CC BY
34
13. Gunas I. Method of thermal burn trauma correction by means of cryoinfluence / I. Gunas, I. Dovgan, O. Masur // Verhandlungen der Anatomischen Gesellschaft. 92. In Olsztyn vom 24. Bis 27. Mai 1997: bipartitemeeting / zusammen mit der Polish Anatomical Society with the participation of the Association des Anatomistes. - 1997. - P. 105.
14. Lee M.O. Determination of the surface area of the white rat with its application to the expression of metabolic results / M.O. Lee // Am. J. Physiol. - 1989. - Vol. 24. - P. 1223.
15. Regas F.C. Elucidating the vascular response to burns with a new rat model / F.C. Regas, H.P. Ehrlich // J. Trauma. - 1992. -Vol. 32, № 5. - P. 557-563.
М1КРОМОРФОМЕТРИЧН1 ЗМ1НИ В СЕЛЕЗ1НЦ1 ЩУР1В У ПЕРШ1 7 Д1Б П1СЛЯ ОП1КУ ШК1РИ ТА ПРИ ВВЕДЕНН1 КОЛО1ДНИХ Г1ПЕРОСМОЛЯРНИХ РОЗЧИН1В Очеретна Н.П.
В робой, на лабораторних бших щурах-самцях масою 155-160 г вивчет стереометричт змши вщносного обему бшо! i червоно! пульпи селезшки при дп iнфузiйних препаратiв 0,9% розчину NaCl, лактопротеiну з сорб^олом та HAES-LX-5% через 1, 3 i 7 дiб без отку та пiсля опiкового пошкодження шюри II-III ступеню з площею ураження 21-23 % поверхнi тша. Встановлено вiдсутнiсть змiн даних стереометричних показниюв при введеннi тваринам без отку шюри протягом перших семи дiб даних розчинiв. При використант iнфузiйних коло!дних гiперосмо-лярних розчинiв лактопроте!ну з сорбiтолом та HAES-LX-5% починаючи з третьо! доби пiсля отку шюри спостертаеться виражена позитивна корекщя змiн вiдносного об'ему бшо! i червоно! пульпи селезiнки, порiвняно iз застосуванням 0,9 % розчину NaCl.
Ключовi слова: селезiнка, щури, стереометрiя, опiк шкiри, коло!дт гiперосмолярнi розчини.
Стаття надтшла 28.08.2015 р.
МИКРОМОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СЕЛЕЗЁНКЕ КРЫС В ПЕРВЫЕ 7 ДНЕЙ ПОСЛЕ ОЖОГА КОЖИ И ПРИ ВВЕДЕНИИ КОЛОИДНЫХ ГИПЕРОСМОЛЯРНЫХ РАСТВОРОВ Очеретная Н.П В работе, на лабораторных белых крысах-самцах массой 155-160 г изучены стереометрические изменения относительного объема белой и красной пульпы селезёнки при действии инфузионных препаратов 0,9% раствора NaCl, лактопротеина с сорбитолом и HAES-LX-5% через 1, 3 i 7 дней без ожога и после ожогового повреждения кожи II-III степени с площадью поражения 21-23 % поверхности тела. Установлено отсутствие изменений данных стереометрических показателей при введении животным без ожога кожи на протяжении первых семи дней данных растворов. При использовании инфузионных коллоидных гиперосмолярных растворов лактопротеина с сорбитолом и HAES-LX-5%, начиная с третьих суток после ожога кожи, наблюдается выраженная позитивная коррекция изменений относительного объёма белой и красной пульпы селезёнки, в сравнении с использованием 0,9 % раствора NaCl.
Ключевые слова: селезёнка, крысы, стереометрия, ожог кожи, коллоидные гиперосмолярные растворы.
Рецензент Гунас В.В.
УДК 577.17:591.436:599.323.4
1НСУЛ1НОПОД1БНИЙ ФАКТОР РОСТУ-1 У ПАТОГЕНЕЗ1 ХРОН1ЧНОГО АЛКОГОЛЬНОГО УШКОДЖЕННЯ ПЕЧ1НКИ ЩУР1В Р1ЗНИХ В1КОВИХ ГРУП
В останне десятирiччя, хротчт дифузт хвороби печтки через високий рiвень захворюваност та небезпечт для життя наслщки вщносяться до актуальних проблем сучасно! медицини. Актуальним питанням е дослщження молекулярних механiзмiв репаративно! регенерацп патологiчно змтено! печiнки та впливiв на данi процеси медикаментiв. Перспективним являеться вивчення рiвня iнсулiноподiбного фактора росту-1 (IGF-1) у щурiв рiзного вiку при хронiчному алкогольному ушкоджент печiнки та за умов фармакокорекцп кверцетином та L-аргiнiном L-глутаматом, а також дослiдження кореляцiйних взаемозв'язюв мiж IGF-1 та змiнами бiохiмiчних показникiв сироватки кровi. Доведено, що при хронiчному алкогольному ураженнi печтки вiдбуваеться зменшення концентрацп IGF-1 у тварин уах вiкових груп, яке корелюе iз бiохiмiчними маркерами синдромiв цитолiзу та холестазу. Встановлено, що за умов фармакокорекцп L-аргiнiном L-глутаматом достовiрно збiльшуеться рiвень IGF-1, при цьому наявт прямi достовiрнi кореляцшт зв'язки з показниками функцiонального стану печтки, що вказуе на вщновлення структури паренхiми печiнки та И функцюнального стану за рахунок активацп репаративно! регенерацi!. Одержанi данi свщчать, що гепатопротектор L-аргiнiн L-глутамат володiе бiльш позитивним впливом на процеси репаративно! регенерацп у порiвняннi iз кверцетином.
Ключовi слова: вiковi особливоси, хронiчне алкогольне ушкодження печiнки, iнсулiноподiбний фактор росту-1, бюх1]\нчт показники.
Робота е фрагментом НДР «Вiковi особливостi патогенезу гостроI i хротчног патологи внутрштх оргатв. Патогенетичш тдходи до лжування» (номер державноI реестраци 0111и008679).
