CC BY
115
ОБЗОРЫ
Современное состояние изучения эффективности неспецифических средств медицинскои защиты in vitro и in vivo в отношении коронавируса IV генотипа, вызывающего тяжёлыИ острый респираторный синдром
В. Н. ЩУКИНА, С. Я. ЛОГИНОВА, С. В. БОРИСЕВИЧ, В. П. БОНДАРЕВ
Филиал федерального государственного учреждения 48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации — Вирусологический центр, Сергиев Посад
Present State of in vitro and in vivo Studies on Efficacy of Medical Nonspecific Protective Agents with Respect to Genotype IV Coronavirus Causing Severe Acute Respiratory Syndrome
V. N. SHCHUKINA, S. YA. LOGINOVA, S. V. BORISEVICH, V. P. BONDEREV
Virological Centre, Branch of Central Research Institute No. 48 of the Ministry of Defense of the Russian Federation, Sergiev Posad
Результаты оценки эффективности различных фармакологических групп НМСЗ in vitro свидетельствуют о том, что ряд препаратов (велферон, алферон, бетаферон, рибавирин, лопинавир) оказались эффективными в отношении вируса ТОРС, что позволило исследователям рекомендовать их для оценки активности на лабораторных животных. Данные об изучении. эффективности фармакологических препаратов in vivo в отношении возбудителя ТОРС немногочисленны и судить об их эффективности затруднительно. Опасность скрытоИ циркуляции ТОРС среди диких животных в Китае обусловливает актуальность поиска новых эффективных медицинских средств защиты населения РФ в отношении этого возбудителя.
Ключевые слова: вирус тяжёлого острого респираторного синдрома, интерферон, индукторы интерферона, противовирусная эффективность, химиотерапия.
The results of the in vitro studies on the efficacy of medical nonspecific protective agents from various pharmacological groups showed that some drugs, such as velferon, alferon, betaferon, ribavirin and lopinavir were active against TOPC virus, that permitted to recommend them for estimation of their activity on laboratory animals. The data on the in vivo activity of pharmacological drugs with respect to TOPC virus are rather scanty and it is difficult to predetermine their efficacy. The danger of TOPC virus latent circulation among wild animals in China requires research of new efficient medical agents for protection of the people from the pathogen in the Russian Federation.
Key words: severe acute respiratory syndrome virus, interferon, interferon inductors, antiviral efficacy, chemotherapy.
Тяжёлый острый респираторный синдром — новое острое вирусное заболевание, характеризующееся появлением лихорадки, симптомов поражения дыхательных путей и летальностью до 10% [1]. Благодаря объединённым усилиям мирового сообщества и установлению жестких карантинных мероприятий в пострадавших странах, удалось к июлю 2003 года ликвидировать все очаги заболевания в мире. Однако с сентября 2003 года по. апрель 2004 года периодически возникали вспышки заболевания, в том числе внутрилабораторные, в Сингапуре, Тайване и Китае, которые были ликвиди-
© Коллектив авторов, 2011
Адрес для корреспонденции: 141306 Московская обл., Сергиев Посад-6. Филиал ФГУ 48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны РФ «Вирусологический центр»
рованы усилиями местных специалистов [2, 3]. Несмотря на отсутствие в настоящее время заболевания среди людей, власти Китая неоднократно, сообщали о том, что, по-прежнему, вирус ТОРС продолжает циркулировать среди диких вивьер и летучих мышей в Китае [4, 5].
Угроза возрастания эпидемиологической опасности повторного заноса возбудителя тяжёлого острого респираторного синдрома и распространения его на территории нашей страны обуславливает актуальность изучения эффективности существующих в мире различных групп неспецифических медицинских средств защиты.
