CC BY
15
HidП¡К ВДНЗУ «Украгнсъка медична сгпомагпологгчна академ1я»
Summary
ANTIDEPRESSANT ACTIVITY PRODUCED BY 2-OXOINDOLIN-3- GLYOXYLIC ACID DERIVATIVES IN MODELS OF CLONIDINE-INDUCED DEPRESSION Sydorenko A.G., Lutsenko R.V.
Key words: derivatives, 2-oxoindolin-3-glyoxylic acid, clonidine-induced depression.
This research was aimed to study the influence of 2-oxoindolin-3-glyoxylic acid derivatives in models of clonidine-induced depression in mice. Under the observation there were 50 white pubescent male mice. The derivatives conventionally designated as 18 and E-38 were administered in a dose of 12 mg/gr of body weight in modeled clonidine-induced depression. In 1.24 h after the event we registered changes of psychic and behavioral reactions in the "open field" test which lasted 5 min. We focused on the following parameters as the latent period of the first relocation (sec.), the number of entries to the centre, the number of square crossed, the number of vertical positions, the parameter of vegetative balance including the number of grooming behavior acts and dejections. It has been established preventive introduction of 2-oxoindolin-3-glyoxylic under conventional signs as 18 and E-38 in a dose of 12 mg/gr of body weight decreases clonidine-induced depression, i.e. increases locomotor activity and exploratory behavior of the animals. The substance designated as E-38 is found out to be more effective.
УДК 611.21:616-07 Совгиря С. М.
ВИВЧЕННЯ СТАНУ ПРОЛ1ФЕРАТИВНИХ ПРОЦЕС1В В КЛ1ТИНАХ СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ КЛИНОПОД1БНОТ ПАЗУХИ У ЛЮДЕЙ ЗР1ЛОГО В1КУ ЗА ДОПОМОГОЮ 1МУНОГ1СТОХ1М1ЧНОГО МАРКЕРА К1-67
Вищий державний навчальний заклад Укра'ни «Украшська медична стоматолопчна акаде1^я» м. Полтава
В даному iмуногiстохiмiчному дослiдженнi матерiалом вивчення була слизова оболонка клинопо-дiбнdi пазухи людей зршого вту. Метою цiëi роботи е виявлення явищ пролiферацii в клтинах псевдобагатошарового вшчастого цилтдричного еттелт за допомогою iмуногiстохiмiчного маркера Ш-67. Встановлено, що медiальна, латеральна i передня сттки, як м^тять велику кшь-тсть високодиференцшованих клiтин, характеризуются достатньо активними процесами мтозу. В той час, як на заднш сттцг, в зонах росту, даний маркер спостеркаеться тшьки в пятинах, розташованих на базальнш мембран (коротк i довгi вставт клтини). На нашу думку, це тдтверджуе дан лiтератури, що вставн клтини е клтинами-попередниками мтро-ворсинчастих, а потiм i вшчастих та келихоподiбних кпятин. Але останн клтини тдтри-мують свою тльтсть i за рахунок власного мтозу.
Ключов1 слова: псевдобагатошаровий вшчастий цил1ндричний еглтелш, гомеостаз, прол1ферац1я, маркер К1-67.
Дана робота е фрагментом науково''' теми «Морфолопя судинно-нервових взаемовщношень оргаыв голови та ши''' людини в норм1 та глд д1ею зовышжх чинниив у вдовому аспект!. Створення та модиф1кац1я юнуючих х1рурпчних шовних матер1ал1в I екс-периментально-морфолопчне обфунтування 'х використання в кл1нЩ1», № держ.реестрацп 0107и001657.
телш (коротких i довгих вставних, мковорсинча-стих, келихоподiбних та вшчастих).
Об'ект i методи дослщження Об'ектом дослщження дано' роботи була слизова оболонка клиноподiбноl' пазухи людини, забiр яко' проводився на трупному матерiалi людей, померлих вщ причин не пов'язаних з ЛОР-патологiею. Забiр слизово' оболонки кли-ноподiбноl пазухи вщбувався в умовах примн щення судово-медичного моргу Бюро судово-медично' експертизи Управлiння Охорони Здо-ров'я Полтавсько' обласно' державно' адмшют-рацп та патанатомiчному вiддiленнi ПОКЛ.
У сво'й роботi ми використовували вкову пе-рiодизацiю, яка була прийнята Мiжнародним симпозiумом по вiковiй перюдизаци у Москвi в 1965 роцк Отриманi данi занесенi в таблицю.