В останш роки, алкогол1зм, в усьому свт 1, зокрема, в Укра!ш характеризуеться значним поширенням та омолодженням (високий темп росту шдл1тково! алкогол1зацн). Так, тенденщя до зменшення в1ку ос1б, яю вживають алкоголь, фемшзащя (все бшьша кшьюсть д1вчаток-шдл1тюв починае вживати алкогольш напо!) та потенцшно важю наслщки викликають значне занепокоення [18]. Експерти ВООЗ вважають ситуащю «небезпечною», якщо доза алкоголю на одну людину
перевищуе 8 л на piK. Однак, загальний показник вживання алкогольних напо!в у нашш кра!ш становить 12-15 л на одну особу [20]. Вщомо, що ризик розвитку хрошчно! алкогольно! патологи печшки пов'язаний з щоденною пороговою дозою для чоловiкiв: 30-40 г етанолу на добу, для жшок ця доза в 2-4 рази менша та становить 20 г [7]. Актуальшсть проблеми хрошчного алкогольного ушкодження печiнки (ХАУП) визначасться не тiльки пошиpенiстю, а й тяжюстю пеpебiгу, тpивалiстю i неpiдко важкими наслiдками iз розвитком фульмшантних форм хpонiчного гепатиту та цирозу печшки (ЦП) [6].
У результат токсично! ди етанолу у печшщ вiдбуваeться альтеpацiя та активуються послiдовнi pепаpативно-pегенеpатоpнi механiзми, як включають пpолiфеpацiю, дифеpенцiювання та мпращю клiтин, а також pестpуктуpизацiю строми i ангiогенез [2]. Регуляцiя цих механiзмiв здiйснюeться факторами, що продукуються як само! печiнкою, так i iншими тканинами [14]. Внаслiдок ушкодження гепатоципв активованi макрофаги продукують фактор некрозу пухлин-а (TNF-а) та штерлейкш-6, якi з одного боку, сприяють активаци перекисного окиснення лiпiдiв (ПОЛ) та утворенню у гепатоцитах токсичних сполук лiпопеpоксидацi!, а з шшого, стимулюють експpесiю велико! кiлькостi гешв негайно! та вiдстpочено! вiдповiдi, що запускають процеси регенераци [9]. Реплшаци ядерно! ДНК вiдбуваeться шд впливом цитокiнiв та ростових фактоpiв [2]. З накопиченням даних про патогенез ХАУП зростае кiлькiсть маpкеpiв, якi пояснюють формування та прогресування дано! патологи. Серед пептидних медiатоpiв основним пpофiбpогенним цитокiном е TGF-ß, який е добре вивченим [15] та IGF-1, який привернув нашу увагу. Соматомедин С володiе стимулюючою дiею на функцiональну i м^отичну дiяльнiсть клiтин, забезпечуе вiдновлення кл^инно! маси, внутpiшньо- i позаклiтинних структур, шдтримання видово! спецiалiзацi! тканин [11], тобто бере участь у фiзiологiчнiй регенераци тканин i оpганiв [3]. На кл^инному piвнi бiологiчна дiя IGF-1 проявляеться вираженим анаболiчним ефектом, ендокринною, автокринною i паракринною регулящею пpоцесiв росту, метаболiчних пpоцесiв, направлених на збiльшення iнтенсивностi пpоцесiв реплшаци та дифеpенцiювання клiтин [18]. Приблизно 75-85 % вщ загально! кшькост IGF-1 продукуеться клiтинами печiнки та виявляе потенцiюючий вплив на пpолiфеpацiю та дифеpенцiювання клiтин всiх тканин [3]. У сироватщ новонароджено! дитини piвень IGF-1 становить приблизно 30-50 % вщ piвня доросло! людини. У дитинсга piвень IGF-1 поступово збшьшуеться i у пубертатному пеpiодi досягае максимальних значень - у 2-3 рази вище piвня IGF-1 доросло! людини. У вщ 2030 pокiв вiдмiчають поступове зниження концентраци IGF-1. Таким чином, концентращя IGF-1 вiдобpажае функцiональний стан печшки.
Вщомо, що гепатоцити починають секретувати IGF-1 у ходi запально! реакци, який пpигнiчуе запальну вiдповiдь шляхом зменшення макрофагально! iнфiльтpацi! та piвня TNF-а, знижуе оксидативний стрес, а також шпбуе апоптоз паpенхiмальних клггин та ендотелiоцитiв, розглядаеться як маркер стеатозу та стеатогепатиту [3]. Збшьшення концентращ IGF-1 при токсичних ушкодженнях печiнки, який у пpоцесi фiбpогенезу синтезуеться клiтинами Купфера та зipчастими клiтинами 1то, вказуе на важливють цього фактора у патогенезi алкогольних ушкоджень печiнки та фоpмуваннi фiбpозу [19]. Тому актуальним залишаються питания про мехашзми регуляторних фактоpiв, що запускають процеси репаративно! регенераци шсля алкоголь-iндукованого ушкодження гепатоцитiв за умов ХАУП, координують дiяльнiсть клiтин протягом вiдновлювального процесу та завершують його.
Метою роботи було з'ясувати роль IGF-1 в патогенезi ХАУП, дослщити вiковi особливостi вмiсту сироваткового IGF-1, вивчити коpеляцiйнi взаемозв'язки мiж piвнем IGF-1 сироватки кpовi та показниками функцюнального стану печiнки у щуpiв-самок з ХАУП i на rai фармакокорекци кверцетином та L-аpгiнiном L-глутаматом.
