CC BY
29
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
чаще у ER+PR+РМЖ (19,1%) и ER+PR-РМЖ (21,4%), чем у здоровых женщин (7,6%) (р < 0,05). Наличие только IgA-Pg без IgA-Es не было ассоциировано с РМЖ. Одновременно повышенные уровни обоих АТ значительно чаще встречались только у больных ER+PR+РМЖ в отличие от здоровых женщин (33,3% против 22,1% соответственно, р = 0,003).
Заключение. Впервые выявлены ассоциации антител к стероидным гормонам с РМЖ: при одновременном отсутствии IgA-Es и IgA-Pg риск ER+PR+РМЖ снижается (OR = 0,5, 95%CI 0,3-0,7), а при одновременном их образовании — повышается (OR = 2,2, 95%CI 1,3-3,7). Рекомендуется использовать предлагаемый вариант иммуноа-нализа антител к стероидным гормонам для определения показателей к превентивному назначению селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов.
ОСОБЕННОСТИ МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Стахеева М.Н., Патышева М.Р., Андреева А.А., Тарабановская Н.А., Кайгородова Е.В., Слонимская Е.М., Чердынцева Н.В.
Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН, Томск, Россия
Макрофаги, ассоциированные с опухолью (МАО), занимают одну из центральных позиций в патогенезе злокачественных опухолей (Allavena P., Mantovani A., 2012). Эффекторы острой фазы воспаления М1-макрофаги реализуют цитотоксическую активность, в том числе и в отношении опухолевых клеток (Biswas S., Mantovani A., 2014). М2-макрофаги, активированные по альтернативному пути и опосредующие регенераторную фазу воспаления, в отношении опухоли проявляют рост-стимулирующую, ангиогенез-стимулирующую и иммуносупрессорную активность (Sica A., Mantovani A., 2012). Возможность изменить свойства МАО от М2-типа в сторону М1 делает их перспективным объектом для поиска и создания новых противоопухолевых иммунотерапевтических подходов. Большинство исследований для изучения свойств МАО и модуляции их активности используют модель индукции макрофагов из моноцитов периферической крови (ПК) здоровых доноров (Ambarus C.A. et al., 2012; Toniolo A. et al., 2015; Yang Y. et al., 2016). Вызывает сомнение адекватность подобного подхода, поскольку очевидно, что моноциты больного злокачественным новообразованием находятся в других условиях существования по сравнению со здоровыми лицами. Подобные отличия могут приводить к значимым изменениям базовых свойств моноцитов и изменять чувствительность к стимулам, индуцирующим поляризацию тканевых макрофагов. Целью работы явилось сравнение свойств (фенотип, экспрессия генов, продукция цитокинов) моноцитов ПК у больных раком молочной железы (РМЖ) и у здоровых лиц и выявление взаимосвязи с особенностями среды циркуляции (сывороточные цито-кины, циркулирующие опухолевые клетки).
Материалы и методы. В исследование включены 18 пациенток с впервые диагностированным инвазивным РМЖ и 6 здоровых женщин. В периферической крови методом проточной цитофлюориметрии были определены М1 (CD68+), M2 (CD163+) моноциты; моноциты, экспрессирующие рецепторы к IFNy(CD119+) и IL-4(CD124+); моноциты, продуцирующие внутриклеточные цитокины IL-1ß и TNFa. В полученной методом
магнитной сепарации фракции моноцитов методом количественной ПЦР в реальном времени была проведена оценка экспрессии генов, ассоциированных с поляризацией М1 (IL-1ß,TNFa) и М2 (CHI3L1, CHI3L2, CHID1, Stabilini). В качестве важных факторов среды циркуляции оценивали уровень воспалительных (IFNy, IL-1ß и TNFa) и противовоспалительных (IL-4) цитокинов в сыворотке крови методом ИФА и количество циркулирующих опухолевых клеток с фенотипом EpCAM+ (метод проточной цитофлюриметрии).
