CC BY
46
УДК 578.835.1(571.53)
М.В. Мальцева, В.А. Астафьев, Т.А. Гаврилова, Е.Д. Савилов
МОНИТОРИНГ ПАТОГЕННЫХ ВИРУСОВ В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ г. ИРКУТСКА
Институт эпидемиологии и микробиологии ГУ НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН (Иркутск) Территориальное Управление Федеральной Службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и
благополучия человека по Иркутской области (Иркутск)
Приведены результаты распространенности патогенных вирусов в объектах окружающей среды г. Иркутска.
Ключевые слова: вирусы, окружающая среда
MONITORING OF PATHOGENIC VIRUSES IN OBJECTS OF AN ENVIRONMENT OF IRKUTSK
M.V. Maltseva, V.A. Astafev, T.A. Gavrilova, E.D. Savilov
Institute of Epidemiology and Microbiology SC ME ESSC SB RAMS, Irkutsk Territorial Management of Federal Service on supervision in sphere of protection of rights of consumers and well-being of the person of Irkutsk region, Irkutsk
The results of prevalence pathogenic viruses in objects of an environment of Irkutsk are given.
Key words: viruses, objects of an environment
ВВЕДЕНИЕ
Последнее десятилетие характеризуется повсеместным ростом заболеваемости острыми кишечными инфекциями (ОКИ) вирусной этиологии, в том числе ротавирусной и энтеровирусной инфекциями (РВИ и ЭВИ). Более всего этот подъем коснулся территории Сибирского и Дальневосточного административных округов [5]. В этой связи четко обозначились два аспекта проблем, связанных с заболеваемостью ОКИ вирусной этиологии. Так, рост заболеваемости ротавирусной инфекцией в большей степени связан с организацией лабораторной диагностики этого заболевания, которое ранее в большинстве случаев учитывалось как ОКИ неустановленной этиологии [1, 2]. В отношении ЭВИ необходимо отметить, что основной причиной, обусловливающей ее подъемы, является вспышечная заболеваемость. Вспышки энтеровирусной патологии были зарегистрированы в Красноярском и Хабаровском краях, Республике Бурятия, Новосибирской области и т.д. Не обошла эта проблема и Иркутскую область, где в 2003 г. было зарегистрировано более двух тысяч (2093) случаев ЭВИ. Во многом заболеваемость ОКИ вирусной этиологии связана с проблемой загрязнения окружающей среды патогенными вирусами, которая усиливается их специфической особенностью — высокой устойчивостью к физическим, химическим и биологическим факторам, что позволяет им длительно (несколько недель, месяцев и даже лет) сохраняться в объектах окружающей среды.
Среди различных факторов передачи патогенов значимую роль имеет вода, основным источником загрязнения которой являются хозяйственно-
бытовые сточные воды. Нарушение любого звена в технологической схеме их обработки резко снижают эффективность очистки, увеличивая тем самым опасность загрязнения водоисточников и, как следствие, питьевой воды [3, 4, 6]. С загрязненной водой вирусы зачастую поступают в почву, состояние которой оказывает воздействие на здоровье населения через продукты питания, например, овощи и фрукты. Не менее важное значение имеет и бытовое загрязнение объектов, в особенности в детских учреждениях.
Все вышесказанное определяет актуальность мониторинговых исследований окружающей среды.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследованы пробы воды, взятые из источников водоснабжения (р.р. Ангара, Иркут, Иркутское водохранилище) и рекреационных зон г. Иркутск, а также смывы с эпидемически значимых объектов (оборудование и инвентарь в детских дошкольных учреждениях; овощи и фрукты, реализуемые через розничную торговлю). Всего было изучено 415 проб воды и 200 проб смывов.
С целью определения маркеров энтеровирусов в исследуемом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), использовали коммерческий набор РИБО-ЗОЛЬ — Амплисенс, Москва (для выделения РНК) и набор РЕВЕРТА L-100 — Амплисенс, Москва (для ОТ-ПЦР). Установление первичной нуклеотидной последовательности проводили на автоматическом секвенаторе ABI 310 с помощью дидеокиси терминаторов ПЦР и флюоресцентно меченных дНТФ, используя наборы ре-
агентов для автоматического секвенирования (Ате^Ьат).
Для изоляции энтеровирусов была использована культура клеток RD, выращенная при использовании среды роста: ИглаМЕМ с 5 % телячьей эмбриональной сыворотки и 200 Ед/мл антибиотиков (пенициллин + стрептомицин). Исследуемый материал пассировали 3 раза.
Детекция маркеров вируса гепатита А и ротавируса в эпидемически значимых объектах окружающей среды осуществлялась с применением метода иммуноферментного анализа.
Исследования проводились с использованием тест-систем НПО Вектор-Бест (Новосибирск). Результаты учитывались на спектрофотометре «Мультискан» фирмы «ЬаЬ$у£1ет£».
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ материалов эпидемиологического анамнеза больных, госпитализированных в Иркутскую городскую клиническую больницу в период вспышки энтеровирусной инфекции в 2003 г., свидетельствовал о широком разнообразии возможных факторов риска и, как следствие, путей передачи. Так, 28,7 % заболевших в качестве основной причины инфицирования рассматривали употребление в пищу фруктов и овощей. На пребывание на дачах и базах отдыха указывали 10 % заболевших, пребывание в других местностях и купание
— 8,75 %, на купание в водоемах в черте города — 5 %, на употребление сока в тетрапакетах — 7,5 % заболевших. Эти данные свидетельствуют о широком перечне факторов, участвующих в передаче вирусов, что нашло свое подтверждение в мониторинговых наблюдениях.
