CC BY
65
УДК 615.32.-092:616.61
□.Л. ЛПШШП D.e. иППЩ, т.н. кШШШС
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЭКСТРАКТА ЗУБЧАТКИ ПОЗДНЕЙ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГЕПАТИТЕ
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
Установлено гепатозащитное действие сухого экстракта Odontites serotina (Lam) Dum. при экспериментальном, токсическом, гепатите. В основе механизма действия экстракта лежит, его способность ингибировать процессы, свободнорадикального окисления липидов, предупреждать развитие синдрома холестаза, цитолиза и. стимулировать регенераторную функцию печени. Ключевые слова: токсический гепатит, холестаз, цитолиз, хемилюминесценция, регенерация печени
PHARMACOTHERAPEUTIC EFFICACY OF THE ODONTITES SEROTINA (LAM) DUM EXTRACT IN EXPERIMENTAL HEPATITIS
T.A. Azhunova, S.V. Lemza, S.M. Nikolayev
Institute of General and Experimental Biology, SB RAS, Ulan-Ude
Hepatoprotective effect of the dry extract from Odontiter serotina (Lam) Dum. in experimental toxic hepatitis has been found. Its ability to inhibit free radical lipid, oxidation, to prevent the development of cholestasis, cytolysis, to stimulate liver regeneration, underlie the mechanism, of the extract activity.
Key words: toxic hepatitis, cholestasis, cytolysis, liver regeneration
В настоящее время болезни органов пищеварения занимают третье место по распространенности среди основных классов болезней [1, 3, 11, 12]. В связи с этим возрастает актуальность поиска новых лекарственных препаратов, обладающих гепатоза-щитными свойствами, в частности, фитопрепаратов, которые имеют широкий диапазон действия и обладают такими важными преимуществами, как малая токсичность, высокая эффективность и возможность длительного применения без побочных проявлений. При применении фитопрепаратов действует целый комплекс биологически активных веществ, которые, благодаря их оптимальному сочетанию, оказывают благотворное влияние на функциональное состояние всего организма в целом [5,
6, 10]. Преимущественная фармакотерапевтическая и профилактическая эффективность растительных средств обусловлена не только их воздействием на патологический процесс, но и их регулирующим влиянием на соответствующие функциональные системы, повышая устойчивость организма.
Экстракт зубчатки поздней получен по технологии, включающей измельчение растительного сырья, экстракцию 20% этанолом (дробная мацерация), фильтрацию, упаривание, сушку в вакууме и порошкование. Полученный экстракт представляет собой растворимый в воде коричневый порошок горьковатого вкуса с характерным запахом: содержит 13—15 % флавоноидов, а также иридоидные гликозиды [8].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты проведены на 35 крысах линии Wistar обоего пола массой 150—160 г. Животные находились в стандартных условиях вивария на обычном рационе. Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с исполь-
зованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.).
Острое повреждение печени вызывали путем подкожного введения 50% масляного раствора 1 раз в сутки в течение 4 дней. Экстракт зубчатки поздней (ЭЗП) вводили крысам 1 раз в сутки внутрижелу-дочно в установленной экспериментально-терапевтической дозе 300 мг/кг в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг в течение всего эксперимента. Крысы контрольной группы по аналогичной схеме в соответствующем объеме получали дистиллированную воду. Исследования проводили через 7, 14 и 21 сутки от начала введения гепатотропного токсина (CCl4). Определяли митотическую активность гепатоцитов и оценивали показатели регенерации печени при экспериментальном гепатите [4]. Для определения интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) регистрировали динамику изменения уровня хемилюминесценции в липидах печени [6]. Биохимическое исследование биологических жидкостей организма лабораторных животных выполняли с помощью унифицированных методов с использованием диагностических наборов «Вектор-Бест» (Россия) и «Lachema» (Чехия). Для определения влияния экстракта зубчатки поздней на желчевыделительную и желчеобразовательную функцию печени применяли методы, изложенные в руководстве [9].
Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ Excel. Отличия между выборками оценивали с помощью t-критерия Стъюдента. Различия считались достоверными при p < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты проведенных исследований свидетельствовали об улучшении функционального
ПІІІІІІІІІІІІІІ ІПII IIIII I I ІІГП □ I I I I I I III Г nil I I I II I
109
Таблица 1
Динамика изменений основных биохимических показателей в сыворотке крови под влиянием ЭЗП при экспериментальном тетрахлорметановом гепатите у крыс
Показатели Группы животных
Интактная Контрольная (тетрахлорметан) Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП)
7 сутки
АпТ, мкМ/мл ч 0,71 ± 0,08 4,49 ± 0,22 3,98 ± 0,23
АсТ, мкМ/мл ч 0,41 ± 0,03 3,45 ± 0,17 3,10 ± 0,15
Тимоловая проба, ед. помутн. 1,40 ± 0,15 7,46 ± 0,50 6,26 ± 0,30*
р-липопротеиды, ед. 0,91 ± 0,06 1,40 ± 0,13 0,89 ± 0,08
Холестерин, мг % 51,00 ± 2,10 92,00 ± 4,00 83,00 ± 4,50
Общий билирубин, мг % 0,90 ± 0,02 5,54 ± 0,34 4,42 ± 0,28
Прямой билирубин, мг % 0,47 ± 0,03 2,92 ± 0,21 2,36 ± 0,20*
Непрямой билирубин, мг % 0,43 ± 0,02 2,78 ± 0,23 2,08 ± 0,11*
14 сутки
АпТ, мкМ/мл ч 0,71 ± 0,08 3,40 ± 0,20 2,54 ± 0,17*
АсТ, мкМ/мл ч 0,41 ± 0,03 3,48 ± 0,20 2,92 ± 0,23
Тимоловая проба, ед. помутн. 1,40 ± 0,15 5,90 ± 0,28 3,00 ± 0,27*
р-липопротеиды, ед. 0,91 ± 0,06 1,60 ± 0,10 1,31 ± 0,07*
Холестерин, мг % 51,00 ± 2,10 110,00 ± 8,63 78,00 ± 0,50*
Общий билирубин, мг % 0,90 ± 0,02 3,63 ± 0,36 2,41 ± 0,21*
Прямой билирубин, мг % 0,47 ± 0,03 1,75 ± 0,11 1,18 ± 0,15*
Непрямой билирубин, мг % 0,43 ± 0,02 1,88 ± 0,20 1,24 ± 0,14*
21 сутки
АпТ, мкМ/мл ч 0,71 ± 0,08 2,44 ± 0,27 1,54 ± 0,14
АсТ, мкМ/мл ч 0,41 ± 0,03 3,26 ± 0,20 2,45 ± 0,25*
Тимоловая проба, ед. помутн. 1,40 ± 0,17 6,14 ± 0,48 4,20 ± 0,30*
р-липопротеиды, ед. 0,91 ± 0,03 1,28 ± 0,12 1,93 ± 0,18
Примечание: * - здесь и далее разница достоверна по сравнению с контролем при p < 0,05.
Таблица 3
Динамика изменения скорости секреции желчи под влиянием экстракта зубчатки поздней при экспериментальном (СС14) гепатите у белых крыс
Сутки наблюдения Группы животных Скорость секреции желчи в течение 4 ч, мг/100 г
1 ч 2 ч 3 ч 4 ч
7 Контрольная (тетрахлорметан) 3,8 ± 0,3 4,2 ± 0,2 4,1 ± 0,3 3,5 ± 0,2
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 4,7 ± 0,5 7,6 ± 0,8* 5,3 ± 0,8 4,8 ± 0,6*
14 Контрольная (тетрахлорметан) 4,6 ± 0,1* 4,1 ± 0,3* 4,6 ± 0,3* 4,1 ± 0,4*
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 5,9 ± 0,4* 7,7 ± 0,3* 7,0 ± 0,5* 5,5 ± 0,4*
21 Контрольная (тетрахлорметан) 4,4 ± 0,3 5,3 ± 0,1 5,1 ± 0,1 5,0 ± 0,2
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП 5,1 ± 0,4 6,7 ± 0,7* 6,0 ± 0,5 5,0 ± 0,4
состояния печени на фоне фармакотерапии экстрактом зубчатки поздней (ЭЗП) токсического гепатита (табл. 1).
При этом обращало внимание более активное действие испытуемого экстракта на проявления синдрома холестаза. При хемилю-минесцентном исследовании липидов печени установлено отчетливое снижение интенсивности свободнорадикальных реакций при введении ЭЗП (табл. 2).
