Состояние антимикробного иммунитета у больных гнойным верхнечелюстным синуситом Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

3. Гнойные заболевания лёгких и плевры / под ред. проф. В.В. Бойко и А.К. Флорикяна. -Харьков: «Прапор». - 2007 - 576 с.

4. Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Exel. -К. МОРИОН. - 2001. - 408 с.

5. Малоштан А.В., Бойко В.В., Тищенко А.М., Криворучко И.А. Лапароскопические технологии и их интеграция в билиарную хирургию. -X.: СИМ. - 2005. - 367 с.

6. Cowen М.Е., Johnston M.R. // Compr. Ther. - 1998. - № 10. - P. 40-45.

7. Wqsowski Dariusz, Kuzdzal Jaroslaw, Reifland Agnieszka, et al //Pol. prz. chir. - 2002. -№ 1. - C. 54-60/

КЛІНІЧНІ АСПЕКТИ ВИКОРИСТАННЯ БІПОЛЯРНОЇ КОАГУЛЯЦІЇ В РЕЖИМІ АВТОМАТИЧНОГО ПЕРЕРИВАННЯ ПРИ ДЕКОРТИКАЦІЇ ЛЕГЕНІ

/і. В. Макаров

Харківський державний медичний університет, Україна РЕЗЮМЕ

Використання біполярної коагуляції в режимі автоматичного переривання при декортикації легені дозволяє уникнути ускладнень пов’язаних з впливом електричного струміння на оточуючи тканини та скоротити термін перебування в стаціонарі.

КЛЮЧЕВІ СЛОВА: декортикації легені, біполярна коагуляція

CLINICAL ASPECTS OF APPLICATION OF BIPOLAR COAGULATION WITH AUTOMATIC INTERRUPTION REGIME AT DECORTICATIONS OF LANG

V. V. Makarov

Kharkiv State Medical University, Ukraine SUMMARY

Application of bipolar coagulation with using automatic interruption regime at decortications of lang allows to avoid the complication connected adjoining tissues and reduce the terms of clinical treatment of patents in permanent hospital.

KEY WORDS: decortications of lang, bipolar coagulation.

УДК: 616.216.1: 616.379-008.64

СОСТОЯНИЕ АНТИМИКРОБНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ГНОЙНЫМ ВЕРХНЕЧЕЛЮСТНЫМ СИНУСИТОМ

Е.В. Огнивенко1, Н.Н. Попов1, Е.А. Романова2

'Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина, Украина

'Государственное учреждение «Институт микробиологии и иммунологии имени И.И. Мечникова

АМН Украины», Харьков

РЕЗЮМЕ

Состояние антимикробного иммунитета было изучено у 26 больных хроническим гнойным верхнечелюстным синуситом в фазе обострения при сопуствующем инсулинзависимом сахарном диабете (1 группа) и 28 больных хроническим гнойным верхнечелюстным синуситом, не страдающих эндок-ринопатиями - 2 группа. Развитие гнойного верхнечелюстного синусита у лиц с ИЗСД протекает на фоне снижения активности основных противомикробных факторов иммунитета, аффинности продуцируемых антител, опсонирующих свойств сыворотки, фагоцитарной и биоцидной активности нейт-рофилов.

Снижение биоцидности нейтрофилов ассоциируется с нарушениями как кислородзависимых, так и кислороднезависимых антимикробных механизмов.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: антимикробный иммунитет, нейтрофилы

В возникновении и развитии хронических риносинуситов наряду с особенностями возбудителя, его патогенными, вирулентными и инвазивными свойствами большую роль играют иммунные нарушения как системного, так и местного характера, расстройства во взаимодействии различных звеньев иммунной системы [1, 3].

Известно, что ведущую роль в элиминации инфекционных агентов из организма играют клетки с фагоцитарными свойствами. Фагоциты поглощают и переваривают микробы. Антитела и комплемент выступают в качестве опсонинов, способствуя этому процессу. Комплемент также обладает прямым механизмом лизиса микробных клеток.

Учитывая, что разработка оптимального алгоритма терапии невозможно без учета характера изменений в иммунореактивности организма, целью настоящей работы явилось изучение активности факторов антимикробного иммунитета у больных хроническим гнойным верхнечелюстным синуситом (ХГВС), страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом (ИЗСД).

