кроме того, снижалась экскреция холестерина с желчью, особенно первые два срока наблюдения.
При фармакотерапии экстрактом тонкоплод-ника вводно-спиртового извлечения крыс с токсическим гепатитом скорость секреции желчи у животных на 7-й день опыта умеренно повышалась, нарастая к І4-му дню с превышением контроля на 30 % (табл. 5). Наряду с этим, отмечена высокая степень стимуляции синтеза и выделения желчных кислот. Уже на 7 -й день наблюдения содержание холатов почти в І,5 раза превышало таковое у крыс контрольной группы, а на І4-й день — в 2,5 раза. Экстракт тонкоплодника также способствовал экскреции холестерина с желчью, начиная с ранних сроков опыта, а на 2І-й день опыта содержание холестерина в желчи по сравнению с контролем возрастало 2 раза (табл. 6).
При патоморфологическом исследовании печени животных, получавших указанный экстракт
Таблица 5
Влияние экстракта тонкоплодника дымянкового на скорость секреции желчи у белых крыс при токсическом
гепатите
Условия опыта Скорость секреции желчи в течение 4 часов, мг/мин на 100 г
1 ч 2 ч 3 ч 4 ч
Интактные (Н20) , n = 6 5,4 ± 0,3 5,2 ± 0,4 5,2 ± 0,4 5,2 ± 0,4
7-й день
Контроль (ССЦ+Н2О), n = 6 3,8 ± 0,3 4,2 ± 0,2 4,1 ± 0,3 3,5 ± 0,2
Опыт (СС14+тонкоплодник), n = 6 4,3 ± 0,2 4,6 ± 0,2 4,9 ± 0,2 4,1 ± 0,1
14-й день
Контроль (ССЦ+Н2О), n = 6 4,6 ± 0,1 4,1 ± 0,5 4,6 ± 0,3 4,4 ± 0,4
Опыт (СС14+тонкоплодник), n = 6 4,4 ± 0.2 5,3 ± 0,5 6,0 ± 0,5* 5,0 ± 0,3
21-й день
Контроль (ССЦ+Н2О), n = 6 4,4 ± 0,3 5,0 ± 0,1 4,7 ± 0,1 4,6 ± 0,2
Опыт (СС14+тонкоплодник), n = 6 4,4 ± 0,1 6,3 ± 0,3* 6,3 ± 0,2* 5,8 ± 0,3*
Таблица в
Влияние экстракта тонкоплодника дымянкового на общее количество и основные ингредиенты желчи
у белых крыс при токсическом гепатите
Условия опыта Общее кол-во желчи за 1-4 ч Желчные кислоты Билирубин Холестерин
мг/ 100 г
7-е сутки
Интактные (Н20), n = 6 1242 ± 78 8,08 0,096 0,106
Контроль (CCl4+H20) , n = 6 936 ± 51 6,82 0,068 0,065
Опыт (СС14+тонкоплодник), n = 6 1074±44* 10,00 0,070 0,090
14-е сутки
Контроль (ССЦ+Н2О), n = 6 1062 ± 32 4,56 0,084 0,096
Опыт (СС14+тонкоплодник), n = 6 1332±66* 11,34 0,085 0,129
21-е сутки
Контроль (ССЦ+Н2О), n = 6 1122±61 5,79 0,098 0,094
Опыт (СС14+тонкоплодник), n = 6 1368±45* 7,01 0,098 0,190
тонкоплодника, на 7-й день наблюдения обнаруживали явления нарушения микроциркуляции, которые сочетались с дискомплексацией печеночных балок, явлениями зернистой дистрофии гепатоцитов. В гепатоцитах отмечено накопление гликогена, в то время как у крыс контрольной группы их не обнаружено. На 14-й день опыта в печени животных контрольной группы сохранялись выраженные изменения гемодинамики с проявлениями кровоизлияний, круглоклеточной инфильтрации, а также наблюдали мелкие очаги некроза ткани. Отмечалась выраженная жировая дистрофия, заполняющая паренхиму органа, главным образом в центре печеночных долек. У животных, получавших экстракт тонкоплодника, умеренная жировая дистрофия гепатоцитов сопровождалась активной фагоцитарной деятельностью купферовских клеток. Отмечены лишь мелкокапельные очажки жировой инфильтрации. В гепатоцитах отчетливо заметно увеличение содержания гликогена. В паренхиме печени обнаружено большое количество увеличенных гепатоцитов с большими гиперхромными ядрами, что свидетельствует об активации внутриклеточной регенерации. На 21-й день опыта в печени животных контрольной группы еще сохранялись явления воспалительного характера: полнокровие, наличие очажков некроза, хотя они были менее распространенными и значительно меньшими по размерам, чем в ранние сроки наблюдения.
