CC BY
0
© Коллектив авторов, 2024
Сухова М.М.1' 2, Бязрова М.Г.1' 3, Банделюк А.С.4, Зубкова О.В.4,
Михайлов А.А.1' 2, Прилипов А.Г.1' 4, Шмаров М.М.4, Филатов А.В.12
Сравнение эффективности трансдукции дендритных клеток человека с помощью аденовирусных векторов различных серотипов
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства, 115522, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», 119234, г. Москва, Российская Федерация
3 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов имени П. Лумумбы» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 117198, г. Москва, Российская Федерация
4 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 123098, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Аденовирусные (Ad) вакцины с успехом используются для иммунизации против некоторых опухолеспецифических антигенов, а также ряда инфекционных патогенов. Дендритные клетки (ДК) являются профессиональными антиген-представляю-щими клетками, поэтому их трансдукция под действием Ad-векторов особенно важна для эффективного действия Ad-вакцин.
Цель исследования - определить эффективность трансдукции ДК человека Ad-век-торами различных серотипов.
Материал и методы. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров (n = 11) выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла-веро-графина. Моноциты обогащали из мононуклеарной фракции крови методом отрицательной иммуномагнитной сепарации с использованием набора Dynabeads. Для дифферен-цировки в ДК моноциты культивировали in vitro в течение 7 дней в присутствии смеси цитокинов, содержавшей 70 ед/мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулиру-ющего фактора (ГМ-КСФ) и 50 ед/мл ИЛ-4. В результате полученные клетки в высокой плотности экспрессировали маркеры CD11c и HLA-DR, что свидетельствовало о диф-ференцировке ДК. Полученные клетки инфицировали рекомбинантными Ad-векторами, несущими репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка (GFP). Были протестированы 3 серотипа: Ad5, sAd23 и Ad26, а также химерный Аd5-вектор, содержавший на С-конце своего фибера соответствующий домен серотипа Ad35 (Ad5/35). Через 48 ч после инфекции определяли процент трансдуцированных ДК и среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) репортерного белка GFP. После трансдукции на GFP+- и GFP-клетках определяли экспрессию антигенов CD86 и HLA-DR.
Результаты. Высокие дозы Ad (от 60 до 1000 БОЕ/клетку) обеспечивали трансдук-цию более 90 % ДК. При этом гистограммы флуоресценции GFP+-клеток имели одномо-дальный пик флуоресценции, который отчетливо отстоял от флуоресценции GFP-клеток. При уменьшении дозы Ad характер гистограмм, полученных при инфекции различными серотипами, отличался друг от друга. При инфекции серотипами Ad5, Ad26 и Ad5/35 при уменьшении дозы вируса снижение трансдукции проявлялось главным образом в падении интенсивности GFP-флуоресценции. Дальнейшее снижение дозы Ad, когда трансду-цированной оказывалась только часть ДК, приводило к существенному падению доли GFP+-клеток при умеренном снижении MFI. При инфекции ДК с помощью sAd23 при снижении дозы вируса падение уровня флуоресценции и уменьшение процента GFP+-клеток происходило одновременно.
Дозозависимые кривые трансдукции были получены для 11 добровольцев. Сравнение трансдуцирующей эффективности различных серотипов показало, что векторы Ad5/35 и Ad26 обладали наибольшей трансдуцирующей способностью. Для трансдук-ции 50 % ДК требовались дозы Ad5/35 и Ad26 ~ 1 БОЕ/клетку. Наименьшую эффектив-
Для корреспонденции
Филатов Александр Васильевич -доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6460-9427
ность проявляли векторы Ad5 и sAd23. Для трансдукции 50 % ДК требовались дозы Ad5 и sAd23 ~ 140 и 70 БОЕ/клетку соответственно. Аденовирусная трансдукция вызывала увеличение экспрессии на ДК антигенов CD86 и HLA-DR.
Заключение. Ad-векторы по отношению к ДК обладают высокой трансдуцирующей способностью. Трансдукция ДК с помощью серотипов Ad5, Ad26 и Ad5/35 обеспечивает высокую экспрессию трансгена. Аденовирусная трансдукция индуцирует переход ДК в более зрелую форму.
Ключевые слова: аденовирусы (Ad); серотипы Ad; перенос генов; дендритные клетки; трансдукция; GFP
Статья получена 19.08.2024. Принята в печать 28.09.2024.
Для цитирования: Сухова М.М., Бязрова М.Г., Банделюк А.С., Зубкова О.В., Михайлов А.А., Прилипов А.Г., Шмаров М.М., Филатов А.В. Сравнение эффективности трансдукции дендритных клеток человека с помощью аденовирусных векторов различных серотипов. Иммунология. 2024; 45 (5): 550-560. DOI: https://doi. org/10.33029/1816-2134-2024-45-5-550-560
Финансирование. Исследование выполнено при поддержке гранта Российского научного фонда № 24-1500266 (https://rscf.ru/project/24-15-00266/).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Сбор и обработка материала - Сухова М.М., Бязрова М.Г., Банделюк А.С., Зубкова О.В., Михайлов А. А.; написание текста, редактирование - Прилипов А.Г., Шмаров М.М., Филатов А.В.; окончательный вариант и целостность текста - Шмаров М.М., Филатов А.В.
Sukhova M.M.1, 2, Byazrova M.G.1 3, Bandelyuk A.S.4, Zubkova O.V.4, Mikhailov A.A.1 2, Prilipov A.G.1 4, Shmarov M.M.4, Filatov A.V.1 2
Comparison of the transduction efficiency of human dendritic cells using adenoviral vectors of different serotypes
1 National Research Center - Institute of Immunology of the Federal Medical-Biological Agency, 115522, Moscow, Russian Federation
2 M.V. Lomonosov Moscow State University, 119234, Moscow, Russian Federation
3 Рeoples' Friendship University of Russia named after P. Lumumba, Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, 117198, Moscow, Russian Federation
4 Federal Research Centre of Epidemiology and Microbiology named after Honorary Academician N.F. Gamaleya, Ministry of Health of the Russian Federation, 123098, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. Adenovirus (Ad) vaccines are successfully used for immunization against some tumor-associated antigens, as well as a number of infectious pathogens. Dendritic cells (DC) are professional antigen-presenting cells, so transduction of these cells by Ad vectors is especially important for the effective action of Ad vaccines.
The aim of the study was to determine the efficiency of transduction of human DCs by adenovirus vectors of different serotypes.
