CC BY
60
УДК 616.092.9:616.36-002
И.О. Убашеев, К.С. Лоншакова, И.М. Бальхаев, О.И. Убашеев
КАЛЕФЛОН КАК СТИМУЛЯТОР РЕГЕНЕРАТОРНЫХ ПРОЦЕССОВ В ПЕЧЕНИ БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ССЦ-ГЕПАТИТЕ
Бурятский государственный университет (Улан-Удэ) Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
В работе установлено стимулирующее влияние калефлона — экстракта какалии копьевидной на регенераторные процессы, в печени белых крыс при. хроническом. СС14-гепатите.
Ключевые слова: печень, гепатит, калефлон
CALEPHLON AS A STiMULATOR OF REACTiVATiON PROCESSES iN LiVER OF WHiTE RATS AT CHRONiC CCL4-HEPATiTE
I.O. Ubasheev, K.S. Lonshakova, I.M. Balhaev, O.I. Ubasheev
Buryat State University, Ulan-Ude Institute of general and experimental Biology, Ulan-Ude
The stimulating influence of extract of spear-point cacalia Calephlon on reactivation processes in liver of white rats at chronic CCL-hepatite is stated.
Key words: liver, hepatite, Calephlon
В процесс стимуляции репаративной регенерации печени белых крыс вносит свою лепту целый ряд антиоксидантов, содержащихся в калефлоне, преимущественно полифенолы. Благодаря их ингибирующему влиянию на перекисное окисление липидов, мембранозащитному эффекту предотвращалась грубая деструкция и достигалось ускорение митоза клеток и внутриклеточной регенерации поврежденной печени животных.
Способность к регенерации сложилась в процессе эволюции. Она является одной из форм приспособления организма.
В основе лечения болезней человека и животных лежат регенераторные процессы в поврежденных органах и тканях, ибо общеизвестно, что выздоровление организма при его заболеваниях идет через регенерацию.
Полное выздоровление возможно лишь при восстановлении нормального строения клеток, тканей и органов. Поэтому и в медицине, и в ветеринарии регенерационной терапии во все времена уделялось большое внимание. Значительное место в стимуляции репаративных процессов занимали природные лекарственные средства [2, 7].
Часто применение биологически активных веществ из природного сырья определяет исход заболевания, обусловливая полноту восстановления структуры и функции поврежденных органов и систем организма. Стимулирующие регенерацию природные средства важны не только на этапе лечебных мероприятий, но и с целью профилактики болезненных состояний.
В настоящее время уделяется большое внимание регенерации патологически измененных органов. При воздействии токсических агентов в паренхиматозных органах (в том числе в печени) имеют место множественные очаги некрозов.
Восстановление органов в этих случаях протекает двояко: 1) путем заполнения очага некроза либо соединительной тканью, с последующей ее организацией, либо жизнеспособной, вновь образованной специфической тканью; 2) за счет гипертрофии другого неповрежденного участка органа.
Для стимуляции регенерации патологически измененных органов особую актуальность приобретает поиск новых средств, ускоряющих восстановление поврежденных тканей и органов [8].
Целью настоящей работы явилась оценка стимуляции регенерации печени белых крыс калефло-ном — экстрактом календулы лекарственной при хроническом СС14-гепатите.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Хронический токсический гепатит вызывали у белых крыс с массой 180 — 240 г введением 50%-ного масляного раствора СС14 в объеме 0,25 мл/100 г массы животного подкожно 2 раза в неделю в течение 1,5 месяца. Животные принимали калефлон внутрижелудочно в лозе 0,5 г/100 г через месяц с начала затравки ССЬ^ Все животные в эксперименте были разделены на три группы:
1) контрольная группа — животные, которым вводили только раствор СС14;
2) животные, получавшие калефлон после месячной затравки СС4;
3) группа интактных животных.
Всего в опытах использовано 105 белых крыс.
Морфологическое состояние печени животных исследовали в сроки: 15, 28 и 35 сутки с момента введения калефлона на фоне хронического гепатита.
Для взятия гистоматериала белых крыс декапити-ровали под эфирным наркозом. Кусочки печени фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Депарафинированные гистологические срезы
органа для оценки морфологической картины окрашивали по общепринятой методике гематоксилин-эозином [4]. Для оценки состояния перекисного окисления липидов выявляли содержание в печени пигмента липофусцина по Шморлю [3, 5].
В свежезамороженных срезах печени, полученных на микротомкриостате МК-25, определяли количество гликогена ШИК-реакцией, нейтральных жиров — суданом черным «Б», активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ-азы) и лактатдеги-дрогеназы (ЛДГ-азы) — по Нахласу.
