Механизмы участия провоспалительных и апоптотических факторов в инициации повреждения легких при экстремальных состояниях Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК: 616.24-001-018.1-092

МЕХАНИЗМЫ УЧАСТИЯ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И АПОПТОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В ИНИЦИАЦИИ ПОВРЕЖДЕНИЯ ЛЕГКИХ ПРИ ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ СОСТОЯНИЯХ

Кубышкин А. В.1, Анисимова Л. В.1, Бессалова Е. Ю.2, Алиев Л. Л.1, Голубинская Е. П.3, Макалиш Т. П.2, Писарев А. А.1

'Кафедра общей и клинической патофизиологии, 2Центральная научно-исследовательская лаборатория, 3Кафедра патологической анатомии с секционным курсом Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского», 295051, бульвар Ленина 5/7, Симферополь, Россия

Для корреспонденции: Анисимова Людмила Васильевна, доцент кафедры общей и клинической патофизиологии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», e-mail: [email protected]

For correspondence: Anisimova Lyudmila Vasilievna, PhD, Associate Professor department of General and clinical pathophysiology, Medical Academy named after S.I. Georgievsky of Vernadsky CFU; e-mail: [email protected]

Information about authors:

Kubishkin A. V., http://orcid.org/ 0000-0002-9400-1826 Anisimova L. V., http//orcid.org/0000-0001-9412-5071 Bessalova Ye. Yu., http://orcid.org/0000-0001-8216-4196 Aliev L. L., http://orcid.org/0000-0001-9401-4398 Golubinskaya E. P., http// orcid.org/0000-0003-3917-924X Makalish T. P., http://orcid.org/0000-0003-1884-2620 Pisarev A. A., https://orcid.org/0000-0002-9204-5198

РЕЗЮМЕ

Одним из наиболее распространенных и прогностически неблагоприятных компонентов формирования синдрома полиорганной недостаточности при критических состояниях является развитие синдрома острого повреждения легких. В основе патогенеза развития данного синдрома при критических состояниях лежат механизмы дезорганизованой системной воспалительной реакции на воздействие повреждающего агента, который активирует ряд клеточных и биохимических реакций, что приводит к системной активации многочисленных медиаторов воспаления. Особая роль в развитии полиорганной недостаточности принадлежит системной активации неспецифического протеолиза, который представляет собой универсальный механизм неспецифической альтерации тканей. Среди наименее изученных механизмов гибели клеток на фоне их неспецифического повреждения при полиорганной недостаточности остается апоптоз.

Цель исследования: изучить провоспалительные и апоптотические факторы формирования повреждения легких при критических состояниях, сопровождающихся развитием реперфузионного сидрома. Экспериментальные исследования проведены на 72 белых крысах-самцах линии «Wistar» массой 180-210 г в соответствии с принципами биоэтики. Формирование СПОН проводили путем моделирования реперфузионного синдрома. В статье проведен анализ состояния неспецифической протеиназ-ингибиторной системы сыворотки крови и иммуногистохимических реакций в легочной ткани животных с экспериментально моделированным реперфузионным синдромом свидетельствует о гиперактивации проапоптотического фактора CD95 и одновременном критическом угнетении блокаторов апоптоза, оказывающих протективный эффект на паренхиму легких. Дисбаланс регуляторов программируемой клеточной гибели приводит к инициации FAS-зависимого апоптоза и нарушению равновесия неспецифической протеиназ-ингибиторной системы, что в комплексе с нарастающими гемодинамическими нарушениями приводит к прогрессии некробиотических изменений и рекрутированию в очаги повреждения клеток гистиоцитарного происхождения. Активация фагоцитоза макрофагами сопровождается антигенной презентацией клеткам лимфоидного ряда, последующей их дифференцировке в CD8+ Т-киллеры, пролонгации цитотоксического эффекта и формированию синдрома острой легочной недостаточности.