Material and methods. Peripheral blood mononuclear cells of healthy donors (n = 11) were isolated by centrifugation in a Ficoll-Verografin density gradient. Monocytes were enriched from the mononuclear fraction of blood by negative immunomagnetic separation using the Dynabeads kit. For differentiation into DCs, monocytes were cultured in vitro for 7 days in the presence of a cytokine mixture containing 70 U/ml granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and 50 U/ml IL-4. As a result, the differentiated cells expressed CD11c and HLA-DR markers at a high density, indicating DC maturation. The resulting cells were infected with recombinant Ad vectors carrying a green fluorescent protein (GFP) reporter gene. Three serotypes were tested: Ad5, sAd23, and Ad26, as well as a chimeric Ad5 vector containing the corresponding domain of the Ad35 serotype at the C-terminus of its fiber (Ad5/35). The percent of transduced B lymphocytes and the mean fluorescence intensity (MFI) of the GFP reporter protein were determined 48 h after infection. After transduction, expression of CD86 and HLA-DR antigens was determined on GFP+ and GFP- cells.
Results. High Ad doses (from 60 to 1000 PFU/cell) provided transduction of more than 90 % of DCs. In this case, the fluorescence histograms of GFP+ cells had a unimodal character, which was clearly separated from the fluorescence of GFP- cells. With a decrease in the Ad dose, the
For correspondence
Alexander V. Filatov -Dr.Sci., PhD, Prof., Head of the Immunochemistry Laboratory, NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6460-9427
character of the histograms obtained during infection with different serotypes differed from each other. During infection with Ad5, Ad26, and Ad5/35 serotypes, with a decrease in the virus dose, a decrease in transduction was manifested mainly in a drop in the intensity of GFP fluorescence. Further reduction of the Ad dose, when only a part of DCs was transduced, led to a significant drop in the proportion of GFP+ cells, with a moderate decrease in MFI. When DCs were infected with sAd23, the decrease in the fluorescence level and the percent of GFP+ cells occurred simultaneously with a decrease in the virus dose. Dose-dependent transduction curves were obtained for 11 volunteers. Comparison of the transduction efficiency of different serotypes showed that the Ad5/35 and Ad26 vectors had the highest transducing capacity. To transduce 50 % of DCs, Ad5/35 and Ad26 doses of about 1 PFU/cell were required. The Ad5 and sAd23 vectors showed the lowest efficiency. To transduce 50 % of DCs, Ad5 and sAd23 doses of about 140 and 70 PFU/cell were required, respectively. Adenoviral transduction increased the expression of CD86 and HLA-DR antigens on DCs.
Conclusion. Ad vectors have a high transducing capacity for DCs. Transduction of DCs with Ad5, Ad26, and Ad5/35 serotypes provides high transgene expression. Adenoviral transduction induces the transition of DCs to a more mature form.
Keywords: adenoviruses (Ad); Ad serotypes; gene transfer; dendritic cells; transduction; GFP
Received 19.08.2024. Accepted 28.09.2024.
For citation: Sukhova M.M., Byazrova M.G., Bandelyuk A.S., Zubkova O.V., Mikhailov A.A., Prilipov A.G., Shma-rov M.M., Filatov A.V. Comparison of the transduction efficiency of human dendritic cells using adenoviral vectors of different serotypes. Immunologiya. 2024; 45 (5): 550-60. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-5-550-560 (in Russian)
Funding. The study was supported by the grant of Russian Science Foundation (RSF) No. 24-15-00266, https://rscf. ru/project/24-15-00266/.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Collection and processing of material - Sukhova M.M., Byazrova M.G., Bandelyuk A.S., Zubkova O.V., Mikhailov A.A.; text writing, editing - Prilipov A.G., Shmarov M.M., Filatov A.V.; the final version of the text - Shmarov M.M., Filatov A.V.
Введение
В качестве средства для доставки генов все большую привлекательность приобретают аденовирусные (Ad) векторы. Они с успехом применяются в генной терапии при лечении моногенных заболеваний, а также при создании разнообразных вакцин [1]. Ad-векторы выгодно отличаются тем, что они способны инфицировать как делящиеся, так и покоящиеся клетки, а также имеют высокую емкость в отношении размера трансгена. Безопасность использования Ad-векгоров обеспечивается тем, что они не интегрируются в геном человека, а также применением генетически модифицированных Ad с дефектом репликации.
К возможным мишеням для Ad-векгоров относятся дендритные клетки (ДК). Они являются профессиональными антиген-презентирующими клетками, которые играют ключевую роль при иммунном ответе на антиген. Зрелые ДК проявляют себя как мощные стимуляторы пролиферации и развития эффекторных Т-кле-ток. Напротив, незрелые ДК индуцируют развитие регу-ляторных Т-клеток (Treg), они участвуют в генерации периферической толерантности [2].
Быстроразвивающейся областью исследований является создание дендритноклеточных вакцин. Раковые клетки зачастую лишены на своей поверхности костимулирующего антигена В7, а также они характеризуются сниженной экспрессией молекул МНС класса I. Поскольку эти молекулы необходимы для успешной
активации Т-клеток [3], большинство раковых клеток являются плохими иммуногенами. ДК имеют высокий уровень молекул МНС класса I и II, а также несут ряд костимулирующих и адгезивных молекул. Таким образом, ДК способны обеспечивать все необходимые сигналы для активации Т-клеток. Аутологичные ДК, в которые с помощью рекомбинантного Ad введены опухолеспецифические антигены, способны эффективно активировать цитотоксические Т-лимфоциты против раковых клеток [4].
Активно развиваются исследования, направленные на создание аденовирусных вакцин против ВИЧ-1 [5], туберкулеза [6], малярии [7], вируса гриппа [8], некоторых других бактериальных и вирусных инфекций [9]. Наиболее наглядно высокие потенциальные возможности вакцин на основе Ad недавно были продемонстрированы на примере создания вакцин против СОУГО-19 [10-13].
Таким образом ДК являются перспективными клетками-мишенями при создании вакцин, направленных на иммунизацию против как инфекционных, так и злокачественных заболеваний. В связи с этим растет потребность в исследованиях, посвященных изучению аденовирусной инфекции ДК. В настоящей работе проведено сравнительное исследование эффективности трансдук-ции ДК под действием четырех серотипов Ad. Нами также были получены данные о влиянии Ad векторов на фенотип трансдуцированных ДК.