Целью настоящей работы явилось обобщение зарубежного опыта изучения эффективности неспецифических средств медицинской защиты in vitro и in vivo в отношении коронавируса IV гено-
-е-
Таблица 1. Результаты оценки эффективности in vitro фармакологических противовирусных соединений специалистами государства Сингапур [8]
Класс фармакологи- Международное Патентованное Фирма- Исследованные Наличие
ческих препаратов непатентованное название производитель концентрации подавления
название фарм- фармпрепарата препарата цитопатического
препарата действия
Интерфероны Интерферон а-2а Роферон Roche 1x105 ME/мл Нет
Интерферон а-2Ь Интрон A Schering-Plough 5x105 ME/мл Нет
Интерферон а-п1 Велферон Glaxo-Smith-Kline 5x105 ME/мл Есть
Интерферон а-п3 Алферон Hemispheryx 1x105 ME/мл Есть
Интерферон в- 1а Ребиф Serono International 5x105 ME/мл Нет
Интерферон в- 1Ь Бетаферон Schering AG 1x105 ME/мл Есть
Нуклеозидные аналоги Ацикловир — Faulding 1 мг/мл Нет
Ганцикловир Цимевене Roche 50 мг/мл Нет
Рибавирин — ICN Pharma 10 мг/мл Есть
Ингибиторы протеаз Индинавир Криксиван Merk 1x10-2 M/мл Нет
Нелфинавир Вирацепт Roche 1x10-3 M/мл Нет
Сакуйнавир Фортовазе 1x10-3 M/мл Нет
Ингибиторы обратной Ламивудин Эпивир Glaxo-Smith-Kline 1x10-1 M/мл Нет
транскриптазы Зидовудин Ретровир 10 мг/мл Нет
Ингибиторы нейро- Осельтамивир Тамифлю Roche 1xм/мл Нет
минидазы Занамивир Реленза Glaxo-Smith-Kline 1x10-1 M/мл Нет
Другие Амантадин Сумметрел Novartis 1 мг/мл Нет
Другие Фоскарнет Фоскавир AstraZeneca 8x10-1 M/мл Нет
Таблица 2. Результаты определения концентраций препаратов интерферона, вызывающих подавление репликации вируса ТОРС [8]
Инфицирующая доза, БОЕ
Концентрация препарата ... (МЕ/мл), полностью подавляющая размножение вируса ТОРС
велферон бетаферон алферон
10000 500 000 10 000 10 000
1000 5 000 1 000 1 000
100 500 10 1
типа, вызывающего тяжёлый острый респираторный синдром.
Прежде чем рассматривать вопросы изучения неспецифических средств медицинской защиты в отношении коронавируса IV генотипа, вызывающего тяжёлый острый респираторный синдром, необходимо вернуться к моменту появления заболевания в мире. Фактически, к началу эпидемии отсутствовали какие-либо эффективные лекарственные соединения, а терапия больных ТОРС практически осуществлялась эмпирически. В различных странах мира использовались традиционные противовирусные соединения, эффективность которых была доказана в отношении других вирусных инфекций. Благодаря широкому спектру действия, включающего как ДНК, так и РНК-содер-жащие вирусы, чаще всего назначался рибавирин, если не наблюдалось улучшения состояния больных при стандартной антибиотикотерапии или в анамнезе был контакт с больным ТОРС. Важно отметить, что поиск эффективных соединений в отношении вируса ТОРС проводился параллельно разрабатываемым биологическим методам титрования и изучения свойств возбудителя в культурах клеток и на лабораторных животных.
Поиск веществ, обладающих активностью против вируса ТОРС, в настоящее время ведётся
среди средств, ингибирующих транскрипцию вирусной РКН, синтез белков, активность протеаз, соединение с клеточным рецептором — ангиотензин конвертирующим ферментом 2, внедрение вируса в цитоплазму клетки. При этом изучается возможность клинического использования синтетических пептидов, которые копируют области S-белка, белков слияния HR2 и субстраты протеиназ вируса ТОРС [6, 7].
