CC BY
41
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 113
тора некроза опухоли а. Поэтому разработка удобных ме- жения фототоксичности и увеличения избирательности тодов получения и синтез новых производных 1,2-дигид- действия препарата. ро-4(3Н)-хиназолинонов остается актуальной задачей Материалы и методы. Субстанция Фотосенса в настоящее время. («НИОПИК»), яичный фосфатидилхолин, холестерин, Цель исследования — синтез и оценка in vitro противо- DSPE-PEG-2000 (Lipoid), pNP-PEG-3000-lipid. Гуманизи-опухолевой активности новых производных 1,2-дигидро- рованные моноклональные антитела анти-Нег2/пеи были 4-хиназолинонов, являющихся аналогами природных ал- получены в лаборатории трансгенных препаратов НИИ калоидов. ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Материалы и методы. Для оценки противоопухолевой Результаты. Липосомы получали методом обращения активности использовали МТТ-тест. Исследование прово- фаз из фосфатидилхолина, холестерина, DSPE-PEG-2000 дили на клеточных линиях опухолей человека: карциноме и pNP-PEG-3000-lipid. Липидную пленку снимали водным толстой кишки HCT116, карциноме простаты РС3, карци- раствором Фотосенса и полученную дисперсию последо-номе легкого А549, аденокарциноме молочной железы вательно пропускали через поликарбонатные мембранные MCF7, Т-клеточном лимфобластном лейкозе Jurkat, полу- фильтры с диаметром пор 400, 200 и 100 нм на ручном мини-ченных из Банка клеточных линий РОНЦ им. Н.Н. Бло- экструдере. Моноклональные антитела Her2 присоединя-хина. Активными считали соединения, у которых IC50 бы- ли к pNP-PEG-3000-lipid, включенному в состав липосом ла меньше или равна 100 мкМ. исходя из мольного соотношения белок/pNP-PEG3000-Результаты. В результате проведенных исследований lipid 1:40 при рН 8,3, температуре 4 °С в течение 12 ч. Пробыл разработан препаративный метод синтеза ряда произ- водили очистку полученных иммунолипосом методом водных хиназолинона (более 200 структур) реакцией кон- гель-фильтрации. Диаметр иммунолипосом определяли денсации полученных ранее амидов антраниловой кислоты с помощью прибора Nicomp 380 Submicron Partical Sizer. (более 20 производных) с (гетеро)-ароматическими альде- Специфическое связывание полученных иммунолипосом гидами. Необходимые альдегиды получали хлорметилиро- с Ней-положительными клетками рака молочной железы ванием анисового альдегида с последующей заменой атома оценивали в реакции иммунофлуоресценции с помощью хлора O-, N-, S-нуклеофилами. Исследование цитотокси- проточной цитофлуориметрии. ческой активности показало, что соединение Khan-0120 Заключение. Получены иммунолипосомы диаметром в концентрации 100 мкМ ингибировало рост клеток линии 120 ± 5 нм, содержащие 6 мг/мл Фотосенса. Включение MCF7 на 92 %. Фотосенса в иммунолипосомы составило 61 %. После ин-Заключение. Нахождение цитотоксически активных кубации Ней-положительных клеток молочной железы веществ в ряду синтезированных 1,2-дигидро-4(3Н)-хина- человека линии SK-BR-3 с иммунолипосомальным Фото-золинонов говорит о перспективности данного направле- сенсом регистрировали 95 % связывание иммунолипосом ния исследований. Соединения, у которых обнаружена с клетками-мишенями. противоопухолевая активность in vitro, будут исследованы для подтверждения противоопухолевого эффекта на пере- Т. С. Хлыстова1, Н.Д. Олтаржевская1, виваемых опухолях экспериментальных животных in vivo И.А. Эйзенах2, И.М. Липатова3 и в случае положительного результата будут предложены ЛЕЧЕБНЫЕ ГИДРОГЕЛЕВЫЕ МАТЕРИАЛЫ для проведения доклинических исследований в целях со- ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ здания новых противоопухолевых препаратов. ПРЕПАРАТОВ В ОНКОУРОЛОГИИ Работа выполнена при частичной финансовой поддержке Мин- 1ООО «КОЛЕТЕКС», Москва; обрнауки России в рамках Соглашения № 14.576.21.0044 от 05.08.14 2МБЛПУ «ГКБ № 1», Новокузнецк; (RFMEFI57614X0044). ФГБУН «ИХР им. Г.