CC BY
22
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
тенденцию к снижению, причем наиболее заметным оно было у пациентов с хорошим клиническим эффектом терапии. Возможным объяснением этого является влияние на секрецию BDNF периферическими Т- и В-клетками, связанное с иммуномодулирующим и противоспалитель-ным действием терапии.
ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ РОЛЬ УРОВНЯ TNFa, IL-10 И ММП-1 У ПАЦИЕНТОВ С ИБС ПОСЛЕ АОРТОКОРОНАРНОГО ШУНТИРОВАНИЯ
Маркелова Е.В., Шкорик Е.В., Силаев А.А.
ФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, Владивосток, Россия
Фактор некроза опухоли-a (TNFa) влияет на функциональные свойства эндотелия, участвует в метаболизме ли-пидов, в процессах свертывания крови (Корженевская К.В. и соавт., 2011). Интерлейкин-10 (IL-10), подавляя патологическую воспалительную реакцию, способствует регенерации поврежденного миокарда и замедляет свёртывание крови. А матриксная металлопротеиназа-1 (ММП-1) может играть ключевую роль в разрыве уязвимой атероскле-ротической бляшки (Cavusoglu E.et al., 2015).
Цель. Определить диагностическую роль уровня TNFa, IL-10 и ММП-1 в риске возникновения тромбо-эмболических осложнений (ТЭО) у пациентов после аор-токоронарного шунтирования (АКШ).
Материалы и методы. Исследовано 75 больных с ише-мической болезнью сердца (ИБС) до и после АКШ в возрасте от 45 до 74 лет. Пациенты после АКШ были разделены на две группы: I — 25 больных с ТЭО после АКШ (острый инфаркт миокарда, ишемический инсульт, тромбоэмболия легочных ветвей); II — 50 больных с ИБС без осложнений после АКШ. Забор крови осуществлялся до АКШ, в 1-е, 3-и, 7-е и 12-е сутки после АКШ. Определение уровня TNFa, IL-10 и ММП-1 проводилось в сыворотке крови методом твердофазного ИФА, с использованием реактивов R&D Diagnostics Inc., USA. Результаты выражали в пг/мл и нг/мл. Данные представляли в виде медианы и двух квартилей (Me, Q25, Q75). Внутри и межгрупповые различия оценивали с помощью критерия Манна—Уитни, х2 критерия в рамках прикладной программы SPSS и.16. Статистически достоверным считали уровень значимости p < 0,05.
Результаты. TNFa у пациентов с ТЭО был повышен в 9-10 раз по сравнению с здоровыми людьми (2,8 (0,8; 10,9) пг/мл, p < 0,01) и его значение до операции было статистически выше (p < 0,05), чем во II группе (9,46 (4,86; 10,98) пг/мл). Во II группе концентрация TNFa была повышена в 2-4 раза, х2 между группами 4,28 при р < 0,05, то есть выявлена достоверная связь повышенного значения TNFa (выше 24 пг/мл) и риском возникновения ТЭО после АКШ. Определено значительное увеличение ММП-1 в I группе, ее уровень до АКШ (4,35 (3,5; 7,5) нг/мл) был выше вдвое (p < 0,05), чем во II группе (1,98 (1,34; 2,61) нг/мл). Выявлена сопряженность повышения ММП-1 выше 3,3 нг/мл (х2 = 6,66, р < 0,01) и IL-10 выше 65 пг/ мл до АКШ и выше 320 пг/мл в 1-е сутки после АКШ (х2 = 3,97, p < 0,05) с риском возникновения ТЭО у пациентов с ИБС после АКШ.
Заключение. Для выявления риска возникновения тромбоэмболических осложнений после АКШ, опреде-
лен диагностически значимый уровень TNFa, ММП-1 и IL-10 в сыворотке крови пациентов до операции и в 1-е сутки после реваскуляризации миокарда.
ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОК С ИММУНОРЕГУЛЯТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОСТРОМ ПЕРИОДЕ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА
Морозов С.А., Старостина Н.М., Шевела Е.Я., Штоббе А.А., Давыдова М.Н., Черных Е.Р.
ФГБНУ«Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Иммунная система играет ключевую роль в патогенезе ишемического инсульта, поскольку участвует в опосредовании как воспалительного ответа, так и активации репаративных процессов. Целью настоящей работы явилось исследование количественного содержания различных субпопуляций регуляторных клеток и их взаимосвязи тяжестью инсульта и ранним исходом.