Вступ
Системы уявлення про гомеостаз все ще ви-кликають вагання у науковому свт. Багато рош вони дискутуються, уточнюються. В оргашзацп живо' природи ( в т.ч. i людському органiзмi) ми маемо справу з пiрамiдою гомеостатичних бю-систем, якi постiйно взаемодiють мiж собою. В основi ^еТ шрамщи знаходиться жива клiтина. Питання пщтримання кiлькiсного балансу клiтин в кожнш окремiй тканинi вивченнi недостатньо [1,3,6,7]. Це стосуеться i псевдобагатошарового вшчастого цилтдричного еттелш. Тому ми провели iмуногiстохiмiчне дослщження з викорис-танням маркеру Ю-67 слизово' оболонки клино-подiбноl пазухи людей зртого вiку.
Мета роботи Вивчення явищ пролiферацil в клiтинах псевдобагатошарового вшчастого цилтдричного еш-
Актуальт проблеми сучасно! медицини
Таблиця
КЛьксний розподл об'ект'в досл'дження Bid cmami та вку
Вкс^ групи В|к Ктькють об'ек"пв:
чоловiки жшки Всього
Перший перюд зртого вку 22-35 роюв у чоловiкiв, 21-35 рокiв у жшок 5 1 6
Другий перiод зртого вку 36-60 рокiв у чоловшв, 36-55 рокiв у жшок 19 5 24
Всього 24 6 30
Для отримання слизовоТ оболонки ми вико-ристовували технику розтину клиноподiбноТ пазухи, запропоновану Абрикосовим А.И. (1948). Пюля цього за допомогою шприца на 1-2 хв. вводили у пазуху 2 мл 10% розчин формалшу для фксацп слизовоТ оболонки i виконували за-бiр тканини з передньоТ, задньоТ, медiальноТ та латеральноТ стшок правоТ i лiвоТ клиноподiбних пазух. В подальшому тканини вмiщували в па-рафiн за загальновiдомою схемою.
Для проведення iмуногiстохiмiчного дослн дження використовували парафiновi блоки слизовоТ оболонки клиноподiбноТ пазухи людини. Отримували зрiзи за допомогою мiкротому зi станцieю прийому зрiзiв (Microm HM-340), що дозволило готувати сершш зрiзи. В нашому дослн джен зрiзи товщиною 4-6 мкм наносили на спе-цiальнi адгезивнi предметы стекла SuperFrost Plus, по™ депараф^зовували вiдповiдно до прийнятих стандартiв. В робот в якостi первин-них використовувалися моноклональн антитiла до Ki-67 - маркера пролiферацiТ [8,9,10,11]. Ми використовували шкубацш зрiзiв з первинними антиттами у вологих камерах при температурi 23 - 250С на протязi 30 хвилин. Вториннi антитн ла, що мiстили велику ктькють молекул перок-сидази хрону, наносили на зрiзи та iнкубували у вологих камерах протягом 30 хвилин з проми-ванням у ТРИС-буферному розчин мiж кожним етапом протягом 10 хвилин. 1дентифка^я реак-цп проводилась завдяки нанесенню хромогену (DAB (Lab Vision)) пщ контролем мiкроскопа протягом вiд 20 секунд до 3 хвилин, з проявом у ви-глядi темно-коричневого забарвлення ядер спе-цифiчних структур [2,4,5].
Для диференцшвання структур тканин зрiзи додатково забарвлювали гематоксилiном Маера протягом 1-3 хвилин. Наступна депдрата^я i включення у бальзам здiйснювалися згщно роз-повсюдженим методикам.
Мiкроскопiю проводили за допомогою свп"ло-вого мiкроскопа Leica DMLS з використанням об'ективiв х10, х20, х40, х100.
Результати дослвджень та ix обговорення
Нами проведено дослщження пролiфератив-ноТ здатност клiтин псевдобагатошарового вш-частого цилшдричного епiтелiю слизовоТ оболонки клиноподiбноТ пазухи у людей зрiлого вку. В
наших попереднiх роботах було встановлено, що слизова оболонка кожноТ стшки клиноподiб-ноТ пазухи мае певн цитологiчнi властивостi. Так медiальна i латеральна стiнки мiстять велику кь лькiсть вiйчастих клiтин, в переднш стiнцi пере-важають келихоподiбнi клiтини на рiзних фазах секрецп, а задня стiнка характеризуеться наяв-нiстю зон росту.