Матерiал та методи дослiдження. Дослщження проводили на бiлих лабораторних щурах-самках зпдно з «Положеннями про використання тварин в бiомедичних дослщах», враховуючи вимоги Закону Укра!ни "Про захист тварин вщ жорстокого поводження" (ст. 230 вiд 2006 р.), вщповщно до положень "Свропейсько! конвенци про захист хребетних тварин, яю використовуються для експериментальних та шших наукових цiлей" (Страсбург, 1985), "Загальних етичних пpинципiв експеpиментiв на тваринах", схвалених Першим Нацiональним конгресом з бюетики (20.09.04 р., Ки!в, Укра!на). Щури знаходились в стандартних умовах вiваpiю ВНМУ iменi М.1. Пирогова з дотриманням загального pацiону при вшьному доступi до !ж1 та води. В експериментальному дослiдженi було використано 120 бших щуpiв-самок 3-х вшових груп. У 1 групу увiйшли статевонезpiлi щуpi-самки (вiк - 1,5 мю., початкова маса тша 55-75 г, n =
40), у 2 групу - молодi статевозрш (bîk - 6 мю., маса 180-200 г, n = 40) та у 3 групу - crapi тварини (bîk - 20 мю., маса 300-320 г, n = 40). Кожна вшова група була pозподiлена на чотири тдгрупи по 10 тварин у кожнiй: 1-ша пiдгpупа - iнтактнi щуpi (тварини щентичного вiку без алкоголiзацiï); 2-га пiдгpупа - тварини з хрошчним алкогольним ушкодженням печiнки (ХАУП); 3-тя пiдгpупа - щуpi з ХАУП, яким паралельно i3 етанолом вводили кверцетин i3 розрахунку 100 мг/кг; 4-та пiдгpупа - тварини з ХАУП, яким паралельно з етанолом вводили L-аргшш L-глутамат iз розрахунку 35 мг/кг.
Моделювання ХАУП було проведено за методикою розробленою Г.А. Ковальовим та А.Ю. Петренко (2004) [4]. Дана модель не суперечить принципам бюетики, так як виключае насильницьке введення алкоголю, яке супроводжуеться стресом. Експериментальне доcлiдження включало два етапи: перший етап - звикання тварин до алкоголю, тривалють якого складала два тижнi. Тварин розмщували в iндивiдуальних клiтках pозмipами 20x30x15 см, як були оcнащенi мipними поïлками. Для адаптацiï тварин до смаку та фаpмакологiчноï дiï етилового спирту концентращю розчину етанолу поступово збшьшували: на пpотязi першого тижня щурам у cкладi pацiону, як едине джерело рщини, без обмежень в корм^ замicть води в пошках давали 5 % розчин етанолу, на другий тиждень 5 % розчин етанолу замшювався 15 % розчином. Другий етап -штенсивна алкоголiзацiя, вiдповiдно до яко1' протягом 12 тижнiв тваринам щоденно, iнтpагаcтpально вводили 96 % розчин етанолу iз розрахунку дози алкоголю 14-18 г/кг маси тша на добу [4]. Протягом другого етапу алкогольно!' штоксикаци пiддоcлiдним тваринам з профшактично-лшувальною метою щоденно iнтpагаcтpально вводили гепатопротектори. Перерахунок cеpедньотеpапевтичноï лiкувальноï дози pекомендованоï для людини на 1 кг маси тша на масу щура проводився за константою бiологiчноï активност [8]. Пicля завершення теpмiну експерименту тварин в умовах евтанази пiд легким ефipним наркозом декаштували та проводили забip цiльноï кpовi. Кров у тварин брали вранщ пicля голодування (12 год). Спектр показниюв бiохiмiчного доcлiдження кpовi включав: загальний бiлок, альбумiни, загальний бiлipубiн (ЗБ), прямий бiлipубiн (ПБ) та непрямий бiлipубiн (НБ), Р-лшопротеши та активноcтi ензимiв кpовi: аланшамшотрансферази (АлАТ), аcпаpтатамiнотpанcфеpази (АсАТ), y-глутамiлтpанcпептидази (ГГТП), лужноï фосфатази (ЛФ), тимоловоï проби (ТП) за загальноприйнятими методиками [5]. Комплекс бiохiмiчних доcлiджень проводили для вивчення функцiонального стану печiнки при ХАУП, наявшсть основних cиндpомiв цитолiзу, холестазу, мезенхiмального запалення. Бiохiмiчнi дослщження проводили на напiвавтоматичному бiохiмiчному аналiзатоpi Vital Microlab-300 (США) та бiохiмiчному автоматичному аналiзатоpi Beckman Coulter AU-480 (США) з використанням pеактивiв фipми "Pointe Scientific Inc" (США), вщповщно до iнcтpукцiй до пpиладiв та pеактивiв.
Рiвень сироваткового IGF-1 визначали iмунофеpментним методом за допомогою набору pеактивiв "DRG" (Нiмеччина). Доcлiдження проводили на iнуфеpментному аналiзатоpi Hymareader 2106 (США). Статистичну обробку отриманих результат доcлiдження здiйcнювали за комп'ютерною програмою STATISTICA 6.0 iз використанням непараметричних методiв оцiнки за допомогою U-кpитеpiя Мана-Уiтнi. При цьому для показника визначали вибipкове середне значення та стандартну похибку середнього (M± m). Дослщжуваш cпiввiдношення та pозбiжноcтi вважали вipогiдними при р < 0,05. Взаемозв'язок ознак визначали за допомогою обчислення коефщента коpеляцiï Спipмена. 1нтерпритащя коефiцiента коpеляцiï проводилися виходячи з piBM сили зв'язку: r > 0,01 < 0,29 - слабкий позитивний зв'язок, r > 0,30 < 0,69 - помipний позитивний зв'язок, r > 0,70 < 1,00 - сильний позитивний зв'язок, r > -0,01 < -0,29 - слабкий негативний зв'язок, r > -0,30 < -0,69 - помipний негативний зв'язок, r > -0,70 < -1,00 - сильний негативний зв'язок [10].