Материал и методы
Участники исследования. В исследовании приняли участие 11 здоровых добровольцев (6 женщин и 5 мужчин, средний возраст - 26 лет, в диапазоне от 24 лет до 31 года). Исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого». Письменное информированное согласие получено от каждого участника исследования перед выполнением каких-либо процедур. Протокол исследования рассмотрен и одобрен этическим комитетом ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России (№ 3-1, 11 марта 2020 г.).
Получение дендритных клеток. Мононуклеар-ные клетки периферической крови здоровых доноров выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина («ПанЭко», Россия). Моноциты обогащали из мононуклеарной фракции крови методом отрицательной иммуномагнитной сепарации с использованием набора Dynabeads Untouched Human Monocytes kit (Thermo Fisher Scientific, Cat. No. 11350D, США). Выделенные моноциты культивировали в среде DMEM/F12 с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки, 24 мкг/мл гентамицина, 1 мМ пирувата натрия, 10 мМ HEPES (все реагенты «ПанЭко», Россия). Для дифференцировки моноцитов в ДК к клеткам добавляли стимулирующую смесь цитокинов, которая состояла из 70 нг/мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и 50 нг/мл ИЛ-4 (SciStore, Россия). Клетки культивировали при 37 °C в 5 % CO2. Через 7 дней культивирования непри-липшие клетки собирали и использовали для экспериментов в качестве ДК. Все последующие функциональные тесты проводили после удаления цитокинов.
Наработка и очистка аденовирусов. В работе были использованы рекомбинантные Ad человека серотипов Ad5, Ad26 и Ad обезьян sAd23. Все Ad-векторы содержали в своем составе репортерный ген GFP. Адено-векторы Ad5-GFP и sAd23-GFP получали путем транс-фекции соответствующих плазмидных конструкций в клетки пакующей линии HEK293 с использованием реагента Metafectene Pro (Biontex, Германия), как было описано ранее [14]. Получение химерного Аd5-век-тора, содержащего фибер аденовируса человека Ad35, тоже описано ранее [15]. Ad-вектор на основе Ad человека 26-го серотипа Ad26-GFP был любезно предоставлен канд. биол. наук Т. А. Ожаровской (ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России).
Рекомбинантные Ad накапливали в клетках HEK293 вплоть до развития цитопатического эффекта. Далее рекомбинантные Ad очищали и концентрировали ультрацентрифугированием лизатов зараженных клеток в градиенте плотности хлористого цезия. Концентрацию Ad в очищенном препарате определяли спект-рофотометрически, учитывая, что одна единица оптической плотности при 260 нм соответствует 1,12 • 1012 вирусных частиц в 1 мл. Титр препаратов Ad опреде-
ляли методом бляшкообразования на клетках линии HEK293 и выражали в бляшкообразующих единицах (БОЕ) в пересчете на количество клеток-мишеней.
Вирусная трансдукция. Вирусные препараты разводили в культуральной среде и готовили 6 последовательных двукратных разведений. Разведенный вирус в объеме 50 мкл добавляли в лунки, содержавшие 10 000 клеток-мишеней в объеме 200 мкл. Конечная концентрация векторов варьировала от 0,4 до 1000 БОЕ/клетку. Через 48 ч флуоресценцию трансду-цированных клеток регистрировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США).
Проточная цитометрия. ДК для определения поверхностного фенотипа отмывали и обрабатывали антителами против CD11c-PE-Cy7 (клон Bu15, BioLegend, США), CD86 (клон IT2.2, BioLegend, США) и HLA-DR-PE (клон C120, получен нами ранее [16]). Клетки инкубировали с антителами в течение 30 мин при комнатной температуре, после чего их дважды отмывали и анализировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США), оснащенного тремя диодными лазерами (488, 561 и 638 нм). Популяцию живых клеток определяли по бипараметрическим цитограммам в координатах прямого (FCS) и бокового (SSC) светорассеяния. Доля клеток, положительных по флуоресценции GFP, отражала эффективность трансдукции. Экспрессию репортерного гена выражали в относительных единицах при измерении средней интенсивности флуоресценции (mean fluorescence intensity, MFI). Обработку цито-флуориметрических данных проводили при помощи программы FlowJo (Becton Dickinson, США).
Статистическая обработка данных. Полученные данные обрабатывали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версия 8.4.3 (GraphPad, США). На графиках представлены медианы (столбцы), усы показывают 1,5-кратный межквартильный размах. Значимость различий между выборками оценивали с помощью критерия Краскела-Уоллиса с поправкой Данна.
Результаты
Эффективность трансдукции ДК с помощью аденовирусных векторов различных серотипов
Моноциты человека 7 дней культивировали in vitro в присутствии 70 ед/мл ГМ-КСФ и 50 ед/мл ИЛ-4, под действием которых они дифференцировались в ДК. Успешность дифференцировки контролировали по фенотипу. Полученные клетки в высокой плотности экспрессировали маркеры CD11c и HLA-DR, что свидетельствовало о дифференцировки ДК.
Далее ДК (10 000 клеток на лунку) инфицировали возрастающими дозами Ad5, sAd23, Ad26 и Ad5/35. Все Ad-векторы несли репортерный ген GFP. При проникновении векторов в клетки-мишени репортерный ген GFP транскрибировался и клетки приобретали зеленую флуоресценцию, которую через 48 ч после инфекции анализировали с помощью проточной цитометрии. При этом мы регистрировали процент GFP-положительных (GFP+) клеток и интенсивность флуоресценции клеток (MFI, отн. ед).
Ad5
sAd23
Ad26
Ad35
-
=
a
W О ta
607 000
29 %
14 034
37 %
3 950 000 98 %
s
^
s =
£ я
s -
265 832
%
Отрицательный контроль
GFP+
Рис. 1. Экспрессия GFP на дендритных клетках, трансдуцированных с помощью Ad-GFP различных серотипов Цифрами указаны средняя интенсивность флуоресценции (MFI) в относительных единицах и доли ОЕР+-клеток. В отрицательном контроле клетки не обрабатывали вирусом.
