CC BY
23
Клинические наблюдения последних лет показали, что одним из перспективных способов преодоления данных проблем является использование антрациклиновых антибиотиков, инкапсулированных в липосомы. Вместе с тем в доступной нам литературе практически отсутствуют данные, посвященные изучению механизмов действия липосомальных антрациклинов на клетки с фенотипом лекарственной резистентности.
Цель исследования - изучить особенности влияния свободной и липосомальной форм доксорубина на молекулярный профиль и клеточный цикл чувствительных и резистентных линий РМЖ.
Методы. Культивирование клеток в системе in vitro, МТТ-тест, иммуноцитохимический, проточная цитофлюорометрия.
Результаты. Согластно данным, полученным нами ранее, формирование фенотипа лекарственной устойчивости к доксорубицину в клетках РМЖ человека линии MCF-7 сопровождалось изменением рецепторного статуса, повышением адгезивных свойств клеток и снижением их пролиферативной активности (за счет изменения уровня экспресии белков-регуляторов клеточного цикла). Следует отметить, что чувствительные и резистентные к доксорубицину клетки РМЖ человека характеризовались одинаковым распределением клеток по фазам клеточного цикла. Культивирование чувствительных клеток линии MCF-7 со свободной формой доксорубицина приводило к значительному снижению их пролиферативной активности, уровня экспрессии рецепторов сте-
роидных гормонов и металлотионеинов. Кроме того, влияние свободной формы доксорубицина вызывало в чувствительных клетках изменения экспрессии белков-регуляторов клеточного цикла (снижение циклина D1, pR, с-тус и повышение р-21), что приводило к задержке клеток в G0/ G1-фазе Культивирование клеток резистентной линии MCF-7/Dox с доксорубицином не приводило к изменениям экспрессии молекулярних маркеров и не вызывало изменений распределения клеток по фазам клеточного цикла.
При культивировании МСБ-7, МСБ-7Юох с липосомальной формой доксорубицина наблюдалось снижение пролиферативной активности и изменения экспрессии белков-регуляторов клеточного цикла, что приводило к блокировке клеточного цикла в 0/Ог Однако следует отметить, что влияние липосомальной формы доксо-рубицина способствовало снижению экспрессии металлотионеинов лишь в клетках чувствительной линии и не вызывало в них изменений экспрессии рецепторов стероидных гормонов.
Выводы. Свободная форма вызывает изменения молекулярного профиля и клеточного цикла только в клетках исходной линии МСБ-7. В противоположность этому, липосомальная форма доксорубицина приводит к идентичным изменениям экспрессии белков-регуляторов клеточного цикла и к остановке клеток в фазе Ц0/Ц1 как в исходной, так и в резистентной линии. Полученные данные свидетельствуют о необходимости дальнейших исследований, направленных на изучение действия липосомальных форм противоопухолевых препаратов на молекулярно-биологические особенности злокачественных клеток.
цитолиз аутологичных эритроцитов больных с патологией желудочно-кишечного тракта
А.П. лЫКОВ1, А.В. СОСНИНА1, Н.В. ВЕлИКАЯ2, С.А. фУРСОВ2
НИИ Молекулярной биологии и биофизики СО РАМН, г. Новосибирск1 Новосибирский областной онкологический диспансер2
Целью работы явилось изучение антителонезависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности по отношению к аутологичным эритроцитам (АЭ) in vitro у больных раком желудочно-кишечного тракта (РЖКТ).
Материал и методы. Исследование проведено у 20 больных раком желудка (РЖ), 20 больных колоректальным раком (КР) и у 8 условно здоровых лиц. За основу исследования взята методика W.Z. Wei, Цитотоксический тест ста-
вили против АЭ, ненагруженных и нагруженных опухолеассоциированными антигенами (ОАА), включающими в себя раковоэмбриональный антиген, хорионический гонадотропин человека, нейроспецифическую энолазу, углеводные антигены СА-19-9 и СА-125, альфа-фетопротеин и микроглобулин человека. Индекс цитотоксичности определяли отдельно для нагруженных и ненагруженных ОАА эритроцитов по следующей формуле: ИЦ = (О - К) х 100% / К, где О - оптическая плотность супернатантов ячеек, содержащих эффекторные клетки и АЭ, К — оптическая плотность супернатантов ячеек, содержащих только АЭ. Кроме этого, иммунофлуоресцентным методом определяли популяции и субпопуляции мононуклеарных клеток (МНК), в т. ч. с маркерами активации.
Результаты. Анализ способности монону-клеаров крови лизировать ненагруженные АЭ выявил более высокие значения цитолиза у больных РЖКТ по сравнению с условно здоровыми лицами (12,85±3,14% и 1,84±1,84%; р<0,05 соответственно). ИЦ для АЭ, нагруженных ОАА, был выше в группе больных РЖКТ по сравнению с условно здоровыми лицами (12,79±2,93% и 2,47±1,40%; р<0,05 соответственно). При РЖ выявлены обратные корреляционные связи уровней цитолиза АЭ, нагруженных ОАА, с абсолютным содержанием CD71 (г=-0,471; р<0,05), а при КР между цитолизом ненагруженных АЭ и относительным содержанием CD71 лимфоцитов (г=-0,479; р<0,05). При КР отме-
чены прямые корреляционные связи между ИЦ ненагруженных АЭ с абсолютным содержанием CD8- (г=0,574; р<0,01), CD71- (г=0,579; р<0,01) и HLA-DR- лимфоцитов (г=0,566; р<0,01). У больных РЖКТ была обнаружена обратная корреляционная связь между приростом ИЦ (разность между ИЦ нагруженных ОАА АЭ и ИЦ ненагруженных АЭ) и инфильтрацией опухоли макрофагами (г=0,379, р<0,05). При КР прирост ИЦ находился в прямой корреляционной связи с относительным содержанием CD8 (г=0,465, р<0,05); а также с относительным и абсолютным содержанием CD71 (г=0,612, р<0,01 и г=0,619, р<0,01 соответственно).
Выводы. У больных РЖ при активации иммунной системы (определенной по абсолютному содержанию CD71-клеток), свойственной преимущественно высокодифференцированным аденокарциномам, происходит снижение ИЦ нагруженных ОАА АЭ, что, возможно, создает оптимальные условия развития опухоли в организме за счет включения механизмов супрессии эффекторных функций МНК по отношению к опухоли. Изучение корреляционных связей между антителонезависимой клеточно-опосредованной цитотоксичностью и содержанием популяций и субпопуляций МНК показало, что особенностью цитолиза АЭ при КР является повышение прироста ИЦ при активации иммунной системы, что может свидетельствовать о различных механизмах реализации цитотоксического эффекта в зависимости от локализации аденокарцином.
ИЗМЕНЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА CD95 клетками костного мозга больных гемобластозами под влиянием низких концентраций ЦИТОСТАТИКОВ IN VITRO
И.Б. лЫСЕНКО, Е.Ю. ЗлАТНИК, Е.А. КАПУЗА, В.В. ДМИТРИЕВА
ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Росмедтехнологий»,
г. Ростов-на-Дону
Программированная гибель клеток (апоп-тоз) играет важную роль в морфогенетических процессах организма, в развитии опухолевых заболеваний. Один из путей апоптоза может осуществляться через «рецепторы смерти», в
частности, известен Fas-опосредованный путь апоптоза CD95 позитивных клеток. Белок CD95 принадлежит к семейству рецепторов фактора некроза опухолей и экспрессируется на поверхности многих типов клеток. Нами проведено
