CC BY
74
Химия растительного сырья. 2014. №3. С. 159-166. DOI: 10.14258/jcprm.1403159
УДК 615.322:547
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСТРАКТА STELLARIA MEDIA (CARYOPHYLLACEAE)
© A.C. Сухих"1, П.В. Кузнецов1, Л.С. Теслов2
1 Кемеровская государственная медицинская академия Минздрава России, ул. Ворошилова, 22а, Кемерово, 650029 (Россия), e-mail: [email protected] 2Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия Минздрава России, ул. проф. Попова, 14, Санкт-Петербург, 197022 (Россия)
С использованием сефадекса LH-20 и его модифицированного аналога в режиме неклассической аффинной хроматографии проведено разделение на хроматографические фракции, извлечения травы Звездчатки средней. Компонентный состав выделенных фракций проанализирован с использованием ГЖХ-МС и ВЭЖХ. Определены микрокомпоненты, среди которых обнаружено наличие стероидов и некоторых типов алкалоидов производных ¿ß-карболина. Показана возможность применения модифицированного сефадекса LH-20 для препаративного выделения флавоноидов. Впервые установлено наличие в экстракте растения некоторых типов серусодержащих фенил-пропаноидов, идентифицирован кемпферол.
Ключевые слова: Звездчатка средняя, азоадсорбенты аффинного типа, сефадекс LH-20, кемпферол, алкалоиды, производные ^-карболина.
Введение
Представитель рода Stellaria Звездчатка средняя (Stellaria media (L.) Vill.) распространена повсеместно и рассматривается как сорное растение. В последнее время растения рода Stellaria семейства гвоздичных (Caryophyllaceae) привлекают внимание исследователей своими биологическими и фармакологическими свойствами [1-4]. По данным литературы, в состав растения входят: флавоноиды, тритерпеновые сапонины, дубильные вещества, аскорбиновая кислота [5, 6]. В недавнем исследовании [1] определено, что растения рода Звездчатка, произрастающие в Западносибирском регионе, содержат полисахариды, тритерпеновые гликозиды олеаноловой кислоты, кумарины, дубильные вещества, каротиноиды, аскорбиновую кислоту. В отличие от произрастающих в европейской части России образцы, собранные на территории Томской области, Красноярском крае, содержат флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты лишь в следовых количествах [1]. В работе [7] приведены данные о содержании в S. media: синаповой кислоты, витаминов С иЕ. В то же время в химии природных веществ известно, что использование различных хроматографиче-ских сорбентов для выделения основных компонентов из одного и того же природного объекта приводит к отличительным физико-химическим характеристикам конечного целевого продукта [8]. Цель работы -сравнительное определение состава хроматографических фракций экстракта Stellaria media полученных с использованием сефадекса LH-20 и его азо -аналога.
Сухих Андрей Сергеевич - старший научный сотрудник Экспериментальная часть центральной научно-исследовательской лаборатории,
кандидат фармацевтических наук, доцент, Растение было собрано на территории Топкин-
тел.: (3842) 52-18-10, е-таД: [email protected] ского района Кемеровской области, вблизи села Топки
Кузнецов Петр Васильевич - заведующий кафедрой
фармацевтической химии, доктор фармацевтических
во второй половине июля 2010 г. Сырье подвергнуто
наук, профессор, тел.: (3842) 35-89-16 сушке в тонком слое в затененном, хорошо проветри-
Теслов Леонид Степанович - доцент кафедры ваемом помещении. Воздушно-сухое сырье в сентябре фармакогнозии, кандидат фармацевтических наук, тел.: (812) 234-57-29
* Автор, с которым следует вести переписку.
2010 г. трехкратно обрабатывали 70%-ным этиловым спиртом содержащим 0,01 М гидроксида натрия. Полученные извлечения объединены и подвергнуты хроматографическому анализу. Этиловый спирт 70%-ный приготовлен из спирта-ректификата ГОСТ 5964-93 по правилам разведения, изложенным в ГФ XI издания.