В одной из первых опубликованных работ, посвященных поиску противовирусных соединений, была оценена эффективность существующих фармакологических препаратов, направленных на подавление цитопатического действия вируса в культуре клеток Vero Е-6. Исследовали 18 фармакологических препаратов 7 различных классов (табл. 1) [8]. При этом выявлена эффективность in vitro только 4 их 18 препаратов, относящихся к группе интерферонов (велферон, алферон, бетаферон) и нуклеозидным аналогам (рибавирин). В дальнейшем специалисты установили концентрации велферона, алферона и бетаферона, эффективно подавляющие цитопати-ческое действия возбудителя ТОРС, штамм 2003VA2774, в культуре клеток Vero E-6, инфицированной в дозах 1000 и 100 БОЕ (табл. 2).
Военные специалисты США, оспаривая результаты вышеизложенных исследований, дока-
АНТИБИОТИКИ И ХИМИОТЕРАПИЯ, 2011, 56; 9-10
>
н-
к
Таблица 3. Методы оценки эффективности медицинских средств защиты в отношении возбудителя ТОРС in vivo
-Q-
Лабораторное животное Способ моделирования Критерии оценки эффективности Оцениваемый препарат Эффективность Источник
Белая мышь Интраназально 6 ^ БОЕ вируса ТОРС Снижение и продолжительность репродукции вируса в лёгких Рибавирин, инозинмонофосфат, мизорибин и микофеноловая кислота Не эффективен 38
Снижение репродукции Альфа интерферон в дозе 10000 Снижает на 1 ^ ЦПД^0 36
вируса в лёгких и 32000 МЕ через 4 часа после инфицирования, затем однократно ежедневно в течение 3 дней. Амплиджен внутрибрюшинно, 10 мг/кг за 4 часа до инфицирования. Нелфинавир, бета-В-М4-гидрокси-цидин, калпаин Ингибитор VI, 3 дезанефаноцин хлорохин, пентоксифилин альферон (человеческий лейкоцитарный интерферон-а-пЗ) Снижают на 3 ^ ЦПД^0 Не эффективны Не эффективны
Тоже Вакцина Вирус не обнаружен 35
Снижению ректальной температуры Тоже Не эффективна 39
Образование вируснейтрали- Вакцина Эффективна 40-43
зующих антител
Образование вируснейтрали- Рекомбинантная вакцина Эффективна 44
зующих антител
Защита от инфицирования
Макака циномольгус Инфицирование штаммом 02-01 вируса ТОРС после вакцинации Образование вируснейтрали-зующих антител Снижение репродукции вируса в лёгких Инактивированная, очищенная вакцина (штамм В1-01) Эффективна Вирус не обнаружен 45
Макака резус Образование вируснейтрали-зующих антител Рекомбинантная вакцина Эффективна 43
Инфицирование штам- Защита от инфицирования Инактивированная вакцина 46
мом N8-1 вируса ТОРС Образование
через 3 недели после вируснейтрализующих антител
иммунизации
Золотистый сирийский Интраназально Снижение образования Моноклональные человеческие Эффективны 47
хомяк 3 ^ЦПД^о вируса ТОРС иммуноглобулина О Снижение репродукции вируса в лёгких антитела в дозе выше 40 мг/кг Более 3 ^ ЦПД50
Хорек Защита от инфицирования Рекомбинантная вакцина Не эффективна 48
н
а
д
X
а
ч
ю
CD
-Є-
4^
СО
О
F1
Со
О
id
О-
зали, что интерферон-в-1а, продукции кампании Serono International, Швейцария, является эффективным против вируса ТОРС. Так, интерфе-рон-в-la в концентрациях 50 ME/мл и 500 ME/мл, ингибировал на 50% соответственно при внесении до и после инфицирования репродукцию вируса ТОРС, штаммов Tor2, Tor7 и Urbani, в культуре клеток Vero E-6 при множественности инфицирования 0,1 БОE на клетку. Препарат эффективно снижал уровень накопления возбудителя более чем на 99,5% при внесении его до инфицирования и до 90% при внесении препарата после заражения культуры клеток [9].