98 %
96 %
Ad5
sAd23
100 -1
80-
60-
Рч Сч
v 40 Н
20-
100 и
80 -
60 -
Рч Сч
V 40
20 -
15 30 60 125 250 500 БОЕ на дендритную клетку
Ad26
^ .ь13
чЬ
100 I
80-
60-
Рч Сч
V 40
20-
100-,
80-
60-
Рч Сч
о 40 -\
20-
15 30 60 125 250 500 БОЕ на дендритную клетку
Ла5/35
[Г
-1-1-1-1-г
чЬ
БОЕ на дендритную клетку
ft, V.' п,,'
БОЕ на дендритную клетку
- - 1
- - 4 -ф- 5
-е- 6
"И" 7
9
10
Рис. 2. Доля ОЕР+-клеток при трансдукции дендритных клеток в зависимости от дозы вируса Приведены данные для 11 доноров.
0
0
0
0
Для каждого вектора был подобран диапазон концентраций, в пределах которого регистрировалась полная кривая титрования вируса, начиная с уровня плато при максимальных концентрациях вируса с прохождением точки перегиба и постепенным приближением к нулевому значению процента вЕР+-клеток при последующем разведении. Для АЛ26 и Ad5/35 рабочая область титрования находилась в диапазоне от 0,195 до 15 БОЕ (7 экспериментальных точек), а для Ad5 и sAd23 - от 15 до 500 БОЕ (6 экспериментальных точек).
Трансдукция ДК высокими дозами аденовируса приводила к тому, что не менее 94 % клеток приобретали яркую флуоресценцию. При этом гистограммы флуоресценции вЕР+-клеток имели одномодальный характер (рис. 1).
При разведении вектора характер гистограмм, полученных при инфекции различными серотипами, отличался друг от друга. Так, при инфекции серотипом АЛ26 при уменьшении дозы вируса снижение трансдук-ции проявлялось главным образом в падении интенсивности вЕР-флуоресценции. При этом доля вЕР+-клеток снижалась не так заметно. Так, например, при дозе АЛ26 в 250 БОЕ флуоресцировали около 98 % клеток, которые имели МЕ1 = 3 950 000 отн. ед. При снижении дозы Ad26 до 15 БОЕ/клетку МИ падал при-
мерно в 5 раз - до значения 798 000 отн. ед., в то время как доля вЕР+-клеток снижалась незначительно - до уровня 94 %. Дальнейшее уменьшении дозы Ad26 до 0,9 БОЕ/клетку напротив, приводило к существенному падению доли вЕР+-клеток при умеренном снижении МЕ1. При минимальной дозе вируса 0,9 БОЕ/клетку флуоресцировали 41 % клеток, которые сохраняли довольно высокий уровень флуоресценции (МЕ1 = 70 325 отн. ед.). Эта флуоресценция регистрировалась отдельным пиком, отчетливо отстоящим от пика вЕР-клеток.
Иная картина наблюдалась при инфекции ДК с помощью sAd23. При снижении дозы sAd23 от 500 до 3,8 БОЕ/клетку падение уровня флуоресценции и процента вЕР+-клеток происходило одновременно. При дозе 3,8 БОЕ/клетку отдельный пик флуоресценции вЕР+-клеток не регистрировался и их флуоресценция наблюдалась как плечо на пике вЕР-клеток. Векторы Ad5 и Ad5/35 по характеру гистограмм флуоресценции занимали промежуточное положение. При этом Ad5 больше соответствовал трансдукции вектором Ad26, а Ad5/35 - sAd23.
Дозозависимые кривые трансдукции были получены для 11 добровольцев, при этом они мало отличались друг от друга (рис. 2). Это свидетельствует о том,
ns ns ns
1000
100 -
S a
x
M О w
M
Ad5
sAd23
Ad26
Ad5/35
Рис. 3. Сравнение трансдуцирующей эффективности различных серотипов Ad
Звездочки указывают на значимость различий между выборками: ** - p < 0,01; *** - p < 0,001; **** - p < 0,0001; ns - незначительная.
что между донорами не существует больших индивидуальных отличий по чувствительности ДК к аденовирусной инфекции. Точку, которая на кривых «доза-эффект» соответствовала 50 % трансдукции клеток, обозначали как TE50 (Transduction efficacy) и в дальнейшем использовали как меру эффективности трансдукции.
Сравнение трансдуцирующей эффективности различных серотипов приведено на рис. 3. Наибольшей трансдуцирующей способностью обладали векторы Ad5/35 и Ad26. Для трансдукции 50 % ДК требовались дозы Ad5/35 и Ad26 ~ 1 БОЕ/клетку. Наименьшую эффективность проявляли векторы Ad5 и sAd23. Значения TE50 для этих вирусов находились на уровне 140 и 70 БОЕ/клетку соответственно. Таким образом, для Ad5/35 значения TE50 были в 200 (p < 0,0001) и в 100 (p < 0,0001) раз ниже, чем для Ad5 и sAd23 соответственно, а для Ad26 соответствующее значение было в 82 (p = 0,002) раз ниже, чем для Ad5. Векторы Ad26 и Ad5/35, а также Ad5 и sAd23 были сравнимы между собой по трансдуцирующей эффективности и значения TE50 для них статистически не отличались друг от друга.
Сравнение экспрессии молекул CD86 и HLA-DR при трансдукции ДК с помощью Ad-векторов различных серотипов
Известно, что антиген-представляющая функция ДК коррелирует с уровнем экспрессии антигенов MHC класса II, а также некоторых костимуляторных молекул. Для того чтобы оценить возможные фено-
типические изменения ДК в процессе Ad-инфекции, мы анализировали экспрессию ИЬА-БК и СБ86 при концентрации Ad, которые обеспечивали трансдукцию 50 % клеток. Были использованы дозы 125, 60, 1,56 и 0,78 БОЕ/клетку для Ad5, sAd23, Ad26 и Ad5/35 соответственно. В этих условиях вРР+- и вРР-популяции ДК имели равные пропорции и представляли собой трансдуцированные и нетрансдуцированные клетки в одном и том же образце. Мы обнаружили, что на вРР+-клетках по сравнению с вРР-клетками заметно возрастает экспрессия молекулы СБ86 (р < 0,01 для Ad5, Ad26 и Ad5/35; р < 0,001 для sAd23) (рис. 4). Аналогично при трансдукции возрастала экспрессия HLA-DR (р < 0,01 для Ad5, Ad26 и sAd23; р < 0,05 для Ad5/35).
Обсуждение
ДК обеспечивают связь врожденного и адаптивного иммунитета, таким образом они играют ключевую роль в иммунном ответе. Основной функцией ДК является представление антигена наивным Т-лимфоцитам с их последующей активацией.