Материалы и методы. В исследование были рекрутированы 36 пациентов с ишемическим инсультом (19 мужчин и 17 женщин в возрасте от 40 до 79 лет) c тяжестью инсульта > 4 баллов по шкале тяжести инсульта (NIHSS). Обследование проводилось в остром периоде — через 22-44 часа с момента развития инсульта. Ранний исход (через 30 дн) оценивался по модифицированной шкале Рэнкина (mRs). Контролем служили 20 доноров. Количество регуляторных Т-клеток (CD4+CD25+, CD4+CD25hi, CD4+CD25+CD127-), гранулоцитарных и моноцитарных миелоидных супрессорных клеток (Lin-HLA-DR-, CD33+ и CD14+HLA-DR-); а также классических (CD14++CD16-), промежуточных (CD14++CD16+) и альтернативных моноцитов (CD14+CD16++) исследовали методом проточной цитофлюориметрии с использованием соответствующих моноклональных антител.
Результаты. По сравнению с донорами пациенты в остром периоде ишемического инсульта характеризовались повышенным содержанием CD4+CD25+Т-клеток - (Me 5,2 vs 3,1%, ри = 0,026); CD4+CD25hiТ-клеток (Me 2,2 vs 1,0%, ри = 0,02) и CD4+CD25+CD127- (Me 6,1 vs 5,0%, ри = 0,001). Кроме того, пациенты с инсультом отличались более высоким содержанием гранулоцитарных (Me 12,2 vs 6,3%, ри = 0,00001) и моноцитарных (Me 3,1 vs 2,0%, ри = 0,005) миелоидных супрессорных клеток. В периферической крови пациентов регистрировалось повышенное количество промежуточных (Me 7,5 vs 3,0; ри = 0,0004) и альтернативных моноцитов (Me 7,5 vs 2,0%, ри = 0,005) на фоне снижения доли классических моноцитов (Me 78 vs 88,0%, ри = 0,003). В подгруппе пациентов с NIHSS < 18, тяжесть инсульта (балл по NIHSS) коррелировал с уровнем лейкоцитов (Rs = 0,48; p = 0,009), нейтрофильно-лимфоцитарным индексом (Rs = 0,61; p = 0,0007) и концентрацией СРБ (Rs = 0,52; p = 0,004), что указывало на взаимосвязь тяжести инсульта с воспалительным процессом. В этой подгруппе нейтрофильно-лимфоцитарный индекс (как показатель воспаления) значимо коррелировал с абсолютным количеством Lin-HLA-DR-CD33+ гранулоцитарных миелоидных супрессорных клеток (Rs = 0,65; p = 0,0002), и на уровне тренда — с долей CD14+HLA-DR- моноцитарных миелоидных супрессорных клеток (Rs = 0,38; p = 0,01). При анализе ранних исходов выявлена обратная взаимосвязь
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология заболеваний сердечно-сосудистой системы Immunology of cardiovascular system diseases
между относительным содержанием CD14++CD16+ промежуточных моноцитов с баллом mRs (Rs = -0,55; p = 0,04), что свидетельствует о лучшем восстановлении у пациентов с более высоким количеством CD14++CD16+ моноцитов.
Заключение. Полученные результаты демонстрирует, что у пациентов в остром периоде ишемического инсульта наблюдается возрастание различных субпопуляций ре-гуляторных клеток, некоторые из которых коррелируют с выраженностью воспалительного процесса и эффективностью раннего восстановления. Дальнейшие исследования этих субпопуляций регуляторных клеток могут представлять интерес с точки зрения оценки их прогностической значимости при инсульте.
КОГНИТИВНАЯ ДИСФУНКЦИЯ, АКТИВНОСТЬ МАТРИКСНЫХ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ И ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ ПРИ АОРТОКОРОНАРНОМ ШУНТИРОВАНИИ В УСЛОВИЯХ ИСКУССТВЕННОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ И ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ОПЕРАЦИИ OFF-PUMP
Овчинников Д.А.1, 3, Воробьев Е.А.1, Гарнюк В.В.2, Баранцевич Е.Р.1, 3, Бельтюков П.П.2
1ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГУП«Научно-исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия
3 ФГБУ«Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Оперативные вмешательства сопровождаются реакцией со стороны иммунной системы, что может проявляться изменениями цитокинового профиля. Матрикс-ная металлопротеиназа типа 9 (MMP9) продуцируется преимущественно в костном мозге и в лимфоидной ткани. Около 70% MMP9 по данным ресурса Protein Atlas секретируется макрофагами и лимфоцитами. Поэтому изменения активности MMP9 могут рассматриваться как реакция иммунной системы. Изменения активности MMP в плазме крови наряду с окислительным стрессом могут нарушать функции эндотелия и гемато-энцефали-ческого барьера.