Эти же сведения о высокой эффективности интерферона-в-la (интерферон альфакон 1) представлены другими исследователями [10]. По мнению зарубежных специалистов, вирус ТОРС ингибирует действие интерферона на размножение, предотвращая индукцию интерферона-^ в клетках и/или деактивируя гены-посредники антивирусного действия интерферона-а [11]. Следует отметить, что другие цитокины (ИЛ 4 и интерферон-у) снижают экспрессию на поверхности клетки ангиотензин конвертирующего фермента 2 и уровень мРНК этого рецептора, благодаря чему уменьшается восприимчивость культуры клеток Vero E-6 к коронавирусу ТОРС [12, 13].
Помимо поиска эффективных соединений среди интерферонов, активно оценивалась эффективность химиопрепарата рибавирина и его аналогов. По результатам исследований in vitro установлено, что в нетоксичных концентрациях (>600 мкг/мл) препарат не оказывал эффективного воздействия на вирус ТОРС [14]. Однако в более высоких (токсичных) дозах (600—5000 мкг/мл) рибавирин полностью подавляет цито-патическую активность возбудителя [8, 15]. Другими исследователями выявлена умеренная эффективность рибавирина. Так, рибавирин снижает репродукцию возбудителя на 1,0 lg БОE/мл в концентрации 40 мкг/мл и подавляет бляшкообразование вируса ТОРС, штаммов Франкфурт-1 и HKU39849, на 50% при 20 и 80 мкг/мл соответственно [16]. Недавно синтезированные 1,2,3 триазол и 1,2,4-триазол гетероциклические карбоциклические аналоги нуклеозида, также выявили умеренную противовирусную активность ^Д50 39 мкМ и 21 мкМ соответственно) в отношении вируса ТОРС [17].
Зарубежными исследователями была изучена противовирусная эффективность ряда производных адамантана: бананин, иодобананин, ванили-бананин и эубананин. В ходе иммунофлюорес-центного исследования химиопрепарат бананин оказался более эффективным за счёт ингибирования внутриклеточной репликации вируса ТОРС. Химиотерапевтический индекс бананина приближался к 8 [18]. Цитопатическая актив-
ность другого химиопрепарата дипептидил N, N-этан глютаминил флюорометила была изучена в культуре клеток Vero. Препарат обладал высокой противовирусной эффективностью (индекс селективности был более 40) на фоне низкой токсичности [19]. Другой химиопрепарат — цинан-серин, известный антагонист серотонина, в концентрации 5 мкМ подавлял 50% размножение вируса. При концентрации препарата от 19 до 34 мкМ уровень РНК вируса ТОРС снижался более чем на 4 lg ЕД50 [20].
Специалисты США и Китая оценили эффективность существующих в настоящее время противовирусных ретровирусных препаратов в отношении возбудителя ТОРС. Ими выявлено, что химиопрепарат лопинавир и его аналоги обладают более высокой противовирусной эффективностью in vitro по сравнению с рибавирином [21, 22]. Лопинавир подавляет цитопатическое действие вируса ТОРС в концентрации 4 мкг/мл, а в сочетании с 6,25 мкг/мл рибавирина — в концентрации 1 мкг/мл при инфицирующей дозе вируса 50 ЦПД50 [21]. Помимо лопинавира, у его аналогов (ритона-вир, никлозамид и промазин) также выявили ингибирующую активность против возбудителя ТОРС [23, 24]. Другими исследователями показана эффективность олигопептидов, октапептидов, этакринтертбутиламидовой кислоты и её амида при ингибировании протеазы М (про) вируса ТОРС [25—29]. Также специалистами были синтезированы пептиды, представляющие различные области ангиотензин конвертирующего фермента 2 и оценена их противовирусная активность. Два из них (п. о. 22—44 и 22—57) проявили умеренную антивирусную активность, поэтому исследователи рекомендовали их для оценки эффективности in vivo [30].
