CC BY
112
УДК 630:576.8:632
ОСОБЕННОСТИ МИКРОБИОТЫ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА ТЕПЛОКРОВНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗЕ, ОБУСЛОВЛЕННОМ ДЕЙСТВИЕМ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА ВДСИШВ тВШШ/З 1
432700 г. Ульяновск, ул. Л. Толстого, 42, E-mail: [email protected]
Е.Г. Климентова Л.К. Каменек А.А. Купцова
Ульяновский государственный университет
Показано изменение видового состава и численности различных представителей микробиоты толстого кишечника теплокровных животных под влиянием перорального введения дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в дозе от 100 мг/кг веса. При этом подавлялся рост нормальной микрофлоры в толстой кишке - бифидобактерий, лактобактерий, бактероидной микрофлоры и эшерихий с нормальной ферментативной активностью. В результате снижения количества представителей облигатной микрофлоры размножались микробы, попавшие извне или эндогенные виды, устойчивые к лекарственным препаратам - стафилококки, в том числе и самый патогенный вид -S. aureus, а также клебсиэллы, протеи и дрожжевые грибы. При постоянном введении больших доз токсина изменялись также индекс встречаемости и индекс доминирования микроорганизмов.
Ключевые слова: дельта-эндотоксин Bacillus thuringiensis, микрофлора кишечника, дисбактериоз.
Введение
Актуальность проблемы. Известно, что Cry-белки параспоральных кристаллов, образуемые множеством подвидов энтомопатогенной бактерии B. thuringiensis с высокой специфичностью поражают некоторых насекомых, нематод, клещей, являющихся вредителями растений и переносчиками болезней. Поэтому на основе кристаллов и спор B. thuringiensis выпускается более 80% всех производимых в мире биоинсектицидов, в их числе такие препараты, разрешенные к применению в России, как лепидоцид, битоксибациллин, новодор FC и форей 48 В.
В последнее время в различных источниках появляется все больше публикаций
о неблагоприятных последствиях для здоровья человека применения биопрепаратов на основе B. thuringiensis. Так, весной 2009 года, в лесистых районах западной части города Лондона, а также в провинции Онтарио (Канада), после вспышки размножения личинок непарного шелкопряда и использования для ее подавления воздушного распыления препарата «Foray 48 B» на основе B. thuringiensis vаг. kurstaki, жители района стали жаловаться на проблемы со здоровьем: боль в животе, затрудненное дыхание, боль в горле, тошноту, рвоту, сильный кашель, жжение в глазах, диарею, мышечные судороги, сонливость, слабость, и головокружение. Данные симптомы говорят о том, что препарат, возможно, обладает не только местным, кожно-резорбтивным действием, но также может вызывать аллергию и отравление [1].
На сайте Общества по контролю чрезмерного примененияя пестицидов [2] сообщается о 290 инцидентах, связанных с 51 симптомами, включая тошноту, рвоту, спазмы, диарею, обострение астмы и случаями мучительного зуда также после применения биопрепаратов на основе B. thuringiensis. Особый интерес представляет исследования Дамгаард и соавторов [3]. Авторами были изучены различные штаммы B. thuringiensis из инсектицидных препаратов. Было обнаружено, что все они способны вырабатывать диарейный энтеротоксин человека.
Известно, что бактерии рода Bacillus обладают выраженной антимикробной
1 Работа выполнена при поддержке гранта МО РФ аналитической ведомственной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2010 годы)» по проекту № 2.1.1/2275.
активностью, обусловленной продуцированием антибиотических веществ. В настоящее время известно о более чем 200 антибиотиках и бактерицинах, образуемых этими микроорганизмами [4]. Данные об антибактериальном действии Cry-белков параспо-ральных кристаллов B. thuringiensis или их фрагментов на микроорганизмы появились сравнительно недавно [5-10]. Изучение действия белков включений важно так же для всестороннего понимания экологической роли включений в биоценозах, в том числе и в микробиоценозах желудочно-кишечного тракта теплокровных животных, куда токсические белки могут поступать вместе с продукцией, обработанной биопестицидами на основе дельта - эндотоксинов.