Исследования выполнены в рамках научно-исследовательской работы «Разработка эффективных технологий реабилитации иммунной системы детей и взрослых, страдающих инфекционно-воспалительными заболеваниями ЛОР-органов», № госрегистра-ции 01511002857.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Состояние антимикробного иммунитета было изучено у 29 больных хроническим гнойным верхнечелюстным синуситом в фазе обострения при сопутствующем ИЗСД - 1 группа (основная) и 29 больных хроническим гнойным верхнечелюстным синуситом, не страдающих эндокринопатиями - 2 группа (сравнения). Возраст больных составил от 18 до 50 лет. Степень тяжести ИЗСД определялась как среднетяжелая. Контрольная группа была сформирована из 30 здоровых лиц.

Все больные проходили комплекс общеклинических исследований.

Программа иммунологических исследований включала определение фагоцитарной активности нейтрофилов, эффективности внутриклеточного киллинга бактерий, состояния микробицидных систем клеток, опсонизи-рующих свойств сыворотки, титра антител к этиологическим инфекционным возбудителям, аффинности вырабатываемых антител, содержания основных классов иммуноглобулинов и комплемента в сыворотке крови.

Нейтрофилы из периферической крови выделяли на градиенте двойной плотности

фиколла-верографина (1,093:1,077).

Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали по их способности поглощать бактерии S. aureus (штамма 209). Для этого смешивали 1 мл суспензии нейтрофилов (107 клеток) и 1 мл взвеси бактерий (109) в растворе Хенкса. Смесь инкубировали 30 мин при температуре 31С при постоянном п о-мешивании. По окончании процедуры на стеклах готовили мазки, которые окрашивали по Романовскому-Гимзе. Определяли фагоцитарное число (ФЧ - число фагоцитирующих клеток) и фагоцитарный индекс (ФИ - число бактерий, поглощенных одной клеткой). Эффективность фагоцитоза опсо-низированных бактерий изучали аналогичным способом. Опсонизацию бактерий проводили в растворе Хенкса, содержащем 20% термоинактивированной сыворотки больных (аутосыворотки) или сыворотки здоровых доноров (пул от 5 доноров) в течение 30 мин при 37°С.

Эффективность внутриклеточного киллинга (ВК) оценивали по методу S.Nielsen [10]. Число поглощенных, но живых стафилококков определяли по высеву лизата лейкоцитов по методу Гольда на чашки Петри с мясопептонным агаром. Лизис лейкоцитов вызывали путем добавления 3-кратного объема воды.

Кислородзависимую метаболическую активность фагоцитов изучали в спонтанном и индуцированном НСТ-тесте, результаты учитывали морфологически и выражали в процентах формазанположительных клеток. В качестве стимулятора использовали взвесь убитых бактерий S.aureus (штамм 209) в дозе 109/мл.

Активность миелопероксидазы (МПО) и катионных белков (КБ) в нейтрофилах оценивали цитохимически (Э. Пирс, 1962; В.Е. Лигачевский и соавт., 1981). Об активности МПО и катионных белков судили по среднему цитохимическому коэффициенту (СЦК), которые вычисляли в соответствии с рекомендациями авторов.

Титр антител к этиологическим инфекционным возбудителям и общей антигенной детерминанте (ОАД) бактерий определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) [5]. Оптическую плотность (ОП) исследуемых образцов учитывали на аппарате «Star Fax 303 Plus». Ставили два контроля: контроль сыворотки (лунки не сенсибилизировали антигеном) и контроль антител (в лунки не вносили сыворотку). В качестве отрицательного стандарта использовали пул сывороток 10 здоровых доноров. Титр антител выражали в относительных единицах (ОЕ), ВЫЧИСЛЯЯ ПО формуле ОЕ=ОП45о-630 сы-

воротки болъного/ОП450_630 здоровых лиц.

В качестве бактериальных антигенов использовали ультразвуковые дезинтегранты, приготовленные из односуточной культуры микробных тел, убитых нагреванием в течение 2 часов на кипящей водяной бане [7].