Результати дослщження та ïx обговорення. Аналiзуючи отримаш штактш значення IGF-1 у щуpiв piзних вiкових груп, слщ вiдмiтити, що його концентpацiя у сироватщ кpовi збiльшувалаcь з вшом: найнижчий piвень IGF-1 cпоcтеpiгавcя у статевонезрших щуpiв, у cтатевозpiлих бшьший на 62,3 % за показник попеpедньоï групи та найвищий у старих щуpiв, що на 70,7 % перевищуе значення cтатевонезpiлих щуpiв. При моделюваннi ХАУП у щуpiв-cамок piзного вiку, доведено зменшення концентраци IGF-1 у вciх доcлiджуваних групах у поpiвняннi з iнтактними значеннями iдентичних за вiком тварин (рис. 1). Встановлено, що у статевонезрших щуpiв 1-ï групи з ХАУП piвень IGF-1 зменшився майже на 17,5 % (р > 0,05), у статевозрших щуpiв 2-ï групи - на 54,8 % (р < 0,05) та у старих щуpiв 3-ï групи - на 16,3 % (р < 0,05) (див. рис. 1), у поpiвняннi з штактними значеннями тварин вiдповiдноï вiковоï категорп. Отpиманi данi вказують на токсичну дiю етанолу, ураження паpенхiми печiнки та зниження бiлокcинтетичноï
функцн, в тому числ1 з1 зменшенням синтезу IGF-1. Оскшьки 90 % циркулюючого IGF-1 синтезуеться печшкою, , то зменшення даного показника вказуе на зниження репаративно!' функцн печшки та прогресування ХАУП. За даними Со1ак У. е1 а1. (2012 р.), зниження концентрацн IGF-1 у сироватщ кров1 асощюеться 1з гютолопчними змшами пареными печшки [13]. Встановлено, що найвищий р1вень IGF-1 на тл1 ХАУП спостер1гався у старих тварин (див. рис. 1), що за даними 8аПе Б. е1 а1. (2004 р.) може бути пояснено активащею з1рчастих клггин та клггин Купфера у вщповщь на пошкоджуючий фактор, тобто токсичну дто етанолу та виступае
Кр1м вище сказаного, у тварин ус1х вжових груп з ХАУП спостер1гали наступш синдроми: цитату, який характеризуеться статистично
значущим наростанням
гшерферментемп з р1зким збшьшенням активност АлАТ, АсАТ, ГГТП та збшьшенням вмюту ПБ, внаслщок пошкодження гепатоцилв етанолом та ацетальдепдом; холестазу - з тдвищенням р1вня ЗБ та його фракцш, жовчних кислот, холестерину, Р-лшопроте!дов, збшьшенням активност екскреторних ензим1в (ЛФ та ГГТП), мезенх1мального запалення - з1 зменшенням загального бшка та альбумшово!' фракцп, альбумш-глобулшового шдекса, збшьшенням тимолово!' проби та р1вня глобул1н1в у сироватц1 кров1, що вказуе на розвиток печшково-клггинно!' недостатност1 (деструкц1ю гепатоцит1в) з1 зниженням бшок-синтетично!' та метабол1чно!' функц1й печшки.
Активн1сть цитозольних ензим1в (АлАТ) тдвищуеться при пом1рно вираженому процес1, збшьшення активност1 м1тохондр1альних ензим1в (АсАТ, ГГТП) свщчить про б1льш виразн1 дистрофго та некроз печ1нкових кл1тин. Ведомо, з л1тературних даних, що при гострому в1русному гепатит1 АлАТ перевищуе АсАТ, а при ЦП, хрошчному гепатит1, токсичних ураженнях печ1нки АсАТ перевищуе АлАТ, що спостер1гаеться 1 в наших отриманих результатах. За даними Бабака О.Я. (2009 р.) р1вень АсАТ мае бшьш сильну кореляцшну залежн1сть з ф1брозом печшки шж АлАТ [1]. Д1агностичне значення також мае стввщношення АсАТ/АлАТ (коефщ1ента де Р1т1са), яке < 1 при запальному тит цитол1зу та > 1 - при некротичному тит, та довели, що при ХАУП даний показник > 2, що вщображае катабол1чний тип метабол1зму. Стввщношення АсАТ/АлАТ е достов1рним показником вираженост1 ступеня ф1брозу та ЦП, а перевищення даного стввщношення бшьше 1,16 рази з чутлив1стю 81,3 % та специф1чнютю 55,3 % прогнозуе наявнють ЦП, який протягом одного року може призвести до летального наслщку [1]. У роботах Р. Ргаёа1;, Т. Роуиагё показано, що тдвищення р1вня АлАТ > 2,25К у 28 % випадюв супроводжувалось г1столог1чними зм1нами з розвитком ф1брозу печ1нки, однак при нормальному р1вш АлАТ у 26 % також спостер1гались г1столог1чн1 ознаки ф1брозу.
Для досл1дження л1п1дного стану дослщжували зм1ни концентрацГ! Р-л1попроте!'н1в, представник1в лшопроте!д1в низько!' щ1льност1. Доведено, що за умов ХАУП вщбуваеться зб1льшення Р-лшопроте!шв, що вказуе на порушення лтдного обм1ну. Пперл1п1дем1я супроводжуеться зниженням швидкост1 Р-окислення жирних кислот та веде до жирово!' дистрофГ! печ1нки. З лггератури в1домо, що регулярний прийом алкоголю веде до розвитку гшерлшопротешемп з тдвищенням р1вня в1льних жирних кислт та тригл1церид1в, вм1сту загального холестерину, лшопроте!д1в високо!' щ1льност1 (яю мають антиатерогенну д1ю), фосфол1п1д1в 1 неетерифжованих жирних кислот, що призводить до ацидозу. В дослщженш
компенсаторним мехашзмом.
1 група 2 група 3 група
Рис. 1. В1ков1 особливост! зм1ни концентрацИ плазменного IGF-1 (%) у щур1в-самок на тш ХАУП та за умов патогенетично! корекцИ кверцетином та L-аргiнiном L-глутаматом. Прим1тка: ХАУП - хрон1чне алкогольне ушкодження печiнки; 1 група - статевонезрш тварини; 2 група - молодi статевозрiлi тварини; 3 група - старi тварини; * - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,05) у порiвняннi з контрольною групою; ** - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,01) у порiвняннi з контрольною групою; # -достовiрнiсть вщмшностей (р < 0,05) у порiвняннi з показниками щурiв з ХАУП; # - достовiрнiсть вщмшностей (р < 0,01) у порiвняннi з показниками щурiв з ХАУП; х - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,05) у порiвняннi з корекщею кверцетином; хх - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,01) у порiвняннi з корекцiею кверцетином; ° - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,05) у порiвняннi з корекщею L-аргiнiном L-глутаматом; °° - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,01) у порiвняннi з корекцiею L-аргiнiном L-глутаматом; р - достовiрнiсть вiдмiнностей (р < 0,05) у порiвняннi мiж корекцiею кверцетином та L-аргiнiном L-глутаматом.