Исследование овощей и фруктов методом ПЦР в 40,0 % случаев выявило присутствие РНК энтеровируса. Из них 50,0 % проб — продукты местного производства (пригороды г. Иркутск) и такая же доля овощей и фруктов с наличием вирусов были доставлены из-за рубежа — Китая (33,3 %) и Узбекистана (17,0 %).
В процессе накопления вируса на культуре клеток RD, в пяти из девяти исследуемых проб были идентифицированы энтеровирусы. Детекция вирусной РНК из смывов, взятых с инвентаря и оборудования, а также с рук детей и персонала позитивных результатов не дала. Отрицательные результаты были получены и при анализе воды различного качества, что лишь указывает на низкую концентрацию энтеровирусов в исследуемых пробах (не более 40 вирусных частиц в литре анализируемой воды, согласно расчету порога чувствительности метода ПЦР). Присутствие вируса было установлено при трехкратном пассаже отдельных проб на культуре клеток RD. Так, из семи проб воды, в трех были выделены цитопатогенные агенты: один — в воде р. Ангара (пос. Боково); два
— в горячей воде (Иркутск-2). В ходе исследования смывов вирус был выделен в материале, взятом со стен, а также в спальной комнате и туалете детского дошкольного учреждения.
Исследование биосубстратов больных энтеровирусной инфекцией с целью идентификации вируса, продемонстрировало принадлежность этиологического агента виду Human enterovirus B (HEVB), серотипу Echovirus 30, ближайшим родственником которого оказался вирус, обнаруженный в спинномозговой жидкости больного менингитом из Франции. При этом он резко отличался от штаммов, вызвавших вспышки инфекции на Тайване в 2001 г., в Китае в 2004 г. и других азиатских регионах. Также следует отметить, что указанный вирус с одинаковой частотой (p > 0,05) выделялся из спинномозговой жидкости, фекалий и носоглоточных смывов, что свидетельствует о возможной реализации не только фекальноорального механизма передачи, но и воздушнокапельного.
Дальнейшими исследованиями предусматривался анализ материала на присутствие маркеров вируса гепатита А и ротавируса.
Исследование овощей и фруктов, реализуемых через торговую сеть г. Иркутска (Центральный рынок) свидетельствовало о высокой частоте встречаемости патогенных агентов как в смывах (21,1 и 5,3 % для вируса гепатита А и ротавируса соответственно), так и мякоти (в 13,4 % проб каждый) анализируемых продуктов.
Комплексный анализ воды источников водоснабжения и рекреационных зон г. Иркутска выявил присутствие антигена вируса гепатита А в 14,0 %, ротавируса — в 8,0 % проб. Наиболее часто позитивные находки определялись в водах реки Ангара, озера ГЭС 2, залива Чертугеевский, реже
— при водозаборе в заливе Ерши и техническом водозаборе в районе ИАПО.
С целью мониторинга патогенных вирусов в детских дошкольных учреждениях были исследованы смывы. Как показали результаты исследования, антиген вируса гепатита А в анализируемых пробах определялся в 13,5 %, ротавируса — 8,5 % случаев. Наиболее часто маркеры указанных вирусов встречались в смывах, взятых в приемной и раздаточной, реже — в кухне и игровой комнате.
Приведенные выше результаты исследований свидетельствуют об активной циркуляции патогенных вирусов в объектах окружающей среды г. Иркутска, что создает реальные предпосылки для возникновения и распространения острых кишечных инфекций вирусной этиологии. Данное обстоятельство диктует необходимость организации постоянно действующего санитарно-вирусологического мониторинга за объектами эпидемического риска в городе, что позволит рационально (научно обосновано) проводить комплекс профилактических мер по предупреждению заболеваемости.
ЛИТЕРАТУРА
1. Астафьев В.А. Значимость ротавирусной инфекции в структуре острых кишечных заболеваний в Республике Саха (Якутия) / В.А. Астафь-
ев, А.Г. Федулова // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. -2002. - Т. 1, № 4. - С. 23-25.
2. Васильев Б.Я. Острые кишечные заболевания. Ротавирусы и ротавирусная инфекция / Б.Я. Васильев, Р.И. Васильев, Ю.В. Лобзин. -Санкт-Петербург: «Лань», 2000. - 272 с.
3. Денисов И.Н. Инфекционные болезни и задачи медицинской науки и здравоохранения по их профилактике / И.Н. Денисов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1991. - № 11. - С. 2-7.
4. Новиков Ю.В. Оптимизация водопользования населения города Воронежа / Ю.В. Новиков,
М.И. Чубирко, Н.П. Мамчик // Гигиена и санитария. - 2001. - №3. - С. 41-44.
5. Савилов Е.Д. Восточные регионы России -зона риска для распространения острых кишечных инфекций / Е.Д. Савилов, В.А. Астафьев // Материалы IX съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 2007 г. - М., 2007. - Т. 1. - С. 196.
6. Сравнительная оценка методов выделения колифагов из чистых вод / Р.А. Дмитриева, Н.Н. Корнилова, Т.В. Доскина, А.Е. Недачин // Гигиена и санитария. - 1988. - №6. - С. 4748.