В медiальнiй i латеральнiй стiнках клиноподн бноТ пазухи у осiб зрiлого вку спостерiгаеться певна локалiзацiя маркеру Ю-67. Так, короткi та довгi вставн клiтини, якi локалiзуються на база-льнiй мембранi, не мають або мають слабо ви-ражену експресш до маркера Кi-67, в той час як ядра мiкроворсинчатих i вiйчастих клiтин штен-сивно експресують iмуногiстохiмiчний маркер №67. В пщслизовому шарi ендотелiальнi клiтини мiкросудин мають посилену експресiю Кi-67, що свщчить про Тх здатнiсть до пролiферацiТ (рис.1).
Рис. 1. Псевдобагатошаровий в1йчастий цил1ндричний еп-тел1й з переважним вмстом в1йчастих штин. В1йчаст1 кл1тин1. 2. Мкроворсинчат/' клтини. 3. Вставш кл1тини. 4. Базальна мембрана. 5. Ендотел1й мкросудин. Забарвлення К-67. Збльшення 20*10.
В псевдобагатошаровому вшчастому цилшд-ричному ештели з перевагою келихоподiбних кл^ин у оаб зртого вiку вiдмiчаеться висока експреая до маркера пролiферацiТ Кн67 як в мь кроворсинчатих, так i частково в келихоподiбних кл^инах. В той час, як вставш кл^ини мають лише поодиноку експресш даного iмуногiстохi-мiчного маркера (рис.2).
В1СНПК ВДНЗУ «Украгнсъка медична сгпомагпологгчна академ1я»
Рис.2. Псевдобагатошаровий eiü4acmuü цилiндричний eni-тeлiй з переважним розташуванням кeлихоподiбних клi-тин. Слабка експреая маркера Ki-67 в вставних клтинах. Забарвлення Ki-67. Збльшення 20*10.
ними пролiферативними вщмшностями. Так, в переднш, медiальнiй i латеральнш стшках, що складаються з високо диференцшованих кл^ин (вшчастих, келихоподiбних, мiкроворсинчастих), у людей зртого вiку достатньо активно вщбува-ються явища пролiферацiТ вищеназваних кттин. В зонах росту маркер Ki-67 спостер^аеться пе-реважно в коротких i довгих вставних клiтинах, що пщтверджуе лiтературнi данi про Тх причет-нiсть до системи HLA.
Перспективи подальших розробок у даному напрямку полягають у проведенi iмуногiстохiмiч-них дослiджень псевдобагатошарового вшчасто-го цилшдричного епiтелiю слизовоТ оболонки клиноподiбноТ пазухи у людей рiзного вку для виявлення вiкових змiн в здатност клiтин до пролiферацiТ.
Л^ература
1. Almaldi I. Induction of HLA class // genes by IFN-is transcriptional and requires a trans-action protein / I. Almaldi, W. Reith, C. Berte [et al.] // J. Immunol. - 1989. - V.142. - P.999-1004.
2. Bonhomme G. Z'histologie de la muquese des sinus / G. Bonhomme, Z. Gesp // Rev. laryngol. - 1958. - №5. - P.889-901.
3. Tamboli P. Comparative analysis of the nuclear proliferative index (Ki-67) in benign prostate, prostatic intraepithelial neoplasia, and prostatic carcinoma / P. Tamboli, M.B. Amin, D.S. Schultz [et al.] // Mod. Pathol. - 1996. - V.9, №10. - P.1015-1019.
4. Duchrow M. Cell proliferation-associated nuclear antigen defined by antibody Ki-67: a new kind of cell cycle-maintaining proteins / M. Duchrow, C. Schlter [et al.] // Arch. Immunol. ther. Exp. (Warsz). -1995. - V.43, №2. - P.117-121.
5. Duchorow M. Molecular characterization of the gene locus of the human cell proliferation-associated nuclear protein defined by monoclonal antibody Ki-67 / M. Duchorow, C. Schluter, C. Wohlenberg ]et al.] // Cell Prolif. - 1996. - V.29, №1. - P.1-12.
6. Gerdes J. Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation-associated nuclear antigen that is defined by monoclonal antibody Ki-67 / J. Gerdes, L. Li, C. Schlueter [et al.] // Am. J. Pathol. - 1991. - V.138. - P.867-873.
7. Gerlach C. Ki-67 expression during rat liver regeneration after partial heparectomy / C. Gerlach, D.Y. Sakkab, T. Scholzen [et al.] // Hepatology. - 1997. - V.26, №3. - P.573-578.