У большинства животных этой группы очаговая жировая дистрофия сочеталась с мелко- и среднекапельной жировой инфильтрацией. Распределение гликогена в дольках печени было неравномерным. У животных, получавших экстракт тонкоплодника, отсутствовали очаги некроза, благодаря, очевидно, интенсификации холеретической реакции под действием экстракта тонкоплодника.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, экстракт тонкоплодника ды-мянкового оказывает выраженное желчегонное и гепатозащитное влияние, а также, стимулируя синтез и выделение холатов, проявляет свойство истинных холесекретиков. Курсовое лечебнопрофилактическое применение экстракта тонко-плодника в экспериментально-терапевтической дозе при токсическом гепатите ограничивает расстройства желчеобразования и желчевыделения,
стимулирует синтез желчных кислот, экскрецию холестерина, способствует ранней инволюции деструктивных нарушений в печени. Благоприятное влияние указанного растительного средства на течение токсического гепатита обусловлено содержанием в нем биологически активных веществ, стимулирующих холеретическую реакцию [1, 6] и тем самым предупреждающих развитие вторичных некрозов в печени [6]. Полученные результаты исследований аргументируют его применение в комплексном лечении и профилактике заболеваний печени в клинической медицине, особенно в восстановительном периоде.
ЛИТЕРАТУРА
1. Блинова К.Ф., Стуккей К.Л. Качественное фитохимическое исследование некоторых растений тибетской медицины Забайкалья // Вопросы фармакогнозии. — 1961. — Вып. 1. — С. 135 — 155.
2. Ворошилов В.Н. Поиски нового растительного сырья // Труды ВИЛР. — 1941. — Вып 6. — С. 125-136.
3. Г аммерман А.Ф., Шупинская М.Д. Предварительные химические исследования лекарственного сырья тибетской медицины, собранного Сибирской экспедицией ВИЭМ // Фармация и фармакология. - 1937. - № 3. - С. 20-26.
4. Данзин Пунцог. «Кунсал - нанзад» - тибетский медицинский трактат по приготовлению лекарственных эликсиров; пер. с тибет. Д.Б. Даши-ева. - Улан-Удэ, 1991. - Ч. 1 -2. - 346 с.
5. Макаров А.А. Растительные лечебные средства Якутской народной медицины. - Якутск, 1974. - 197 с.
6. Николаев С.М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы. - Новосибирск, 1992. - 155 с.
7. Николаев С.М., Назаров-Рыгдылон В.Э., Ба-зарон Э.Г. Лекарственные растения и особенности фармакотерапии в тибетской медицине // Фармация. - 1984. - № 6. - С. 44- 48.
8. Растения и здоровье. - Улан-Удэ, 1994. -167 с.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - 832 с.
10. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflan-cen. - Basel; Stuttgart, 1973. - Bd. 6. - 882 s.
Сведения об авторах
Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор, заведующий Отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012) 43-37-13; e-mail: smnikolaev@ mail.ru).
Бальжиров Баир Гвибалович - к.м.н., с.н.с. лаборатории экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012) 43-37-13).
Самбуева Зинаида Гамбожаповна - к.б.н., с.н.с. лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012) 43-37-13).
Разуваева Янина Геннадьевна - к.б.н., научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012) 43-37-13). ФедоровА.В. - аспирант кафедры фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета (670000, г. Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а, Бурятский государственный университет).