Таблица 2
Динамика изменений хемилюминесценции липидов печени (имп/сек) под влиянием ЭЗП при экспериментальном (СС1^) гепатите у крыс
Сутки наблюдения Группы животных
Контрольная (тетрахлорметан) Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП)
7 254,0 ± 11,6 176,0 ± 23,3*
14 184,0 ± 9,8 116,0 ± 10,0*
21 170,0 ± 6,5 110,0 ± 9,0*
НО
ПІІІІІІІІІІІІІІІІІПІІІІІІ ІІІІГП □ I I I I I □ ПІ ІІІІІ
Таблица 4
Динамика изменения биохимического состава желчи под влиянием экстракта зубчатки поздней при экспериментальном (СС14) гепатите у крыс
Сутки наблюдения Группы животных Общее количество желчи за 1-4 ч, мг мин/100 г Общее количество желчных кислот, мг % Билирубин, мг % Холестерин, мг %
7 Контрольная (тетрахлорметан) 936 ± 55 6,82 ± 0,30 0,068 0,065
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 1314 ± 103* 9,62 ± 0,20* 0,084 0,106
14 Контрольная (тетрахлорметан) 1062 ± 72 4,56 ± 0,10 0,084 0,096
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 1626 ± 12* 7,36 ± 0,40* 0,096 0,127
21 Контрольная (тетрахлорметан) 1188±113 5,79 ± 0,4 0,098 0,094
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 1368±189 5,65 ± 0,5 0,054 0,095
Одновременно на фоне фармакотерапии ЭЗП экспериментального гепатита у белых крыс поддерживалась функциональная состоятельность внешнесекреторной деятельности печени (табл. 3 — 4). В частности, введение ЭЗП сопровождалось усилением холереза, стимуляцией образования желчных кислот и ускорением их выведения с желчью.
Таблица 5
Влияние экстракта зубчатки поздней на показатели Шитотической активности гепатоцитов белых крыс при остром токсическом (СС14) гепатите
Группы животных Сутки наблюдения
7 14
Контрольная (тетрахлорметан) 0,30 ± 0,002 0,70 ± 0,002*
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 2,70 ± 0,003* 2,30 ± 0,001*
При патоморфологическом исследовании печени у животных, получавших экстракт зубчатки поздней, на 7-е сутки развития экспериментального гепатита обнаруживали умеренное полнокровие сосудов с инфильтрацией ткани органа клетками лейкоцитарного ряда, находили участки «баллонной», зернистой и жировой дистрофии ткани, центролобулярные некрозы и некробиозы клеток. Встречались на срезах органа двуядерные и гипертрофированные гепатоциты (табл. 5 — 6) с гиперхромными ядрами; изредка обнаруживались фигуры митоза. В контрольной группе крыс на этот же срок наблюдения капсула печени была отечной, и под ней обнаруживали выраженную инфильтрацию лейкоцитарными элементами. Междольковые кровеносные сосуды и центральные вены были полнокровными, пространства Диссе — расширенными. По ходу сосудов отмечали обширные лимфоцитарные инфильтраты, находили множественные очаги некрозов, участки некробиоза и зернистой дистрофии. Встречали явления вакуольной дистрофии, картину стирания балочного строения, выраженную крупнокапельную жировую дистрофию, охватывающую всю дольку печени.
Таблица 6 Влияние экстракта зубчатки поздней на показатели регенерации в печени белых крыс при экспериментальном (СС14) гепатите
Группы животных Сутки исследования
7 14
Число двуядерных клеток
Контрольная (тетрахлорметан) 10,60 ± 0,001 22,30 ± 0,02
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 37,00 ± 0,03* 19,60 ± 0,01*
Число гипертрофированных клеток
Контрольная (тетрахлорметан) 10,60 ± 0,04 22,40 ± 0,02
Опытная (тетрахлорметан + ЭЗП) 54,30 ± 0,005* 59,3 ± 0,06*
Активность щелочной и кислой фосфатаз в органе была высокой по сравнению с данными в опытной группе крыс. На 14 сутки наблюдения в группе животных на фоне фармакотерапии экстрактом зубчатки поздней токсического гепатита отмечали умеренные гемодинамические нарушения и неярко выраженные дистрофические изменения. Очагов некроза не находили, сохранялась еще незначительная мелкокапельная жировая инфильтрация на отдельных участках. Клеточные инфильтраты, как правило, были очаговыми, в их составе преобладали гистиолимфоцитарные элементы. Ближе к центру долек обнаруживали множество крупных темноокрашенных гепатоцитов с гиперхромными ядрами, а также двуядерных клеток и фигур митоза. В контроле сохранялись еще выраженные гемоди-намические изменения в органе: полнокровие вен, междольковых сосудов и капилляров. Находили вторичные очаги некрозов и некробиозов, границы между клетками были трудноразличимыми, наблюдали проявления «баллонной» дистрофии и «мутного набухания» гепатоцитов, а жировая инфильтрация органа была представлена средними и реже крупными каплями жира. Гистохимически выявлялись большое содержание жира, низкие активности сукцинат- и лактатдегидрогеназ и высокие уровни активности кислой и щелочной фосфатаз, а в опыте при фармакотерапии экстрактом зубчатки поздней наблюдали высокую активность окисли-