В качестве сорбентов в работе использовались: сефадекс LH-20 (Sephadex® LH-20 (Pharmacia Shweden), и его модифицированный аналог - азоэпоксиадсорбент аффинного типа (азо-ААфТ) синтез которого осуществляли по методике [9]. Наличие оксипропильной перешивки у сефадекса LH-20 определяет характер хромато-графического разделения как гель-фильтрационный, адсорбционный и распределительный. Фракции собирали по 1 мл с помощью коллектора (Diafrak, Россия). В качестве элюентов использовали бидистиллированную воду (1 по 30 фракции). С 31 по 87 фракции в качестве элюента использовали 0,01 М NaOH.
Полученные пиковые фракции анализировались в режиме ВЭЖХ и ГЖХ-МС. Для ВЭЖХ применяли хроматографическую систему «Альянс» (Waters), оснащенную детектором с фотодиодной матрицей при длине волны 255 нм. Колонка Atlantys C18 (3,9x150 мм) 5 мкм. Элюирование градиентное с использованием 0,1% водного раствора ортофосфорной кислоты и ацетонитрила (78 : 22). Скорость потока составила 1 мл/мин, объем инжекции - 20 мкл. Температура колонки - 30 °С.
Газожидкостная хроматография с масс-спектрометрической детекцией (ГЖХ-МС) выполнена на приборе Finnigan TraceDSA (США) колонка TR-MS, газ-носитель гелий, скорость потока 5 м/мин. Температуру колонки программировали от 100 до 250 со скоростью 10 °С/мин.
Обсуждениерезультатов
Известно, что метод ГЖХ с масс-спектрометрической детекцией отличается высокой чувствительностью и определенной универсальностью. Эти факторы, в том числе, позволяют использовать метод для анализа извлечений из растительных объектов [10, 11]. В нашем исследовании, метод ГЖХ-МС использован для анализа хроматографических фракций полученных после разделения экстракта на сефадексе LH-20 и его азо-ААфТ аналоге. На сефадексе LH-20 в режиме водной элюции были выделены три хроматографические фракции (рис. 1). В Ia фракции методом ГЖХ-МС определены следующие компоненты: лауриновая кислота; 1,5-пентандиол; этилнониловый эфир фталевой кислоты; 1,4-циклогександиметамин; этил-15-метил-гексадеканоат; 1,1,3,3,5,5,7,7,9,9,11,11,13,13,15,15-гексадекаметил-холест-5-ен-3-ол; диизооктилфталат; 3,7,11-триметил-(£,£)-трихотек-9-ен-4-ол; 2,4-диметил-бензо-у-хинолин; 2,4,6,-циклогептатриен-1-он; 1,1,3,3,5,5,7,7,9,9,11,11,13,13,15,15-гексадекаметил-2,4,6-циклогептатриен-1-он; декаметилциклотрисилоксан.
Фракция IIa содержит: миристиновую кислоту; 9-октадиенан; 1,3,5,-триазин-2,4,6,-(Ш,3Я,5Я)-трион; 3-фенил-1-бензилиндол; пиридин-3-карбоксамид; декаметилиндолизин; декаметил 1,2,4-триазол-3-амин; 1,4-фенилендин-(2,4,6-триметил)циклогептатриен-1-он; Ж-метил-1-адамантанацетамид; 2,4,6,-цикло-гептатриен-1-он. Фракция имеющая наибольшее удерживание - IIIa, содержит следующие компоненты: 3-пропокси-^-аланин; 1,2-диэтил-1,2-гидразиндикарбоксальдегид; мочевина; 1-(4,7дигидро-2-метил-7-оксо-пиразоло)[1,5-а]пиримидин-5-ил.