8. Gerlach C. Ki-67 immunoexpression is a robust marker of proliferative cells in the rat / C. Gerlach, M. Golding, L. Larue [et al.] // Lab. Invest. - 1997. - V.77, №6. - P.697-698.
9. Key G. New antiserum against Ki-67 antigen suitable for double immonostaining of paraffin wax sections / G. Key, J.L. Petersen, M.H. Becker [et al.]. // J. Clin. Pathol. - 1993. - V.46, №12. -P.1080-1084.
Mc Cormick D. Detection of the Ki-67 antigen in fixed and wax-embedded sections with the monoclonal antibody MIB1 / D. Mc Cormick, H. Chong, C. Hobbs [et al.] // Hystopathology. - 1993.-V.22, №4. - P.355-360.
Moll R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells / R. Moll, W.W. Franke, D.L. Schiller [et al.] // Cell. - 1982. - V.31, №1. - P.11-24.
10.
11.
Рис.3. Псевдобагатошаровий в1йчастий цил1ндричний еп-тел1й в зон! крипт у оаб зрлого вку. Експреая К1-67 в коротких I довгих вставних клтинах.Забарвлення Ю-67. Зб1-льшення 20*10.
В зонах росту псевдобагатошарового вшчас-того цилшдричного ештелш спостер^аеться глибока вегета^я епiтелiальних комплешв в пщлеглий пщслизовий шар. У оаб зртого вку спостер^аеться посилена експреая маркера Ю-67, як коротких i довгих вставних, так i мiкровор-синчатих, та iнодi i келихоподiбних кл^инах (рис.3).
Висновки
Встановлено, що рiзнi стшки слизовоТ оболонки клиноподiбноТ пазухи людини мають своТ ци-толопчн особливосп, як характеризуются пев-
Реферат
ИЗУЧЕНИЕ СОСТОЯНИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ В КЛЕТКАХ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КЛИНОВИДНОЙ ПАЗУХИ У ЛЮДЕЙ ЗРЕЛОГО ВОЗРАСТА С ПОМОЩЬЮ ИМУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО МАРКЕРА К1-67 Совгиря С.Н.
Ключевые слова: псевдомногослойный мерцательный цилиндрический эпителий, гомеостаз, пролиферация, маркер К1-67.
В данном иммуногистохимическом исследовании материалом изучения была слизистая оболочка клиновидной пазухи людей зрелого возраста. Цель этой работы - выявление явлений пролиферации в клетках псевдомногослойного мерцательного цилиндрического эпителия с помощью маркера Ю-67. Установлено, что медиальная, латеральная и передняя стенки, состоящие преимущественно из вы-сокодифференцированных клеток, характеризуются достаточно активными процессами митоза. В то время, как на задней стенке маркер пролиферации выявляется только в коротких и длинных вставочных клетках. С нашей точки зрения, это подтверждают данные литературы, что вставочные клетки являются клетками-предшественниками микроворсинчатых, а потом и мерцательных и бокалоподоб-ных. Хотя последние обновляются и за счет собственного митоза.
Актуальт проблеми сучасно!" медицини
Summary
STUDY OF PROLIFERATIVE PROCESSES IN SPHENOIDAL SINUS MUCOSA CELLS IN ADULTS BY IMMUNOHISTOCHEMICAL
Ki-67-MARKER
Sovhyrya S.N.
Keywords: pseudostratified ciliated columnar epithelium, homeostasis, proliferation, marker Ki-67.
Sphenoidal sinus mucosa cells taken from adults were the material of this immunohistochemical research aimed to identify proliferative processes that occur in the cells of pseudostratified ciliated columnar epithelium by immunohistochemical Ki-67-marker. It was founded the medial, lateral and frontal walls which mainly consisted of highly differentiated cells were characterized by rather active processes of mitosis. While on the posterior wall the Ki-67 marker was observed only in cells located on basal membrane (short and long inserted cells). To our opinion it confirms the reliable literature information that the inserted cells are predecessors for microciliated cells, and then for ciliated and goblet cells. But the last ones regenerate due own mitosis as well.
ДК 616.316-092.9 : 615.916'175 Стасюк О.А., Костенко В.О.