Аффинность антител (IgG) оценивали с помощью относительной величины по методике R. Luxton и Е. Tompson [9], Я.И. Тель-нюк с соавт. [4]. Значения аффинности вычисляли по формуле и выражали в относительных единицах (ОЕ):

ОЕ=А5х12+А4:5х11+А4хЮ+А3:5х9,

где А5, А45, А4. А35 - относительное содержание антител, оставшихся в лунках планшета после внесения раствора тиоцианата натрия соответствующей концентрации по отношению к исходному уровню антител.

Концентрацию иммуноглобулинов определяли спектрофотометрическим методом [8].

Активность комплемента оценивали по

50% гемолизу [6].

Активность лизоцима в клетках определяли турбодиметрически [2].

Математическую обработку полученных данных проводили с использованием программы 81айзйса 6.0. Для выявления значимых различий сравниваемых показателей использовали ^критерий Стьюдента. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05. Определяли среднее арифметического значения М и его среднеквадратичное отклонение о.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

Проведенные исследования показали, что у лиц при сопутствующем ИЗСД обострение ХГВС протекает на фоне повышения концентрации и активности комплемента и сниженых значений ^А. Подобная тенденция прослеживается и у больных группы сравнения, однако в меньшей степени выраженности (табл. 1).

Таблица 1

Содержание иммуноглобулинов и комплемента в сыворотке крови больных ХГВС (М±о)

Показатели Здоровые лица Больные хгвс+изсд Больные ХГВС без ИЗСД

IgA г/л 1,7+0,16 1,4+0,17 1,5±0,16

IgM г/л 1,8+0,16 1,6+0,19 1,7+0,18

IgG г/л 12,6+1,14 15,2+1,17 13,2+1,14

Комплемент, у.е 1,4+0,12 2,1+0,21* 1,7+0,16

- р<0,05 по сравнению с показателями здоровых лиц

У всех обследованных больных основной группы и группы сравнения обнаружилось достоверное повышение титра антител к бактериальным этиологическим факторам. Высокие титры антител были выявлены практически ко всем изученным микробам (табл. 2). Однако более высокий их уровень определялся у лиц не страдающих ИЗСД.

В сыворотке больных также определялось

Содержание антител (ОЕ) к в сыворотке крови

повышение титра антител к общей антигенной детерминате (ОАД) бактерий.

Дальнейшие исследования показали, что вырабатываемые антитела у больных хроническим верхнечелюстным синуситом при сопутствующем ИЗСД проявляют сниженную аффинность, по сравнению со здоровыми лицами и больными ХГВС без ИЗСД

Т аблица 2

инфекционным возбудителям больных ХГВС (М±о)

*

Микробы Больные ХГВС+ИЗСД Больные ХГВС без ИЗСД

S. pneumoniae 1,7+0,2 1,9+0,2

M. catarrhalis 1,7+0.2 1,9+0.2

H. influenza 1,6+0,2 1,8+0,2

S. aureus 1,6+0,2 1,8+0,2

S. pyogenes 1,6+0,2 1,8+0,2

ОАД бактерий 1,6+0,2 1,8+0,2

Т аблица 3

Аффинность антител (у.е) к ОАД микробов больных ХГВС (М±о)

Здоровые лица Больные ХГВС+ИЗСД Больные ХГВС без ИЗСД

> 1000 417+92,7 v > 1000

* - р<0,05 по сравнению с показателями здоровых лиц

** - р<0,05 достоверность различий между показателями больных 1 и 2 группы

Изучение фагоцитарной активности нейтрофилов показало, что поглащение бактериальных частиц и переваривающая способность нейтрофилов больных 1 группы значи-

тельно ниже, чем больных 2 группы и здоровых лиц (табл. 5). Эффективность нейтро-фильного внутриклеточного киллинга у больных 1 группы в 3,6 раза, а у больных 2

группы в 1,9 раза уступала этому показатель клеток лиц контрольной группы.

Низкая фагоцитарная способность клеток больных ХГВС при сопутствующем ИЗСД наблюдалась и в отношении опсонизирован-ных аутосывороткой бактерий (табл. 6).