При вакцинации для некоторых антигенов необходима корректировка антиген-представляющих свойств ДК. Естественные антиген-представляющие свойства ДК могут быть усилены в нужном направлении с помощью аденовирусной трансдукции. В представленной работе мы сравнили как различные серотипы Ad транс-дуцируют ДК. При сравнении учитывали количественные и качественные показатели трансдукции.
В целом полученные результаты свидетельствуют о высокой трансдуцирующей способности Ad-векторов по отношению к ДК. Для сравнения можно привести данные по трансдукции активированных В-лимфоцитов, которые по профилю костимуляторных молекул, а также молекул МНС наиболее близки к ДК. Обращает на себя внимание то, что ДК трансдуцируются более эффективно, чем первичные В-лимфоциты [17]. Последние даже под действием высоких доз Ad трансдуцировались в зависимости от серотипа от 10 до 46 %. В отличие от этого, даже при сравнительно невысоких дозах ДК доля трансдуцированных клеток приближалась к 100 %.
Следует отметить, что ДК, полученные из моноцитов, являются терминально дифференцированными и постмитотическими клетками. Несмотря на то, что Ad способны трансдуцировать непролиферирующие клетки, как было отмечено ранее, для эффективной трансдукции ДК требуются высокие дозы Ad, примерно от 100 до 1000 БОЕ/клетку [18]. Действительно, нами обнаружено, что такие дозы необходимы при трансдук-ции серотипами Ad5 и sAd23. В отличие от этого, серотипы Ad26 и Ad5/35 способны трансдуцировать ДК в более низких дозах, которые характерны для таких чувствительных клеток, как ИЕК293.
При трансдукции различными серотипами Ad наблюдались также некоторые качественные отличия в характере экспрессии трансгена. При обработке ДК субоптимальными дозами вируса только часть клеток демонстрировала вРР-флуоресценцию. Особенность
Sri
•Si-Si*
**
Ad5
О
О
80 000-1
60 000
40 000
20 000
Э
GFP- GFP+
Ad5
**
■j-
S
q 100 000 -\
i
50 000 А
о
о
80 000 -I
60 000
40 000
20 000
200 000
150 000
i S
Q 100 000
£
50 000
sAd23
•kitit
Ad26
Ad5/35
GFP- GFP+ sAd23
Q
О
80 000
60 000
40 000
20 000
200 000 -I
150 000-
x,
s
q 100 000
à
50 000 H
GFP- GFP+ Ad26
Q
О
80 000 "I
60 000
40 000
20 000 -
GFP- GFP+ Ad5/35
GFP- GFP+
GFP- GFP+
GFP- GFP+
GFP- GFP+
Рис. 4. Сравнение экспрессии молекул СБ86 и HLA-DR на трансдуцированных (ОЕР+) и нетрансдуцированных (ОЕР ) дендритных клетках
Каждая точка представляет образец дендритных клеток, полученный от добровольца. Звездочки указывают на значимость различий между выборками: * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001.
трансдукции с помощью серотипов Ad5, Ad26 и Ad5/35 заключалась в том, что при снижении дозы вируса ОРР+-клетки сохраняли заметный уровень флуоресценции. В отличие от этого, при использовании серотипа sAd23 при снижении дозы вируса ДК пропорционально теряли GFP-флуоресценцию, которая последовательно приближалась к уровню аутофлуоресценции.
Для объяснения этого явления необходимо рассмотреть характер взаимодействия Ad и ДК. Можно предположить, что при инфекции вирусные частицы распределяются по клеткам-мишеням случайным образом и проникновения в клетки-мишени отдельных вирусных частиц являются индивидуальными событиями [19]. В этом случае зависимость доли трансдуцированных клеток от числа вирусных частиц, проникших в клетку (MOI, multiplicity of infection), подчиняется распределению Пуассона и описывается следующим уравнением: доля трансдуцированных клеток = (1 - exp(-MOI)) [20]. При высоких дозах вируса Ad26 в каждую клетку проникают сразу несколько вирусных частиц, обеспечивая высокий уровень экспрессии трансгена. По мере снижения дозы вируса каждая клетка в среднем получает все меньшее число вирусных копий, что приводит к снижению уровня флуоресценции GFP. Когда MOI приближается к 1, только часть клеток несет по одной вирусной копии, остальные остаются нетрансдуциро-
ванными. Мы предполагаем, что для Ad26 проникновение в клетку даже одной копии вируса достаточно для выраженной экспрессии трансгена. В отличие от этого одна копия sAd23 дает очень низкую вЕР-флуоресцен-цию. В результате при снижении дозы sAd23 наблюдается прогрессивное падение уровня вЕР-флуоресцен-ции вплоть до уровня аутофлуоресценции.
При проникновении в клетку Ad дикого типа запускаются процессы, связанные с врожденным иммунитетом. Ранее было показано, что наибольшее влияние на эти реакции оказывают продукты генов, расположенные в Е1- и Е3-областях Ad-генома [1]. В использованных нами рекомбинантных векторах указанные области были удалены из вирусного генома. Процессы врожденного иммунитета также могут запускаться посредством активации паттерн-распознающих рецепторов, в частности ТЪЯ-рецепторов, которые являются сенсорами вирусных ДНК- и РНК-транскриптов [21].
Таким образом, при аденовирусной инфекции ДК получают сигнал опасности, который стимулирует переход ДК в более зрелое состояние. Нами было обнаружено, что Ad-трансдукция ДК всеми изученными серотипами вызывала повышение экспрессии HLA-DR и CD86 до уровней, характерных для более зрелых ДК. Эти результаты позволяют предполагать, что трансдуци-рованные ДК могут иметь более выраженные антиген-
0
0
0
0
0
0
представляющие и иммуностимулирующие свойства, чем нетрансдуцированные клетки. Это должно приводить к увеличению антиген-представляющего потенциала ДК и в конечном счете - к повышению эффективности аденовирусной вакцины.
Полученные нами данные соответствуют более ранним наблюдениям о том, что при инфицировании Ad незрелые ДК трансформируются в более зрелые клетки [22]. Трансдуцированные ДК меняют не только свой антигенный портрет, но и функциональные свойства. Они снижают продукцию ИЛ-10 и секретируют повышенный уровень ИЛ-12 p70 [23]. Интересно, что уровень созревания, индуцированный с помощью Ad, превосходил тот, который достигался при обработке этих клеток ФНОа или ИНФ-а. Противоречивые результаты были получены в работе K.R. Newton и соавт., которые обнаружили, что трансдукция ДК Ad-векторами приводит к подавлению последующего иммунного ответа [24].