В полученных после LH-20 и его азо-ААфТ аналога фракциях I и II, методом ГЖХ-МС показано наличие миристиновой и стеариновой кислот. Необходимо отметить, что данные кислоты также обнаружены в черноморской бурой водоросли Colpomeniaperegrine[12].
В случае применения модифицированного азо-ААфТ сорбента было выделено четыре хроматографические фракции (рис. 2). При этом выделена фракция IV6, которая получена в режиме элюции 0,01 М NaOH.
По данным ГЖХ-МС компонентной состав первой хроматографической фракции после азо-ААфТ (рис. 2) представлен следующими группами веществ.
Алифатические структуры: Обнаруженные алифатические вещества в выделенных хроматографических фракциях представлены в таблице 1. Можно отметить, что алифатические структуры не обнаружены в первой хроматографической фракции. Тогда как максимальное их количество содержится в IV6 хроматографической фракции при элюции раствором 0,01 М NaOH. Это объясняется липофильными свойствами как сорбента, так и удерживаемых веществ.
Рис. 1. Хроматограмма извлечения на сефадексе LH-20
Рис. 2. Хроматограмма извлечения на модифицированном сефадексе ЬИ-20 с иммобилизованными фенольными соединениями из Звездчатки в качестве лиганда [9]
Таблица 1. Алифатические компоненты хроматографических фракций
№ Фракция Время удерживания, мин RSI* Компонент Формула
1 116 20,12 701 2-метилгексадекан- 1-ол
2 116 22,37 740 2-гексадеканол
3 116 26,38 796 этиловый эфир гексадекановой кислоты метиловый эфир 10,11-эпокси-7-этил- 0
4 Шб 18,01 643 3,11-диметил-(Д,Е,)-^мс-2,6-тридекадиеновой кислоты
5 Шб 26,36 763 этиловый эфир гексадекановой кислоты
6 1Уб 15,52 671 3,7,11 -триметил-1-додеканол
7 1У6 17,88 756 2,6,10-триметилтетрадекан
8 1Уб 18,90 727 3,7,11 -триметил-1-додеканол
9 1У6 19,33 705 2-метил- 1-гексадеканол
10 1У6 20,17 746 2-гексадеканол но
11 !У6 24,00 717 9,12,15-октадекатриеновая кислота 0
*см. работу [10].
Ароматические соединения: В хроматографической фракции I6 были определены три производных фталевой кислоты (табл. 2). Вторая фракция (II6) содержит следующие фталаты: бутилтетрадециловый эфир фталевой кислоты; этилпентадециловый эфир фталевой кислоты, диизооктиловый эфир фталевой кислоты. Фракция III6 этилпентадециловый эфир фталевой кислоты; бутилизогексиловый эфир фталевой кислоты; этил 2-пентиловый эфир фталевой кислоты; моно-(2-этил)-гексиловый эфир фталевой кислоты.
Производные фталевой кислоты с различной структурой алкильного остатка определяются в растениях семейства Apiaceae, Caprifoliaceae, Lamiaceae, Amaranthaceae [6, 13, 14]. Известен мощный эффект фталатов как неионогенных ПАВ, этот фактор может обусловливать устойчивость S. media к поражению различного типа микромицетов [3].
В III6 фракции обнаружен 2,6-диизопропилнафталин - вещество, которое по аналогии с известными антимикотическими препаратами тербинафин и хинофунгин (нафтильный фрагмент в структуре) способно проявлять противогрибковые свойства.
Содержащиеся в III6 фракции: Ж,Ж'-дибензоилоксигександиамин и Z-фенилметиловый эфир 9-окта-декановой кислоты можно рассматривать как производные бензойной кислоты. Интересно, что II6 фракция содержит ДЖ-диметил^-1,3-дифенил-2-бутеновый эфир тиокарбоновой кислоты, который способен проявлять антиоксидантные свойства.
