CC BY
78
Опыт применения иммуноцитохимического метода в поликлинической практике
Ключевые слова: иммуноцитохимическое исследование, ВПЧ, p16ink4a, Ki- 67, цитологическое исследование, поликлиническая практика
Keywords:
immunocytochemical study, HPV, p16ink4a, Ki-67, Cytological examination, outpatient practice
Баяндина Н.Н., Лагутина О.Е.
ФГБУ «Поликлиника №3» Управления делами президента РФ (Москва, Россия) 129090, Россия, Москва, Грохольский пер., 31 E-mail: [email protected]
Experience of the use of immunocytochemical method in outpatient practice
Bayandina N.N., Lagutina O.E.
FSBE «Polyclinics №3» (Moscow, Russia) 31, per. Grokholskiy, Moscow, 129090, Russia E-mail: [email protected]
Резюме
Исследование гинекологического материала составляет подавляющую долю всех цитологических исследований первичного звена. Целью гинекологического скрининга является раннее выявление рака шейки матки, этиологическим фактором которого является вирус папилломы человека. Основные методы лабораторной диагностики не дают информации о наличии ВПЧ-процесса в конкретной клетке, и также не позволяют определить форму существования вируса в организме. Поэтому, актуальной задачей является совершенствование диагностики гинекологических ВПЧ-ассоциированных заболеваний.
Abstract
A study of the gynecological material has overwhelming proportion of all smears of primary care. The purpose of gynaecological screening is the early detection of cervical cancer, an etiological factor of which is the human papilloma virus. The main methods of laboratory diagnosis do not provide information about the presence of HPV-specific process in the cell, and also allows us to determine the existence of the virus in the body. Therefore, the urgent task is to improve the diagnosis of gynecological HPV-associated diseases.
Цель. На основе комплексного исследования обосновать необходимость использования ИЦХ-метода в диагностике патологии шейки матки, разработать алгоритм проведения и внедрить ИЦХ-метод в повседневную поликлиническую практику.
Задачи. Провести анализ структуры патологии 2015 г.; оценить современные методы лабораторной диагностики патологии шейки матки; составить маршрут и разработать комплекс мероприятий по организации и проведение ИЦХ-исследования; провести анализ результатов ИЦХ.
Материалы и методы. Объектом исследования являлись пациентки, наблюдающиеся у гинеколога ФГБУ «Поликлиника № 3» с патологией шейки матки за 2015 г. При проведении аналитической части работы применялись методы статистического анализа; источники информации - отечественная и зарубежная литература, инструктивно-методические документы. Использовались данные ЛИС (АЛТЕЙ) и электронной амбулаторной карты (МИС ИНТЕРИН), амбулаторно-поликлинические карты. Применялись цитологический и гистологический архивы препаратов. При проведении ИЦХ-анализа использовались методы: иммуноморфологический (ручная постановка) на традиционных цитологических мазках, прямая световая микроскопия окрашенных препаратов; материалы: прямой световой микроскоп «AXIOLAB.Al», производства фирмы «KARL ZEISS JENA» (Германия); набор реагентов для ИЦХ реакции - «CINTec plus» (Roche, Швейцария).
Для обработки полученных результатов применялось программное обеспечение Microsoft Office 2010.
Результаты. Патология шейки матки (по данным направительных диагнозов) представлена: воспалительные заболевания влагалища, шейки матки, цервикального канала (женщины фертильного возраста) и атрофический кольпит (женщины в постменопаузе) - 80-85%; эктропи-он и эрозия - 5-10%; лейкоплакия - 2-5%; дисплазия -1-3%; полип - 1-3%; аногенитальные бородавки - 2-5%.
При цитологическом исследовании гинекологического материала (12 032 исследования) патология выявляется в 40%. Структура патологии: 15% - ВПЧ-ассоцииро-ванные процессы (клеточные признаки ПВИ, ASC-US, LSIL, HSIL-рак); 1% - пролиферативные процессы; 84% - патология, не сопровождающаяся изменениями клеток (воспаления, инфекции).
Было проведено 5026 исследований ПЦР на определение ВПЧ высокого канцерогенного риска, в 15% случаев результат был положительным.
В настоящее время в лабораторной диагностике применяются методы: цитологический, ПЦР и ИФА (выявление онкобелков Е6 и Е7 ВПЧ). Принципиальными недостатками этих методов являются: субъективизм в цитологии; ПЦР и ИФА не дают информации о состоянии и активности вирусного агента. Мы не можем определить: запущен ли процесс канцерогенеза вирусом папилломы человека? Является ли выявленная патология
клетки результатом действия ВПЧ? Ответить на эти вопросы позволяет иммуноцитохимический метод, являясь комбинацией морфологического и иммуноферментного методов. Диагностическим критерием наличия патологического процесса является усиленная экспрессия белка р16тк4а в сочетании с экспрессией белка Ки67 в клеточном материале шейки матки. Таким образом, ИЦХ позволяет выявить наличие ВПЧ-ассоциированного процесса непосредственно в исследуемой клетке.
Нами был составлен алгоритм проведения ИЦХ, принцип архивирования препаратов; разработана схема интерпретации результатов на основании балльной системы оценки; сформирован соответствующий профиль в ЛИС.
В 2015 г. начали проводить ИЦХ на базе КДЛ поликлиники. Всего было проведено 98 исследований. Из общего количества исследований в 56% случаях был выявлен положительный результат (37% - моноэкспрес-
сия Р16 и в 19% - коэкспрессия Р16тк4а/Ки67), в 44% экспрессия не определялась. Анализ сопоставимости результатов ИЦХ, ПЦР и цитологического исследований показал: в 32% случаев ИЦХ подтверждает положительные результаты цитологии и ПЦР, в 18% - отрицательные; в 15% случаев ИЦХ подтверждает наличие ВПЧ в неизмененной клетке (при нормальной цитограмме), в 11% -при нормальной цитограмме и положительной ПЦР отрицательная ИЦХ может свидетельствовать о персистенции и вирусоносительстве.
Выводы. Учитывая результаты анализа гинекологической патологии, клинические потребности, а также, принимая во внимание перспективы развития современной лабораторной диагностики, политику проводимых реформ здравоохранения мы считаем целесообразным введение и дальнейшее развитие ИЦХ метода в амбула-торно-поликлинической практике.