Организм теплокровных животных и человека и его микробиота представляют собой высокоорганизованную, саморегулирующуюся систему, «обеспечивающую поддержание равновесия компонентов внутренней среды организма на метаболическом, клеточном и молекулярно-генетическом уровнях» [11]. Сбалансированность системы «хозяин-микрофлора» может нарушаться «при превышении интенсивности негативных внешних воздействий над пороговыми значениями адаптационной системы организма» [12] и при сдвигах в метаболической активности самой микрофлоры [13]. Одной из наиболее частых причин нарушений в рассматриваемой системе является воздействие на нее антибактериальными препаратами белкового происхождения. Показано, что антибиотики изменяют количественный и качественный состав аутохтонной микрофлоры организма, оказывают прямое воздействие на клетки и метаболические процессы в них [14]. Установлено, что у 5-25% пациентов, получающих антибиотики, наблюдается антибиотико-ассоциированная диарея («antibiotic associated diarrhea»), чаще называемая «лекарственно опосредованным дисбиозом кишечника» [15]. Следует отметить, что дисбиоз характеризуется снижением популяционного уровня или полным исчезновением некоторых облигатных представителей нормальной микрофлоры и увеличением частоты выявления концентрации представителей факультативной ее части. Такие дисбиозные микробные ассоциации не в состоянии выполнять защитные и физиологические функции в кишечнике, которые они осуществляют в условиях нормоценоза. Нарушения при микробиоценозе кишечника наступают задолго до клинических проявлений и служат обычно предшественником развития соматических заболеваний [16].
Целью исследования явилось изучить действие дельта-эндотоксина B. thur-ingiensis subsp. kurstaki Z-52 на изменение количественных и качественных показателей микробиоты кишечника теплокровных животных.
Объекты и методы исследований. В работе был использован штамм Z-52 B. thuringiensis subsp. kurstaki, продуцирующий кристаллы дельта-эндотоксина класса Cry IA, полученный из коллекции культур микроорганизмов Всероссийского института защиты растений (ВИЗР), г. Пушкин Ленинградской области. Культуру выращивали на питательной среде № 14 при температуре 27°С. На 3-4 сутки культивирования при спорообразовании в пределах 80-90% выделяли дельта-эндотоксин с применением модифицированного метода Л.К. Каменёк [17]. Выделенные и очищенные от спор кристаллы дельта-эндотоксина предварительно активировали по методике Кукси [18]. Кристаллы дельта-эндотоксина разводили в 0,9% растворе NaCl и в различных дозах вводили животным перорально вместе с пищей.
В эксперименте использовали 360 белых беспородных мышей - самок со средним весом 30±3 г. Содержание, питание, уход за животными осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 № 755).Все животные содержались в виварии УлГУ при сходных условиях в отношении температуры, влажности и освещения, а также рациона питания. Животные содержались в клетках по 10 особей. Перед проведением каждой из серий экспериментов животные были разделены на четыре группы (по 90 животных в каждой группе). Первая группа - контрольная, вторая группа животных ежедневно в одно и то же время (первая половина дня) получала перорально в течение 28 дней дельта-эндотоксин в количестве 25 мг/кг веса чистого вещества, растворенного в буферном растворе, вторая и третья группа - по 50 и 100 мг/кг веса, что составило 0.03-0.0075 мг на особь, соответственно. На протяжении всего эксперимента наблюдали за физической активностью животных, аппетитом
(количество съеденной пищи), характером стула. В 7, 14 и 20-й дни эксперимента забирали пробы фекалий для проведения бактериологического исследования микробиоты толстой кишки.
Микроорганизмы выделялись из фекалий животных с использованием классических бактериологических методик. Выделение чистой культуры и идентификация проводились а аэробных, анаэробных и микроаэрофильных условиях в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов. Культуры, выросшие на питательных средах, подвергались групповой и видовой идентификации. Анализ выделенных микроорганизмов проводили согласно определителю Берджи [19] по морфологическим, тинкто-риальным, культуральным, биохимическим (с помощью мультимикротестов ММТ Е1, ММТ Е2 Lachema тест-систем) и антигенным свойствам. Наличие гемолитических эшерихий учитывали на кровяном агаре из разведения 10-5 . Количественное содержание выделенных микроорганизмов выражали в виде lg КОЕ/г.
