CC BY
17
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ходы, такие как хирургическое вмешательство, лучевая терапия, химиотерапия. Эти методы, не смотря на достижения, остаются неудовлетворительными, особенно для глиобластом, что приводит к необходимости поиска новых вариантов лечения. Перспективным методом для борьбы с некоторыми опухолями стала иммунотерапия, но ее применение для лечения глиом имело ограниченный успех. Изучение иммунобиологии глиальных новообразований головного мозга поможет понять причины неудачи этого терапевтического метода и привести к более успешному лечению в будущем.
Цель и задачи. Целью данного исследования явилось выявление значимых иммунологических показателей у пациентов с глиомами, динамика их изменения после проведения хирургического лечения для подбора наиболее адекватной тактики терапии в дальнейшем. Для решения этой задачи у больных глиальными опухолями с различными гистологической структурой и степенью злокачественности были исследованы субпопуляции Ти NK-лимфоцитов, основных участников противоопухолевого иммунитета.
Материалы и методы. Исследована периферическая кровь (ПК) 58 пациентов с глиальными опухолями головного мозга различной степени злокачественности. Взятие крови проводили в день выполнения оперативного вмешательства и на 7-е сутки после него. Иммунофено-типирование лимфоцитов периферической крови (ПК) осуществляли на проточном цитометре «Cytomics FC500» (фирма Beckman Coulter, США) с использованием комбинаций прямых моноклональных антител той же фирмы: CD45FITC/CD4PE/CD8ECD/CD3PC5/CD25PC7, CD45FITC/CD56PE/CD19ECD/CD3PC5.
Результаты. Пациенты были распределены по группам по степени злокачественности: группа grade II (диффузные глиомы) — 19 чел. (33%); группа grade III (анапласти-ческие глиомы) — 21 чел. (36%); группа grade IV (глио-бластомы) — 18 чел. (31%). После первичного иммунофе-нотипического исследования больным было проведено хирургическое лечение: в группе с диффузными глиомами (grade II) преимущественно выполнялась стереотакси-ческая биопсия, в случаях с глиомами grade III-IV (high grade) — открытое вмешательство и криодеструкция опухоли в целевых точках. До хирургического лечения в ПК больных с глиомами низкой степени злокачественности (grade II) отмечалось более высокое (р < 0,05) абсолютное количество общих Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD3+CD4+) и NK-клеток (CD3CD56+) по сравнению с пациентами с глиомами высокой степени злокачественности (high grade). В послеоперационном периоде в группе grade II было обнаружено выраженное (р < 0,05) снижение числа CD3+ (до: 2,42±0,18; после: 1,54±0,09), CD3+CD4+ (до: 1,56±0,12; после: 0,95±0,07), CD3CD56+ (до: 15,47±1,58; после 7,17±0,47) и увеличение (р < 0,05) популяции CD3+CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) (до: 0,53±0,04; после: 0,79±0,07). Тогда как у больных с grade III,IV глиомами статистически значимых изменений данных показателей после операции не наблюдалось. В то же время в ПК больных с high grade глиомами и до, и после операции выявлено повышение (р < 0,05) абсолютного количества Т-киллеров (CD3+CD56+). Наряду с этим в группе grade IV на дооперационом этапе по сравнению с другими группами зафиксировано увеличение (р < 0,05) относительного количества ^eg (CD3+CD4+CD25bnsht), обладающих супрессорной функцией.
Заключение. На дооперационном уровне у пациентов с диффузными астроцитомами (grade II) (в отличие от больных с grade III, IV) наблюдалась активация Т-клеточного звена иммунитета и NK-клеток, препятствующая быстрому развитию опухоли, но при недостаточно эффективном цитотоксическом Т-клеточном ответе. После хирургического вмешательства пациенты группы grade II (в отличие от больных с grade III, IV) продемонстрировали усиление цитотоксического ответа. Уменьшение количества NK-клеток у пациентов с диффузными астроцитомами (grade II) и анапластиче-скими глиомами (grade III) после хирургического лечения может быть связано с миграцией этих клеток в зону оперативного вмешательства. Повышенное количество Т-киллеров до и после хирургического вмешательства у больных с high grade глиомами возможно отражает компенсаторную реакцию иммунной системы на низкий ЦТЛ ответ. Увеличение Treg на дооперационном этапе свидетельствует о нарушении противоопухолевого иммунного ответа (возможно инициированного опухолью), что является причиной подавления цитотоксического Т-клеточного ответа у больных с high grade глиомами.