При оценке влияния калефлона на течение репа-ративной регенерации печени после ее токсического повреждения использованы морфофункциональные показатели, характеризующие регенераторный процесс. В частности, гистологические срезы печени, окрашенные гематоксилин-эозином, употребляли для исследования митотической активности гепато-цитов и подсчета двуядерных клеток. Количество митозов и двуядерных клеток подсчитывали в 100 полях зрения гистологического препарата. Митотический индекс выражали в промилле (%0), т.е. содержание митозов на 1000 клеток, способных к делению.
Цифровые данные, полученные в опытах этой серии, обрабатывали по параметрическому критерию (I) Стьюдента-Фишера [6].
Микроскопирование гистологических, гистохимических препаратов осуществляли на немецком микроскопе «Motik» со встроенной видеокамерой и с помощью ряда прикладных программ.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
На 15 сутки в печени белых крыс контрольной группы, подвергнутых длительной интоксикации СС14, выявлялось умеренное полнокровие пери-портальных вен и капилляров в дольках. Часто наблюдалось расширение синусов. Портальные тракты увеличены в размерах, вокруг триад умеренный отек соединительной ткани с инфильтрацией круглоклеточными элементами. В ряде случаев замечена дискомплексация печеночных балок. Границы между клетками представлялись нечеткими. В отдельных гепатоцитах отмечались явления цитолиза и мутного набухания. В дольках у многих животных обнаруживался холестаз. Есть нежные тяжики соединительной ткани как по периметру долек, портальным трактам, так и вокруг отдельных групп печеночных клеток в дольке. Гистохимически выявлялись выраженная жировая инфильтрация, понижение синтеза гликогена и уровней активности окислительно-восстановительных ферментов. В значительном количестве определялись гранулы липофусцина.
На 28 сутки исследования гистологическая картина в печени контрольных животных почти соответствовала таковой в первый срок наблюдения. Гистохимически выявлены жировая инфильтрация и повышение содержания гликогена в гепатоцитах. Еще оставались гранулы липофусцина.
На 35 сутки наблюдения в ряде случаев в печени сохранялись полнокровие и расширение стенок капилляров. Вокруг триад отек не наблюдался, а
клеточная инфильтрация, как правило, сопровождалась фибриллогенезом. Уровни активности СДГ- и ЛДГ-азы и содержания гликогена значительно повышались, жировая инфильтрация органа сводилась к появлению капель жира, расположенных преимущественно по периферии печеночных долек.
При введении калефлона животным в отличие от контроля в первые сроки наблюдения (15 сутки) не было отмечено явлений «мутного» набухания клеток, что свидетельствовало об упорядочении биохимических процессов в гепатоцитах. Менее выражена полиморфноклеточная инфильтрация в паренхиме и по ходу сосудов. В меньшей степени существовали отечные изменения в портальных трактах. Гистохимически в печени выявлена очень слабая жировая инфильтрация в виде очень мелких капель. Содержание гликогена в 4 случаях из 5 очень близко к норме.
На 28 сутки в подавляющем большинстве случаев (в 4 из 6) отсутствуют соединительнотканные волоконца и полиморфно-клеточная инфильтрация, структура печени соответствовала таковой у интактных животных. Совершенно не было отмечено явление жировой инфильтрации, нет гранул липофусцина. В структуре печени наблюдалось увеличение количества гипертрофированных гепа-тоцитов с крупными темноокрашенными ядрами.
На 35 сутки у крыс, получавших калеф-лон, в одном случае из 5 отмечалась клеточномезенхимальная реакция в печени. Жировая дистрофия гепатоцитов не была выявлена. У всех животных на этот срок исследования содержание гликогена в органе не отличалось от такового в печени интактных животных. Активность окислительно-восстановительных ферментов была такой же, как в интактном контроле.
Результаты морфологических исследований показывают, что калефлон повышает по сравнению с контролем в более ранние сроки функциональную активность гепатоцитов, способствует более быстрому рассасыванию соединительнотканных тяжиков, обеспечивая в более короткие сроки нормализацию структуры органа.
Что касается регенераторных процессов, то показатели митотической активности, число двуядерных и гипертрофированных клеток при введениях белым крысам с ССЬ^гепатитом калефлона в первые сроки исследований (табл. 1, 2) свидетельствовали о вялом течении регенераторных процессов в печени крыс контрольной группы. Так, митотический индекс практически прослеживался на одном уровне во все сроки наблюдения. Число двуядерных гепатоцитов незначительно менялось на протяжении всего эксперимента.