Определение индекса встречаемости при пероральном введении дельтаэндотоксина B. thuringiensis в дозе 100 мг/кг веса проводили по числу проб, в которых обнаружены особи исследуемого вида, выраженных в процентах к общему числу проанализированных проб. Определение индекса доминирования - доли в %, которую составляет обилие исследуемого вида по отношению к суммарному обилию всех сравниваемых между собой видов в изучаемом материале. При оценке результатов учитывали, что при С = 50% и выше виды считаются постоянными, добавочные виды соответствуют значениям С от 25 до 50%, случайные - ниже 25%.
Все материалы были подвергнуты статистической обработке с использованием методов статистического и вариационного анализа. Различия между величинами считались достоверными при р < 0,05.
Результаты исследований и их обсуждение. В настоящем исследовании к концу второй недели после введения дельта-эндотоксина в дозе 100 мг/кг веса у экспериментальных животных в 25-50% случаев (т.е. у 25-45 особей из 90) отмечались и сохранялись в течение всего периода эксперимента следующие симптомы: понос, изменение консистенции стула, ухудшение аппетита, снижение поведенческой активности. Степень проявления симптомов у 30 особей возрастала по мере увеличения срока применения токсина.
Показано, что при дисбиозе кишечника, в частности, при антибиотикоассоциированной диарее наблюдается доминирование каких-либо условнопатогенных микроорганизмов (стафилококков, псевдомонад, клебсиелл, протея, эше-рихий с низкой ферментативной активностью, клостридий и грибов) или их ассоциаций [20, 21].
В результате проведенных нами бактериологических исследований фекалий животных было установлено, что пероральное введение дельта-эндотоксина в дозах от 25 до 50 мг/ кг веса практически не оказывало влияния на изменение состава и численности кишечной микрофлоры (табл. 1).
Таблица 1
Состав микробиоты кишечника мышей при пероральном введении дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis (при n = 9)
Микроорганизмы Количественное содержание мик робиоты Lg КОЕ/г
контроль 14 сутки 28 сутки
25-50 мг/кг веса 25 мг/кг веса 50 мг/кг веса 25 мг/кг веса 50 мг/кг веса
1 2 3 4 5 6
доминирующие виды (встречаются в 50-100% случаев)
Bifidobacterium spp. 6.4±0.13 6.2±0.10 6.1±0.2 6.2±0.15 6.0±0.3
Lactobacillus spp. 13.9±0.9б 12.9±0.20 12.0±0.4 12.0±0.18 11.5±0.8
Bacteroides 4.5±0.11 4.35±0.15 4.2±0.2 4.3±0.20 4.1±0.3
Escherichia coli типичные 7.4±0.1б 7.3±0.10 7.1±0.3 7.2±0.25 7.0±0.4
добавочные виды (встречаются в 25-50% случаев)
Escherichia coli (гем) - - - - -
Окончание табл. 1
1 2 3 4 5 6
Klebsiella spp 1.03±0.01 1.1±0.1 1.2±0.1 1.1±0.3 1.2±0.2
Proteus spp. 2.7±0.84 2.8±0.40 2.8±0.5 2.8±0.3 3.0±1.0
случайные или транзиторные виды (встречаются менее чем в 25% случаев)
Staphylococcus aureus - - - - -
Дрожжеподобные грибы р. Candida 1.0±0.03 1.1±0.2 1.1±0.1 1.1±0.1 1.2±0.1
Несмотря на то, что Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp., обнаруживаются в составе микрофлоры кишечника у всех экспериментальных животных (частота встречаемости - 100%), их количество при пероральном введении дельта-эндотоксина в дозе от 25 до 50 мг/кг веса умеренно снижается. Наблюдается так же и некоторая тенденция к уменьшению количества эшерихий с нормальной ферментативной активностью и бактероидной микрофлоры. Уменьшение количества доминирующих видов Bacteroides и Escherichia coli с нормальной ферментативной активностью (типичных) не является статистически достоверным.