А. Крестова», Иваново Введение. При онкологических заболеваниях в области А. Хашем1, А.А. Матюшин1, А. О. Райков1, малого таза в большинстве случаев вовлекаются в патоло-М.А. Барышникова2, В.С. Косоруков2, И. И. Краснюк1 гический процесс органы мочевыделительной системы. РАЗРАБОТКА ИММУНОЛИПОСОМ, Их терапия вызывает большие трудности. Высокую эффек-НАГРУЖЕННЫХ ФОТОСЕНСОМ тивность при лечении циститов, в том числе лучевых, по-1ГБОУВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» казали гидрогелевые материалы для направленной доставки Минздрава России, Москва; лекарственных препаратов (ЛП) на основе биополимера 2ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва альгината натрия «Колегель» с деринатом и лидокаином Введение. Фотосенс применяется для фотодинамиче- и «Колегель» с диоксидином и лидокаином. С учетом по-ской терапии целого ряда опухолей, однако высокая эф- ложительных результатов внутрипузырной терапии цисти-фективность лекарственной формы Фотосенса сочетается тов солями гиалуроновой кислоты, было предложено объ-с достаточно высокой фототоксичностью. Иммунолипо- единение лечебных свойств альгината (АН) и гиалуроната сомальная лекарственная форма способствует направлен- натрия (ГН) в одном материале. ной доставке препаратов к опухолевым клеткам-мишеням, Цель исследования — создание лечебного гидрогелево-благодаря чему снижается их токсичность и увеличивается го материала для внутрипузырного подведения ЛП с повы-селективность действия. шенной биологической активностью, достигаемой за счет Цель исследования — разработка анти-Ней-иммуно- использования 2 биополимеров — АН и ГН (входящий липосомальной лекарственной формы Фотосенса для сни- в состав уротелия), с хорошими защитными (адгезивными)
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
114 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
свойствами по отношению к уротелию, обладающего про- мы — бортезомибом и роль NF-kB в качестве посредника лонгированным лечебным действием и способствующего цитотоксических эффектов бортезомиба. восстановлению защитных функций стенок мочевого пузыря. Материалы и методы. Исследование проводили Материалы и методы. В эксперименте использовали на линиях меланомы человека Mel Z, Mel Mtp, Mel Ksen лечебные гидрогели, в состав которых помимо основного и Mel Rac, полученных в РОНЦ им. Н. Н. Блохина. полимера АН и ЛП дополнительно введен ГН. Оценива- Цитотоксичность оценивали посредством МТТ-теста. лось влияние полимерного состава на адгезивные свойства Для изучения механизма действия Рефнота был прове-гидрогеля на изолированных мочевых пузырях самцов ка- ден анализ транскриптома клеточных линий до и после пюшонных крыс. На стенки образцов пузырей крыс нано- обработки препаратом путем секвенирования на плат-сили гидрогель, проводили смыв, имитирующий контакт форме HiSeq 2000 в режиме одиночных прочтений дли-с биологической жидкостью, и окрашивание красителем ной 50 нукл. Анализ генных сетей проведен с примене-C.I. reactive Blu 21, способным связываться с белковой со- нием ресурса GeneMANIA и STRING. Активацию ставляющей. Отсутствие окрашивания свидетельствовало транскрипционного фактора NF-kB определяли методом о наличии защитного полимерного слоя. иммуноцитохимии, оценку проводили на клеточном Результаты. Использование гидрогелей на основе 2 био- анализаторе InCell Analyzer 6000. полимеров АН и ГН увеличивает время контакта гидроге- Результаты. Бортезомиб проявлял токсичность в отно-ля и введенных ЛП с поврежденными тканями за счет уве- шении клеточных линий ММ (IC504,3 ± 2,9 мкМ, p < 0,05). личения адгезии полимеров к уротелию и снижения Клеточная линия Mel Ksen, несущая мутацию B-RAFV600E, скорости растворения биологической жидкостью. Образова- оказалась наиболее чувствительной к действию препарата ние защитного слоя на стенке органа способствует пролон- (IC500,04 мкM, р < 0,05). Коинкубация клеточных линий гации лечебного действия (через 2 ч контакта с жидкостью с бортезомибом и Рефнотом не приводила к увеличению концентрация полимеров не менее 35,0 % от нанесенного, цитотоксичности. Транскриптомный анализ показал, при использовании только ГН концентрация 2,0 %). АН что инкубация клеток с Рефнотом вела к активации пути обеспечивает гемостатические и адгезивные свойства, TNFa с одновременной активацией NF-kB, поэтому мы а введение ГН позволяет повысить биологическую актив- исследовали качественное изменение экспрессии. Активация ность гидрогелей и способствует восстановлению защит- NF-kB происходила при концентрации Рефнота 10 ЕД/мл. ных функций стенок мочевого пузыря. Реологические При этом ее уровень зависел от времени воздействия пре-свойства гидрогеля удобны для его введения через катетер парата. У клеточной линии Mel Z (B-RAFV600E) через 6 ч с помощью преднаполненного шприца. Разработанный инкубации с Рефнотом 10 ЕД/мл уровень NF-kB повышал-состав на основе АН и ГН прошел токсикологические ис- ся в 1,6 раза по сравнению с 1-часовой (536 % vs 336 % со-пытания. Успешные клинические испытания доказали ответственно), а у линии Mel Ksen (B-RAFV600E) — в 100 раз эффективность использования гидрогеля «Колегель» с АН (586 % vs 5,2 % соответственно). Интересно, что у линий и ГН при лечении циститов. с диким типом гена B-RAF (Mel Rac и Mel Mtp), наоборот, Заключение. Полученные результаты свидетельствуют максимальная активация NF-kB отмечалась при 1-часовой о целесообразности применения рассматриваемых лечеб- ко-инкубации с бортезомибом и Рефнотом, а к 6 ч проис-ных гидрогелей для профилактики и лечения лучевых по- ходило снижение экспрессии (746 % vs 196 % — для Mel Rac, вреждений в онкоурологии. 585 % vs 246 % — для Mel Mtp). Заключение. Таким образом, комбинированное при-Ю.А. Хоченкова, Ю.С. Мачкова, О.О. Рябая, менение бортезомиба с Рефнотом вызывает активацию Е.В. Степанова, Д.А. Хоченков NF-kB; более выраженное действие было установлено ЦИТОТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА в случае линий ММ с мутацией B-RAFV600E. РЕФНОТ В КОМБИНАЦИИ С БОРТЕЗОМИБОМ Работа поддержана грантом РНФ № 14-35-00107от 17.09.2014. НА КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ МЕЛАНОМЫ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO Д.А. Церковский, Ю.П. Истомин ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва ВЛИЯНИЕ СОНО-ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ Введение. Препарат Рефнот (фактор некроза опухоли- С ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОМ ФОТОЛОН тимозин а — TNFa) проявил уникальные иммуномодули- НА ИНТЕНСИВНОСТЬ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ рующие свойства у онкологических больных. Его особенность ЭПИДЕРМОИДНОЙ КАРЦИНОМЫ ЛЕГКОГО заключается в положительном воздействии одновременно ЛЬЮИС У МЫШЕЙ ЛИНИИ C57BLACK на Т- и NK-клетки, являющиеся ведущими популяциями ГУ«РНПЦОМР им. Н.Н. Александрова», противоопухолевого иммунитета. Рефнот также блокирует агрогородок Лесной, Республика Беларусь факторы, ассоциированные с пролиферацией и метаста- Введение. Исследование антиметастатической эффек-зированием меланомных клеток. NF-kB может выступать тивности соно-фотодинамической терапии (СФДТ) явля-стимулятором опухолевого роста, блокирование активно- ется актуальным направлением исследований в экспери-сти данного белка, ассоциированной с использованием ментальной онкологии. Рефнота, может повысить эффективность лечения больных Цель исследования — изучение противоопухолевого меланомой (ММ). и антиметастатического эффектов СФДТ с фотосенсиби-Цель исследования — изучить эффективность комби- лизатором (ФС) фотолон у мышей линии C57Black с эпи-наций Рефнота с ингибитором активности 26S-протеасо- дермоидной карциномой легкого Льюис.
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