ПІІІІММІМІІІІМІІПІІІІІІ ІІІІГП □ I I II II III Г ПІІ ІІІІІ I
111
тельно-восстановительных ферментов, повышенное содержание гликогена и соответственно малую активность фосфатаз. На 21 сутки развития экспериментального гепатита на фоне применения экстракта отмечались выраженные признаки активации восстановительных процессов, не обнаруживались при микроскопическом исследовании дистрофические участки и зоны вторичных некрозов; в контроле же наблюдали еще выраженное полнокровие сосудов со значительной клеточной инфильтрацией, мелкокапельную жировую дистрофию и области с белковой дистрофией, а также участки вторичного некроза и перицеллюлярного отека.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Курсовое введение животным экстракта зубчатки поздней в экспериментально-терапевтической дозе 300 мг/кг при экспериментальном гепатите у крыс сопровождается нормализацией функционального состояния печени, способствует более раннему восстановлению структуры органов гепатобилиарной системы. Фармакологическое действие экстракта зубчатки поздней обусловлено собственным антиоксидантным эффектом и потенцированием эндогенных антиоксидантных систем. Указанное растительное средство улучшает обмен белков, липидов, углеводов, антитоксическую, экскреторную, холеретическую и другие функции печени, устраняет гиперферментемию, поддерживает процессы регенерации. Обнаруженное выраженное фармакотерапевтическое влияние экстракта зубчатки обусловлено содержанием в нем в значительных количествах веществ фенольной природы, способных ингибировать процессы свободнорадикального окисления липидов [7], а также наличием витаминов, макро- и микроэлементов, полисахаридов, органических кислот [2], обеспечивающих в совокупности указанный эффект.
ЛИТЕРАТУРА
1. Апросина З.Г. Хронические вирусные заболевания печени // Тер. архив. — 1995. — № 5. — С. 77-80.
2. Биологически активные вещества растительного происхождения. — М., 2001 -2002. — Т. 1. — 350 с.; Т. 2. — 764 с.; Т. 3. — 216 с.
3. Блюм Х.Е. Гепатит С: современное состояние проблемы // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 2005. — № 1. — С. 20 — 25.
4. Микроскопическая техника: руководство для врачей и лаборантов. — М., 1996. — 544 с.
5. Никитин И.Г. Гепатопротекторы: мифы и реальные возможности // Фарматека. — 2007. — № 13. — С. 14—18.
6. Николаев С.М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы. — 1992. — 155 с.
7. Николаев С.М., Ажунова Т.А. Биантиоксиданты в терапии повреждений печени // Тез. докл. междунар. конф. «Биантиоксидант». — Тюмень, 1997. — С. 184.
8. Николаев С.М., Гармаев Р.Б. О желчегонной активности Odontites serotina (Lam) Dum // Раст. ресурсы. — 1982. — № 1. — С. 91—93.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — 832 с.
10. Сологуб Т.В., Романцев М.Г., Коваленко С.Н. и др. Комбинированная терапия хронического вирусного гепатита В и ее влияние на качество жизни // Вестн. СПб. Гос. мед. академии. — 2006. — № 1. — С. 7—14.
11. Kuntz E., Kuntz H-D. Hepatology. Principles and Practice. — Springier, Berlin, Heidenberg, 2002. — P. 700 — 703.
12. Tiegs G. Experimental hepatitias and role of cytokins // Acta Gastroenterol. Belg. — 2002. — Vol. 60. — P. 176—179.
Сведения об авторах
Николаев Сергей Матвеевич - заведующий Отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, доктор медицинских наук, профессор.
Ажунова Татьяна Александровна - ведущий научный сотрудник Отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, доктор биологических наук; ответственная за переписку (670042, Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: 43-34-63; e-mail: [email protected]).
Лемза Сергей Васильевич - старший научный сотрудник Отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, кандидат биологических наук.
112
nilllllllllllllllin IIIIII 1111ГП □ I I I I I □ nil I I I I I