В результате снижения количества представителей облигатной микрофлоры размножаются микробы, попавшие извне или эндогенные виды, устойчивые к лекарственным препаратам - стафилококки, в том числе и самый патогенный вид -S. aureus, а также Klebsiella spp., Proteus spp. и дрожжеподобные грибы р. Candida. Их количество в микроценозе несколько увеличивается, но это увеличение при математической обработке результатов так же оказалось статистически недостоверным, то есть можно говорить только о некоторой тенденции к снижению или увеличению количества бактерий. Такие патогенные виды, как E. coli гемолитические и St. aureus из состава микробиоты кишечника мышей при пероральном введении дельтаэндотоксина B. thuringiensis (25-50 мг/кг веса) не выделялись.
При введении высоких доз препарата (100 мг/кг, табл. 2) подавлялся рост нормальной микрофлоры в толстой кишке: количество доминирующих видов - бифидобактерий - на 14 и 28 сутки после начала перорального введения уменьшалось по сравнению с контролем, соответственно, с 6.4 до 6.0 и 5.9 lg КОЕ/г, а лактобактерий -с 13.9 до 11.0 и 10.6 lg КОЕ/г. Применение дельта-эндотоксина оказало влияние и на бактероидную микрофлору: в контроле их количество составляло 4.5 lg КОЕ/г, а на 14 сутки 4.1 lg КОЕ/г и на 28 сутки - 3.9 lg КОЕ/г. Число эшерихий с нормальной ферментативной активностью сократилось с 7.4 lg КОЕ/г - в контроле до 7.0 и 6.8 lg КОЕ/г на 14 и 28 сутки. Эшерихии, обладающие гемолитической активностью, в контрольной группе не наблюдались, и высеивались лишь на 14 и 28 сутки в количестве
1.1 и 1.3 lg КОЕ/г.
Количество клебсиэлл увеличилось по сравнению с контрольной группой с 1,03 lg КОЕ/г до 1.4 и 1.6 lg КОЕ/г на 14 и 28 сутки соответственно, а протеи с 2.7 lg КОЕ/г до 3.0 и 3.3 lg КОЕ/г. Количество дрожжеподобных грибов рода Candida увеличивается с 1.0 до 1.3 и 1.5 lg КОЕ/г. Стафилококки высеялись на 14 и 28 сутки, их число составило соответственно 1.2 и 1.4 lg КОЕ/г.
Таблица 2
Состав микробиоты кишечника мышей при пероральном введении дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis (100 мг/кг, при n = 9)
Микроорганизмы Количественное содержание микробиоты Lg КОЕ/г
контроль 14 сутки 28 сутки
1 2 3 4
доминирующие виды (встречаются в 50-100% случаев)
Bifidobacterium spp. 6.4±0.13 6.0±0.9 5.9±0.8
Lactobacillus spp. 13.9±0.96 11.0±0.6 10.6±0.7
Bacteroides 4.5±0.11 4.1±0.4 3.9±0.5
Escherichia coli (тип.) 7.4±0.16 7.0±0.3 6.8±0.5
добавочные виды (встречаются в 25-50% случаев)
Escherichia coli (гем.) - 1.1 ±0.1 1.3 ±0.1
Oкончание табл.2
1 2 3 4
Klebsiella spp i.03±0.0i i.4±o.i 1.6±0.2
Proteus spp. 2.7±o.84 3.o±o.6 3-3±i-i
Случайные (транзиторные виды встречаются менее чем в 25% случаев)
Staphylococcus aureus - 1.2 ±0.1 1.4 ±0.2
Дрожжеподобные грибы р. Candida i.0±0.03 i.3±o.i 1.5±0.2
Данные по определению индекса встречаемости микроорганизмов при перо-ральном введении дельта-эндотоксина в дозе 100 мг/кг веса представлены в табл. 3. У бифидобактерий и лактобактерий индекс встречаемости составил 100%, т.е. во всех 35 пробах были обнаружены особи данного вида. Индекс встречаемости бактероидной микрофлоры составил в контроле 58.4%, на 14 сутки уменьшился до 56.2 %, на 28 сутки - до 52.0%. Индекс эшерихий с нормальной ферментативной активностью уменьшился с 84.2% в контроле до 78.4 и 73.5% на 14 и 28 сутки соответственно.
На фоне снижения количества и частоты встречаемости представителей видов облигатной микрофлоры в пробах чаще стали высеваться добавочные и транзиторные виды - Klebsiella spp., Proteus spp. и дрожжеподобные грибы р. Candida.