Помимо интерферона и химиотерапевтических средств была изучена противовирусная эффективность средств, полученных из различных растений. В настоящее время для специалистов большой интерес представляют низкомолекулярные антиметаболиты растительного происхождения. Глицирризин (экстракт, получаемый из корня солодки) ингибировал репликацию вируса ТОРС in vitro. Введение 2-ацетамидо-в^-глако-пиранозиламина в цепь гликозида глицирризина десятикратно увеличивает активность по сравнению с исходным веществом. Амиды и конъюгаты глицирризина с двумя остатками аминокислоты и свободной 30-C00H функцией обеспечивают 70-кратное увеличение активности против ТОРС. Однако увеличивается их цитотоксичность, что ведёт к снижению селективности данной серии препаратов [31—33]. Другой растительный препарат цефарантин (бибензил изогуанолин алкалоид, извлечённый из китайского лекарственного растения Stephania cepharantha Hayata) проявил
антивирусное действие против вируса ТОРС, штамм F 69 [34].
Новое направление в разработке этиотропных средств против вирусных инфекций основывается на прицельном подавлении репликации комплементарными олигонуклеотидами (феномен интерференции РКН). Механизм действия синтетической РКН следующий: при попадании в клетку двухцепочечная РНК разрезается РНКаза III-подобным ферментом на короткие двухцепочечные РНК, содержащие 21—23 последовательности нуклеотида (si РКН). Эти короткие интерферирующие РНК включаются в состав сложенного эффекторного белкового комплекса RISC, обнаруживающего и разрушающего мРНК-мишень, соответствующую данной РНК. Введение в клетку si РКН против мРНК вируса ТОРС приводит к сайлепсингу вирусного белка. Интерференцию РНК можно использовать в широком спектре эукариот для полного подавления экспрессии генома с определенной последовательностью. В культуре клеток Vero E-6 эффект синтетических РНК сконструированных к участкам РНК, кодирующим структурные белки E, М, и N коронавируса ТОРС, был выражен в уменьшении целевой экспрессии генов более чем на 80% при концентрации 60 нМ [35].
Следовательно, различные фармакологические группы препаратов, оказались эффективными in vitro в отношении вируса ТОРС, что позволило рекомендовать их для оценки их активности на лабораторных животных.
Однако сложность проведения доклинических испытаний эффективности неспецифических медицинских средств защиты, в отношении возбудителя ТОРС, связанная с трудностями разработки экспериментальных форм данной инфекции, не позволила большинству исследователей в короткие сроки оценить эффективность различных лекарственных препаратов. Фактически, лишь некоторые фармакопейные препараты были доклинически изучены параллельно в госпиталях (больницах) пострадавших стран. При этом поиск новых эффективных соединений НМСЗ in vitro и in vivo был свёрнут практически через год после
ЛИТЕРАТУРА
1. Revised U. S. Surveillance case definition for severe acute respiratory syndrome (SARS) and update on SARS cases — United States and worldwide, December 2003. Weekly 2003; 52: 49: 1202—1206.
2. Severe acute respiratory syndrome (SARS) in Singapore — update 2. SARS case in Singapore linked to accidental laboratory contamination. 24 September 2003. Disease 0utbreak Reported. http://www.who.int/csr/don/2003_09_24/en/index.html.
3. China confirms SARS infection in another previously reported case; summary of cases to date — Update 5. 30 April 2004. http://www.who.int/csr/don/2004_04_30/en/index.html.
4. Guan Y, Zheng B. J., He Y. Q. et al. Isolation and characterization of viruses related to the SARS coronavirus from animals in southern China. Science 2003; 302: 276—278.
ОБЗОРЫ
ликвидации последних очагов заболевания, а разработка экспериментальных лабораторных форм инфекции (трансгенной линии белых мышей) осуществлялась с целью оценки эффективности создаваемых специфических средств профилактики и лечения (вакцин, иммуноглобулинов) ТОРС (табл. 3). Именно из-за этого количество работ, посвящённых оценке эффективности фармакопейных НМСЗ, минимально.
