CC BY
0ISBN 978-5-507-47124-9. — Text: electronic // Lan: electronic library system.
7. Maintenance, feeding and diseases of horses: a textbook / A. A. Stekolnikov, A. F. Kuznetsov, A.V. Vil [et al.]; edited by A. A. Stekolnikov. — Saint Petersburg: Lan, 2022. — 624 p. — ISBN 978-5-8114-0689-0. — Text: electronic // Lan: electronic library system.
8. Tushina, A.D. Treatment of non-infectious diseases of horses / A.D. Tushina, N. P. Pekarskaya // In the World of Scientific discoveries : Proceedings of the International Student Scientific Conference, Ulyanovsk, May 23-25, 2017. Volume 3. - Ulyanovsk: Ulyanovsk State Agrarian University, 2017. - pp. 205207. - EDN ZDUOJX.
9. Care and diseases of horses / A. A. Stekolnikov, A. F. Kuznetsov, V. B. Galetsky [et al.]; Ed.: Stekolnikov A. A. — 3rd ed., erased. — Saint Petersburg: Lan, 2023. — 620 p. — ISBN 978-5-507-46917-8. — Text : electronic // Lan : electronic library system.
УДК 619.615.33.616.24-002.636.4
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЭТИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЙ У СВИНЕЙ
Толстова Елизавета Антоновна, аспирант, ORCID: 0000-0001-8839- 9025, SPIN-код: 6340-6610, AuthorID: 1164113, e-mail: [email protected] Агольцов Валерий Александрович, профессор, д.в.н., ORCID: 0000- 0001-6991-7253, SPIN-код: 3897-4273, AuthorID: 722672, e-mail:[email protected] ФГБОУ ВО Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н.И. Вавилова, Саратов
Черных Олег Юрьевич, профессор, д.в.н., ORCID: 0000-0001-8584-8251, SPIN-код: 3611-5160, AuthorID: 473119, e-mail: [email protected] ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория », г. Кропоткин, Краснодарский край
Аннотация. Проводились микроскопические, культуральные, биологические, молекулярно-генетические и вирусологические методы исследований. Материалом для лабораторных исследований служили: мазки со слизистой носовой полости от заболевших свиноматок, цельная кровь, сыворотка крови, смывы из бронхов, а также трупы поросят в возрасте от 1 до 4 месяцев. Для контроля питательных сред и диагностикумов использовали эталонные культуры микрооганизмов, находящихся в ГБУ Кропоткинской краевой ветеринарной лаборатории.
Ключевые слова: Диагностика, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Mycoplasma hyopneumoniae, свиньи, инфекция.
LABORATORY DIAGNOSTICS TO IDENTIFY PATHOGENS OF RESPIRATORY INFECTIONS IN PIGS
Tolstova Elizaveta Antonovna, graduate student, ORCID: 0000-0001-8839- 9025, SPIN-код: 6340-6610, AuthorID: 1164113, e-mail: liza. tolstova.2014@mail. ru Agoltsov Valery Alexandrovich, Grand PhD in Veterinary Medicine., ORCID: 0000-0001-6991-7253, SPIN-код: 3897-4273, AuthorID: 722672,
e-mail:[email protected] Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after H.I. Vavilov, Saratov, Russia
Chernykh Oleg Yurievich, Grand PhD in Veterinary Medicine, ORCID:
0000-0001-8584-8251, SPIN-код: 3611-5160, AuthorID: 473119,
e-mail: gukkvl50@kubanvet. ru Kropotkin Regional Veterinary Laboratory, Kropotkin, Russia
Abstract: Microscopic, cultural, biological, molecular genetic and virological research methods were carried out. The materials for laboratory studies were: smears from the nasal mucosa of diseased sows, whole blood, blood serum, flushes from the bronchi, as well as corpses of piglets aged from 1 to 4 months. To control nutrient media and diagnostics, reference cultures of microorganisms located in the GBU of the Kropotkin Regional Veterinary Laboratory were used.
Keywords: Diagnostics, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Mycoplasma hyopneumoniae, pigs, infection.
Введение. Респираторные инфекции свиней являются одной из основных проблем современного свиноводства.
