CC BY
17
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
АМ (р = 0,01). При моделировании очага патологической активности в стриатуме, характеризующегося высокой плотностью дофаминовых рецепторов, увеличился оборот фосфолипидов (р = 0,001) и активность механизмов врожденного иммунитета, о чем свидетельствовало повышение фагоцитарного индекса (р = 0,006) и фагоцитарного числа (р = 0,001). При введении ПК-Мерц, стимулирующего высвобождение дофамина и блокирующего NMDA-рецепторы глутамата, увеличилась продукция фосфолипидов (р = 0,001) с низкими поверхностно-активными свойствами (р = 0,001), как и при активации стриатума, но способность АМ к фагоцитозу снизилась (р = 0,001) по сравнению с воздействием на стриатум, а фагоцитарное число соответствовало контролю.
Заключение. При дисбалансе дофаминергической нейротрансмиссии сопряженность изменения состава фосфолипидов сурфактанта и фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов определяет эффективность механизмов врожденного иммунитета легких и органной резистентности.
ВЛИЯНИЕ АНГИОТЕНЗИНА-М НА ЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МНОЖЕСТВЕННО МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЛИПОПРОТЕИНОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ У КРЫС В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Толпыго С.М.1, Шойбонов Б.Б.1 2, Лагутина Л.В.1
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина», Москва, Россия
2 ФГБУ«Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Общепризнано, что эндогенные множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ммЛНП) и ангиотензин-П (А-11) — основной эффектор-ный пептид ренин-ангиотензиновой системы — играют ведущую роль в развитии сосудистой эндотелиальной дисфункции и запуске иммунных процессов при атеросклерозе. Показано также, что ммЛНП оказывают ци-тотоксическое действие на эндотелий сосудов, вызывая воспаление и фиброз. Ранее нами разработан способ определения литической активности ммЛНП и иммунных комплексов, содержащих ммЛНП (ИК-ммЛНП), позволяющий определить патогенность, т.е. атерогенность, данных соединений. Определение литической активности основано на наличии лизофосфатидилхолина и фос-фолипазы А2 в составе ммЛНП, которые вызывают лизис собственных эритроцитов.
Эксперименты проведены на 40 крысах-самцах популяции ""Маг (по 10 особей в группе) с массой тела 320350 г. Животным однократно вводили: 1 группа — конъюгат А-11 с ммЛНП (в дозе 300 мкг/кг по А-11 и 200 мкг/кг по носителю в 0,5 мл физиологического раствора); 2 группа — белок-носитель — ммЛНП (в дозе 200 мкг/кг в 0,5 мл физиологического раствора); 3 группа — смесь А-11, ммЛНП и физиологического раствора; 4 группа — 0,5 мл физиологического раствора. Конъюгирование А-11 и ммЛНП осуществляли карбодиимидным методом, при этом 1 молекула ммЛНП связывалась с 10-12 молекулами А-11. Использовали естественно модифицированные окислением ЛНП, выделенные из сыворотки крови больных атеросклерозом с применением разработанного нами метода. Через 5-6 месяцев после однократного введения веществ у животных
1-4 групп в сыворотке крови определяли содержание эндогенных ммЛНП, ИК-ммЛНП, а также оценивали их литическую активность. Тест литической активности проводили в 96-луночных плоскодонных иммунологических планшетах по 3 повтора. Сыворотки крови крыс обрабатывали 20% раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка: ПВП (1:0,84), инкубации в течение 10 мин при комнатной температуре. Агрегаты ммЛНП осаждали центрифугированием, тщательно декантировали и осадок ммЛНП растворяли в буфере без ПВП. Вначале по 10 мкл (х 3) ммЛНП или ИК-ммЛНП вносили в лунки, потом добавляли 60 мкл (х 3) буфера VBS2+ и 30 мкл (х 3) суспензии стандартизованных в этом же буфере эритроцитов барана. Параллельно ставили контроли: 3 контроля на полный лизис (30 мкл суспензии аутологичных эритроцитов + 70 мкл Н2О); 3 контроля на спонтанный лизис эритроцитов (30 мкл аутологичных эритроцитов + 70 мкл буфера VBS2+). Тщательно перемешивали и сразу измеряли оптическую плотность на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 620 нм (бланк устанавливали против воздуха). После измерения планшеты герметично заклеивали пленкой и оставляли на 48 часов при комнатной температуре, затем планшету тщательно перемешивали и измеряли оптическую плотность при тех же условиях, по калибровочному графику определяли степень лизиса и при лизисе более 10% констатировали повышенную литическую активность ммЛНП или ИК-ммЛНП.
Получены следующие данные об атерогенности ммЛНП. В 1-ой группе (комплекс ммЛНП с А-11) и 3-ей группе (смесь ммЛНП с А-11) литическая активность повышена у 70% крыс (у 7 из 10 животных в группе). Во 2 группе (ммЛНП) также наблюдается повышение литической активности в 50% случаев. В 4-ой группе (введение физиологического раствора) литическая активность повышается только у 20% животных. Таким образом, даже после однократного введения комплекса А-11 с ммЛНП, ммЛНП, смеси А-11 и ммЛНП через 5-6 месяцев их эндогенные ммЛНП в сыворотке крови характеризуются повышенной патогенностью (атеро-генностью).
При оценке литической активности ИК-ммЛНП обнаружено, что в 1-ой группе (комплекс ммЛНП с А-11) у 40% крыс ИК-ммЛНП утрачивают литическую активность, в 10% — даже увеличивают ее (с 21% для ммЛНП до 30% в составе ИК-ммЛНП). Показано, что у всех животных
2-ой (ммЛНП) и 3-ей (смесь ммЛНП с А-11) групп патогенность ИК-ммЛНП полностью отсутствует. У части (20%) крыс 4-ой группы (физиологический раствор) литическая активность ИК-ммЛНП снижается (с 30% для ммЛНП до 13% в составе ИК-ммЛНП), у остальных контрольных животных не изменяется. Полученные данные свидетельствуют о протективной роли ИК-ммЛНП при развитии аутоиммунного ответа на ммЛНП в организме и функциональной гетерогенности образующихся при этом аутоантител. А-11, по-видимому, за счет своей выраженной прооксидантной и провоспалительной активности обуславливает дополнительную модификацию ммЛНП, увеличивая тем самым их патогенность и про-грессирование атеросклеротического процесса.