■ Литература
1. Nishimura N., Nishioka Y., Shinohara T., Sone S. Enhanced efficiency by centrifugal manipulation of adenovirus-mediated interleukin 12 gene transduction into human monocyte-derived dendritic cells. Hum. Gene Ther. 2001; 12: 333-46. DOI: https://doi.org/10.1089/10430340150 503966
2. Kushwah R., Hu J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 2011; 1: 20. DOI: https://doi.org/10.1186/2045-3701-1-20
3. Gong J., Avigan D., Chen D., Wu Z., Koido S., Kashiwaba M., Kufe D. Activation of antitumor cytotoxic T lymphocytes by fusions of human dendritic cells and breast carcinoma cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2000; 97: 2715-8. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.050587197
4. Chan R.C.-F., Pang X.-W., Wang Y.-D., Chen W.-F., Xie Y. Transduction of dendritic cells with recombinant adenovirus encoding HCA661 activates autologous cytotoxic T lymphocytes to target hepatoma cells. Br. J. Cancer. 2004; 90: 1636-43. DOI: https://doi.org/10.1038/sj.bjc. 6601706
5. Janes H.E., Cohen K.W., Frahm N., De Rosa S.C., Sanchez B., Hural J. Higher T-cell responses induced by DNA/rAd5 HIV-1 preventive vaccine are associated with lower HIV-1 infection risk in an efficacy trial. J. Infect. Dis. 2017; 215: 1376-85. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/ jix086
6. Jeyanathan M., Fritz D.K., Afkhami S., Aguirre E., Howie K.J., Zganiacz A. Aerosol delivery, but not intramuscular injection, of adenovi-rus-vectored tuberculosis vaccine induces respiratory-mucosal immunity in humans. JCI Insight. 2022; 7: e155655. DOI: https://doi.org/10.1172/ jci.insight.155655
7. Hollingdale M.R., Sedegah M., Limbach K. Development of replication-deficient adenovirus malaria vaccines. Expert. Rev. Vaccines. 2017; 16: 261-71. DOI: https://doi.org/10.1080/14760584.2016.1228454
8. Kerstetter L.J., Buckley S., Bliss C.M., Coughlan L. Adenoviral vectors as vaccines for emerging avian influenza viruses. Front. Immunol. 2021; 11: 607333. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.607333
9. Arauio N.M., Rubio I.G.S., Toneto N.P.A., Morale M.G., Tamura R.E. The use of adenoviral vectors in gene therapy and vaccine approaches. Genet. Mol. Biol. 2022; 45: e20220079. DOI: https://doi. org/10.1590/1678-4685-gmb-2022-0079
10. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukh-vatulin A.I., Zubkova O.V., Dzharullaeva A.S., Kovyrshina A.V., Lubenets N.L.,Grousova D.M., Erokhova A.S., Botikov A.G., Izhaeva F.M., Popova O., Ozharovskaya T.A., Esmagambetov I.B., Favor-skaya I.A., Zrelkin D.I., Voronina D.V., Shcherbinin D.N., Semikhin A.S., Simakova Y.V., Tokarskaya E.A., Egorova D.A., Shmarov M.M., Nikitenko N.A., Gushchin V.A., Smolyarchuk E.A., Zyryanov S.K., Bori-sevich S.V., Naroditsky B.S., Gintsburg A.L. Safety and efficacy of an
Представленные данные имеют некоторые ограничения. В своей работе мы использовали ДК, которые in vitro были получены из моноцитов крови. Нельзя исключить того, что резидентные ДК, присутствующие в различных органах и тканях человека, могут несколько отличаться от индуцированных ДК по чувствительности к Ad-трансдукции.
Заключение
Ad-векторы по отношению к ДК обладают высокой трансдуцирующей способностью. Трансдукция ДК с помощью серотипов Ad5, Ad26 и Ad5/35 обеспечивает высокую экспрессию трансгена. Ad-трансдукция индуцирует переход ДК в более зрелую форму.
Благодарности. Благодарим канд. биол. наук Т. А. Ожа-ровскую (ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России) за предоставленный препарат Ad человека 26-го серотипа Ad26-GFP.
rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. Lancet. 2021; 397: 671-81. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)00234-8
11. Bos R., Rutten L., Van Der Lubbe J.E.M., Bakkers M.J.G., Hardenberg G., Wegmann F. Ad26 vector-based COVID-19 vaccine encoding a prefusion-stabilized SARS-CoV-2 Spike immunogen induces potent humoral and cellular immune responses. NPJ Vaccines. 2020; 5: 91. DOI: https://doi.org/10.1038/s41541-020-00243-x
12. Zhu F.-C., Li Y.-H., Guan X.-H., Hou L.-H., Wang W.-J., Li J.-X. Safety, tolerability, and immunogenicity of a recombinant adenovirus type-5 vectored COVID-19 vaccine: a dose-escalation, open-label, nonran-domised, first-in-human trial. Lancet. 2020; 395: 1845-54. DOI: https:// doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31208-3
13. Voysey M., Clemens S.A.C., Madhi S.A., Weckx L.Y., Fole-gatti P.M., Aley P.K. Safety and efficacy of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine (AZD1222) against SARS-CoV-2: an interim analysis of four randomized controlled trials in Brazil, South Africa, and the UK. Lancet. 2021; 397: 99-111. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)32661-1
14. Багаев А.В., Пичугин А.В., Лебедева Е.С., Лысенко А.А., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., Народицкий Б.С., Атауллаханов Р.И., Хаитов Р.М., Гинцбург А.Л. Влияние TLR-агонистов на экспрессию в антиген-презентирующих клетках целевого белка-антигена, закодированного в аденовирусном векторе. Иммунология. 2015; 36 (4): 18895. eLIBRARY ID: 24324492
15. Рогожин В.Н., Логунов Д.Ю., Щебляков Д.В., Шмаров М.М., Ходунова Е.Е., Гальцева И.В., Белоусова Р.В., Народицкий Б.С., Гинцбург А. Л. Эффективный способ доставки гена интерлейкина-2 в гемопоэтические клетки человека с использованием рекомбинант-ного аденовируса с модифицированным фибером. Acta Naturae. 2011; 3 (3): 103-10. eLIBRARY ID: 17704753.