МЕХАНИЗМЫ ДЕФЕКТНОСТИ TNFa-ОПОСРЕДОВАННОЙ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ГЛИОМАМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА
Тыринова Т.В.1, Леплина О.Ю.1, Мишинов С.В.2, Долгова Е.В.4, Проскурякова А.С.4, Баторов Е.В.1, Калиновский А.В.3, Чернов С.В.3, Ступак В.В.2, Богачев С.С.4, Черных Е.Р.1
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
2 ФГБУ«Научно-исследовательский институт Травматологии и ортопедии им. Я.Л. Цивьяна» Министерства здравоохранения РФ, Новосибирск, Россия
3 ФГБУ «Федеральный центр нейрохирургии» Министерства здравоохранения РФ, Новосибирск, Россия
4 ФГНУ «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук», Новосибирск, Россия
Введение. Дендритные клетки (ДК) играют ключевую роль в индукции противоопухолевого иммунного ответа и при этом обладают эффекторной функцией, заключающейся в способности лизировать опухолевые клетки. У больных злокачественными глиомами ДК характеризуются нарушением цитотоксической активности против TNFa-чувствительных опухолевых клеток, что связано с низким уровнем экспрессии мембранной формы TNFa (mTNFa) на ДК. Одним из позитивных регуляторов ци-тотоксичности ДК и экспрессии mTNFa является экзогенная двуцепочечная ДНК человека (dsDNA).
Цель. Настоящее исследование направлено на изучение механизмов дефектности mTNFa-медиируемой цитотоксической активности ДК больных злокачественными глиомами, а также роли dsDNA в регуляции этих механизмов.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
Материалы и методы. В исследование были включены 15 здоровых доноров и 13 больных с глиобластомой (Grade IV). ДК получали путем культивирования прилипающей фракции мононуклеарных клеток в присутствии GM-CSF и IFNa с последующим дозреванием с липо-полисахаридом (IFN-ДК). Уровень экспрессии мРНК TNFa в ДК определяли методом обратной транскрипции и RT-PCR и нормировали относительно содержания мРНК гена «домашнего хозяйства» RPLP0. Активность TNFa-конвертирующего фермента (ТАСЕ) в ДК оценивали спектрофлуориметрически.
Результаты. Экспрессия мРНК TNFa в IFN-ДК больных глиобластомой была снижена более чем в 2 раза по сравнению с IFN-ДК доноров (Ме 2-AACt = 0,35 vs 1; р < 0,05). Активность фермента ТАСЕ, осуществляющего шеддинг mTNFa с мембраны клеток, была выше более чем в 2 раза в IFN-ДК больных по сравнению с IFN-ДК доноров (Ме 680 RFU/^g белка vs 265 RFU/^g белка; р = 0,08). Добавление в культуры IFN-ДК больных глиобластомой dsDNA (5 мкг/мл) на этапе конечного созревания (совместно с ЛПС) увеличивало экспрессию мРНК TNFa в IFN-ДК больных глиомами (Ме 2-AACt = 2,74 vs 0,35; р = 0,09) и приводило к значимому снижению активности ТАСЕ по сравнению с интактными ЛПС-стимулированными ДК анализируемых пациентов (Ме 680 RFU/^g белка vs 443 RFU/^g белка; р = 0,043).
Заключение. Нарушенная регуляция экспрессии mTNFa в IFN-ДК у больных злокачественными глиомами обусловлена низким уровнем экспрессии мРНК TNFa и высокой активностью фермента ТАСЕ. При этом нарушенная регуляция экспрессии mTNFa может корригироваться с помощью dsDNA как на транскрипционном уровне, так и посттрансляционном уровне.
ВЗАИМОСВЯЗЬ ЦИТОКИНОВ С АЛЛОПРЕГНАНОЛОНОМ У ЖЕНЩИН С ПРЕДМЕНСТРУАЛЬНЫМ СИНДРОМОМ
Хайдарова Ф.А., Ходжаева Н.В.
Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр эндокринологии Министерства здравоохранения РУз, Ташкент, Узбекистан
Выявлено, что возникновение ПМС зависит от типа чувствительности организма к половым гормонам. Выявлена связь предменструального синдрома с аллопрег-нанолоном — женским половым гормоном из группы гестагенов. В норме чувствительность к этому гормону у женщин является максимальной после менструации и минимальной перед ней, из-за чего ПМС, как правило, не возникает. Однако примерно 8% женщин, напротив, имеют повышенную чувствительность к аллопрегнано-лону перед менструацией, что проявляется симптомами предменструального синдрома.