Ключевые слова: синдром острого повреждения легких, полиорганная недостаточность, апоптоз, воспаление

MECHANISMS OF PARTICIPATION OF PROINFLAMMATORY AND APOPTOTIC FACTORS IN THE INITIATION OF LUNG INJURY IN EXTREME CONDITIONS

Kubishkin A. V., Anisimova L. V., Bessalova Ye. Yu., Aliev L. L., Golubinskaya E. P., Makalish T. P., Pisarev A. A.

Medical Academy named after S. I. Georgievsky of Vernadsky CFU, Simferopol, Russia

SUMMARY

One of the most common and prognostically unfavorable components of the formation of multiple organ failure syndrome in extreme conditions is the development of acute lung injury syndrome. The pathogenesis of development of this syndrome in extreme conditions is based on the mechanisms of systemic inflammatory response, which is caused by the generalized damaging agent. It activates a number of cellular and biochemical reactions, which lead to the systemic activation of numerous inflammatory mediators. A special role in the development of multiple organ failure belongs to the systemic activation of nonspecific proteolysis, which is a universal mechanism for nonspecific

alteration of tissues. Apoptosis remains among the least studied mechanisms of cell death on the background of their non-specific damage during multiorgan failure.

Objective: to study the proinflammatory and apoptotic factors of the formation of lung damage in extreme conditions, accompanied by the development of reperfusion sydrome. Experimental studies were carried out on 72 white male rats of the «Wistar» line weighing 180-210 g in accordance with the principles of bioethics. The formation of multiorganic falure syndrome was performed by modeling the reperfusion syndrome. The article analyzes the state of non-specific proteolysis and immunohistochemical reactions in the lung tissue of animals with experimental reperfusion syndrome. The results of research indicates activation of proapoptotic factor CD95 and simultaneous critical inhibition of apoptosis blocking factors that have a protective effect on the lung parenchyma. An imbalance of apoptosis regulators leads to the initiation of FAS-dependent apoptosis and an imbalance in the nonspecific proteinase-inhibitory system, which leads to progression of necrobiotic changes and recruitment of histiocytic cells to the lesions. Activation of phagocytosis by macrophages is accompanied by antigenic presentation of cells of the lymphoid series and their subsequent differentiation into CD8 + T-killers, prolongation of the cytotoxic effect and formation of acute pulmonary insufficiency.

Key words: acute lung injury syndrome, multiple

Полиорганная недостаточность является одним из наиболее частых и серьезных осложнений в клинике критических состояний и повышает риск летального исхода у пациентов по данным разных авторов до 28 - 56% [1; 2]. Практически обязательным компонентом формирования синдрома полиорганной недостаточности (СПОН) при критических состояниях является развитие синдрома острого повреждения легких (СОПЛ) [3], который признается крайне неблагоприятным осложнением критических состояний. Согласно современным представлениям в основе патогенеза полиорганной недостаточности лежит индукция и генерализация гуморальных факторов вторичной альтерации, которую в современных источниках все чаще рассматривают как дезорганизованную системную воспалительную реакцию [4; 5; 6]. Она сопровождается каскадной активацией медиаторных систем (калликреин-кининовой системы, системы комплемента, эйкозанои-дов, свертывающей системы крови, цитоки-нов и др.), активные компоненты которых реализуют вторично-альтеративные эффекты в органах и тканях. На периферическом уровне каждая из перечисленных систем способна ре-ализовывать свои деструктивные эффекты посредством нескольких основных механизмов. Одни из них вызывают глубокие нарушения микроциркуляции с развитием гипоксическо-го повреждения клеток, другие - индуцируют глубокие метаболические расстройства, третьи, такие как неспецифические протеиназы и свободные радикалы, способны оказывать прямое деструктивное воздействие на компоненты тканей. Однако, среди вторично-альтеративных механизмов при полиорганной недостаточности наименее изученной в настоящее время является роль апоптоза. Известно, что активация последнего при полиорганной недостаточности может индуцироваться цитокинами, интенсификацией свободнорадикальных процессов, а также вследствие неспецифического

organ failure, apoptosis, inflammation

насильственного повреждения клеток, практически, вне зависимости от его специфики [7; 8].