Респираторные инфекции у свиней могут вызывать бактерии, вирусы и грибы. Среди бактериальных возбудителей чаще встречаются Mycoplasma hyopneumoniae, Streptococcus pneumonia, Staphylococcus aureus. [1, 2, 3]
Общими показаниями для лабораторного исследования с целью проведения этиологической диагностики бактериальных респираторных инфекций является наличие у свиней остро возникшего заболевания с локальными симптомами поражения дыхательных путей.Обнаружения фрагментов генома возбудителей инфекционных болезней дыхательных путей в большинстве случаев наиболее эффективно и востребовано для ранней диагностики с целью последующего получения чистой культуры возбудителя. [3, 4, 5]
Таким образом, разработка быстрых и чувствительных диагностических инструментов является ключом к успешному решению данной проблемы и сдерживанию распространения инфекций. Доступные в настоящее время методы диагностики очень специфичны и чувствительны, имеют свои принципы работы. Основными методами диагностики являются микроскопический, культуральный, биологический, молекулярно-генетический и вирусологический. [2, 3, 5]
Цель исследования. Сравнение методов лабораторной диагностики и их эффективность для выявления возбудителей респираторных инфекций свиней.
Материал и методика исследований.
Проводились микроскопические, культуральные, биологические, молекулярно-генетические и вирусологические методы исследований.
Материалом для лабораторных исследований служили: мазки со слизистой носовой полости от заболевших свиноматок, цельная кровь, сыворотка крови, смывы из бронхов, а также трупы поросят в возрасте от 1 до 4 месяцев. Для контроля питательных сред и диагностикумов использовали эталонные культуры микрооганизмов, находящихся в ГБУ Кропоткинской краевой ветеринарной лаборатории. Изучение биологических свойств культур проводили на территории вивария ГБУ Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория.
Были применены диагностические наборы: «Вет-фактор» (Россия),
«Литех» (Россия), СТРЕПТОтест 16 (Erba Lachema Чехия), СТАФИтест 24(Erba Lachema Чехия), ID Screen Mycoplasma hyopneumoniae Competition (ID.Vet Франция).
Результат исследований.
Исследования проводились на базе ГБУ Кропоткинской краевой ветеринарной лаборатории. Из полученных статистических данных за последние три года с 2019 по 2021 можно установить (табл 1).
Таблица 1. Статистические данные по респираторным инфекциям
свиней в Краснодарском крае с 2019-2021 году
2019
Исследуем Количес Проведено исследований по Получено
ыи тво стрептококкозу положитель
материал, Матери микро бактериол биологи ПЦР вирусо ных
показател алов скопи огических ческих логиче результатов
ь ческих ские
Пат. 45 33 13 4 45 - 22
материал
Проведено исследований по микоплазмозу
Цельная 20 - - - 20 - 13
кровь
Сыворотка 25 - - - - 25 15
крови
Пат. 31 31 15 10 31 - 28
материал
Проведено исследований по стафилококкозу
Цельная 24 - - - 24 - 12
кровь
Пат. 35 20 20 10 35 20 26
материал
2020
Проведено исследований по стрептококкозу
Пат. 46 36 36 9 25 - 18
материал
Проведено исследований по микоплазмозу
Цельная 50 - - - 50 - 10
кровь
Сыворотка 50 - - - - 50 23
крови
Пат. 33 25 15 10 33 - 24
материал
Проведено исследований по стафилококкозу
Цельная 17 - - - 17 - 3
кровь
Пат. 54 45 15 15 14 - 28
материал
2021
Исследуемы Колич Проведено исследований по Получено
стрептококкозу
й ество микрос бактерио биологи ПЦ вирусол положитель
материал, Матер копичес логическ ческих Р огическ ных
показатель иалов ких их ие результатов
Пат. 58 40 40 8 28 - 24
материал
Проведено исследований по микоплазмозу
Сыворотка 48 - - - - 48 15
крови
Пат. 40 34 34 16 6 - 15
материал
Проведено исследований по стас илококкозу
Цельная 8 - - - 8 - 2
кровь
Пат. 35 29 29 20 15 - 16
материал
Высевы из патологического материала делали пастеровской пипеткой в мясо-пептонный бульон с 1% глюкозы и 10% инактивированной нормальной сывороткой лошади и на мясо-пептонный агар с 1% глюкозы и 5-10% дефебринированной крови барана.