В ходе доклинической оценки эффективности ряда соединений на белых мышах установлено, что интраперитонеальное введение мышиного интерферона-а в дозах 10 000 и 32 000 МЕ по схеме экстренной профилактики (через 4 часа после инфицирования, затем однократно ежедневно в течение 3 дней) снижало титр вируса в лёгких на 1 lg ЦПД50. При более высокой дозе 100000 МЕ интерферон-а уровень накопления возбудителя ТОРС в лёгких выявить не удалось, так как чувствительность метода титрования была ниже пределов его обнаружения. Были изучены и другие препараты (нелфинавир, бете^-Ж-гидрокси-цидин, калпаин ингибитор VI, 3 дезанефаноцин, хлорохин, пентоксифилин и альферон), однако они не проявили противовирусную эффективность в отношении возбудителя ТОРС [46].
Эффективность интерферона-а в отношении вируса ТОРС была подтверждена и на макаках резус путём количественного определения вирусной РНК методом RT-ПЦР [37].
Таким образом, результаты оценки эффективности различных. фармакологических групп НМСЗ свидетельствуют о том, что ряд препаратов (велфе-рон, алферон, бетаферон, рибавирин, лопинавир) оказались эффективными в отношении вируса ТОРС, что позволило исследователям рекомендовать их для оценки активности на лабораторных животных. Данные об изучении эффективности фармакологических препаратов in vivo в отношении возбудителя ТОРС малочислены, и судить об их эффективности затруднительно. Опасность скрытой циркуляции ТОРС среди диких животных в Китае обусловливает актуальность поиска новых эффективных медицинских средств защиты населения РФ в отношении этого возбудителя.
5. Li W., Shi Z., Yu M. et al. Bats are natural reservoirs of SARS-like coro-naviruses. Science 2005; 310: 676—679.
6. Wu Y. S., Lin W. H., Hsu J. T., Hsieh H. P. Antiviral drug discovery against SARS-CoV. Curr Med Chem 2006; 13: 17: 2003—2020.
7. Shigeta S., Yamase T. Current status of anti-SARS agents. Antivir Chemother 2005; 16: 1: 23—31.
8. Tan E. L. C., Ooi E. E., Tan H. C. et al. Inhibition of SARS coronavirus infection in vitro with clinical approved antiviral drugs. Emerg Infect Dis 2004; 10: 4: 581—586.
9. Hensley L. E., Fritz E. A., Jahrling P. B. et al. Interferon-в 1a and SARS coronavirus replication. Emerg Infect Dis 2004; 10: 2: 317—319.
10. Paragas J., Blatt L. M., Hartman C. et al. Interferon alfacon1 is an inhibitor of SARS-coronavirus in cell-based models. Antiviral Res 2005; 66: 2—3: 99—102.
-e-
11. Spiegel M, Pichlmair A., Martinez-Sobrido L. et al. Inhibition of beta interferon induction by severe acute respiratory syndrome coronavirus suggests a two-step model for activation of interferon regulatory factor
3. J Virol 2005; 79: 4: 2079-2086.
12. De Lang A., Osterhaus A. D., Haagmans B. L. Interferon-gamma and interleukin-4 downregulate expression of the SARS coronavirus receptor ACE2 in Vero E6 cells. Virology 2006; 353: 2: 474-481.
13. Zorzitto J., Galligan C. L., Ueng J. J., Fish E. N. Characterization of the antiviral effects of interferon-alpha against a SARS-like coronavirus infection in vitro. Cell Res 2006 16: 2: 220—229.
14. Lau Y. L, Peiris J. M. Pathogenesis of severe acute respiratory syndrome. Curr Opin Immunol 2005; 17: 4: 404—410.
15. Koren G, King S., Knowles S., Phillips E. Ribavirin in treatment of SARS: A new trick for an old drug? Can Med Ass J 2003; 168: 10: 412—414.