Сведения о провоспалительных и апопто-тических механизмах вовлечения легких при экстремальных состояниях, в частности при ситуациях, сопровождающихся развитием ре-перфузионного сидрома (РС) немногочисленны и выполнены на органном и тканевом уровнях, и, в меньшей степени, - на молекулярном [9; 10; 11]. Поэтому изучение воспалительных и апоптотических механизмов формирования органопатологии при критических состояниях является актуальным для современной как фундаментальной так и клинической медицины.

Цель данной работы - изучить провоспа-лительные и апоптотические факторы инициации формирования повреждения легких при критических состояниях сопровождающихся развитием реперфузионного сидрома (РС)

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Экспериментальные исследования проведены на 72 белых крысах-самцах линии «Wistar» массой 180-210 г в соответствии с принципами биоэтики. Формирование СПОН проводили путем моделирования реперфузионного синдрома. РС моделировали путём наложения резиновых жгутов на обе задние конечности на уровне паховой складки сроком на 6 часов. Ширина пережатия тканей составила 2-3 мм. Показателем правильности наложения жгута являлось отсутствие отёка конечностей и бледность их окраски. Реваскуляризация производилась одномоментно путём рассечения жгутов через 6 часов после их наложения. Эвтаназию животных осуществляли под тиопенталовым наркозом путём декапитации через 6 часов ишемии (группа А) и 6 (группа В), 12 (группа С), 24 (группа D) и 48 (группа E) часов после реперфузии. В качестве контроля служила группа интактных животных.

При проведении экспериментальных исследований соблюдались принципы и положения Руководства по уходу и использованию лабо-

раторных животных (USNIH, № 85-23), международных правил «Guide for the Care and Use of Laboratory Animals» (2009г.) с учетом Конвенции Совета Европы о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986г.).

Было проведено поэтапное морфологическое исследование, включающее стандартное гистологическое исследование с использованием окраски гематоксилином и эозином и последующее иммуногистохимическое (ИГХ) исследование.

ИГХ исследование проводили на серийных парафиновых срезах толщиной 4 мкм (автоматический ротационный микротом Leica RM 2255, Германия), помещенных на адгезивные стекла (Leica Biosystems, Великобритания). Использовали концентрированные антитела к регулятору апоптоза bcl-2-протеину (NCL-L-BCL-2, Novocastra, Великобритания) в разведении 1:100, маркер Fas-рецепторов CD95 (BD Biosciences, Великобритания) в разведении 1:100 (использовали раствор для разведения первичных антител Leica Biosystems, Великобритания), а также готовые к использованию моноклональные антитела к маркерам лейкоцитов CD45, CD8, CD68, CD56 (клон ММ1, Leica, Великобритания). Применяли систему детекции Polymer Refine Detection (Leica Biosystems, Великобритания). Постановку реакции осуществляли с помощью автоматизированной системы ИГХ окрашивания Bond Max (Leica Biosystems Melburn Pty, Австралия), в каждой серии дополнительно ставили реакцию с тканями негативного и позитивного контроля к указанным антителам. Реакцию оценивали в световом поле при увеличении 400х в десяти полях зрения. Использовали сканер препаратов Aperio CS2 (Leica Biosystems, Германия) с программным обеспечением Aperio ImageScope. Просмотр и цифровые фотографии микропрепаратов осуществляли цифровой камерой OLYMPUSC 5050Z, установленной на микроскопе «OlympusCX-41».

Морфометрический анализ полученных данных проводили с помощью лицен-зинного программного обеспечения ImageJ.

Исследования проведены в Гистологической лаборатории с иммуногистохимией и электронной микроскопией Центральной научно-исследовательской лаборатории Медицинской Академии имени С.И. Георгиевского и Центра коллективного пользования научным оборудованием «Молекулярная биология».

