CC BY
27
УДК 633.883:599.323
ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ АНТИГЕПАТОТОКСИЧЕСКОГО СРЕДСТВА НА РЕГЕНЕРАЦИЮ ПЕЧЕНИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ У БЕЛЫХ КРЫС
© Убашеев Олег Иннокентьевич
кандидат биологических наук, старший преподаватель
Бурятская государственная сельскохозяйственная академия
им. В. Р. Филиппова
670024, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8а
E-mail: [email protected]
Изучено стимулирующее влияние антигепатотоксического средства на регенераторные процессы в печени белых крыс при хроническом токсическом CCl4 — гепатите. Выявлено ускорение размножения гепатоцитов путем клеточной и внутриклеточной регенерации. Стимуляция регенерации в паренхиме печени крыс с токсическим гепатитом обусловливает ускоренную, чем в контроле, резорбцию соединительной ткани. Ключевые слова: регенерация, митоз, гипертрофия, фиброз.
ASSESSMENT OF INFLUENCE ANTIHEPATOTOXIC AGENT ON LIVER REGENERATION IN CHRONIC TOXIC HEPATITIS IN RATS
Ubasheev Oleg
PhD in Biology, Senior Lecturer Buryat State Agricultural Academy 670024, Ulan-Ude, Pushkin st., 8а E-mail: [email protected]
The stimulating effect of antihepatotoxic agent on regenerative processes in the liver of white rats with chronic toxic CCl4 hepatitis was studied. The acceleration of hepatocyte multiplication by cellular and intracellular regeneration is revealed. The stimulation of regeneration in the liver parenchyma of rats with toxic hepatitis causes an accelerated, than in control, resorption of the connective tissue. Keywords: regeneration, mitosis, hypertrophy, fibrosis.
Введение
Потребность в лекарственной коррекции нарушенных функций гепа-тобилиарной системы в настоящий момент ощущается наиболее остро. Воздействие неблагоприятных экологических факторов, стрессовых ситуаций, применение некоторых лекарственных препаратов неизбежно приводят к нарушению функциональной активности печени. В настоящее время они занимают 2-3% общего числа заболеваний гепатобилиарной системы [3].
Для стимуляции регенерации патологически измененных органов особую актуальность приобретает поиск новых средств, ускоряющих восстановление поврежденных тканей и органов. В настоящее время большую роль отводят лекарственным средствам природного происхождения и в первую очередь наибольшего внимания заслуживают лекарственные растения, так как фитотерапия при достаточной фармакотера-певтической активности не оказывает побочного влияния на организм [4, 6].
Целью настоящей работы явилась оценка стимуляции регенерации печени белых крыс антигепатотоксическим средством при хроническом CCI4 — гепатите.
Материал и методы
В работе использовали антигепатотоксическое средство, представляющее сухой экстракт из 5-ти компонентного сбора:
пижма обыкновенная (Fanacetum vulgare L.) — трава; золототысячник обыкновенный (Gentrarium vulgaris L) — трава; девясил высокий (Inula helenium L) — корневище и корни; боярышник кроваво-красный (Grataegus sanguineae Pall) — плоды; шиповник (Rosa L) — плоды.
Хронический токсический гепатит вызывали у белых крыс массой 180-220 г подкожным введением 50% масляного раствора CCU в объеме 0,25 мл/100г массы животного 2 раза в неделю в течение 2-х месяцев. После окончания введения CCU крысам вводили per os ежедневно в течение месяца испытуемое средство внутрижелудочно в дозе 0,3 г/кг массы животного. В качестве препарата сравнения применяли силибор. Контролем служили белые крысы, получавшие только раствор CCl4.
Морфологическое состояние печени белых крыс исследовали на 14-, 28-, 35-е и 42-е сутки с момента введения антигепатотоксического средства на фоне хронического гепатита. При взятии гистологического материала кусочки печени фиксировали в 10%-ом растворе нейтрального формалина. При оценке влияния антигепатотоксического средства на течение репаративной регенерации печени после ее токсического повреждения были использованы морфофункциональные показатели, характеризующие регенераторный процесс. В частности, исследовали митотиче-скую активность гепатоцитов и подсчет количества двуядерных и гипертрофированных клеток, количество которых подсчитывали в 100 полях зрения гистологического препарата. Митотический индекс выражали в промилле (%о), т. е. содержание митозов на 1000 клеток способных к делению. Цифровые данные, полученные в эксперименте обрабатывали по параметрическому критерию Стьюдента-Фишера [5].
Результаты исследований и их обсуждение
Патологическая картина в печени белых крыс после окончания 2-месячных затравок ССЦ сводилась к выраженным гемодинамическим нарушениям в виде полнокровия сосудов, а также к значительным дистрофическим и воспалительно-пролиферативным процессам. У животных контрольной группы перипортальный и портальный фиброз в печени отмечен у 66% животных, а в группе животных, получавших антигепато-токсическое средство — 50% случаев.