16. Saijo M, Morikawa S., Fukushi S. et al. Inhibitory effect of mizoribine and ribavirin on the replication of severe acute respiratory syndrome (SARS)-associated coronavirus. Antiviral Res 2005; 66: 2—3: 159—163.
17. Cho J. H, Bernard D. L., Sidwell R. W. et al. Synthesis of cyclopentenyl carbocyclic nucleosides as potential antiviral agents against orthopoxviruses and SARS. J Med Chem 2006; 49: 3: 1140—1148.
18. Tanner J. A., Zheng B. J., Zhou J. et al. The Adamantane-derived bananins are potent inhibitors of the helicase activities and replication of SARS coronavirus. Chem Biol 2005; 12: 3: 303—311.
19. Zhang H. Z, Zhang H., Kemnitzer W. et al. Design and synthesis of dipeptidyl glutaminyl fluoromethyl ketones as potent severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) inhibitors. J Med Chem 2006; 49: 3: 1198—1201.
20. Chen L., Gui C., Luo X., Yang Q. et al. Cinanserin is an inhibitor of the 3c-like proteinase of severe acute respiratory syndrome coronavirus and strongly reduces virus replication in vitro. J Virol 2005; 79: 11: 7095—7103.
21. Chan K. S., Lai S. T., Chu C. M. Treatment of severe acute respiratory syndrome with lopinavir/ritonavir: a multicentre retrospective matched cohort study. Hong Kong Med J 2003; 9: 399—406.
22. Yazdanpanah Y., Guery B. Antiretroviral drugs in severe acute respiratory syndrome. Presse Med 2006; 35; 1: 2: 105—107.
23. Zhang X. W., Yap Y. L. Old drugs as lead compounds for a new disease? Binding analysis of SARS coronavirus main proteinase with HIV, psychotic and parasite drugs. Bioorg Med Chem 2004; 12: 10: 2517—2521.
24. Savarino A. Expanding the frontiers of existing antiviral drugs: possible effects of HIV-1 protease inhibitors against SARS and avian influenza. J Clin Virol 2005; 34: 3: 170—178.
25. Du Q. S., Sun H., Chou K. C. Inhibitor design for SARS coronavirus main protease based on «distorted key theory». Med Chem 2007; 3: 1: 1—6.
26. Gan Y. R., Huang H., Huang Y. D. et al. Synthesis and activity of an octapeptide inhibitor designed for SARS coronavirus main proteinase. Peptides 2006; 27: 4: 622—625.
27. Zhang R., Wei D. Q., Du Q. S., Chou K. C. Molecular modeling studies of peptide drug candidates against SARS. Med Chem 2006; 2: 3: 309—314.
28. Kaeppler U., Stiefl N., Schiller M. et al. A new lead for nonpeptidic active-site-directed inhibitors of the severe acute respiratory syndrome coronavirus main protease discovered by a combination of screening and docking methods. J Med Chem 2005; 48: 22: 6832—6842.
29. Lu I. L, Mahindroo N., Liang P. H. et al. Structure-based drug design and structural biology study of novel nonpeptide inhibitors of severe acute respiratory syndrome coronavirus main protease. J Med Chem 2006; 49: 17: 5154—5161.
30. Han D. P., Penn-Nicholson A., Cho M. W. Identification of critical determinants on ACE2 for SARS-CoV entry and development of a potent entry inhibitor. Virology 2006; 350: 1: 15—25.
31. Hoever G., Baltina L., Michaelis M. et al. Antiviral activity of glycyrrhiz-ic acid derivatives against SARS-coronavirus. J Med Chem 2005; 48: 4: 1256—1259.
32. Morgenstern B., Bauer G., Chandra P. et al. Glycyrrhizin, an active component of liquorice roots, and replication of SARS-associated coronavirus. Lancet 2003; 361: 2045—2046.
