CC BY
28
112
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
щевода и нейробластомой. Пептиды этих белков распознаются цитотоксическими Т-лимфоцитами в комплексе с молекулой HLA. Кроме того, антитела к белкам семейства GAGE обнаруживаются в сыворотке больных мелано-мой, раком толстой кишки и Т-клеточными лимфомами. Таким образом, белки GAGE могут быть подходящими мишенями для специфической иммунотерапии. Разработка препаратов рекомбинантных белков является перспективным направлением в иммунотерапии, так как в отличии от пептидов полноразмерные белки могут стимулировать как CD4-, так и CDS-лимфоциты, и не зависят от подтипа HLA пациента.
Цель исследования — получить высокоочищенный ре-комбинантный раково-тестикулярный белок GAGE1.
Материалы и методы. Кодирующая последовательность гена была получена с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией; в качестве матрицы использовали выделенную рибонуклеиновую кислоту из линии клеток эритромиелоидного лейкоза К562. Кодирующая последовательность гена была клонирована в плаз-миду pET-30a, и белок был экспрессирован в штамме Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. Нуклеотидная последовательность всех элементов плазмиды и гена GAGE1 подтвер-жена секвенированием. Рекомбинантный белок GAGE1 был очищен с помощью металл-аффинной хроматографии.
Результаты. Нами была получена плазмида для экспрессии гена GAGE1 в бактериальных клетках на основе вектора pET-ЗОа. Рекомбинантный белок GAGE1 был экс-прессирован под контролем индуцируемого промотора в суспензионной культуре клеток E. coli. Были подобраны условия для оптимальной экспрессии и очистки белка из бактериальных клеток. Выход целевого продукта составил 6 мг/л бактериальной культуры. Согласно данным электрофореза, масса полученного продукта составила примерно 24 кДа, что соотвествует массе природного белка GAGE1. Чистота рекомбинантного белка также оценивалась по электрофореграмме и составила 95 %.
Заключение. Получен бактериальный продуцент рекомбинантного человеческого антигена GAGE1. Очищенный белок GAGE1 может быть использован для широкого спектра исследований в онкологии и иммунологии, например для получения специфических антител. На основе рекомбинантного белка GAGE1 можно создавать противоопухолевые вакцины с применением адъювантов или дендритных клеток. Кроме того, с помощью этого белка можно оценивать специфический гуморальный ответ в сыворотке крови онкологических больных.
Ю.М. Фоменко1, Н.А. Кабилдина1, И.М. Омарова2,
Г.Х. Тулеуова3, С.С. Жумакаева1, В. Б. Сирота1
НЕПОСРЕДСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ
АРГЛАБИНА ПРИ МЕСТНО-РАСПРОСТРАНЕННОМ
РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
1КГМУ, Караганда, Казахстан;
2КГП «Областной онкологический диспансер»,
Караганда, Казахстан;
3АО МНПХ «Фитохимия», Караганда, Казахстан
Цель исследования — повышение степени доказательности клинической эффективности препарата арглабин
путем проведения рандомизированного клинического исследования.
Материалы и методы. В исследование включены 93 пациента с местно-распространенным раком молочной железы (МРРМЖ) с гистологической и иммуногистохимиче-ской верификацией в возрасте от 30 до 75 лет. Все больные разделены на 3 группы: 2 исследуемые, 1 контрольная. В контрольной группе 36 пациентам проводили 4 курса неоадъювантной химиотерапии (ХТ) по схеме АС (доксору-бицин — 50 мг/м2, циклофосфан — 500 мг/м2) каждые 21 день, радикальную мастэктомию, 4 курса адъювантной ХТ (АС), лучевую терапию и гормональную терапию по показаниям. Исследуемая группа 1 (n = 30) получала лечение по аналогичной схеме, только режим ХТ (АС) сочетался с арглаби-ном (арглабин 370 мг/м2 в течение 7 дней). Исследуемая группа 2 (n = 27) получала лечение по аналогичной схеме, но в неоадъювантном и адъювантном режиме применяли монотерапию арглабином. Клиническую эффективность оценивали по критериям Всемирной организации здравоохранения.