Определение активности компонентов протеиназ-ингибиторной системы проводили с использованием энзиматических методов [12] на спектрофотометре "Biomat 5» (Великобритания). Трипсиноподобную ак-

тивность (ТПА) определяли по скорости отщепления N-бензоил^-аргинина от синтетического субстрата этилового эфира N-a-Benzoil-L-arginine ethyl ester hydrochloride (BAEE) (Sigma). Определение эластазоподоб-ной активности (ЭПА) проводили на основании изучения скорости гидролиза синтетического субстрата Boc-L-alanine-4-nitrophenil ester (Boc-Ala-ONp) (Sigma). Определение концентрации альфа-1-ингибитора проте-иназ (АТА) проводили на основании торможения расщепления трипсином BAEE. Аналогично определялась активность кис-лотостабильных ингибиторов (КСИ) после предварительной подготовки сыворотки путём прогревания в кислой среде.

Статистическая обработка полученных данных проведена с применением методов вариационной статистики с вычислением средних величин (M), оценкой вероятности расхождений (m), оценкой достоверности изменений с использованием t-критерия Стью-дента. За достоверную принималась разность средних значений при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенных исследований было установлено, что моделирование РС сопровождается интенсивной индукцией апоптоза. Об этом свидетельствуют результаты ИГХ исследования фрагментов легочной ткани, согласно которым экспрессия FAS во всех экспериментальных группах была статистически значимо повышена в сравнении с контрольной группой интакт-ных экспериментальных животных. Позитивное окрашивание регистрировалось в альвеолярных клетках (эпителиальные и эндотелиальные), клетках бронхо-ассоциированной лимфоидной ткани и элементах воспалительного инфильтрата (макрофаги, лимфоциты). Количество клеток, экспрессирующих проапоптотические молекулы динамически увеличивалось в зависимости от продолжительности действия фактора. Так минимальные показатели фиксировались в группе А с моделированием ишемии в течение 6 часов (21,71±4,44), а максимально выраженные - в группе D с ишемией и последующей реперфу-зией в течение 48 часов (62,12±11,28) (табл.1).

Важной особенностью ИГХ реакцией с CD9S является инициация FAS-зависимого апоптоза в различных клеточных популяциях в зависимости от срока эксперимента.

При ишемии в течение 6 часов (группа А), ишемии и реперфузии 6 ч (группа В) и ише-мии-реперфузии 12 ч (группа С) превалирующей позитивно окрашенной клеточной популяцией были альвеолоциты и эндотелиоциты.

Таблица 1

Количественные характеристики иммуно-гистохимических маркеров во фрагментах ткани легких

крыс с моделью реперфузионного синдрома

Группа FAS ^95) Bd-2 CD68 CD8 CD45 CD56

M±m (Абс.)

Группа А п=12 21,71±4,44* 36,54±4,76* 27,09±2,93* 17,74±1,89* 22,41±3,01* 13,74±1,08

Группа В п=12 25,36±5,01* 31,16±3,99* 32,45±3,14* 17,98±1,76* 25,03±3,28* 14,05±2,01

Группа С п=12 29,56±6,41* 30,07±5,41* 39,21±3,79* 19,04±2,01* 29,12±4,25* 14,22±2,41

Группа Б п=12 37,41±9,12* 27,01±5,12* 48,33±7,12* 31,06±6,22* 39,39±6,13* 14,61±2,03

Группа Е п=12 62,12±11,28* 22,52±4,28* 79,11±8,01* 56,61±7,24* 67,85±9,21* 14,32±1,89

Контроль п=12 4,92±1,37 34,51±5,28 23,11±3,72 14,21±1,73 17,62±2,01 12,81±1,16

Примечание: звёздочками отмечена достоверность различий показателей (р) по отношению к контрольной группе животных (*р<0,05); п - количество животных

В последующие сроки количество их критически увеличивалось наряду с появлением БЛ8+ клеток лимфогистиоцитарного происхождения (рис.1А).