ЗМ1НИ ОКИСНЮВАЛЬНОГО МЕТАБОЛ1ЗМУ У СЛИННИХ ЗАЛОЗАХ ЩУР1В ЗА УМОВ СПШЬНОГО НАДЛИШКОВОГО НАДХОДЖЕННЯ Н1ТРАТУ ТА ФТОРИДУ НАТР1Ю
ВДНЗУ «Украшська медична стоматолопчна акаде1^я», м. Полтава
У експеримент{ на 40 бших щурах досл{джено стан NO-синтазного та аргтазного шляхгв ме-табол{зму L-аргiнiну та пов'язаш з ними змти окиснювальних процеЫв у тканинах слинних за-лоз щурiв за умов стльного надлишкового надходження штрату та фториду натрЮ. Виявлено, що при введенш фториду натрЮ типове для iзольованого призначення ттрату натрЮ пригт-чення активностi сумарних NO-синтаз змтюеться на збшьшення гх активностi, тдвищена активнгсть орттиндекарбоксилази суттево зменшуеться. За цих умов у тканинах слинних залоз ктотно тдвищуеться продукщя супероксидного атон-радикалу мжросомальним та м^ тохондрiальним електронно-транспортними ланцюгами, збшьшуеться пероксидне окиснення лiпiдiв, знижуеться антиоксидантний потенщал.
Ключов1 слова: 1нтоксикац1я жтратом натр1ю, штоксика^я фторидом натр1ю, слинн залози, супероксидний анюн-радикал, пероксидне окиснення лтщ1в, антиоксидантна система, оксид азоту, NO-синтази.
Стаття е фрагментом планово!' НДР ВДНЗУ «УкраТнська медична стоматолопчна академ1я» "Кисень- та NO-залежн механь зми ушкодження внутр1шн1х орган1в та Тх корекц1я ф1зюлопчно активними речовинами" (№держреестрацп 0108U010079).
Пщвищення наприкшц ХХ столггтя антропо- ся через штрат- та ытритредуктазш реакцп [9]. генного впливу на довктля призвело до появи ново' еколопчноТ та медико-бюлопчноТ проблеми, пов'язаноТ з сукупною дiею хiмiчних забруд-нювачiв навколишнього середовища на оргашз-ми людини та тварин. За оцшками науков^в, у аграрно-промислових регюнах УкраТни значною проблемою е комбшована дiя на оргашзм людини та тварин неоргашчних азотовмiсних сполук та фторидiв.
Залишаеться недостатньо з'ясованим питан-ня сукупноТ дм нiтратiв i фторидiв на органiзм ссавцiв. 1нтерес викликае дослiдження, насам-перед, метаболiчних змiн у слинних залозах (СЗ), осктьки останнi тiсно взаемопов'язанi з ш-шими вiддiлами травлення, органами серцево-судинноТ, видiльноТ систем тощо [3].
В останш роки СЗ розглядаються як важли-вий орган регуляци утворення NO у кшькосп, необхiднiй для нормального функцiонування протективних систем слизовоТ оболонки органiв шлунково-кишкового тракту, пщтримання iY цтн сност [9].
Кiлькiсть NO, що надходить у оргашзм iз сли-ною, контролюеться мехашзмом ауторегуляцiТ, вiдомим як цикл оксиду азоту [5]. Поряд з NO-синтазним шляхом в СЗ оксид азоту утворюеть-
Вважаеться, що саме ця складова циклу оксиду азоту е фiзiологiчно необхщною за умов знижен-ня активносл NO-синтаз (NOS), наприклад, за умов ппокси' [5]. У той же можна припустити зда-тнiсть фторид-юшв втручатися у функцiонування цикл оксиду азоту, осктьки ц сполуки вiдомi як пригнiчувачi альтернативного щодо NO-синтазного - арпназного (неокисного) шляху ме-таболiзму L-аргiнiну [16].
Введення надлишково'1 кiлькостi попередникiв NO (штратв i нiтритiв), а також шших токсичних агентiв, що втручаються у функцюнування циклу оксиду азоту та сполученого з ним циклу супероксидного анюн-радикала може ютотно змшю-вати рiвень продукцп NO, сприяти утворенню йо-го високотоксичних метаболтв (наприклад, пе-роксинiтриту). За цих умов можна очкувати по-рушень як з боку самих СЗ, так i шших оргашв i систем.
Мета роботи
Вивчення стану NO-синтазного та арпназного шляхiв метаболiзму L-аргшшу та пов'язаних з ними змш окиснювальних процесiв у тканинах СЗ щурiв за умов сптьного надлишкового надходження нiтрату та фториду натрш.