Результаты. Частичный ответ опухоли у больных после ПХТ по схеме АС наблюдали в 58,3 ± 8,2 %, после АС с арглабином — в 63,3 ± 8,8 %, после монотерапии арглабином — в 25,9 ± 8,4 % случаев (p > 0,05); стабилизацию опухоли соответственно в 38,9 ± 8,1 %, 33,3 ± 8,6 %, 51,9 ± 9,6 %. Степень регрессии опухоли у больных МРРМЖ составила после ХТ по схеме АС 54,6 ± 6,9 %, после АС с арглабином — 57,1 ± 7,9 %, после монотерапии арглабином — 10,0 ± 15,1 %. Степень регрессии метастатических подмышечных лимфатических узлов у пациентов после неоадъювантной терапии по схеме АС составила 39,6 ± 7,0 %, после АС с арглабином — 63,7 ± 14,1 %, после монотерапии арглабином — 2,9 ± 20,2 %. В контрольной группе лекарственный патоморфоз опухоли III и IV степени имели 25 % больных, после неоадъювантной ХТ по схеме АС + арглабин — 33,3 %, после монотерапии арглабином — 14,8 %.
Заключение. Наблюдается общая положительная динамика регрессии опухоли и лимфатических узлов после неоадъювантной ПХТ при ее комбинации с арглабином у больных МРРМЖ.
Д. С. Хачатрян1, В.А. Мисюрин2, М.А. Барышникова1,2, В.Н. Осипов1,2, А.Н. Балаев1, А. В. Колотаев1, К. Р. Матевосян3 СИНТЕЗ И ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ СВОЙСТВА НОВЫХ 1,2-ДИГИДРО-4-ХИНАЗОЛИНОНОВ ФГУП «ИРЕА», Москва;
2ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 3ФГБОУ ВО «РХТУ им. Д. И. Менделеева», Москва
Введение. Интерес к синтезу и изучению свойств производных хиназолинона в последние десятилетия объясняется их разноплановой биологической активностью. В частности, ранее синтезированые Khan-0101 и Khan-0140 подтвердили такую мультиактивность. Соединения SMR000040130 инги-бировали рост клеток рака легкого, но при этом проявляли кардио- и нейротоксичность. Ряд полученных 2,3-дигидро-хиназолин-4(1Н)-онов активны в отношении опухолевых линий клеток HepG2, MCF-7; некоторые производные изоиндоло[2,1-а]-хиназолина являются ингибиторами фак-
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 113
тора некроза опухоли а. Поэтому разработка удобных ме- жения фототоксичности и увеличения избирательности тодов получения и синтез новых производных 1,2-дигид- действия препарата. ро-4(3Н)-хиназолинонов остается актуальной задачей Материалы и методы. Субстанция Фотосенса в настоящее время. («НИОПИК»), яичный фосфатидилхолин, холестерин, Цель исследования — синтез и оценка in vitro противо- DSPE-PEG-2000 (Lipoid), pNP-PEG-3000-lipid. Гуманизи-опухолевой активности новых производных 1,2-дигидро- рованные моноклональные антитела анти-Нег2/пеи были 4-хиназолинонов, являющихся аналогами природных ал- получены в лаборатории трансгенных препаратов НИИ калоидов. ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Материалы и методы. Для оценки противоопухолевой Результаты. Липосомы получали методом обращения активности использовали МТТ-тест. Исследование прово- фаз из фосфатидилхолина, холестерина, DSPE-PEG-2000 дили на клеточных линиях опухолей человека: карциноме и pNP-PEG-3000-lipid. Липидную пленку снимали водным толстой кишки HCT116, карциноме простаты РС3, карци- раствором Фотосенса и полученную дисперсию последо-номе легкого А549, аденокарциноме молочной железы вательно пропускали через поликарбонатные мембранные MCF7, Т-клеточном лимфобластном лейкозе Jurkat, полу- фильтры с диаметром пор 400, 200 и 100 нм на ручном мини-ченных из Банка клеточных линий РОНЦ им. Н.