Целью исследования явилось изучение уровня про-воспалительных цитокинов (TNFa и IL-6) и аллопрегна-нолона у женщин с ПМС в зависимости от фазы менструального цикла. Обследовано 76 женщин репродуктивного возраста, обратившихся за медицинской помощью в консультативную поликлинику РСМНПЦ Эндокринологии МЗ РУз с жалобами на наличие соматических и/или психоэмоциональных симптомов, возникающих перед менструацией. 20 практически здоровых женщин без жалоб на ПМС составили контрольную группу. Всем женщинам было проведено лабораторное обследование в сыворотке
крови, включающее изучение иммунологических (про-воспалительные цитокины TNFa и Ш-6) и гормональных (аллопрегнанолон) показателей на 5-6 и 20-21-й день менструального цикла, методом ИФА. Наиболее распространенными симптомами заболевания явились депрессия (92%), агрессивность (88%), нагрубание молочных желез (75%), изменение аппетита (72%), отечность (69%). Выраженность тревожных и депрессивных расстройств достоверно повышалось к 25-му дню менструального цикла.
Анализ результатов показал, что у женщин контрольной группы уровень TNFa в лютеиновую фазу в 1,8 раза выше (40,1±2,3 пкг/мл), чем в фолликулиновую (21,8±1,84 пкг/мл) (Р < 0,01). Динамика уровня ЮТа позволяет предполагать позитивную связь с уровнем всех женских половых гормонов, которые имеют сходные циклические колебания. Уровень ГЬ-6 у женщин контрольной группы в фолликулиновую фазу составил в среднем 18,9±1,8 пкг/мл, а в лютеиновой фазе этот показатель был в 1,68 раза выше, чем в фолликулиновую фазу и составил в среднем 31,7±1,9 пкг/мл (Р < 0,05). У женщин с ПМС в фолликулиновую фазу уровень ТОТа достоверно выше относительно данных контрольной группы (Р < 0,01). Однако, уровень Ш-6 у женщин с предменструальным синдромом достоверно снизился в 1,3 раза относительно контрольных значений (Р < 0,05). Необходимо отметить, что у женщин с ПМС наблюдаются изменения концентрации некоторых гормонов в лютеиновую фазу, в частности, аллопрегнанолона, который ингибирует синтез ГЬ-6. В фолликулиновую фазу у женщин контрольной группы уровень аллопрегнанолона составил в среднем 3,54±0,25 нг/мл, а в лютеиновую фазу — 2,92±0,14 нг/мл, что достоверно ниже, чем в фолликулиновую фазу (Р < 0,05).
Анализ результатов по изучению уровня аллопрегна-нолона у женщин с ПМС показал, что в лютеиновой фазе концентрация его достоверно ниже (1,29±0,05 нг/мл), чем у женщин контрольной группы (2,92±0,14 нг/мл) (Р < 0,05). Следовательно, низкий уровень аллопренг-нанолона сопровождается низким уровнем Ш-6 и повышенным уровнем TNFa (Р < 0,05). Показано, что при ПМС происходит изменение синтеза некоторых гормонов, в частности прогестерона. В связи с этим, можно предположить, что предменструальный синдром развивается не только от дефицита прогестерона, но и от особенностей его метаболизма в ЦНС. При нормальном метаболизме прогестерон способен образовывать алло-прегнанолон, который стимулирует ГАМК-А рецепторы, а также повышает активность хлоридных ионных канальцев нейронных мембран, обеспечивая седативный эффект. При нарушениях метаболизма прогестерона в ЦНС гормон образует прегнанолон, который является антагонистом А- и В-ГАМК рецепторов, наличие которых может объяснить клинические проявления ПМС. Сниженный уровень аллопрегнанолона вызывает депрессию, часто встречающуюся при предменструальном синдроме. Разнонаправленное содержание изученных провоспали-тельных цитокинов коррелирует со сниженным уровнем аллопрегнанолона, что свидетельствует о взаимосвязи иммунной и эндокринной систем, при которой изменение в одной системе оказывает влияние на изменение другой. Причем, что интересно, циклические изменения гормонов приводят к изменению функций иммуноком-петентных клеток не только на местном, но и на системном уровне, что проявляется изменением концентрации сывороточных цитокинов или интенсивности их продукции циркулирующими лимфоцитами.