Основной целью настоящего исследования стала оценка связи между активностью MMP (MMP2 и MMP9), а также изменениями цитокинового профиля с выраженностью когнитивной дисфункции в зависимости от способа выполнения операции аортокоронарного шунтирования (АКШ). Для достижения поставленной цели, помимо определения уровней цитокинов и активности MMP, проведена оценка когнитивной дисфункции у пациентов до и после выполнения операции АКШ.
Материалы и методы. В исследование включены 70 пациентов, с ишемической болезнью сердца (ИБС), планируемых на операцию АКШ. Диагноз ИБС установлен на догоспитальном этапе на основании типичной клинической картины и данных стресс-исследований. Стенокардия напряжения соответствовала III-IV классу. 42 пациентам АКШ проведена с использованием искусственного кровообращения (ИК), 28 пациентов прооперированы
без применения ИК (off-pump). Рандомизация не проводилась.
Помимо стандартных клинических обследований все пациенты проходили неврологический осмотр и ряд нейро-психологических тестов: 1. Госпитальная шкала тревоги и депрессии — до операции. Положительный высокий результат теста рассматривали в качестве критерия исключения. Тесты на когнитивные нарушения за 2 суток до операции и на 7 сутки после операции: MMSE, Монреальская шкала (MoCa), FAB, ТМТ тест, корректурная проба. Концентрацию цитокинов, хемокинов и факторов роста,(Ш-5, IL-8, IL-9, IL-13, IL-15, эотаксин, FGF-2, G-CSF, PDGF-bb, VEGF) оценивали в плазме крови за сутки до АКШ (Т0) и через 2 часа после АКШ (Т1), методом иммунофлюоресцентного анализа на приборе Luminex 200 Labmap system (Bio-Rad) с использованием набора Bio-Plex Suspension Array System (Bio-Rad). Для учета влияния разведения крови в результате инфузион-ной терапии концентрацию интерлейкинов рассчитывали с учетом изменения гематокрита. Активность MMP определяли методом желатиновой зимографии в 10% ПААГ с определением активности проММР9, MMP9 и MMP2. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы GraphPad Prism5 с использованием критериев, соответствующих характеру распределения и объему выборки.
Результаты. Из примененных нейропсихологических тестов для выявления тонких изменений когнитивных функций у больных после АКШ, достаточно чувствительным оказался только тест «Монреальская шкала». Значимое снижение этого показателя (более 3 баллов по шкале МоСа) произошло у 15 из 42 больных группы ИК и 3 больных оперированных при работающем сердце из 28. Наиболее существенными и статистически значимыми изменениями в точке Т1, как в группе ИК, так и в группе off-pump оказались повышение уровней IL-8, VEGF, Eotaxin, MMP9. Содержание PDGF-bb, G-CSF и IL-13 статистически значимо повышалось только в группе ИК. Ни в одной из групп пациентов не наблюдали значимых изменения MMP2 на фоне АКШ, хотя активность MMP2, как до операции, так и после нее, была значимо выше (p < 0,05) у пациентов с выраженным снижением когнитивных функций по результатам МоСа.
При сравнении групп пациентов между собой показано, что для группы ИК характерно статистически значимое повышение уровней IL-8, MMP9, Eotaxin по сравнению с группой off-pump.
Установлено наличие связи между снижением когнитивных функций на седьмые сутки после операции и изменением уровней IL-5 (r = 0,348, p < 0,05), IL-8 (r = 0,278, p < 0,05) и активности MMP9 (r = 0,549, p < 0,01) в плазме крови через 2 часа после АКШ для всех пациентов. Для MMP2 выявлена положительная значимая корреляция между уровнем MMP2 как до операции, так и после нее (r = 0,598, < 0,01) с уровнем снижения когнитивных функций по результатам тестирования МоСа. Для группы ИК также выявлена зависимость между снижением когнитивной функции и уровнем VEGF (r = 0,398, p < 0,05) и G-CSF (r = 0,337, p < 0,05) в точке Т1.
Выводы. Активность ММР2 в обследованных группах ассоциирована со снижением когнитивных функций как до, так и после операции АКШ. Когнитивный дефицит после АКШ значимо выше в группе ИК, а степень его выраженности ассоциирована с повышенными уровнями цитокинов и MMP9.