Если протеи обнаруживались в контроле в 22.5% проб, то на 14 сутки частота их обнаружения увеличилась до 30.3%, а на 28 сутки - до 39.8%. У клебсиэлл индекс встречаемости увеличился гораздо сильнее - с 26.4% в контроле до 34.2% на 14 сутки и 42.5% на 28 сутки. Дрожжеподобные грибы р. Candida высеваются в 5.1% проб в контрольной группе, 14 сутки они обнаруживаются уже в 10.5% проб, а на 28 сутки - в 18.2%.
Oсобенностью микробиоценоза толстого кишечника теплокровных животных при дисбактериозе, вызванном пероральным введением высоких доз дельтаэндотоксина B. thuringiensis является появление в микробном пуле гемолитических эшерихий и золотистого стафилококка, которые в контрольной группе не высевались. На l4 и 28 сутки эшерихии, обладающие гемолитической активностью, выявлялись в 15.0 и 22.5% проб, а St. aureus - в 11.7 и 15.6% проб соответственно.
Таблица 3
Индекс встречаемости микроорганизмов при пероральном введении дельта-эндотоксина в дозе 100 мг/кг веса
Микроорганизмы Индекс встречаемости микроорганизмов
контроль 14 сутки 28 сутки
доминирующие виды (встречаются в 50-100% случаев)
Bifidobacterium spp. 100.0 100.0 100.0
Lactobacillus spp. 100.0 100.0 100.0
Bacteroides 58-4±4-6 56.2±8.5 52.0±7.0
Escherichia coli (тип.) 84.2±11.2 78.4±і0.5 73-5±і0.8
добавочные виды (встречаются в 25-50% случаев)
Escherichia coli (гем.) 0 і5.0±2.4 22-5±5-3
Klebsiella spp. 26.4±2.4 34-2±4-3 42-5±6-3
Proteus spp. 22.5±3.8 30.3±6.2 39-8±7-7
случайные (транзиторные виды встречаются менее чем в 25% случаев)
Staphylococcus aureus 0 ii.7±2.5 i5-6±4-3
Дрожжеподобные грибы р. Candida 5-1±2-2 io.5±2.5 i8.2±4.i
Для уточнения происхождения сдвигов в микробиоценозе колстой кишки определена доля участия микроорганизмов в структуре экосистемы (рисунок 1). Установлено, что доминантными видами, формирующими микрофлору в контрольной группе животных, или группе сравнения, являются лактобактерии, бифидобатерии, бактероиды и кишечные палочки с нормальной ферментативной активностью, в совокупности их доля составляет почти 84%. Доля микроорганизмов условно-патогенной микрофлоры - клебсиэл, гемолитических эшерихий, протей, стафилококков и грибов рода Candida составила 6%.
На 14-е, и особенно на 28-е сутки эксперимента выявляется структурная перестройка биоценоза, которая проявляется в уменьшением значимости доминирующих групп микроорганизмов до 62 и 48% соответственно, и увеличением значимости условно-патогенных видов - до 48 и 52%. Важной особенностью микробиоценоза является появление на 14 сутки особенно патогенных видов - гемолитических E. coli и St. aureus.
Регистрируемые в микрофлоре толстой кишки различия в качественном и количественном составе симбионтов позволили предположить наличие определенных сопряженных таксонов, встречающихся совместно чаще в группах биоценозов контрольных животных, принимающих высокие дозы дельта-эндотоксина по сравнению с интактными животными.
При пероральном введении дельта-эндотоксина (100 мг/кг веса) в кишечнике мышей у доминирующих видов бактерий наблюдается некоторая тенденция к уменьшению индекса доминирования, так, у лактобактерий - на 14 сутки после начала пе-рорального введения он уменьшился по сравнению с контролем соответственно на 11.7% - с 37.6% до 25.9% и на 28 сутки - на 21.3%. У бифидобактерий индекс доминирования уменьшился с 17.3% в контроле до 13.8% на 14 сутки и 11.7% - на 28 сутки. Применение дельта-эндотоксина оказало влияние на изменение индекса доминирования бактероидной микрофлоры (12.8% -в контроле и 9.9% и 5.9% на 14 и 28 сутки соответственно), эшерихий с нормальной ферментативной активностью (20% - в контроле и 16% и 11.3% на 14-е и 28-е сутки).