В таблице 3 обобщены данные по обнаруженным стероидным соединениям, их аналогам и другим производным циклоалканов. Так, фракция I6 собранная в режиме водной элюции содержит: 3а-метокси-18[Ж-метил-Ж-(2' 14эпоксиэтил)амино]-3,9-эпоксипрегнан-11 р,20-диол. Относительно многокомпонентной оказалась фракция II6, в которой определены: 7-0KC0-UHKfl06yTa[a^H6ero0[c,f]uHKT0renTaflHeH; 9,10-секохолеста-5,7,10-триен-3,24,25-триол или 24,25-дигидроксихолекальциферол и [2-(5-гидроксипентил-2-инил)-3-оксоциклопентил]тиоуксусная кислота. В III6 фракции обнаружен - 4а-метил-1-метилен-1,2,3,4,4а9,10,10 а-октагидрофенантрен.
Таблица 2. Ароматические компоненты хроматографических фракций
№ Фракция Время удерживания RSI* Компонент Формула
мин
1 2 3 4 5 6
1 16 25,88 856 изобутилоктадицил фталат ОсЧ
2 16 28,19 935 этил 2-пентилфталат оЬЬ О О он
3 16 35,80 893 моно(2-этилгексил) фталат
4 II6 25,88 828 бутилтетрадицил фталат
5 II6 28,19 852 этилпентадицилфталат
6 II6 35,80 887 диизооктилфталат
7 II6 36,10 и 39,76 767 738 А',А'-диметил^-1,3-дифенил-2-бутеновый эфир тиокарбоновой кислоты т'^ о Г^ j N
Окончание таблицы 2
1 2 3 4 5 6
8 III6 6,62 771 N Аг-дибензоилоксигександиамин
9 III6 9,38 696 фенилметиловый эфир 1-9-октадекановой кислоты о ---д
10 III6 20,95 849 2,6-диизопропилнафталин
11 III6 22,20 779 этилпентадицилфталат а^с-
12 III6 25,90 898 бутилизогексилфталат О^:Х<
13 III6 35,80 911 моно(2-этил)гексилфталат о
Таблица 3. Производные циклоалканов, стероидные соединения и их аналоги содержащиеся в хроматографических фракциях
№
Фракция
Время удерживания мин
Компонент
Формула
2
3
16
II6
II6
30,09
21,13
21,74
638
3 а-метокси-18 [Ы-метил-Ы-(2 '14-эпоксиэтил)амино]-3,9- эпоксипрег-нан-11р,20-диол
664
[2-(5-гидроксипентил-2-инил)-3-оксоциклопентил]тиоуксусная кислота
662
7-оксо-циклобута[а]дибензо [сДциклогептадиен
он
St
O
1
4
5
6
1
о
2
3
Окончание таблицы 3
1 2 3 4 5 6
OH OH
4 II6 30,10 688 9,10-секохолеста-5,7,10(19)-триен-3,24,25-триол HO^^^
5 III6 19,91 663 4 а-метил-1 -митилен- 1,2,3,4,4а9,10,10а-октагидрофенантрен it?
Соединения, содержащие гетероцикл и их аналоги определены в II III и IV фракциях (табл. 4). Найдено, что фракция II6 содержит L-аскорбиновую кислоту, птерин-6-карбоновую кислоту и 4-метокси-6метил-5-нитроизобензофуран-1,3-дион. Особый интерес вызывает наличие содержащегося в III6 фракции 1-ацетил-20а-гидрокси-16-метиленстрихнана и 2,7-дифенил-1,6-диоксопиридазино[4,5:2',3']пирроло[4,5-^пиридазина обнаруженного в IV6 фракции. По нашему мнению, структурные и количественные особенности алкалоидов, содержащихся в Stellaria, требует дополнительных исследований. Интересно отметить, что произрастающая в Европе осока парвская (Carex bnevicollis ) также продуцирует несколько алкалоидов производных ß-карболина. Среди прочих бревиколлин и бревикарин [15]. В работе [2], посвященной изучению S. dichotomata, впервые были выделены и описаны содержащиеся алкалоиды типа дихотомина I.