ИГХ экспрессия маркера Вс1-2 в контрольных образцах легочной ткани интактных животных определялась в лимфоид-ассоци-ированной легочной ткани, единичных аль-веолоцитах, макрофагах, интерстициальных миофибробластах и в среднем составляла 13,54±1,76 позитивно окрашенные клетки.

В экспериментальной группе А фиксировалось незначительное снижение числа Ьс1-2+ клеток (12,51±1,99). При моделировании РС отмечалась интенсификация антиапоптотической активности клеточных элементов до 12 часов, после чего

происходило прогрессирующее снижение их количества с минимальными показателями в группе Е (11,27±1,28) (рис.1В). Межгрупповая вариабельность количества клеток с антиапоптотиче-ской молекулой относительно контрольной группы статистически значимо недостоверна, и свидетельствует об общей тенденции изменения соотношения про- и антиапоптотических факторов.

При анализе ИГХ реакции с маркерами СБ68, СБ8, СБ45 установлено стойкое повышение популяции макрофагов, Т-цитотоксических лимфоцитов и лейкоцитов по мере развития РС и активации БЛ8-зависимого апоп-тоза с пиковыми значениями в группе Е.

Количественная и качественная интенсификация экспрессии СБ68, СБ8 и СБ45 имеет

К. ' ' $* ^¿а *■ '■')■ * 1 И, \"с * ■ ъ* Ч * > ** * / '-•Ч а-ц к \ л / 4 У '' > 7у. ■•>, Л. ,' 4 жг ' : у 7 / Х Г; Л > ■. ^ >■" я / ' ^ А

Ир' ч *ч -• * А т Т» - Л - В

Рис.1. Экспериментальная группа С период реперфузии 12 часов. ИГХ. Ув. 40х. А - цитоплазматическая экспрессия маркера С095 в перибронхиальной зоне (стрелка). В - цитоплазматическая экспрессия маркера Ьс!-2 в перибронхиальной зоне (стрелка).

2018, т. 8, № 4

крымскии журнал экспериментальном и клиническои медицины

общую тенденцию и проявляется в увеличении числа позитивно окрашенных клеток с преимущественной периваскулярной локализацией на начальных этапах в экспериментальных группах А и В, а при пролонгации реперфузионного периода - с последующим распространением воспалительного инфильтрата по интерстици-альным пространствам легочной ткани (рис.2). Такой характер клеточной локализации свидетельствует об активации в первую очередь тканевых макрофагов, диффузно расположенных в межальвеолярных перегородках. Последующее компенсаторное повышение сосудистой проницаемости приводит к диапедезу моноцитов в паравазальные пространства и трансформации их в макрофаги. Специфические реакции иммунитета активизируются менее интенсивно, что связано со слабой антигенной активностью окружающих тканей, т.к. деструкция клеточных элементов происходит в результате активации апоптоза и тканевой гипоксии.

В процессе ИГХ исследования было установлено наличие стабильной популяции СБ56+ клеток, без количественной вариабельности в динамике эксперимента. Данный факт отражает отсутствие значимой роли естественных киллеров в патогенезе формирующегося синдрома

острого легочного повреждения при моделируемой РС. Активация протеиназ является важным патогенетическим звеном в развитии ряда воспалительных реакций организма и активации апоптоза. Это связано с тем, что интенсификация неспецифического протеолиза приводит к некотролируемой активации регулятрных плазменных систем, таких как калликреин-кинино-вая, системы свертывания и комплемента. Это приводит к глубоким нарушениям микроциркуляции, прямому неспецифическому повреждению тканей, а также массивному поступлению разнообразных воспалительных медиаторов, инициирующих весь комплекс вторично-аль-теративных механизмов. Оценивая ответ организма на повреждающий фактор, мы обнаружили, что у экспериментальных животных с моделью РС в сыворотке крови наблюдается нарастающий дисбаланс в протеиназ-инги-биторной системе, который был максимально выражен в группе Б, где продолжительность реперфузионного периода составляла 24 часа (табл.2). Такое увеличение активности трипси-ноподобных протеиназ на фоне снижения уровней их ингибиторов (АТА и КСИ), которые не способны компенсировать действие протеиназ, видимо и способствует формированию СПОН.