28 сутки
14 сутки
контроль
□ Bifidobacterium spp.
□ Laktobacillius spp.
□ Bacteroides
□ Escherichia coli
□ Escherichia coli гемолит.
□ Klebsiella spp.
□ Proteus spp.
□ Staphylococcus aureus
□ Candida
0% 20% 40% 60% 80%
100%
Рис. 1. Индекс доминирования микроорганизмов биоценоза кишечника мышей при пероральном введении дельтаэндотоксина В. thuringiensis (100 мг/кг веса)
Эшерихии, обладающие гемолитической активностью, в контрольной группе не обнаруживаются, а на 14 и 28 сутки выявляются в количестве 3.1% и 5.3%. Доля клеб-сиэлл в контроле была 2.7%, на 14 сутки их количество возросло до 9.8%, а на 28 сутки
- до 14%. Доля протей увеличивается с 7.3% в контроле до 12.8% и 17.6% на 14 и 28 сутки. Количество дрожжеподобных грибов рода Candida увеличивается в 3 раза, а стафилококки, не обнаруживающиеся ранее в контроле, высеваются на 14 и 28 сутки в количестве 1.1% и 4.8%.
Заключение. Проведенное исследование позволило установить, что в составе микробиоценоза толстой кишки теплокровных животных после длительного потребления вместе с пищей высоких доз дельта-эндотоксина B. thuringiensis (свыше 100 мг/кг веса животного), золотистый стафилококк и гемолитические эшерихии встречаются достоверно чаще, чем в составе микрофлоры кишечника интактных животных. Изменение состава толстой кишки свидетельствует о наличии микробиологического дисбаланса, характерной особенностью которого является снижение присутствия в составе микробиоценоза представителей облигатной микробиоты - Bifidobacterium spp., и Lactobacillus spp., Bacteroides и Escherichia coli с нормальной ферментативной активностью (типичных), на фоне увеличения количества транзиторных и добавочных условно-патогенных видов - S.aureus, Klebsiella spp., Proteus spp. и дрожжеподобных грибы р. Candida.
Достаточно высокая концентрация гемолитических эшерихий (1.1-1.3 lg КОЕ/г), значительный показатель их постоянства (15.0-22.3%), позволяют полагать, что длительное потребление вместе с пищей высоких доз дельта-эндотоксина, возможно, является одним их факторов, способствующих появлению и вегетированию данной группы условно-патогенных микроорганизмов в микробиоценозе. То же можно сказать и о других видах условно-патогенных микроорганизмов - S. aureus, Klebsiella spp., Proteus spp. и дрожжеподобных грибов р. Candida, что свидетельствует о дисбиотиче-ских изменениях в кишечнике. Возможно, что на их вегетирование оказывают влияние и другие факторы, что, несомненно, требует дальнейшего изучения.
Вероятно, длительное поступление значительного количества белкового дельта-эндотоксина в кишечник теплокровных животных ведет к развитию метаболических сдвигов, а появление условно-патогенных видов в составе микрофлоры в данном случае можно рассматривать как индикатор, реагирующий на изменение гомеостаза макроорганизма и создает предрасположенность для развития как инфекционных, так и соматических заболеваний.
Список литературы
1. Richard B. Philp Adverse health consequences following aerial spraying with Bacillus thur-ingiensis (var. kursraki) (Btk) to control the gypsy moth: flaws in government risk assessments and in public health officials attitudes, University of Western Ontario, 2009.
2. Интернет-ресурс www.bcn.ca/stop/part4.html.
3. Damgaard P.H., Larsen H.D., Hansen B.M., Bresciani J., J0rgensen K. Enterotoxin-producing strains of Bacillus thuringiensis isolated from food // Letters in Applied Microbiology. -2008. -Vol. 23 - P. 146-150.
4. Осипова И.Г., Михайлова Н.А., Сорокулова И.Б. Споровые пробиотики // Микробиология. - 2002. - № 3. - С. 113-119.