Garcia-Galiano D. et al. (2007 р.) довели незалежну прогностичну роль зниження IGF-1 в розвитку стеaтозy i стеатогепатиту у xвориx з ожирiнням та порушенням лiпiдного обмiнy [1б].
Доведено, що у стaтевонезрiлиx щyрiв та стар^ щyрiв ХAУП супроводжуеться бшьш вираженими розладами пiгментного, ферментного та бшкового обмiнy, якi вiдобрaжaють важю змiни фyнкцiонaльного стану печiнки, у порiвняннi з молодими стaтевозрiлими щурами. Найвищий рiвень IGF-1 у щyрiв з ХAУП спостерiгaвся у стaриx тварин, стyпiнь етанол-iндyковaного ушкодження гепaтоцитiв в дaнiй грyпi був найвищим та призвiв до активаци компенсaторно-зaxисниx меxaнiзмiв з пiдвищениям ростового цитоюну IGF-1 (див. рис. 1). Отримаш дaнi пiдтверджyються нaявнiстю достовiрниx сильниx кореляцiйниx зв'язкiв: у щyрiв 1 групи рiвень IGF-1 достовiрним сильним зворотнiм зв'язком корелюе iз загальним бiлiрyбiном (r=-0,70, р < 0,05) та непрямим бшрубшом (г=-0,76, р < 0,05), помiрний прямий зв'язок встановлено iз ЛФ (r=0,56, р > 0,05) та ГГТП (r=0,40, р > 0,05), помiрний обернений кореляцiйний зв'язок iз загальним бшком, aльбyмiнaми (r=-0,44, r=-0,56, р > 0,05) та ß-лшопротешами (r=-0,31, р > 0,05). У 2 груш тварин за умов ХAУП концентращя IGF-1 сироватки кровi помiрно корелюе iз загальним бiлiрyбiном та його фракщями (r=0,60, r=0,47, r=0,5S, р > 0,05), виявлено обернет помiрнi кореляцiйнi зв'язки з загальним бшком (r=-0,61, р > 0,05), альбумшами (r=-0,44, р > 0,05) та глобулшами (r=-0,65, р < 0,05), з AлAТ (r=-0,33, р > 0,05), ЛФ (r=-0,34, р > 0,05) та ТП (r=-0,39, р > 0,05), проте зв'язки не досягали статистично достовiрниx меж. У 3 груш - виявлено сильну пряму корелящю мiж рiвнем IGF-1 та aктивнiстю AлAТ (r=0,93, р < 0,05), ТП (r=0,75, р < 0,05), помiрний обернений кореляцшний зв'язок встановлено iз ЛФ (r=-0,69, р > 0,05), також можна вщмггити помiрнy пряму корелящю з альбумшами (r=0,62, р > 0,05), ЗБ, ПБ, НБ (r=-0,54, р > 0,05) та ГГТП (r=0,37, р > 0,05). Проведений кореляцшний aнaлiз шдтвердив нaявнiсть кореляцшнж зв'язкiв мiж показниками фyнкцiонaльного стану печшки та рiвнем IGF-1 сироватки кровi у тварин рiзного вшу з ХAУП: у 1 та 3 групи тварин кшьюсть достовiрниx зв'язкiв е меншою нiж у 2 групи. Даш взаемозв'язки шдтверджуються даними отриманими Colak Y. et al. (2012 р.), як встановили залежшсть мiж рiвнем IGF-1 та ступенем некротично-дистрофiчниx змiн в тканиш печiнки при гiстологiчномy дослiдженнi [13]. Крiм того, достовiрнi кореляцiйнi зв'язки, як спостерiгaлись у щyрiв ytix груп, дають можливiсть припустити, що у тварин активуються та посилюються меxaнiзми впливу рiвня IGF-1 на функцюнальний стан печiнки та корелюють iз прогресуванням ХAУП.
Лiкyвaльно-профiлaктичне введення кверцетину та L-аргшшу L-глутамату шддослщним тваринам з ХAУП супроводжуеться нормaлiзaцieю бiоxiмiчниx покaзникiв плазми кровi з наростанням концентраци загального бiлкa i альбумшв, зниженням концентрaцiï загального бшруб^ та його фрaкцiй, нормaлiзaцieю активност трaнсaмiнaз (AсAT, AлAТ, ЛФ та ГГТП), зниженням ТП та коефщента де Ртса, що вказуе на зниження рiвня етaнол-iндyковaного ушкодження гепатоципв та вiдновления фyнкцiонaльного стану печшки.
Слщ зазначити, що при введенш кверцетину у тварин 1 та 3 груп рiвень сироваткового IGF-1 збшьшуеться у порiвияннi iз показниками ХAУП: на 16,5 % (p>0,05) у щyрiв 1 групи та на 50,2 % (p<0,05) у щyрiв 3 групи, однак, у тварин 2 групи рiвень IGF-1 зменшуеться на 24,2 % (p<0,05), що на 65,S % (p<0,01) менше iнтaктниx значень тварин вщповщного вiкy (рис. 1). За даними О.Я. Бабака (2009 р.), кверцетин проявляе aнтипролiферaтивнi влaстивостi та здатний шпбувати IGF-1 [1].
При застосуванш L-aргiнiнy L-глутамату для корекцiï ХAУП встановлено збiльшения концентрaцiï IGF-1 у тварин всix вiковиx груп: у 1 груш на 37,4 % (p<0,01), у 2 груш - на 13,S % (p>0,05), у 3 груш - на S5,2 % (p<0,01) (див. рис. 1). Слщ зазначити, що рiвень IGF-1 у щyрiв 1 групи при фармакокорекци L-aргiнiном L-глутаматом, нaвiть, перевищуе показники iнтaктниx щyрiв на 13,4 % (р > 0,05), та на 17,9 % (р < 0,05) показники iдентичниx за вшом щyрiв з корекщею кверцетином (рис. 1). У стaтевозрiлиx тварин рiвень IGF-1 також достовiрно рiзниться з показниками при корекци кверцетином на 50 % (р < 0,05) xоч i не досягае штагст^ значень вщповщного вiкy тварин (рис. 1). У щyрiв 3 групи рiвень IGF-1 бшьший за iнтaктнi значення на 55,0 % (р > 0,05) та на 23,3 % (р < 0,05) рiзниться зi значеннями на rai корекци кверцетином (рис. 1), що вказуе на гепатопротекторш та aнтифiбротичнi властивост L-арпшну L-глутамату при ХAУП, оскiльки збiльшения рiвня IGF-1, на нашу думку, може свщчити про aктивaцiю репаративно1' регенераци тканини печiнки. Таким чином, ми можемо вщзначити бiльш позитивний вплив L-арпшну L-глутамату на репaрaтивнi процеси в печiнцi за умов експериментального ХAУП у стaтевонезрiлиx та ^^^возр^ж тварин.