16. Лушова А.А., Жеремян Э.А., Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Бязрова М.Г., Филатов А.В. Субпопуляции В-лимфоцитов: функции и молекулярные маркеры. Иммунология. 2019; 40 (6) 63-75. DOI: https://www.doi.org/Z10.24411/0206-4952-2019-1600917.
17. Сухова М.М., Бязрова М.Г., Банделюк А.С., Михайлов А.А., Шмаров М.М., Филатов А.В. Трансдукция В-лимфоцитов человека с помощью аденовирусных векторов различных серотипов. Иммунология. 2024; 45 (4): 435-45. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-4-435-445
18. Kirk C.J., Mulé J.J. Review: gene-modified dendritic cells for use in tumor vaccines. Hum. Gene Ther. 2000; 11: 797-806. DOI: https://doi. org/10.1089/10430340050015419
19. Sigal A., Kim J.T., Balazs A.B., Dekel E., Mayo A., Milo R. Cell-to-cell spread of HIV permits ongoing replication despite antiret-
roviral therapy. Nature. 2011; 477: 95-8. DOI: https://doi.org/10.1038/ nature10347
20. Arai T., Takada M., Ui M., Iba H. Dose-dependent transduction of vesicular stomatitis virus G protein-pseudotyped retrovirus vector into human solid tumor cell lines and murine fibroblasts. Virology. 1999; 260: 109-15. DOI: https://doi.org/10.1006/viro.1999.9773
21. Marquez-Martinez S., Vijayan A., Khan S., Zahn R. Cell entry and innate sensing shape adaptive immune responses to adenovirus-based vaccines. Curr. Opin. Immunol. 2023; 80: 102282. DOI: https://doi. org/10.1016/j.coi.2023.102282
22. Rea D., Schagen F.H.E., Hoeben R.C., Mehtali M., Havenga M.J.E., Toes R.E.M. Adenoviruses activate human dendritic cells without polariza-
tion toward a T-helper type 1-inducing subset. J. Virol. 1999; 73: 1024553. DOI: https://doi.org/10.1128/JVI.73.12.10245-10253.1999
23. Schumacher L., Ribas A., Dissette V.B., McBride W.H., Mukherji B., Economou J.S. Human dendritic cell maturation by adenovirus transduction enhances tumor antigen-specific T-cell responses: J. Immunother. 2004; 27: 191-200. DOI: https://doi.org/10.1097/00002371-200405000-00003
24. Newton K.R., Sala-Soriano E., Varsani H., Stephenson J.R., Goldblatt D., Wedderburn L.R. Human dendritic cells infected with an adenoviral vector suppress proliferation of autologous and allogeneic T cells. Immunology. 2008; 125: 469-79. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-2567.2008.02860.x
■ References
1. Nishimura N., Nishioka Y., Shinohara T., Sone S. Enhanced efficiency by centrifugal manipulation of adenovirus-mediated interleukin 12 gene transduction into human monocyte-derived dendritic cells. Hum Gene Ther. 2001; 12: 333-46. DOI: https://doi.org/10.1089/1043034015 0503966
2. Kushwah R., Hu J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 2011; 1: 20. DOI: https://doi.org/10.1186/2045-3701-1-20
3. Gong J., Avigan D., Chen D., Wu Z., Koido S., Kashiwaba M., Kufe D. Activation of antitumor cytotoxic T lymphocytes by fusions of human dendritic cells and breast carcinoma cells. Proc Nat Acad Sci USA. 2000; 97: 2715-8. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.050587197
4. Chan R.C.-F., Pang X.-W., Wang Y.-D., Chen W.-F., Xie Y. Transduction of dendritic cells with recombinant adenovirus encoding HCA661 activates autologous cytotoxic T lymphocytes to target hepatoma cells. Br J Cancer. 2004; 90: 1636-43. DOI: https://doi.org/10.1038/sj.bjc. 6601706
5. Janes H.E., Cohen K.W., Frahm N., De Rosa S.C., Sanchez B., Hural J. Higher T-cell responses induced by DNA/rAd5 HIV-1 preventive vaccine are associated with lower HIV-1 infection risk in an efficacy trial. J Infect Dis. 2017; 215:.1376-85. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/ jix086
6. Jeyanathan M., Fritz D.K., Afkhami S., Aguirre E., Howie K.J., Zganiacz A. Aerosol delivery, but not intramuscular injection, of adenovi-rus-vectored tuberculosis vaccine induces respiratory-mucosal immunity in humans. JCI Insight. 2022; 7: e155655. DOI: https://doi.org/10.1172/ jci.insight.155655
7. Hollingdale M.R., Sedegah M., Limbach K. Development of replication-deficient adenovirus malaria vaccines. Expert Rev Vaccines. 2017; 16: 261-71. DOI: https://doi.org/10.1080/14760584.2016.1228454
8. Kerstetter L.J., Buckley S., Bliss C.M., Coughlan L. Adenoviral vectors as vaccines for emerging avian influenza viruses. Front Immunol. 2021; 11: 607333. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.607333
9. Araujo N.M., Rubio I.G.S., Toneto N.P.A., Morale M.G., Tamura R.E. The use of adenoviral vectors in gene therapy and vaccine approaches. Genet Mol Biol. 2022; 45: e20220079. DOI: https://doi. org/10.1590/1678-4685-gmb-2022-0079
10. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukh-vatulin A.I., Zubkova O.V., Dzharullaeva A.S., Kovyrshina A.V., Lubenets N.L.,Grousova D.M., Erokhova A.S., Botikov A.G., Izhaeva F.M., Popova O., Ozharovskaya T.A., Esmagambetov I.B., Favor-skaya I.A., Zrelkin D.I., Voronina D.V., Shcherbinin D.N., Semikhin A.S., Simakova Y.V., Tokarskaya E.A., Egorova D.A., Shmarov M.M., Nikitenko N.A., Gushchin V.A., Smolyarchuk E.A., Zyryanov S.K., Bori-sevich S.V., Naroditsky B.S., Gintsburg A.L. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. Lancet. 2021; 397: 671-81. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)00234-8
11. Bos R., Rutten L., Van Der Lubbe J.E.M., Bakkers M.J.G., Hardenberg G., Wegmann F. Ad26 vector-based COVID-19 vaccine encoding a prefusion-stabilized SARS-CoV-2 Spike immunogen induces potent humoral and cellular immune responses. NPJ Vaccines. 2020; 5: 91. DOI: https://doi.org/10.1038/s41541-020-00243-x
12. Zhu F.-C., Li Y.-H., Guan X.-H., Hou L.-H., Wang W.-J., Li J.-X. Safety, tolerability, and immunogenicity of a recombinant adenovirus type-5 vectored COVID-19 vaccine: a dose-escalation, open-label, nonran-
domised, first-in-human trial. Lancet. 2020; 395: 1845-54. DOI: https:// doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31208-3
13. Voysey M., Clemens S.A.C., Madhi S.A., Weckx L.Y., Fole-gatti P.M., Aley P.K. Safety and effi cacy of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine (AZD1222) against SARS-CoV-2: an interim analysis of four randomized controlled trials in Brazil, South Africa, and the UK. Lancet. 2021; 397: 99-111. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20) 32661-1