Н. Бло- экструдере. Моноклональные антитела Her2 присоединя-хина. Активными считали соединения, у которых IC50 бы- ли к pNP-PEG-3000-lipid, включенному в состав липосом ла меньше или равна 100 мкМ. исходя из мольного соотношения белок/pNP-PEG3000-Результаты. В результате проведенных исследований lipid 1:40 при рН 8,3, температуре 4 °С в течение 12 ч. Пробыл разработан препаративный метод синтеза ряда произ- водили очистку полученных иммунолипосом методом водных хиназолинона (более 200 структур) реакцией кон- гель-фильтрации. Диаметр иммунолипосом определяли денсации полученных ранее амидов антраниловой кислоты с помощью прибора Nicomp 380 Submicron Partical Sizer. (более 20 производных) с (гетеро)-ароматическими альде- Специфическое связывание полученных иммунолипосом гидами. Необходимые альдегиды получали хлорметилиро- с Ней-положительными клетками рака молочной железы ванием анисового альдегида с последующей заменой атома оценивали в реакции иммунофлуоресценции с помощью хлора O-, N-, S-нуклеофилами. Исследование цитотокси- проточной цитофлуориметрии. ческой активности показало, что соединение Khan-0120 Заключение. Получены иммунолипосомы диаметром в концентрации 100 мкМ ингибировало рост клеток линии 120 ± 5 нм, содержащие 6 мг/мл Фотосенса. Включение MCF7 на 92 %. Фотосенса в иммунолипосомы составило 61 %. После ин-Заключение. Нахождение цитотоксически активных кубации Ней-положительных клеток молочной железы веществ в ряду синтезированных 1,2-дигидро-4(3Н)-хина- человека линии SK-BR-3 с иммунолипосомальным Фото-золинонов говорит о перспективности данного направле- сенсом регистрировали 95 % связывание иммунолипосом ния исследований. Соединения, у которых обнаружена с клетками-мишенями. противоопухолевая активность in vitro, будут исследованы для подтверждения противоопухолевого эффекта на пере- Т. С. Хлыстова1, Н.Д. Олтаржевская1, виваемых опухолях экспериментальных животных in vivo И.А. Эйзенах2, И.М. Липатова3 и в случае положительного результата будут предложены ЛЕЧЕБНЫЕ ГИДРОГЕЛЕВЫЕ МАТЕРИАЛЫ для проведения доклинических исследований в целях со- ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ здания новых противоопухолевых препаратов. ПРЕПАРАТОВ В ОНКОУРОЛОГИИ Работа выполнена при частичной финансовой поддержке Мин- 1ООО «КОЛЕТЕКС», Москва; обрнауки России в рамках Соглашения № 14.576.21.0044 от 05.08.14 2МБЛПУ «ГКБ № 1», Новокузнецк; (RFMEFI57614X0044). ФГБУН «ИХР им. Г.А. Крестова», Иваново Введение. При онкологических заболеваниях в области А. Хашем1, А.А. Матюшин1, А. О. Райков1, малого таза в большинстве случаев вовлекаются в патоло-М.А. Барышникова2, В.С. Косоруков2, И. И. Краснюк1 гический процесс органы мочевыделительной системы. РАЗРАБОТКА ИММУНОЛИПОСОМ, Их терапия вызывает большие трудности. Высокую эффек-НАГРУЖЕННЫХ ФОТОСЕНСОМ тивность при лечении циститов, в том числе лучевых, по-1ГБОУВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» казали гидрогелевые материалы для направленной доставки Минздрава России, Москва; лекарственных препаратов (ЛП) на основе биополимера 2ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва альгината натрия «Колегель» с деринатом и лидокаином Введение. Фотосенс применяется для фотодинамиче- и «Колегель» с диоксидином и лидокаином. С учетом по-ской терапии целого ряда опухолей, однако высокая эф- ложительных результатов внутрипузырной терапии цисти-фективность лекарственной формы Фотосенса сочетается тов солями гиалуроновой кислоты, было предложено объ-с достаточно высокой фототоксичностью. Иммунолипо- единение лечебных свойств альгината (АН) и гиалуроната сомальная лекарственная форма способствует направлен- натрия (ГН) в одном материале. ной доставке препаратов к опухолевым клеткам-мишеням, Цель исследования — создание лечебного гидрогелево-благодаря чему снижается их токсичность и увеличивается го материала для внутрипузырного подведения ЛП с повы-селективность действия. шенной биологической активностью, достигаемой за счет Цель исследования — разработка анти-Ней-иммуно- использования 2 биополимеров — АН и ГН (входящий липосомальной лекарственной формы Фотосенса для сни- в состав уротелия), с хорошими защитными (адгезивными)
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