33. Yu Z., Ohtaki Y., Kai K. et al. Critical roles of platelets in lipopolysac-charide-induced lethality: effects of glycyrrhizin and possible strategy for acute respiratory distress syndrome. Int Immunopharmacol 2005; 5: 3: 571—580.
34. Chuan-hai Zh., Yi-fei W., Xin-jian Liu et al. Antiviral activity of cepha-ranthine against severe acute respiratory syndrome coronavirus in vitro. Chin Med J 2005; 118: 6: 493—496.
35. Fanci A. S., Touchette N. A., Folkers G. K. Emerging infections diseases: a 10-years perspective from the national institute of allergy and infections diseases. Emerg Infect Dis 2005; 11: 4: 519—525.
36. Barnard D. L., Day C. W., Bailey K. et al. Evaluation of immunomodu-lators, interferons and known in vitro SARS-CoV inhibitors for inhibition of SARS-CoV replication in BALB/c mice. Antiviral Chem Chemother 2006; 17: 5: 275—284.
37. Haagmans B. L., Kuiken T., Martina B. E., Fouchier R. A. et al. Pegylated interferon-alpha protects type 1 pneumocytes against SARS coronavirus infection in macaques. Nat Med 2004; 10: 290—293.
38. Barnard D. L., Day C. W., Bailey K. et al. Enhancement of the infectiv-ity of SARS-CoV in BALB / c mice by IMP dehydrogenase inhibitors, including ribavirin. Antiviral Res. 2006; 71: 1: 53—63.
39. Чепурнов А. А., Дадаев А. А., Зубавиченко H. М. и др. Попытка получения вакцины против Тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС). Тез. Докл. Международной конф. «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний». Сосновка, Новосибирская обл., Россия, 8—10 сентября 2004 г. ЦЭРИС, Новосибирск, 2004; 286.
40. Jin H., Xiao C., Chen Z. et al. Induction of Th1 type response by DNA vaccinations with N, M, and E genes against SARS-CoV in mice. Biochem Biophys Res Commun 2005; 328: 4: 979—986.
41. Faber M., Lamirande E. W., Roberts A. et al. A single immunization with a rhabdovirus-based vector expressing severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) S protein results in the production of high levels of SARS-CoV-neutralizing antibodies. J Gen Virol 2005; 86: 5: 1435—1440.
42. Zhang C. H., Lu J. H., Wang Y. F. et al. Immune responses in Balb / c mice induced by a candidate SARS-CoV inactivated vaccine prepared from F69 strain. Vaccine 2005; 24: 23: 3196—3201.
43. Chen Z., Zhang L., Qin C. et al. Recombinant modified vaccinia virus Ankara expressing the spike glycoprotein of severe acute respiratory syndrome coronavirus induces protective neutralizing antibodies primarily targeting the receptor binding region. J Virol 2005; 5: 79: 2678—2688.
44. Bisht H., Roberts A., Vogel L. et al. Neutralizing antibody and protective immunity to SARS coronavirus infection of mice induced by a soluble recombinant polypeptide containing an N-terminal segment of the spike glycoprotein. Virology 2005; 334: 2: 160—165.
45. Qin E., Shi H., Tang L., Wang C. et al Immunogenicity and protective efficacy in monkeys of purified inactivated Vero-cell SARS vaccine. Vaccine 2006; 24: 7: 1028—1034.
46. Zhou J., Wang W., Zhong Q. et al. Immunogenicity, safety, and protective efficacy of an inactivated SARS-associated coronavirus vaccine in rhesus monkeys. Ibid 2005; 23: 3202—3209.
47. Roberts A., Thomas W. D., Guarner J. et al. Therapy with a Severe Acute Respiratory Syndrome-associated coronavirus-neutralizing human monoclonal antibody reduces disease severity and viral burden in golden syrian hamsters. J Infect Dis 2006; 193: 685—692.
48. Czub M., Weingart H., Czub S. et al. Evalution of modified vaccinia virus Ankara based recombinant SARS vaccine in ferrets. Vaccine 2005; 23: 17—18: 2273—2279.