14. Bagaev A.V., Pichugin A.V., Lebedeva E.S., Lysenko A.A., Shmarov M.M., Logunov D.Yu., Naroditsky B.S., Ataullakhanov R.I., Khai-tov R.M., Gintsburg A.L. Influence of TLR-agonists on expression by antigen-presenting cells of the target protein antigen encoded in adenoviral vector. Immunologiya. 2015; 36 (4): 188-95. eLIBRARY ID: 24324492. (in Russian)
15. Rogozhin V.N., Logunov D.Y., Shchebliakov D.V., Shma-rov M.M., Khodunova E.E., Galtseva I.V., et al. An efficient method for the delivery of the interleukin-2 gene to human hematopoietic cells using the fiber-modified recombinant adenovirus. Acta Naturae. 2011; 3:100-6. PMID: 22649700
16. Lushova A.A., Zheremyan E.A., Astakhova E.A., Spirido-nova A.B., Byazrova M.G., Filatov A.V. B-lymphocyte subsets: functions and molecular markers. Immunologiya. 2019; 40 (6): 63-76. DOI: https:// doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16009 (in Russian)
17. Sukhova M.M., Byazrova M.G., Bandelyuk A.S., Mikhailov A.A., Shmarov M.M., Filatov A.V. Transduction of human B lymphocytes using adenoviral vectors of various serotypes. Immunologiya. 2024; 45 (4): 43545. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-4-435-445 (in Russian)
18. Kirk C.J., Mulé J.J. Review: gene-modified dendritic cells for use in tumor vaccines. Hum Gene Ther. 2000; 11: 797-806. DOI: https://doi. org/10.1089/10430340050015419
19. Sigal A., Kim J.T., Balazs A.B., Dekel E., Mayo A., Milo R. Cell-to-cell spread of HIV permits ongoing replication despite antiret-roviral therapy. Nature. 2011; 477: 95-8. DOI: https://doi.org/10.1038/ nature10347
20. Arai T., Takada M., Ui M., Iba H. Dose-dependent transduction of vesicular stomatitis virus G protein-pseudotyped retrovirus vector into human solid tumor cell lines and murine fibroblasts. Virology. 1999; 260: 109-15. DOI: https://doi.org/10.1006/viro.1999.9773
21. Marquez-Martinez S., Vijayan A., Khan S., Zahn R. Cell entry and innate sensing shape adaptive immune responses to adenovirus-based vaccines. Curr Opin Immunol. 2023; 80: 102282. DOI: https://doi. org/10.1016/j.coi.2023.102282
22. Rea D., Schagen F.H.E., Hoeben R.C., Mehtali M., Havenga M.J.E., Toes R.E.M. Adenoviruses activate human dendritic cells without polarization toward a T-helper type 1-inducing subset. J Virol. 1999; 73: 10245-53. DOI: https://doi.org/10.1128/JVI.73.12.10245-10253.1999
23. Schumacher L., Ribas A., Dissette V.B., McBride W.H., Mukherji B., Economou J.S. Human dendritic cell maturation by adenovi-rus transduction enhances tumor antigen-specific T-cell responses: J Immu-nother. 2004; 27: 191-200. DOI: https://doi.org/10.1097/00002371-200405000-00003
24. Newton K.R., Sala-Soriano E., Varsani H., Stephenson J.R., Goldblatt D., Wedderburn L.R. Human dendritic cells infected with an adeno-viral vector suppress proliferation of autologous and allogeneic T cells. Immunology. 2008; 125: 469-79. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-2567.2008.02860.x
■ Сведения об авторах
Сухова Мария Михайловна - мл. науч. сотр. лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; асп. каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4572-1878
Бязрова Мария Георгиевна - науч. сотр. лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; асп. каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова; ассистент каф. иммунологии Мединститута ФГАОУ ВО «РУДН им. П. Лумумбы» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9858-7596
Банделюк Алина Сергеевна - мл. науч. сотр. лаб. молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8453-797X
Зубкова Ольга Вадимовна - канд. биол. наук, вед. науч. сотр. лаб. иммунобиотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-7893-8419
Михайлов Артем Андреевич - лаборант лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; студент каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8356-8077
Прилипов Алексей Геннадьевич - д-р биол. наук, зав. лаб. молекулярной генетики ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8755-1419
Шмаров Максим Михайлович - д-р биол. наук, зав. лаб. молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5268-1296
Филатов Александр Васильевич - д-р биол. наук, проф., зав. лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; проф. каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6460-9427
■ Authors' information
Maria M. Sukhova - Technician of the Immunochemistry Lab., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Student of Immunology Chair, Biology Faculty, M.V. Lomono-sov MSU; Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4572-1878
Maria G. Byazrova - Researcher of the Immunochem-istry Lab., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; PhD Student of Immunology Chair, Biology Faculty, M.V. Lomonosov MSU; Assistant of Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9858-7596
Alina S. Bandelyuk - Junior Researcher of the Molecular Biotechnology Lab., N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8453-797X
Olga V. Zubkova - PhD., Leading Researcher of the Molecular Biotechnology Lab., N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-7893-8419
Artem A. Mikhailov - Technician of the Immunochemistry Lab., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Student of Immunology Chair, Biology Faculty, M.V. Lomonosov MSU, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8356-8077
Alexei G. Prilipov - Dr.Sci., PhD, Head of the Molecular Genetics Lab., N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8755-1419
Maksim M. Shmarov - Dr.Sci., PhD, Head of the Molecular Biotechnology Lab., N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5268-1296
Alexander V. Filatov - Dr.Sci., PhD, Prof., Head of the Immunochemistry Lab., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Prof. of Immunology Chair, Biology Faculty, M.V. Lomonosov MSU, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6460-9427