5. Юдина Т.Г. Сравнение антибактериальной активности параспоральных включений различных бацилл. Известия РАН. Серия биол. - 1996. - № 5. - С. 535-541.
6. Юдина Т.Г., Егоров Н.С., Лория Ж.К., Выборных С.Н. Биологическая активность па-распоральных кристаллов Bacillus thuringiensis. - Известия АН СССР. Серия биологич. - 1988.
- № 3. - С. 427 - 436.
7. Егоров Н.С., Юдина Т.Г., Баранов А.Ю. О корреляции между инсектицидной и антибиотической активностями параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis. // Микробиология. - 1990. - Т. 59, вып. 3. - С. 448-452.
8 Юдина Т.Г., Егоров Н.С. Антимикробная активность белковых включений различных бактерий. - Доклады РАН. - 1996. - Т. 349, № 2 . - С. 283-287.
9. Юдина Т.Г., Бурцева Л.И. Действие эндотоксинов четырёх подвидов Bacillus thur-ingiensis на различных прокариот // Микробиология. 1997. - Т. 66. - № 1. - С. 25-31.
10. Cahan R., Friman H., Nitzan Y. Antibacterial activity of Cyt1Aa from Bacillus thuringiensis subsp. israelensis // Microbiology. - 2008. - Vol. 154. - P. 3529-3536.
11. Rolfe R. D. Interactions among microorganisms of the indigenous intestinal flora and their influence on the host / / Rev. Infect. Dis. - 1984. - Vol. 6, Suppl. 1. - P. 73-79.
12. Парфенов А.И., Ручкина И.Н., Осипов Г.А. Антибиотико-ассоциированная диарея // Экспер. и клин. гастроэнтерол. - 2002. - № 5. - С. 92-95.
13. Уголев А.М. Теория адекватного питания и трофология. - СПб., 1991. 271 с.
14. Лобзин Ю.В., Макарова В.Г., Кровякова Е.Р. Дисбактериоз кишечника (клиника, диагностика, лечение): Руководство для врачей. - СПб., 2003. - 256 с.
15. Костюкевич О.И. Современные представления о микробиоценозе кишечника: Дисбактериоз и его коррекция / / РМЖ. - 2007. - 2176. www.rmj.ru
16. Барановский А.Ю., Кондрашин Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. - СПб.: Питер, 2000. - 209 с.
17. Каменек Л.К. Способ получения эндотоксинсодержащих энтомопатогенных препаратов. - Патент РФ № 2027369. - 1995.
18. Кукси К.Э. Кристаллический белковый токсин B. thuringiensis: биохимия и механизм действия // Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. - М.: Колос, 1976. - С.198-218.
19. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. - Мир, 1997. - 800 с.
20. McFarland L. Epidemiology, risk factors and treatments for antibiotic associated diarrhea // Diagn. Dis. - 1998. - Vol. 16. - P. 292-307.
21. Бондаренко В. М., Воробьев А. А. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией // Журн. микробиол. - 2004. - № 1. - С. 84-92.
FEATURES OF THE MICROBIOTA OF THE LARGE INTESTINE OF WARM-BLOODED ANIMALS DURING DYSBACTERIOSIS DUE TO THE ACTION OF DELTA-ENDOTOXIN
OF BACIUUS THURINGIENSIS
E.G. Klimentova L.K. Kamenek A.A. Kuptsova
Ulyanovsk State University, L.Tolstogo St., 42, Ulyanovsk, 432700, Russia
E-mail: [email protected]
The change in species composition and the number of various representatives of the large intestine microbiota of warm-blooded animals under the influence of oral administration of delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis at a dose of 100 mg / kg body weight is shown. The growth of normal microflora in the colon - Bifidobacterium, Lactobacillus, bacteroid microflora and Escherichia with normal enzymatic activity was suppressed. As a result of the reduction of the number of representatives of the obligate microflora microbes that penetrated from the outside or endogenous species that are resistant to drugs - staphylococci, including the most pathogenic form - S. aureus, and Klebsiella organisms, Proteus, and yeasts, multiplied. With the constant administration of high doses of the toxin the index of occurrence and the index of dominance of microorganisms varied as well.
Key words: delta-endotoxin Bacillus thuringiensis, intestinal microflora, dysbacteriosis.