У животных, получавших калефлон, митотический индекс в клетках печени возрастал по сравнению с контролем в 2,2 — 2,5 раза во все сроки эксперимента (табл. 1). Число двуядерных гепатоцитов повышалось к концу исследований по сравнению с контролем в 3 раза. Среднее число гипертрофированных клеток у крыс на фоне введений калефлона постепенно увеличивалось до 69,1 ± 0,3 при контроле
Таблица 1
Показатели митотической активности гепатоцитов белых крыс (%) при хроническом токсическом гепатите
на фоне фармакотерапии калефлоном (М ± m)
№ Условия опыта Срок исследования, сутки
п/п 15 28 35
1 СС14 (контроль), n = 7 1,3 ± 0,03 1,9 ± 0,01 1,7 ± 0,01
2 CCl4 + калефлон, n = 7 2,9 ± 0,01* 4,7 ± 0,07* 2,4 ± 0,04*
Примечание: * - достоверность по сравнению с контролем при Р < 0,05; п - количество животных в группе.
Таблица 2
Показатели регенерации в печени белых крыс при хроническом гепатите на фоне введений калефлона (М ± m)
№ п/п Условия опыта Число двуядерных клеток Количество гипертрофированных клеток
Срок исследования, сутки
15 28 35 15 28 35
1 СС14 (контроль), n = 7 18,2 ± 1,2* 12,4 ± 0,6* 13,5 ± 0,8* 20,2 ± 1,2* 19,5 ± 1,2* 18,6 ± 1,3*
2 CCl4 + калефлон, n = 7 25,5 ± 2,1** 28,5 ± 2,3** 38,4 ± 1,2** 43,2 ± 2,1** 43,2 ± 2,1** 69,1 ± 4,2**
3 Интактный контроль, n = 7 7,3 ± 0,2 79,0 ± 0,8 6,9 ± 0,1 10,4 ± 0,4 10,4 ± 0,4 12,0 ± 0,2
Примечание: * - различие достоверно по отношению к интактному контролю (Р < 0,05);** - различие достоверно по отношению к контролю (Р < 0,05); п - количество животных в группе.
18,6 ± 0,1 (табл. 2). Все эти явления — показатель того, что в печени крыс, получавших калефлон, регенераторные процессы проходят значительно активнее по сравнению с таковыми у крыс контрольной группы. В основе выявленного стимулирующего влияния изучаемого средства на регенераторные процессы в поврежденной печени следует считать ведущим молекулярно-биологический механизм, сводящийся к ингибированию перекисных процессов и стабилизации мембран в ней [1, 9—11]. В результате ингибирующего влияния калефлона на процессы свободнорадикального окисления липидов и последующего снижения концентрации токсических перекисных продуктов достигается ускорение митотического деления клетки, т.е. процессов клеточной регенерации, что убедительно показано в наших исследованиях. Можно предположить, что в процессе стимуляции репаративной регенерации печени вносит слою лепту целый ряд антиоксидантов, содержащихся в калефлоне, преимущественно полифенолы.
Благодаря ингибирующему влиянию на пере-кисное окисление липидов, мембранозащитному эффекту их предотвращалась грубая деструкция и достигалось ускорение митоза клеток и внутриклеточной регенерации в поврежденной печени у животных.
В случаях фармакотерапии калефлоном белых крыс с хроническим СС14-гепатитом усиление регенерации в паренхиме печени способствовало ускорению резорбции тяжиков соединительной ткани, фуксинофильных волокон [7, 8].
ЛИТЕРАТУРА
1. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой.
- Киев, 1976. - 260 с.
2. Буеверов А.О. Современные аспекты патогенеза алкогольной болезни печени / А.О. Буеверов // Новое в изучении патогенеза и лечения алкогольной болезни печени: Материалы симпозиума.
- М., 2003. - С. 9-12.
3. Лилли P. Патологистологическая техника и практическая гистохимия / P. Лилли. - М., 1969. - 645 с.
4. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. - М., 1969. -423 с.
5. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная / Э. Пирс. - М., 1962. - 962 с.
6. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии / Н.А. Плохинский. - М., 1980. - 281 с.
7. Саркисов Д.С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / Д.С. Саркисов. - М., 1987. - 448 с.
8. Чернух А.М. Воспаление / А.М. Чернух. -М., 1979. - 448 с.
9. Middleton Е. The flavonoids / Е. Middleton // Trends Pharmacol. Sci. - 1984. - Vol. 5, N 8. -P. 336-338.
10. Mittelbach Н.Р. Zur Chemoprophylaxe und Therapie der Wundinfection, besonders der Verbren-nunswunden / Н.Р. Mittelbach // Ther. d. Gedenw.
- 1970. - В. 109, N 12. - S. 1761 -1773.
11. Tappel A.L. Lipid peroxidation damage to cell components / A.L. Tappel // Feder. proc. -1973. -Vol. 32. - P. 1870-1874.
Сведения об авторах:
И.О. Убашеев. Бурятский государственный университет, г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская 36, А тел. (3012) 44-82-55