Результаты. Известно, что характерными особенностями злокачественного процесса являются системное воспаление и циркуляция опухолевых клеток в кровотоке (Ben- Baruch A., 2012; Serrano M.J., 2012). Действительно, в нашем исследовании уровень воспалительных цитокинов IFNy. IL-1ß и TNFa у больных РМЖ превышал соответствующие показатели у здоровых лиц в 4,48; 4,48 и 1,83 раза (р = 0,07; 0,002 и 0,1). Увеличение воспалительных цитокинов в циркуляции сопровождалось статистически значимым снижением экспрессии их генов и уменьшением внутриклеточной продукции IL-1ß в моноцитах ПК по сравнению со здоровым контролем. Однако количество CD68+ моноцитов ПК, которые, по мнению ряда авторов, характеризуют М1-популяцию моноцитов, не имело статистически значимых различий у больных РМЖ и у здоровых лиц. Значимым отличием в популяционной структуре моноцитов ПК у больных РМЖ явилось снижение М2 (CD163+) популяции и пула CD124+ моноцитов, экспрессирующих рецептор к IL-4 — главному индуктору М2-поляризации, по сравнению со здоровыми лицами. Если в группе контроля CD163+ моноциты составляли 14,35% от всех моноцитов, то у больных злокачественным новообразованием данный показатель равнялся лишь 0,85% (р = 0,0009). CD124+ популяция моноцитов у больных РМЖ в 3,6 раза меньше, чем у здоровых лиц (р = 0,005). При этом экспрессия генов-маркеров М2 в моноцитах и уровень сывороточного IL-4 не имели различий в группах сравнения. Интересен тот факт, что количество CD124+ моноцитов ПК у больных РМЖ коррелировало с уровнем EpCAM+ циркулирующих опухолевых клеток (r = 0,7, p < 0,05).
Заключение. Моноциты ПК у больных РМЖ и у здоровых лиц имеют выраженные фенотипические, экс-прессионные и функциональные отличия. Выявленные отличия связаны с системным воспалением и циркуляцией опухолевых клеток в кровотоке у больных РМЖ и могут оказаться критическими для осуществления направленного программирования свойств индуцируемых из моноцитов макрофагов у больных злокачественными новообразованиями, что следует учитывать при разработке иммунотерапевтических подходов.
ОЦЕНКА ПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ С ГЛИОБЛАСТОМАМИ ДО И ПОСЛЕ ОПЕРАТИВНОГО ВМЕШАТЕЛЬСТВА
Сухина И.А., Чемодакова К.А., Мартынов Б.В., Никитин В.Ю., Иванов А.М., Иванникова Л.П.
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Глиомы (нейроэпителиальные опухоли) составляют около 60% всех опухолей головного мозга. В настоящее время их лечение, в зависимости от степени злокачественности, может сочетать различные под-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ходы, такие как хирургическое вмешательство, лучевая терапия, химиотерапия. Эти методы, не смотря на достижения, остаются неудовлетворительными, особенно для глиобластом, что приводит к необходимости поиска новых вариантов лечения. Перспективным методом для борьбы с некоторыми опухолями стала иммунотерапия, но ее применение для лечения глиом имело ограниченный успех. Изучение иммунобиологии глиальных новообразований головного мозга поможет понять причины неудачи этого терапевтического метода и привести к более успешному лечению в будущем.
Цель и задачи. Целью данного исследования явилось выявление значимых иммунологических показателей у пациентов с глиомами, динамика их изменения после проведения хирургического лечения для подбора наиболее адекватной тактики терапии в дальнейшем. Для решения этой задачи у больных глиальными опухолями с различными гистологической структурой и степенью злокачественности были исследованы субпопуляции Ти NK-лимфоцитов, основных участников противоопухолевого иммунитета.
Материалы и методы. Исследована периферическая кровь (ПК) 58 пациентов с глиальными опухолями головного мозга различной степени злокачественности. Взятие крови проводили в день выполнения оперативного вмешательства и на 7-е сутки после него. Иммунофено-типирование лимфоцитов периферической крови (ПК) осуществляли на проточном цитометре «Cytomics FC500» (фирма Beckman Coulter, США) с использованием комбинаций прямых моноклональных антител той же фирмы: CD45FITC/CD4PE/CD8ECD/CD3PC5/CD25PC7, CD45FITC/CD56PE/CD19ECD/CD3PC5.