Достоверность результатов, полученных методом ГЖХ-МС, может находится в достаточно широком интервале. Поэтому данные ГЖХ-МС по обнаруженным компонентам растения должны быть обязательно доказаны в дальнейшем, комплексом физико-химических методов в условиях препаративного накопления.
По данным ВЭЖХ, в этой фракции (IV6) содержится флавоноид, идентифицированный нами (по спектральным характеристикам и методом добавок) как кемпферол. Необходимо отметить, что применение азо-ААфТ позволяет осуществлять также и препаративное накопление флавоноидов. Подобные свойства азо-ААфТ были описаны ранее и использованы для определения примеси флавоноидов в препаратах кумаринов [16, 17].
Таблица 4. Компоненты хроматографических фракций, содержащие в структуре гетероцикл
Время
№ Фракция удерживания, мин. RSI* Компонент Формула
0 O
1 II6 18,03 744 птерин-6-карбоновая кислота NH | OH HfcN^N^^N^ 0CH3 O
2 II6 34,63 670 4-метокси-6-метил-5-нитро-изобензофуран-1,3-дион 1, I/O с
3 III6 22,35 559 1-ацетил-20а-гидрокси-16-метиленстрихнан H
4 IV6 5,50 581 2,7-дифенил-1,6-диоксопиридазино-[4,5:2',3 ']-пирроло[4,5-(!]-пиридазин о -
Выводы
Применение сефадекса ЬН-20 и его модифицированного аналога - азоэпоксиадсорбента аффинного типа позволяют выделить фракции, различающиеся по компонентному составу. В изученных хроматогра-
фических фракциях показано наличие производных фталевой кислоты. Использованный модифицированный сорбент LH-20 в режиме неклассической аффинной хроматографии проявляет селективность при сорбции флавоноидов. Методом ВЭЖХ в хроматографической фракции IV6 после азо-ААфТ сорбента определено наличие кемпферола. С применением ГЖХ-МС впервые установлены азотсодержащие и серосодержащие компоненты Stellaria media, в том числе алкалоиды производные ^-карболина и Ж.Ж-диметил-S-1,3дифенил-2-бутенового эфира тиокарбоновой кислоты.
Список литературы
1. Горина Я.В. Фармакогностическое исследование некоторых видов рода Stellaria и возможность их использования в медицинской практике: автореф. ... канд. фарм. наук. Пермь, 2012. 25 с.
2. Morikawa T., Sun B., Matsuda H. Wu L.J., Harima S., Yoshikawa M. Bioactive constituents from Chinese natural medicines. XIV. 1) New glycosides of b-carboline-type alkaloid, neolignan, and phenylpropanoid from Stellaria dichotoma L. var. lanceolata and their antiallergic activities // Chem. Pharm. Bull. 2004. Vol. 52, N 10. Pp. 1194— 1199.
3. Шакуров P.P. Антимикробные пептиды сорного растения Stellaria media и их гены: экспрессия и устойчивость к фитопатогенным грибам: автореф. ... к.б.н. Москва, 2011. 24 с.
4. Vanhaecke M., Ende W., Laere A., Herdewijn P. Lescrinier E. Complete NMR characterization of lychnose from Stellaria media (L.) Vill. // Carbohydrate Research. 2006. Vol. 341. Pp. 2744-2750.
5. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб., 1999. 407 с.
6. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. / отв. ред. А.Л. Буданцев. Т. 1. СПб., 2008. С. 110-112.
7. Телятьев В.В. Полезные растения центральной Сибири. Иркутск, 1985. 384 с.
8. Peuravuori J., Monteiro A., Eglite L., Pihlaja K. Comparative study for separation of aquatic humic-type organic constituents by DAX-8, PVP and DEAE sorbing solids and tangential ultrafiltration: elemental composition, size-exclusion chromatography, UV-vis and FT-IR // Talanta. 2005. Vol. 65. Pp. 408-422.