Str. pneumonia представляли собой круглые, плоские, полупрозрачные колонии, диаметром 0,5-0,8 мкм. Иногда встречались мукойдные колонии -они были более крупные, слизистой консистенции. S.aureus образовывал желтые колонии обладающие лецитиназной активностью, гидролизовал лецитин, и вокруг колоний образовывался заметный «венчик». Чтобы убедиться, что это именно S. aureus, использовали тест с кроличьей плазмой. Микоплазмы образовали очень мелкие врастающие в среду колонии (0,1-0,2мм) с приподнятым центром. Для определения патогенных микоплазм использовали ПЦР, а специфических антител к Mycoplasma hyopneumoniae - ИФА.
Изучение биологических свойств
Определение патогенности стрептококков и стафилококков проводили на шести белых беспородных мышах весом 15-16 г. Для заражения использовали свежевыделенные (18-часовые) культуры стрептококков и стафилоккков. Культуру в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно. Культуру признают патогенной при гибели не менее двух мышей.
Наблюдения проводились в течении 5 суток, при заражении патогенной культурой мыши погибали в течении 1-2 суток. Результаты постановки биопробы представлены в таблице 2.
Таблица 2. Результаты постановки биопробы на белых мышах, зараженных культурой стрептококка и стафилококка
Мыши, зараженные стрептококком и стафилококком
Исследуемое лабораторн ое животное Кол-во вводимой культуры, мл 1 сутки 2 сутки
Белая мышь №1 0,5 - +
Белая мышь № 2 0,5 +
Белая мышь №3 0,5 - +
Молекулярно-генетические исследования проводились по классической схеме:
1. Экстракция ДНК из исследуемых образцов;
2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и изотермическая амплификация ДНК с флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»;
3. Анализ и интерпретация результатов.
Графики положительных результатов ПЦР-исследований с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени M. hyopneumoniae и S. Pneumoniae представлены на рисунке 1 и 2.
Рисунок 1 - График Рисунок 2 - График положительного положительного результата анализа результата анализа
на M. hyopneumoniae на S. Pneumoniae
Для обнаружения антител Mycoplasma hyopneumoniae в сыворотке крови свиней использовали конкурентный иммуноферментный анализ. Для работы применялся диагностический набор ID Screen Mycoplasma hyopneumoniae Competition (ID.Vet) Франция. Специфичность теста обеспечивалась благодаря использованию высокоспецифичного моноклонального антитела,направленного против консервативного эпитопа протеина Р65 M.hyopneumoniae, который не вступает в перекрестные реакции с M. flocculare, M. hyorinis. Проведения анализа считалось корректным, если
- среднее значение отрицательного контроля (ОПк-) больше, чем 0,7
ОПк-> 0,7
- Отношение средних значений Оптических плотностей Положительного (ОПк+) и Отрицательного (ОПк-) контролей меньше 0,3.
ОПк+/ОПк-< 0,3
Для каждой исследуемой пробы рассчитывалось процентное значение (S/N%)
S/N%= ОПобразца x 100 ОПк-
Результаты анализа образцов, имеющие S/N%:
меньше или равные 50%
больше 50%- считаются отрицательными
Результат Иммунный статус
S/N% < 50% Положительный
S/N% > 50% Отрицательный
Таблица 5 Результаты иммуноферментного анализа Mycoplasma hyopneumoniae
№ п/п ОП Пробы: % блокирования образца Результат:
1 0,69 51,51089248 Отрицательно
2 0,108 92,41040056 Положительно
3 0,502 64,72241743 Положительно
4 0,109 92,34012649 Положительно
5 0,237 83,34504568 Положительно
6 0,075 94,72944483 Положительно
7 0,114 91,98875615 Положительно
Заключение. Результаты, полученные при проведении лабораторных диагностических исследований пат. Материала от свиней поступившего в Кропоткинскую краевую ветеринарную лабораторию за последние 3 года (с 2019 по 2021 гг.) свидетельствуют о высокой частоте обнаружения бактериальных возбудителей респираторных инфекций свиней Mycoplasma hyopneumoniae,Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus. Сравнив методы лабораторной диагностики и их эффективность для выявления возбудителей респираторных инфекций свиней, можно заключить, что каждый метод имеет свою уникальность и достоверность.