Результаты. Пациенты были распределены по группам по степени злокачественности: группа grade II (диффузные глиомы) — 19 чел. (33%); группа grade III (анапласти-ческие глиомы) — 21 чел. (36%); группа grade IV (глио-бластомы) — 18 чел. (31%). После первичного иммунофе-нотипического исследования больным было проведено хирургическое лечение: в группе с диффузными глиомами (grade II) преимущественно выполнялась стереотакси-ческая биопсия, в случаях с глиомами grade III-IV (high grade) — открытое вмешательство и криодеструкция опухоли в целевых точках. До хирургического лечения в ПК больных с глиомами низкой степени злокачественности (grade II) отмечалось более высокое (р < 0,05) абсолютное количество общих Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD3+CD4+) и NK-клеток (CD3CD56+) по сравнению с пациентами с глиомами высокой степени злокачественности (high grade). В послеоперационном периоде в группе grade II было обнаружено выраженное (р < 0,05) снижение числа CD3+ (до: 2,42±0,18; после: 1,54±0,09), CD3+CD4+ (до: 1,56±0,12; после: 0,95±0,07), CD3CD56+ (до: 15,47±1,58; после 7,17±0,47) и увеличение (р < 0,05) популяции CD3+CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) (до: 0,53±0,04; после: 0,79±0,07). Тогда как у больных с grade III,IV глиомами статистически значимых изменений данных показателей после операции не наблюдалось. В то же время в ПК больных с high grade глиомами и до, и после операции выявлено повышение (р < 0,05) абсолютного количества Т-киллеров (CD3+CD56+). Наряду с этим в группе grade IV на дооперационом этапе по сравнению с другими группами зафиксировано увеличение (р < 0,05) относительного количества ^eg (CD3+CD4+CD25bnsht), обладающих супрессорной функцией.
Заключение. На дооперационном уровне у пациентов с диффузными астроцитомами (grade II) (в отличие от больных с grade III, IV) наблюдалась активация Т-клеточного звена иммунитета и NK-клеток, препятствующая быстрому развитию опухоли, но при недостаточно эффективном цитотоксическом Т-клеточном ответе. После хирургического вмешательства пациенты группы grade II (в отличие от больных с grade III, IV) продемонстрировали усиление цитотоксического ответа. Уменьшение количества NK-клеток у пациентов с диффузными астроцитомами (grade II) и анапластиче-скими глиомами (grade III) после хирургического лечения может быть связано с миграцией этих клеток в зону оперативного вмешательства. Повышенное количество Т-киллеров до и после хирургического вмешательства у больных с high grade глиомами возможно отражает компенсаторную реакцию иммунной системы на низкий ЦТЛ ответ. Увеличение Treg на дооперационном этапе свидетельствует о нарушении противоопухолевого иммунного ответа (возможно инициированного опухолью), что является причиной подавления цитотоксического Т-клеточного ответа у больных с high grade глиомами.
МЕХАНИЗМЫ ДЕФЕКТНОСТИ TNFa-ОПОСРЕДОВАННОЙ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ГЛИОМАМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА
Тыринова Т.В.1, Леплина О.Ю.1, Мишинов С.В.2, Долгова Е.В.4, Проскурякова А.С.4, Баторов Е.В.1, Калиновский А.В.3, Чернов С.В.3, Ступак В.В.2, Богачев С.С.4, Черных Е.Р.1
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
2 ФГБУ«Научно-исследовательский институт Травматологии и ортопедии им. Я.Л. Цивьяна» Министерства здравоохранения РФ, Новосибирск, Россия
3 ФГБУ «Федеральный центр нейрохирургии» Министерства здравоохранения РФ, Новосибирск, Россия
4 ФГНУ «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук», Новосибирск, Россия
Введение. Дендритные клетки (ДК) играют ключевую роль в индукции противоопухолевого иммунного ответа и при этом обладают эффекторной функцией, заключающейся в способности лизировать опухолевые клетки. У больных злокачественными глиомами ДК характеризуются нарушением цитотоксической активности против TNFa-чувствительных опухолевых клеток, что связано с низким уровнем экспрессии мембранной формы TNFa (mTNFa) на ДК. Одним из позитивных регуляторов ци-тотоксичности ДК и экспрессии mTNFa является экзогенная двуцепочечная ДНК человека (dsDNA).
Цель. Настоящее исследование направлено на изучение механизмов дефектности mTNFa-медиируемой цитотоксической активности ДК больных злокачественными глиомами, а также роли dsDNA в регуляции этих механизмов.