Исследование биоцидных систем нейтрофилов показало, что как кислородзависимые так и кислороднезависимые механизмы в гранулоцитах больных ХГВС при сопутствующем ИЗСД существенно подавлены по сравнению с больными ХГВС не страдающих эндокринопатиями и здоровыми лицами

Фагоцитарная и бактерицидная актив]

(табл 7). Активность продукции супероксид-ных радикалов, изученная в индуцированном НСТ-тесте, была снижена на 20,3%, активность МПО - на 27,7%по сравнению с нормой (табл 7). Система МПО в азурофильных гранулах нейтрофилов является основным фактором бактерицидности, участвует в образовании гипохлорит-аниона, который играет важную роль в биоцидности клетки. Исследование содержания катионных белков и активности лизоцима показало более их низкое содержание, чем у здоровых лиц и больных ХГВС без ИЗСД (табл 7).

Т аблица 5

ль нейтрофилов больных ХГВС (М±о)

Показатели Здоровые лица Больные ХГВС+ИЗСД Больные ХГВС без ИЗСД

ФЧ,% 75,6+7,2 56,1+6,2* 64,2+6,2

ФИ 5,7+0,6 3,2+0,4* ** 4,4+0,4*

Процент выживших бактерий после фагоцитоза (ВК) 5,0+0,5 17,3+1,8*’** 8,5+1,1 *

* Р<0,05 по сравнению с показателями здоровых лиц,

** Р<0,05 между показателями больных хроническим синуситом с СД и больных хроническим синуситом без СД

Фагоцитарная и бактерицидная активность нейтрофилов больных ХГВС в отношении опсонизированных бактерий (М±о)

Т аблица 6

Показатели Сыворотка здоровых доноров Повышение показателя,% Сыворотка больных синуситом Повышение показателя,%

Больные ХГВС+ИЗСД

ФЧ,% 64 7+7 2**,*** 115,3 58,8+6,7***** 104,8

91,5+8,3* 121 81,9+6,7 108,3

ФИ 5 з+0 6*,**,*** 165,6 3,2+0,3***** 0

9,6+0,6* 168,4 6,2+0,6 108,7

Больные ХГВС без ИЗСД

ФЧ,% 80,4+7,9* 125,2 76,9+7,9* 124,8

91,5+8,3* 121 89,4+8,3 118,2

ФИ 7,6+0,7*** 172,7 7,10+0,7*** 154,3

9,6+0,6* 168,4 8,6+0,6* 150,8

Примечание:

1. В числителе приведены показатели больных ГВС, в знаменателе - здоровых лиц;

2. Повышение (%) фагоцитоза опсонизированных бактерий по сравнению с неопсонизированными бактериями.

* р<0,05 по сравнению с показателями фагоцитоза неопсонизированных бактерий в соответствующей группе обследованных ** р<0,05 по сравнению с показателями здоровых лиц *** р<0,05 между показателями больных 1 и 2 групп

Т аблица 7

Показатели микробицидности нейтрофилов больных ХГВС (М±о)

Показатели Здоровые лица Больные ХГВС+ИЗСД Больные ХГВС без ИЗСД

Инд ИСТ-тест,% 28,1+2,05 22,4+2,01* 25,1+2,2

Инд МПО, 0,01Ед ВМ/мг 19,2+3,7 13,9+2,8* 15,7+2,8

КБ, СЦК 1,49+0,08 0,91+0,09*** 1,21+0,08

Лизоцим, мкг/мг 147,9+22,6 87,6+15,4*** 108,7+16,3

* р<0,05 по сравнению с показателями здоровых лиц ** р<0,05 между показателями больных 1 и 2 групп

Полученные данные свидетельствуют о том, что развитие хронического гнойного верхнечелюстного синусита у лиц, страдающих ИЗСД, тесно связано с изменениями активности как гуморального так и фагоцитарного звена иммунитета. У больных хроническим верхнечелюстным синуситом, страдающих ИЗСД, в несколько большей степени, чем у больных ХГВС без ИЗСД угнетена фагоцитарная активность нейтро-фильных гранулоцитов, нарушены процессы захвата и киллинга бактерий. У больных

ХГВС при сопутствующем ИЗСД в отличие от больных без ИЗСД достоверно снижены опсонизирующие свойства сыворотки и аффинность вырабатываемых антимикробных антител. В свою очередь, снижение иммунореактивности организма способствует хро-низации процесса и персистенции инфекции, инфекционные возбудители индуцируют и поддерживают воспаление, затрудняющее формирование полноценной местной иммунной реакции.