У результат проведеного анатзу взаемодiй отриманих даних основних бiохiмiчних показникiв у трьох вiкових групах щурiв iз ХАУП та за умов патогенетично! корекцй кверцетином та L-аргiнiном Ь-глутаматом виявлено велику кiлькiсть прямих сильних та помiрно! сили кореляцiйних зв'язкiв мiж бiохiмiчними показниками, якi характеризують функцюнальний стан печiнки щурiв рiзного вшу. При патогенетичнш корекцi! кверцетином, в щурiв 1 групи встановленi достовiрнi кореляцiйнi вiдношення мiж IGF-1 та ГГТП (г=-0,76, р < 0,05), Р-лiпопроте!нами (г=-0,62, р > 0,05), у 2 груш: IGF-1 прямими сильними зв'язками корелюе iз ЗБ та НБ (г=0,74, г=0,75, р < 0,05), ЛФ (г=0,54, р > 0,05) та у 3 груш: IGF-1 достовiрно обернено корелюе iз активнiстю АлАТ (г=-0,76, р < 0,05) та рiвнем Р-лшопроте!шв (г=-0,62, р > 0,05). За умов застосування L-аргiнiну L-глутамату, у 1 групi встановлено обернет кореляцшш зв'язки iз НБ (г=-0,66, р < 0,05), ЗБ (г=-0,60, р > 0,05) та фракщею альбумiнiв (г=-0,61, р > 0,05), у 2 груш встановлено достовiрний прямий сильний кореляцшний зв'язок iз активнiстю АсАТ (г=0,75, р < 0,05), також iз ГГТП (г=0,55, р > 0,05) та обернений помiрний зв'язок iз ЛФ (г=-0,44, р > 0,05). У щурiв 3 групи IGF-1 корелюе сильним прямим зв'язком iз ГГТП (г=0,80, р < 0,05), середньо! сили кореляцшними зв'язками iз альбумiнами (г=0,57, р > 0,05), ТП (г=-0,65, р > 0,05), АлАТ (г=-0,55, р > 0,05) та АсАТ (г=-0,47, р > 0,05).
Пюля проведеного кореляцiйного аналiзу по Сшрмену, слiд вiдзначити важливiсть ростового цитокшу IGF-1 у патогенезi ХАУП, оскшьки встановленi достовiрнi кореляцiйнi зв'язки мiж показниками функцiонального стану печiнки та рiвнем IGF-1. Таким чином, функцюнальш порушення печiнки та вмiст IGF-1 вiдiграють важливу роль у формуванш та патогенезi алкогольно! патологi! печшки у щурiв при експериментальному ХАУП. Проведений кореляцшний анатз довiв, що зниження концентрацй плазменного IGF-1 при ХАУП корелюе iз синдромами цитолiзу, холестазу та дисфункцiею печiнки та може призвести до прогресування ХАУП, оскшьки знижуються процеси пролiферацi! гепатоцилв.
Отже, дослiдивши кореляцiйнi зв'язки мiж концентрацiею IGF-1 та бiохiмiчними показниками у щурiв з ХАУП залежно вщ вiку, провiвши патогенетичний аналiз вмiсту бiохiмiчних та iмуноферментних маркерiв у сироватцi кровi, нами було встановлено, що IGF-1 е непрямим показником функцюнального стану печiнки та володiе високою чутливiстю до надмiрних доз алкоголю, може виступати специфiчним маркером ступеня ушкодження паренхiми печшки при ХАУП. Доведено, що на тт застосування кверцетину та L-аргiнiну L-глутамату вiдбуваеться нормалiзацiя концентрацi! IGF-1 та бiохiмiчних показникiв, що вказуе на активащю репаративно! регенерацi! тканини печшки та вщновлення !! функщонування. При корекцi! кверцетином встановлено, що рiвень IGF-1 достовiрно корелюе оберненими зв'язками iз активнiстю ферментiв та прямими кореляцшними зв'язками iз ЗБ та його фракщями, а при застосуванш L-аргiнiну L-глутамату, рiвень IGF-1 мае пряму кореляцiйну залежнiсть iз активнiстю трансамiназ. Одержанi данi свщчать, що гепатопротектор L-аргiнiн L-глутамат володiе бiльш позитивним впливом на процеси репаративно! регенерацй печiнки у порiвняннi iз кверцетином.
1. Доведено, що при моделюванш ХАУП у всiх вшових групах тварин вiдбуваеться достовiрне зменшення рiвня плазменного IGF-1 та порушення основних бiохiмiчних показникiв з дисфункщею печiнки.
2. Проведений кореляцiйний аналiз показав, що при дi! кверцетину та L-аргiнiну L-глутамату вiдбуваеться нормалiзацi! бiохiмiчних показникiв та збiльшення концентрацй IGF-1, що вказуе на активащю процешв репаративно! регенерацi! тканини печшки.
3. Введення гепатопротектора L-аргiнiна L-глутамату, незалежно вiд вiку тварин проявляе бiльш позитивний ефект на процеси репаративно! регенерацй печшки у порiвняннi iз кверцетином.
Перспективи подальших дослгджень. Вивчення л^вального впливу та ефективностi геnатоnротекторiв -кверцетину та Ь-аргшшу Ь-глутамату дозволить розробити ефективж програми диференцшованого л^вання патологш печшки викликаноI хрошчним вживанням алкоголю.
1. Бабак О. Я. Фиброз печени: современные представления о механизмах, способах диагностики и лечения / О. Я. Бабак, Е. В. Колесникова, Н. А. Кравченко // Сучасна гастроентерол. - № 2 (46). - 2009. - С. 5-17.