9. Сухих A.C., Коршунов A.B., Кузнецов П.В. Синтез эпоксиазоадсорбента аффинного типа для выделения и очистки биологически активных веществ звездчатки средней (Stellaria media (L.)) // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтическойпродукции. Т. 63. 2008. С. 339-341.
10. Пушкарева Е.С., Ефремов А.А. Компонентный состав эфирнрого масла полыни холодной (Artemisia frígida) Красноярского края и его отдельных фракций // Сорбционные и хроматографические процессы. 2012. Т. 12, вып. 4. С. 619-623.
11. Sabale A. B., Mane A. A. Chemical investigation of Iphigenia stellata Blatter by GC-MS // Биоорганическая химия. 2012. Т. 38. № 3. С. 370-373.
12. Усов А.И., Смирнова Г.П., Каменаская 3., Дмитрова-Конаклиева С.Т., Стефанов К.Л., Попов С.С. Полярные компоненты черноморской бурой водоросли Colpomenia peregrina (Sauv.) // Биоорганическая химия. 2004. Т. 30, № 2. С. 182-189.
13. Beck J.J., Shen-Chieh C. The structural diversity of phthalides from the Apiaceae // J. Natur. Prod. 2007. N 5. Pp. 891-900.
14. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. Семейства Caprifoliaceae - Lobeliaceae / отв. ред. А.Л. Буданцев. Т. 4. СПб.; М., 2011. 630 с.
15. Семенов А.А. Очерк химии природных соединений. Новосибирск, 2000. 664 с.
16. А.с. № 1770897 (СССР). Способ разделения и выделения кумаринов / П.В. Кузнецов, В.В. Шкаренда. 1992.
17. Шкаренда В.В. Исследование адсорбентов аффинного типа для разделения, очистки и анализа кумаринов и их производных и кумаринсодержащих лекарственных средств: автореф. ... канд. фарм. наук, СПб, 1992. 24 с.
Поступило в редакцию 1 ноября 2013 г.
После переработки 22 апреля 2014 г.
Sukhikh A.S.1*, Kuznetsov P.V.1, Teslov L.S.2 THE CHROMATHOGRAPHY CHARACTERISTIC EXTRACT STELLARIA MEDIA (CARYOPHYLLACEAE)
1Kemerovo State Medical Academy, Russian Ministry of Health, st. Voroshilov, 22a, Kemerovo, 650029 (Russia) e-mail: [email protected]
2Saint-Petersburg Chemical-Pharmaceutical Academy of Ministry of Health of Russia, ul. prof. Popov, 14, St. Petersburg, 197022 (Russia)
Research of components of extract of a grass of Stellaria is carried out. Sphadex LH-20 and its changed analog in way NAFC division on parts of chromatographyc that are analysed with HPLC and GLC-MS use. It show that use of modified sephadex LH-20, is possible flavonoids preparation distributions. In research, the maintenance of some types alkaloid derivatives is revealed P-carbolins. For the first time presence at extract of a plant of cempferol is established.
Keywords: Stellaria media, epoxyazoadsorbent affinity type, sephadex LH-20, cempferol, alkaloid derivatives P-carbolins type.
References
1. Gorina Ja.V. Farmakognosticheskoe issledovanie nekotoryh vidov roda Stellaria i vozmozhnost' ih ispol'zo-vanija v medicinskoj praktike. Diss. kand. farm. nauk. [Farmakognostichesky study of some species of the genus Stellaria and the possibility of their use in medical practice. Candidate of Pharmaceutical Sciences diss.]. Perm', 2012, 25 p. (in Russ.).
2. Morikawa T., Sun B., Matsuda H. Wu L.J., Harima S., Yoshikawa M. Chem. Pharm. Bull, 2004, vol. 52, no. 10, pp. 1194-1199.