На 14-е сутки в отличие от контрольных животных после введения антигепатотоксического средства отмечалась меньшая по степени инфильтрация печени мезенхимальными элементами. В печени животных обнаруживались в большем количестве, чем в контроле, крупные гиперх-ромные и двуядерные гепатоциты.
На 28-е сутки исследований в печени крыс, получавших антигепато-токсическое средство, определялась менее выраженная, чем в контроле, полиморфно-клеточная инфильтрация, сопровождающаяся фибриллоге-незом. Фиброз портальных полей в печени крыс встречался, как и в предыдущий срок наблюдения в 50% случаях. Однако волоконца соединительной ткани были тоньше, нежнее и не пронизывали дольку печени в отличие от контроля. У животных, получавших антигепатотоксическое средство, в большем количестве, чем в контроле, были видны гипертрофированные гепатоциты с увеличенными гиперхромными ядрами, а также двуядерные клетки и фигуры митоза. Нарастание объема ядер в гепа-тоцитах и возрастание доли крупных клеток в печени животных получаемых изучаемое средство следует объяснить повышением функционального состояния гепатоцитов, в которых увеличивается синтетическая активность.
На 35-е сутки в печени животных, получавших антигепатотоксиче-ское средство, еще обнаруживались умеренная круглоклеточная инфильтрация и перипортальный фиброз (в 30% случаев). В контроле подобная картина наблюдалась гораздо чаще (50-70% случаев).
Что касается регенераторных процессов, то показатели митотиче-ской активности двуядерных и гипертрофированных клеток в контрольной группе животных свидетельствовали о вялом течении регенераторных процессов в печени. Так, митотический индекс практически прослеживался на одном уровне на все сроки наблюдения (табл. 1).
Таблица 1
Влияние антигепатотоксического средства на митотическую активность гепатоцитов белых крыс (%о) при хроническом гепатите;
М ± т; п=7
Группы животных Сроки исследования, сутки
14 28 35 42
СС14 (контроль) 1,8 ± 0,03 2,2 ± 0,01 2,0 ± 0,01 2,2 ± 0,92
СС14 + антигепато-токсическое средство 3,4 ± 0,01 * 5,2 ± 0,07 * 2,2 ± 0,04 1,6,± 0,81
Интактный контроль 1,2 ± 0,02 1,2 ± 0,02 1,4 ± 0,01 -
Примечание: *— различия достоверны по сравнению с контролем р < 0,05; п — количество животных в группе.
В группе животных, получавших изучаемое средство, митотический индекс в клетках печени возрастал по сравнению с контролем в 2,2-2,5 раза на первые сроки исследований 14 и 28 сутки эксперимента.
Число двуядерных гепатоцитов в группе животных, получавших анти-гепатотоксическое средство увеличивалось по сравнению с контролем (табл. 2).
Таблица 2
Влияние антигепатотоксического средства на регенерацию печени при хроническом гепатите; М ± т; п=7
Группы животных Сроки исследования, сутки
Число двуядерных клеток Число гипертрофированных клеток
14 28 35 14 28 35
СС14 (контроль) 19,2±1,20 13,9±0,60 14,0±0,8 1 21,2±1,18 19,5±1,19 22,1±1,33
СС14 + антиге-пато- токсическое средство 2 ±2,1? 29,7±2,29|: 41,9± 1,23 49,2±2,12 43,4±2,11* 69± 4,31*
Интактный контроль 7,8±0,22 77,9±0,78 7,4 ±011 11,2±0,41 10,4±0,41 16,7±0,68
Примечание: *— различия достоверны по сравнению с контролем Р < 0,05; п — количество животных в группе.
Число двуядерных гепатоцитов возрастало к концу исследований по сравнению с контролем в три раза. Среднее число гипертрофированных клеток у крыс на фоне введений антигепатотоксического средства увеличивалось до 69,7 ± 0,3 при контроле 22,1 ± 1,3. Все эти явления свидетельствовали о том, что в печени крыс, получавших антигепатотоксиче-ское средство, регенераторные процессы проходили значительно активнее в сравнении с таковыми у крыс контрольной группы.
По мере восстановления структуры и функции органа, снижались митотическая активность гепатоцитов и возрастало число гипертрофированных клеток.
По мере восстановления структуры и функции органа, снижались митотическая активность гепатоцитов и возрастало число гипертрофированных клеток (табл. 3).