Подводя итог, можно сказать, что нельзя только одним диагностическим методом заменить микроскопический, культуральный, биологический, молекулярно-генетический и вирусологический методы исследования бактериальных респираторных инфекций у свиней, только комплекс методов может дать точный, достоверный результат.
Литература
1. Агольцов В.А., Падило Л.П., Бирюкова О. П., Лигидова М.М. Эффективность и безопасность лекарственных препаратов при лечении экспериментальных и спонтанных микоплазменных инфекций // Ветеринария сегодня - 2022- №11 - 169-175.
2. Толстова Е.А., Агольцов В.А., Падило Л.П. Особенности диагностики и терапии стрептококкоза свиней, осложненного РРСС на племенной ферме// Научная жизнь - 2022. - Том 17. - Выпуск 1 - С.157-166.
3. Толстова Е.А., Лигидова М.М., Падило Л.П., Семиволос А.М., Агольцов В.А. Диагностика, терапия и специфическая профилактика стрептококкоза свиней, осложненного пастереллезом и микоплазмом// Аграрный научный журнал - 2022. - №1 - С.71-75.
4. Толстова Е.А., Лигидова М.М., Агольцов В.А., Черных О.Ю., Падило Л.П., Попова О.М. ПЦР-диагностика с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени для быстрого обнаружения Mycoplama hyopneumoniae в ассоциации с Streptococcus pneumoniae у свиней// Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана - 2023 - Том 254 - №2 - С.264-272.
5. Толстова Е.А., Агольцов В.А., Черных О.Ю., Семиволос А.М., Падило Л.П., Попова О.М. Видовая принадлежность и серогрупповая вариабельность стрептококков выделяемых от свиней в Краснодарском крае//Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана - 2023 - Том 255 - №3 - С.329-335
References
1. Agoltsov V.A., Padilo L.P., Biryukova O. P., Ligidova M.M. Efficacy and safety of drugs in the treatment of experimental and spontaneous mycoplasma infections // Veterinary Medicine today - 2022- No. 11 - 169-175.
2. Tolstova E.A., Agoltsov V.A., Padilo L.P. Features of diagnosis and
therapy ofpig streptococcosis complicated by RRSS on a breeding farm// Scientific life - 2022. - Volume 17. - Issue 1 - pp.157-166.
3. Tolstova E.A., Ligidova M.M., Padilo L.P., Semivolos A.M., Agoltsov V.A. Diagnosis, therapy and specific prevention of pig streptococcosis complicated by pasteurellosis and mycoplasma// Agrarian Scientific Journal -2022. - No.1 - pp.71- 75.
4. Tolstova E.A., Ligidova M.M., Agoltsov V.A., Chernykh O.Yu., Padilo L.P., Popova O.M. PCR diagnostics with fluorescence detection in real time for rapid detection of Mycoplama hyopneumoniae in association with Streptococcus pneumoniae in pigs// Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman - 2023 - Volume 254 - No.2 - Pp.264-272.
5. Tolstova E.A., Agoltsov V.A., Chernykh O.Yu., Semivolos A.M., Padilo L.P., Popova O.M. Species and serogroup variability of streptococci isolated from pigs in the Krasnodar Territory//Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman - 2023 - Volume 255 - No. 3 -pp.329-335
УДК 631.145:636.4(470):504.75
АНКЕТИРОВАНИЕ СВИНОВОДЧЕСКИХ ПРЕДПРИЯТИЙ ПО НЕГАТИВНОМУ ВОЗДЕЙСТВИЮ НА ОКРУЖАЮЩУЮ СРЕДУ
Третьякова О. Л., д.с.-х. наук, доцент, e-mail: tretiakova. olga2013 @yandex. ru Святогоров Н.А., к.с.-х.н, доцент
ФГБОУ ВО «Донской государственный аграрный университет »