ВЫВОДЫ

Развитие гнойного верхнечелюстного синусита у лиц при сопутствующем ИЗСД протекает на фоне снижения активности основных противомикробных факторов иммунитета, аффинности продуцируемых антител, опсонирующих свойств сыворотки, фагоцитарной и биоцидной активности ней-трофилов.

Снижение биоцидности нейтрофилов ассоциируется с нарушениями как кислородза-висимых, так и кислороднезависимых антимикробных систем.

В дальнейшем является перспективным подбор и изучение эффективности имуноте-рапии на состояние антимикробного иммунитета у больных ХГВС при сопутствующем ИЗСД.

ЛИТЕРАТУРА

1. Антонив В.Ф., Кравченко Д.В., Кравченко А.В. и др. // Вестник оториноларингологии. - 1998. -№3. - С. 28-30.

2. Бухарин И.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. -Томск. - 1974. - 208 с.

3. Заболотний Д.І., Луценко В.І., Розкладка A.I. // Ринологія. - 2003. - №2. - С. 26-29.

4. ТельнюкЯ.И., СетдиковаН.Х.,КарсоноваМ.М. //Иммунология. - 2003. - №1. - С. 20-23.

5. Филатова С.В. //Иммунология. - 2001. - №2. - С. 37-42.

6. Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике. -К.:Здоровье. -1978. - С. 22-23.

7. Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Там же. - С. 28.

8. Чиркин В.В., Веников К).К)., Кожевников Г.И. //Иммунология. - 1990. - №3. - С. 75-77.

9. LuxtonR.W., Tompson E.J. //J. Immunol. Meth. - 1990. -№ 131. - P.277-282.

10. Nielsen S.L.,BlakF.Т., Storgaard V. et al. //APMIS. - 1995. -№ 103. - P.460-468.

СТАН АНТИМІКРОБНОГО ІМУНІТЕТУ У ХВОРИХ НА ГНІЙНИЙ ВЕРХНЬОЩЕЛЕПНИЙ СИНУСИТ

О. В. Огнівенко1, М.М. Попов1, ОЛ. Романова2

'Харківський національний університет імені В.Н. Каразіна, Україна

2Державна установа «Інститут мікробіології та імунології ім. 1.1. Мечникова АМН України», Харків РЕЗЮМЕ

Стан антимікробного імунітету було вивчено у 29 хворих на хронічний гнійний верхньощелепний синусит у фазі загострення при супутньому інсулінзалежному цукровому діабеті (1 група) та 29 хворих на хронічний гнійний верхньощелепний синусит, які не страждають на ендокринопатії (2 група). Розвиток гнійного верхньощелепного синусита у хворих на хронічний гнійний верхньощелепний синусит при супутньому інсулінзалежному цукровому діабеті плине на тлі зниження активності основних протимікробних факторів імунітету, афінності антитіл, що продукуються, опсонуючих властивостей сироватки, фагоцитарної та біоцидної активності нейтрофілів. Зниження біоцидності нейтрофілів асоціюється з порушеннями як киснезалежних, так і кисненезалежних антимікробних механізмів.

КЛЮЧОВІ СЛОВА: антимікробний імунітет, нейтрофіли

ANTIMICROBIAL IMMUNITY CONDITION IN PATIENTS WITH PURULENT MAXILLARY SINUSITIS

E. V. Ognivenko1, N.N. Popov1, EA. Romanova2

'V.N Karazin Kharkov National University, Ukraine

2State establishment «I.I Mechnykov Institute of Microbiology and Immunology of the Academy of Medical Science of Ukraine», Kharkiv

SUMMARY

Antimicrobial immunity condition has been examined in 29 patients with purulent maxillary sinusitis in the exacerbation phase under insulin-dependent diabetes mellitus (group 1) and 29 chronic purulent maxillary sinusitis patients not suffering from endocrinopathies of any kind (group 2)/ Development of purulent maxillary sinusitis in persons insulin-dependent diabetes mellitus progresses against the background of the significant decrease of the main antimicrobial immunity factors aktivity, affinity of the produced antibodies, opsonizing properties of serum, and phagocytic biocidal activity of neutrophils.

Neutrophil biocidity decrease is associated with malfunctions occurring in both oxygen-dependent and oxygen-independent ntimicrobial mechanisms.

KEY WORDS: antimicrobial immunity, neutrophils