А

Рис.2. Экспериментальная группа О период реперфузии 24 часа. ИГХ. Ув. 40х. цитоплазматическая экспрессия маркера СО68 в бронхо-ассоциированной лимфоидной ткани (стрелка). В - мембранная экспрессия маркера СО8 в перибронхиальной зоне (стрелка).

Таблица 2

Изменение протеиназ-ингибиторной системы сыворотки крови при экспериментальном

реперфузионном синдроме (М±т)

Группа животных ТПА мкМ/мл*мин АТА ИЕ/мл КСИ ИЕ/мл

Контроль п=12 0,26±0,02 28,06±0,54 8,14±0,90

Группа А п=12 0,20±0,01* 38,03±1,19* 3,82±0,43*

Группа В п=12 0,50±0,05* 20,63±1,40* 3,19±0,29*

Группа С п=12 0,73±0,04* 25,75±1,63 3,40±0,34*

Группа Б п=12 0,46±0,07* 16,08±0,80 3,08±0,23*

Группа Е п=12 0,49±0,09* 20,74±1,68* 2,10±0,34

Примечание: звёздочками отмечена достоверность различий показателей (р) по отношению к контрольной группе животных (*р<0,05); п - количество животных

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, анализ ИГХ реакций в легочной ткани животных с экспериментально моделированным РС свидетельствует о гиперактивации проапоптотического фактора CD95 и одновременном критическом угнетении факторов блокаторов апоптоза, оказывающих про-тективный эффект на паренхиму легких. Дисбаланс регуляторов программируемой клеточной гибели приводит к инициации FAS-зависимого апоптоза и нарушению равновесия неспецифической протеиназ-ингибиторной системы, что в комплексе с нарастающими гемодинамическими нарушениями приводит к прогрессии некроби-отических изменений и рекрутированию в очаги повреждения клеток гистиоцитарного происхождения. Активация фагоцитоза макрофагами сопровождается антигенной презентацией клеткам лимфоидного ряда, последующей их диф-ференцировке в CD8+ Т-киллеры, пролонгации цитотоксического эффекта и формированию синдрома острой легочной недостаточности.

Рабата выполнена в рамках гранта РФФИ № 17-415-92010 р_а «Механизмы участия про-воспалительных и апоптотических факторов в инициации повреждения органов при экстремальных состояниях».

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.

Conflict of interest. The authors have no conflict of interests to declare.

ЛИТЕРАТУРА

1. Серебрякова Е. Н., Волосников Д. К., Глазы-рина Г. А. Синдром полиорганной недостаточности: современное состояние проблемы/Вестник анестезиологии и реаниматологии.2013;(5):60-66.

2. Dunser M. W., Bataar О., Tsenddorj G. et al. Differences in critical care practice between an industrialized and a developing country/ Wien. Klin. Wochenschr 2008;(19-20):600-607.

3. Росстальная А. Л., Сабиров Д. М., Акалаев Р. Н. и др. Острое повреждение легких: спорные вопросы и нерешенные проблемы (обзор литературы)/ Журнал им. Н.В. Склифосовского Неотложная медицинская помощь. 2016;(3):66-72.

4. Becher R. D., Colonna A. L., Enniss T. M. et al. An innovative approach to predict the development of adult respiratory distress syndrome in patients with blunt trauma./J Trauma Acute Care Surg 2012;73(5):1229-1235.

5. Incagnoli P., Blaise H., Mathey C. et al. Pulmonary resection and ECMO: A salvage therapy for penetrating lung trauma/Ann Fr Anesth Reanim 2012; 31(7-8): 641643.

6. Магрупов Б. А., Вервекина Т. А., Убайдулла-ева В. У., Юлдашев Ф. А. Морфологические аспекты респираторного дистресс-синдрома взрослых/ Вестник экстренной медицины. 2014;(4):96-99.