Таблица 3
Показатели регенерации печени белых крыс при действии антигепатотоксического средства при хронической токсическом гепатите;
М ± т; п=7
Срок, исследования, сутки Интактный контроль Контроль СС14 Силибор Антигепатотоксическое средство
Общее количество митозов (%о)
14 1,2 ± 0,02 1,8 ± 0,03 2,9 ± 0,01 3,4 ± 0,01
28 1,2 ± 0,02 2,9 ± 0,01 3,3 ± 0,07 5,2 ± 0,07
35 1,4 ± 0,01 2,0 ± 0,01 2,7 ± 0,04 2,9 ± 0,04
42 1,3 ± 0,01 2,3 ± 0,93 1,0 ± 0,27 1,6 ± 0,52
Число гипертрос )ированных клеток (абс. ед.)
14 11,2 ± 0,43 21,2 ± 1,21 34,1 ± 1,07 49,2 ± 2.10
28 10,4 ± 0,41 19,5 ± 1,21 23,4 ± 1,20 43,4 ± 2,12
35 10,0 ± 0,22 22,1 ± 1,32 36,1 ± 1,02 69,7 ± 4,31
42 - 21,6 ± 1,81 26,0 ± 1,41 40,7 ± 2,02
Примечание: Достоверность разницы между опытом и контролем во всех случаях р < 0,05.
Как видно из данных таблицы 3 регенераторные процессы в печени проявлялись в наибольшей степени в первые сроки исследований в группе животных, получавших антигепатотоксическое средство. По мере восстановления структуры и функции органа снижалась митотическая активность гепатоцитов, число гипертрофированных клеток оставалось повышенным а последующие сроки, по сравнению с контролем.
В печени животных контрольной группы восстановительные процессы запаздывали, митотическая активность и число гипертрофированных клеток во все сроки наблюдения колебались в незначительной степени. Активнее чем в контроле, протекали процессы регенерации в пече-
ни животных, принимавших силибор. При анализе данных приведенных в таблице 3, для каждой группы животных в первые сроки была установлена обратная зависимость между митотической активностью и числом гипертрофированных клеток.
На 42-е сутки у животных, получавших антигепатотоксическое средство, значительно быстрее, чем в контроле, шли репаративные процессы в печени. Гепатоциты в дольках располагались радиально. Фиброз в печени крыс отмечен только в одном случае в виде тонких и нежных нитей коллагена, проходящих преимущественно по периферии дольки. Налицо были в печени крыс признаки активной регенерации (гипертрофированные и двуядерные гепатоциты, фигуры митоза). Репаративные процессы в условиях патологии во многом определяют исход заболевания, полноту восстановления структуры и функции органа [2].
Заключение
Таким образом, увеличение числа гипертрофированных и двуядер-ных клеток, способность делиться митозом свидетельствуют об их жизнеспособности и высокой функциональной активности. Такие клетки за счет большого размера и особенностей строения быстро осуществляют структурно-функциональную замену погибших одноядерных клеток.
В целом, анализ экспериментальных данных подтверждает, что применение многокомпонентного лекарственного антигепатотоксического средства стимулировало клеточное размножение, способствовало обратному развитию соединительной ткани и других патоморфологических изменений в печени и восстановлении ее нормальной структуры.
Литература
1. Билич Г. Л., Колла В. Э. Современные проблемы фармакологической регуляции // Современные проблемы регенерации. Йошкар-Ола, 1980. С. 3-27.
2. Блюгер А. Ф., Карташова О. Я. Репаративные процессы при некоторых заболеваниях печени // Успехи гепатологии. Рига, 1977. Вып. 6. С. 120-132.
3. Ивашкин В. Т. Болезни печени и желчевыводящих путей. М.: М-Вести, 2002. 416 с.
4. Минаева В. Г. Лекарственные растения Сибири. Новосибирск, 1991. 431 с.
5. Плохинский Н. А. Алгоритмы биометрии. М., 1980. 281 с.
6. Телятьев В. В. Целебные клады. Иркутск, 1991. 400 с.
References
1. Bilich G. L., Kolla V. Je. Sovremennye problemy farmakologicheskoj regu-ljacii // Sovremennye problemy regeneracii. Joshkar-Ola, 1980. Pp. 3-27.
2. Bljuger A. F., Kartashova O. Ja. Reparativnye processy pri nekotoryh zabolevanijah pecheni // Uspehi gepatologii. Riga, 1977. V. 6. Pp. 120-132.
3. Ivashkin V. T. Bolezni pecheni i zhelchevyvodjashhih putej. M.: M-Vesti, 2002. 416 s.
4. Minaeva V. G. Lekarstvennye rastenija Sibiri. Novosibirsk, 1991. 431 p.
5. Plohinskij N. A. Algoritmy biometrii. M., 1980. 281 p.
6. Teljat'ev V. V. Celebnye klady. Irkutsk, 1991. 400 p.