3. Shakurov R.R. Antimikrobnye peptidy sornogo rastenija Stellaria media i ih geny: jekspressija i ustojchi-vost' k fitopatogennym gribam. Diss. kand. bio. nauk. [Antimicrobial peptides weed Stellaria media and their genes: expression and resistance to phytopathogenic fungi. Candidate of Biological Sciences diss.]. Moskva, 2011, 24 p. (in Russ.).
4. Vanhaecke M., Ende W., Laere A., Herdewijn P., Lescrinier E. Carbohydrate Research, 2006, vol. 341, pp. 2744-2750.
5. Jenciklopedicheskij slovar' lekarstvennyh rastenij i produktov zhivotnogo proishozhdenija. [Encyclopedic Dictionary of medicinal plants and animal products]. Ed. G.P. Jakovlev, K.F. Blinova. Sankt-Peterburg, 1999, 407 p. (in Russ.).
6. Rastitel'nye resursy Rossii: Dikorastushhie cvetkovye rastenija, ih komponentnyj sostav i biologicheskaja aktivnost'. [Plant Resources of Russia: Wild flowering plants, their composition and biological activity]. Ed. A.L. Budancev. vol. 1, Sankt-Peterburg; Moscow, 2008, pp. 110-112. (in Russ.).
7. Teljat'ev V.V. Poleznye rastenija central'nojSibiri. [Useful plants of central Siberia]. Irkutsk, 1985, 384 p. (in Russ.).
8. Peuravuori J., Monteiro A., Eglite L., Pihlaja K. Talanta, 2005, vol. 65, pp. 408-422.
9. Suhih A.S., Korshunov A.V., Kuznecov P.V. Razrabotka, issledovanie i marketing novoj farmacevticheskoj produkcii. [Development, research and marketing of new pharmaceutical products]. 2008, vol. 63, pp. 339-341. (in Russ.).
10. Pushkareva E.S., Efremov A.A. Sorbcionnye i hromatograficheskie processy, 2012, vol. 12, no. 4, pp. 619-623. (in Russ.).
11. Sabale A. B., Mane A. A. Bioorganicheskaja himija, 2012, vol. 38, no. 3, pp. 370-373. (in Russ.).
12. Usov A.I., Smirnova G.P., Kamenaskaja Z., Dmitrova-Konaklieva S.T., Stefanov K.L., Popov S.S. Bioorganicheskaja himija, 2004, vol. 30, no. 2, pp. 182-189. (in Russ.).
13. Beck J.J., Shen-Chieh C. J. Natur. Prod, 2007, no. 5, pp. 891-900.
14. Rastitel'nye resursy Rossii: Dikorastushhie cvetkovye rastenija, ih komponentnyj sostav i biologicheskaja aktivnost'. Semejstva Caprifoliaceae - Lobeliaceae. [Plant Resources of Russia: Wild flowering plants, their composition and biological activity. Family Caprifoliaceae-Lobeliaceae]. Ed. A.L. Budancev. vol. 4, St. Petersburg; Moscow, 2011, 630 p. (in Russ.).
15. Semenov A.A. Ocherk himiiprirodnyh soedinenij. [Sketch of Chemistry of Natural Compounds]. Novosibirsk, 2000. 664 p.
16. Patent 1770897 (USSR). 1992. (in Russ.).
17. Shkarenda V.V. Issledovanie adsorbentov afinnogo tipa dlja razdelenija, ochistki i analiza kumarinov i ih proizvodnyh i kumarin soderzhashhih lekarstvennyh sredstv: Diss. kand. farm. nauk. [Investigation of such adsorbents for affinity separation, purification and analysis of coumarins and coumarin derivatives and drugs containing. Candidate of Pharmaceutical Sciences diss.], St. Petersburg, 1992, 24 p. (in Russ.).
Received November 1, 2013 Revised April 22, 2014
* Corresponding author.