2. Гарбузенко Д. В. Механизмы регуляции регенерации печени: обзор литературы / Д. В. Гарбузенко, Г. К. Попов // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2001. - № 1. - С. 21-25.
3. Журавльова Л. В. Зв'язок метаболiчних показниюв з piBHeM iнсулiноподiбного фактору росту -1 у хворих на неалкогольну жирову хворобу печшки та цукровий дiабeт 2-го типу / Л. В. Журавльова, О. В. Огнева // Буковинський медичний вюник. - Том 16, № 4 (64). - 2012. - С. 68-70.
4. Ковалёв Г. А. Экспериментальная модель алкогольного поражения печени у самок крыс / Г. А. Ковалёв, А. Ю. Петренко // Вюн. Харк. нац. ушв. - 2004. - № 617. - C. 15 -18.
5. Меньшиков А.В. Биохимические иследования в биохимии / А. В. Меньшиков // - М., - 2001. - 480 с.
6. Охотшкова О.М. Хрошчш гепатити в практищ пeдiатpа (частина 1) / О.М. Охотшкова // Мистецтво лжування. - 2010. - № 2 (68). - С. 5-39.
7. Полунина Т. Е. Алкогольная болезнь печени / Т. Е. Полунина, И. В. Маев // - Сош. Med. Гастроентерология - 2008. -№ 1. - С. 38-42.
8. Риболовлев Ю. Р. Дозирование веществ для млекопетающих по константам биологической активности / Ю. Р. Риболовлев, Р. С. Риболовлев // Доклады Академии Наук СССР. - 1979. - Т. 247, № 6. - С. 1513-1516.
9. Сервецький К. Л. Змши показниюв перекисного окиснення лшщв при токсичному гепатит! в щуpiв / К. Л. Сервецький, Т. В. Чабан, С. М. Солтик // Клшчната експериментальна патолопя. - 2011. - Т. X, № 2 (36), Ч. 2.- С. 110-112.
10. Слепко Ю. Н. Ледовская Т. В. Обработка и интерпретация результатов психологического исследования: учебное пособие / Ю.Н. Слепко, Т.В. Ледовская. - Ярославль: ЯГПУ. - 2013. - 136 с.
11. Bonefeld К. Insulin-like growth factor-i and the liver / K. Bonefeld, S. Moller / К. Bonefeld // Liver International ISSN. -2010. - Vol. 5. - P. 911-919.
12. Choi J. E. Insulin-like Growth Factor-I receptor blockade improves outcome in mouse model of lung injury / J. E. Choi, S. Lee, D. A. Sunde [et al.] // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2009. - Vol. 179. - P. 212-219.
13. Colac Y. Serum concentrations of huvan insulin-like growth factor-1 and levels of insulin-like growth factor-binding protein-5 in patients with nonalcoholic fatty liver disease: association with liver histology / Y. Colac, E. Senates, O. Ozturk [et al.] / Eur J. Gastroenterol Hepatol. - 2012. - N 24 (3). - P. 255-261.
14. Furnus C. C. ^гошЛю^у of the proliferative events related to angiogenesis in mice liver regeneration after partial hepatectomy / C. C. Furnus, A. M. Inda, L. B. Andrini [et al.] // Cell Biol. Int. - 2003. - Vol. 27, N 4. - P. 383-386.
15. Gressner O. Differential effects of TGF-beta on connective tissue growth factor (CTGF/CCN2) expression in hepatic stellate cells and hepatocytes / O. Gressner, E. Yagmur, B. Lahme [et al.] // J. Hepatol. - 2007. - Vol. 47. - P. 699-710.
16. Garcia-Galiano D. IL-6 and IGF-1 are independent prognostic factors of liver steatosis and non-alcoholic steatohepatitis in morbidly obese patients / D. Garcia-Galiano, M.A. Sanchez-Carrido, I. Espejo [et al.] // Obes Surg. - 2007. - N 17 (4). - P. 493-503.
17. Ohlsson C. The Role of Liver-Derived Insulin-Like Growth Factor-I / C. Ohlsson, S. Mohan, K. Sjo [et al.] // Endocrine Reviews. - 2009. - Vol. 30. - P. 494-535.
18. Paquot N. Alcoholism, an addiction leading to multiple somatic complications / N. Paquot, J. De Flines, A. Scheen // Revue Medicale de Liege. - 2013. - Vol. 68, № 5-6. - P. 272-280.
19. Saile B. IGF-I induces DNA synthesis and apoptosis in rat liver hepatic stellate cells (HSC) but DNA synthesis and proliferation in rat liver myofibroblasts (rMF) / B. Saile, P. Di Rocco, J. Dudas [et al.] // Laboratory Investigation. - 2004. - Vol. 1. - P. 2-13.
20. WHO Global Status Report on Alcohol and Health, - 2011.
РОЛЬ ИНСУЛИНОПОДОБНОГО ФАКТОРА РОСТА-1 В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО АЛКОГОЛЬНОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПЕЧЕНИ КРЫС РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ
ГРУПП Рыкало Н. А., Яровенко Л. А.
В последнее десятилетие, хронические диффузные болезни печени за высокого уровня заболеваемости и опасные для жизни последствия относятся к актуальным проблемам современной медицины. Актуальным вопросом является исследование молекулярных механизмов репаративной регенерации патологически измененной печени и воздействий на эти процессы медикаментов. Перспективным является изучение уровня инсулиноподобного фактора роста-1 (ЮБ-1) у крыс разного возраста при хроническом алкогольном повреждении печени и в условиях фармакокорекции кверцетином и Ь-аргинином Ь-глутаматом, а также исследования корреляционных взаимосвязей между ЮБ-1 и изменениями биохимических показателей сыворотки крови. Доказано, что при хроническом алкогольном поражении печени происходит уменьшение концентрации ЮБ-1 у животных всех возрастов, которое коррелирует с биохимическими маркерами синдромов цитолиза и холестаза. Установлено, что в условиях фармакокорекции Ь-аргинином увеличивается уровень ЮБ-1, достоверные корреляционные функционального состояния печени, что указывает на восстановление структуры паренхимы печени и ее функционального состояния за счет активации репаративной регенерации. Полученные данные свидетельствуют, что гепатопротектор Ь-аргинин Ь-глутамат обладает более положительным влиянием на процессы репаративной регенерации по сравнению с кверцетином.