7. Hachem A., Gartenhaus R. B.Oncoge-nes as molecular targets in lymphoma / Blood.2005;106(6):1911-1923.

8. Кадушкин А. Г., Таганович А. Д., Шман Т. В. и др. Популяции лимфоцитов, содержащих FAS и ССR5-рецепторы, в периферической крови пациентов с хронической обструктивной болезнью. Туберкулез и болезни легких. 2013;90 (10):035-041.

9. Takabatake N., Nakamura H., Innue S. et al. Circulating levels of soluble Fas ligand and soluble Fas in patients with chronic obstructive pulmonary disease / Respir. Med.2000;(94):1215-1220.

10. Algeciras-Schimnich A., Vlahakis S. R., Villasis-Keever A. et al. CCR5 mediates Fas-and caspase-8 dependent apoptosis of both uninfected and HIV infected primary human CD4 T cells/AIDS.2002;16(11):1467-1478.

11. Sakka S.G. Extravascular lung water in ARDS patients./Minerva Anestesiol 2013; 79(3):274-284.

12. Кубышкин А. В., Фомочкина И. И. Эластолити-ческая активность бронхоальвеолярного лаважа при моделировании воспалительного процесса в легких. Укр.биохим. журн. 2008; 80(1): 89-95.

REFERENCES

1. Serebryakova E. N., Volosmkov D. K., Glazyrina G. A. Multiple organ dysfunction syndrome: state-of-the-art / Bulletin of Anesthesiology and Intensive Care.2013; (5):60-66. (In Russian).

2. Dunser M. W., Bataar О., Tsenddorj G. et al. Differences in critical care practice between an industrialized and a developing country/ Wien. Klin. Wochenschr 2008;(19-20):600-607.

3. Rosstalnaya A.L., Sabirov D.M., Akalayev R.N., et al. Acute lung injury: issues and remaining challenges (a literature review). Sklifosovsky Journal of Emergency Medical Care. 2016;(3):66-72. (In Russian).

4. Becher R.D., Colonna A.L., Enniss T.M. et al. An innovative approach to predict the development of adult respiratory distress syndrome in patients with blunt trauma./J Trauma Acute Care Surg 2012;73(5):1229-1235.

5. Incagnoli P., Blaise H., Mathey C. et al. Pulmonary resection and ECMO: A salvage therapy for penetrating lung trauma/Ann Fr Anesth Reanim 2012;31(7-8):641-643.

6. Magrupov B.A., Vervekina Т.А., Ubaydullaeva V.U., и др. Morphologic aspects of respiratory distress-syndrome in adults/ Bulletin of emergency medicine. 2014; (4):96-99. (In Russian).

7. Hachem A., Gartenhaus R.B.Oncogenes as molecular targets in lymphoma / Blood.2005;106(6):1911-1923.

8. Kadushkin A.G. Taganovich A.D. Shman T.V. Germenchuk I.A. Dudareva N.I. Peripheral blood lymphocyte population containing Fas and CCR5 receptors

in patients with chronic obstructive pulmonary disease / Tuberculosis and Lung Diseases. 2013;90(10):035-041.

9. Takabatake N., Nakamura H., Innue S. et al. Circulating levels of soluble Fas ligand and soluble Fas in patients with chronic obstructive pulmonary disease / Respir. Med.2000;(94):1215-1220.

10. Algeciras-Schimnich A., Vlahakis S. R., Villasis-Keever A. et al. CCR5 mediates Fas-and caspase-8

dependent apoptosis of both uninfected and HIV infected primary human CD4 T cells/AIDS.2002;16(11):1467-1478.

11. Sakka S.G. Extravascular lung water in ARDS patients./Minerva Anestesiol 2013; 79(3):274-284.

12. Kubyshkin A. V., Fomochkina I. I. Elastolytic activity of bronchoalveolar lavage fluid in acute lung inflammatory injury./Ukr Biokhim Zh. 2008;80(1):89-95. (In Russ).