L-глутаматом достоверно при этом имеются прямые связи с показателями
ROLE OF INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR-1 IN PATHOGENESIS OF CHRONIC ALCOHOLIC LIVER DISEASE IN RATS OF DIFFERENT AGE GROUPS Rikalo N. A., Yarovenko L. А.
During last ten years, chronic diffuse liver disease due to high morbidity and life-threatening consequences related to the actual problems of modern medicine. The actual topic is to study molecular mechanisms of reparative regeneration of pathological-altered liver and drugs influence on this process. The perspective is the studying of insulin-growth factor-1 (IGF-1) in rats of different age groups with chronic alcohol liver disease and under condition of pharmacocorrection using L-arginine-L-glutamate and quercetin, and study the correlation between IGF-1 and changes of biochemical markers of blood serum. Has been proved that chronic alcohol liver disease decreases the concentration of IGF-1 in the animals of all age groups, which correlates with biochemical markers of cytolysis and cholestasis syndromes. Established that under condition of pharmacocorrection using L-arginine-L-glutamate significantly increases the level of IGF-1, and available direct significant correlation with parameters of functional liver state, indicating restoration of liver parenchyma and its functional state by activation of reparative regeneration. Gained data shows that hepatoprotector L-arginine-L-glutamate has a potitive influence on the regenerative reparation process compared with quercetin.
Ключевые слова: возрастные особенности, хроническое алкогольное повреждение печени, инсулиноподобный фактор роста-1, биохимические показатели.
Стаття надшшла 1.09.2015 р
Key words: age features, chronic alcohol liver disease, insulin-like growth factor-1, biochemical parameters.
Рецензент Старченко I.I.
УДК 611.36+591.436
Ж
МОРФОЛОГ1ЧН1 ОСОБЛИВОСТ1 БУДОВИ СТ1НКИ ЖОВЧНОГО М1ХУРА ТВАРИН З1
СМ1ШАНИМ ТИПОМ ХАРЧУВАННЯ
В po6oTÍ вивчалися особливостi будови стшки жовчного Mixypa свинi у порiвняльно-анатомiчному acneKTi, що зможе допомогти у виршент проблеми профiлaктики виникнення жовчнокам'яно! хвороби та ефективного лжування запальних процесiв в органах гепатобшарно! системи.
Таким чином, структурне рiзномaнiття будови стiнки жовчного мiхурa, без сумнiвiв, можна пояснити змiною функцюнальних проявiв елементiв стiнки жовчного мiхурa.
Kjiiohobí слова: жовчний Mixyp, MixypoBa протока, холецистит, жовчно-кам'яна хвороба.
Робота е фрагментом НДР «Структурна та mpueuMipHa оргатзащя екзогенних залоз i оргатв травного тракту людини в нормi та патологи», № держреестрацн 0111U 004878.
Р!зномаштш патолопчш процеси у жовчному м1хур1 займають у клшщ одне з чшьних мюць. При цьому постшно збшьшуеться кшьюсть хворих на дану патолопю серед населення р1зних вшових груп, особливо працездатного населення [1, 10, 12, 17].
Методи консервативного лшування холециститу та його ускладнень, досить висою показники летальност при х1рург1чному та консервативному лшуванш, значний вщсоток незадовшьних наслщюв лшування вимагають розробки бшьш ефективних метод1в профшактики та попередження виникнення дано! групи захворювань. Профшактика захворювань шлунково-кишкового тракту обов'язково мютить вивчення особливостей харчування хворих [4, 11, 15, 16].
В доступнш л1тератур1 мало вивченим е вплив особливостей харчування на розвиток запальних процешв у жовчному м1хур1 та мапстральних жовчовивщних протоках, а оскшьки при гострому холецистит! запальний процес, найчастше поширюеться, також на органи анатом1чно i функцюнально тiсно пов'язaнi з жовчним мiхуром, то стае зрозумiлим необхiднiсть бшьш детального вивчення даного питання. Хворий у кшшщ не може бути об'ектом експериментальних дослiджень, тому виникае необхщшсть вивчити вплив рiзних титв харчування на представниках рiзних клaсiв тварин [2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 13, 14].
Метою роботи було дослщити морфолопчш особливосп стiнки жовчного мiхурa тварин зi змiшaним типом харчування у порiвняльно-aнaтомiчному aспектi, що зможе допомогти у виршенш проблеми профiлaктики виникнення жовчнокам'яно! хвороби та ефективного лшування запальних процешв в органах гепатобшарно! системи.
Матерiал та методи дослщження. Дослiдження проведенi на видалених у свиней жовчних мiхурaх з мiхуровими протоками. Свинi вiдбирaлися однiе!' породи та приблизно однакового розмiру.
В робот використовувалися нaступнi методи дослщження: 1. Метод aнaтомiчного препарування.2. Морфометричний метод.3. Зaгaльно-гiстологiчнi методи дослiдження (гематоксилш-еозин та iншi).4. Метод корозiйного виготовлення препaрaтiв.
Статистичну обробку даних проводили з використанням програми «STATISTICA FOR WINDOWS 7.0» (StatSoft Inc., США). Розраховували середне (М), похибку середнього (m), достовiрними результати вважалися при p<0,05.
Результати дослiдження та Тх обговорення. Для слизово! оболонки стшки дна жовчного мiхурa свинi (Sus domestica) характерш деякi особливостi !! рельефу. В центрaльнiй чaстинi спостерпаються випинання, рiзномaнiтно! ширини i висоти. Серед них зустрiчaються вузькi i вщносно високi випинання, але основну масу складають широю i низью, якi на зрiзaх нагадують дзвш, основа якого звернена до власно! пластинки слизово! оболонки. Слiд звернути увагу на верхiвки цих дзвоноподiбних випинань. У бiльшостi низьких випинань вона заокруглена, a i збшьшенням висоти випинань верхiвкa поступово подовжуеться i формуе заокруглений вузький тк.
