CC BY
41
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Результаты. ХрСВ было выявлено у 38,5% пациентов с РА и у 75,5% — с СКВ. Сопоставив диагностическую эффективность отдельных показателей в отношении развития ХрСВ путем сравнения площадей под ROC-кривыми (АиС), мы выявили, что она отличается при каждой нозологии (табл.). Так, отличной (АиС > 0,9) и очень хорошей (АиС > 0,8) ДЭ при РА обладали TNFa, кортизол и D-димеры, а при СКВ — ГЬ-8, ГЬ-6, ТОТа. Следует отметить, что ДЭ С-реактивного белка, повышение которого выше нормальных значений зачастую рассматривается в качестве критерия системного воспаления, была невысокой. Среди дополнительных маркеров ХрСВ очень хорошей ДЭ при СКВ обладал липополисахарид-связы-вающий белок. ДЭ шкал DAS28 и SLEDAI в отношении развития ХрСВ оказалась низкой, что свидетельствует об их эффективности при оценке отдельных клинических проявлений заболеваний, но не системной патогенетической картины этих заболеваний.
ТАБЛИЦА. ЗНАЧЕНИЯ AUC ИССЛЕДУЕМЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ (К ТЕЗИСАМ ЖУРАВЛЕВОЙ Ю.А. И ДР.)
Показатель РА СКВ
С-реактивный белок 0,678 0,652
IL-6 0,684 0,995
IL-8 0,791 0,986
TNFa 0,881 0,869
Миоглобин 0,650 0,477
Кортизол 0,825 0,470
D-димеры 0,825 0,715
Липополисахарид-связываю-щий белок 0,594 0,846
р2-микроглобулин 0,603 0,556
Эозинофильный катионный белок 0,611 -
DAS28/ SLEDAI 0,600 0,363
Заключение. Проявления ХрСВ не стабильны и зависят как от особенностей развития основного заболевания, так и от эффективности патогенетической терапии, что определяет целесообразность диагностики ХрСВ с помощью интегральной шкалы ХрСВ. Однако для мониторинга выраженности ХрСВ при каждой конкретной нозологии могут быть использованы отдельные показатели.
ГОРМОНАЛЬНАЯ И ЦИТОКИНОВАЯ РЕГУЛЯЦИЯ В ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ АУТОИММУННОГО ТИРЕОИДИТА
Здор В.В., Маркелова Е.В., Гельцер Б.И.
ФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ,, Владивосток, Россия Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
Многие аспекты иммунопатогенеза аутоиммунного тиреоидита (АИТ) до сих пор требуют прояснения, т.к. лечение заболевания сводится к заместительной терапии
тиреоидными гормонами (ТГ) при манифестации гипотиреоза (Ganesh B.B., 2011; Kristensen B., 2016).
Целью работы явилось изучение взаимосвязей ТТГ, тиреоидных гормонов (св.ТЗ, св.Т4) и Treg, Th1-, Th2-, Th17-, 1Ь22-маркерных цитокинов, объема щитовидной железы (ЩЖ) у пациентов с АИТ и гипотиреозом разной степени тяжести.
Результаты исследования. У 103 пациентов (женщин, n = 67; мужчин, n = 35) с АИТ, подтвержденного гормонально, иммунологически, ультрасонографией и/или морфологически оценивались показатели сывороточного уровня цитокинов IL-1a, IL-ф, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IL-17, IL-22, TGF-P1, TGF-P3, IFNy TNFa и рецепторов TNFa sRI, TNFa sRII методом твердофазного ИФА с помощью диагностических наборов R&D Diagnostics Inc. исходно и через 3, 6 месяцев гормональной заместительной терапии левотироксином натрия (1,6-1,8 мкг/кг массы тела). Для проверки достоверности и специфичности изменений маркеров использовали ROC-анализ. У пациентов с АИТ в дебюте заболевания выявлена избыточная продукция Th1-, Th2- и Tregs маркерных цитокинов при дефиците TGF-P1 (р < 0,05), ассоциированных со степенью тяжести аутоиммунного гипотиреоза. Концентрации IL-ф до начала терапии ТГ нарастала в группах прямо пропорционально увеличению степени тяжести гипотиреоза и коррелировала с объемом ЩЖ (r = 0,79; р < 0,01). Высокое содержание в сыворотке крови IL-4 и IL-13 в дебюте АИТ было сопряжено с тяжестью патологического процесса, но при этом доли цитокинов в общем балансе цитокинов были достоверно снижены и при АИТ преобладал 1Ы-ответ. Установлена дисфункция Treg клеток в дебюте АИТ, что подтверждается относительной и абсолютной гиперпродукцией IL-2 и IFNy (р < 0,05), но достоверным снижением баланса Treg / Th17 маркерных цитокинов в дебюте АИТ на фоне многократно повышенного IL-6 (р < 0,01), достоверно низкого TGF-P1 (р < 0,05), что способствовало преобладанию 1Ы7-клеток и относительной гипофункции Treg. Повышение IFNy (3 38,5 пг/мл по данным ROC-анализа) и IL-2 (> 20 пг/мл) свидетельствует о высокой степени активности эффекторной фазы иммунного ответа при АИТ, и являются одними из основных факторов, определяющих возможное прогрессирование патологического процесса. Прямые сильные корреляции показателей IL-10 с ТТГ (r = 0,76; р < 0,01) и с объемом ЩЖ (r = 0,94; р < 0,05) предполагают негативную роль IL-10 в патогенезе АИТ, которая может заключаться в индукции диффе-ренцировки Treg в 1Ы7-клетки последующим снижением числа Treg (Козлов В.А., 2016). Это подтверждено корреляциями тяжести течения аутоиммунного гипотиреоза с системными уровнями IL-10 и IL-17. Высокое содержание TNFa и TNFa sRI, TNFa sRII прямо коррелировало с тяжестью течения АИТ (r = 0,56; р < 0,05), что согласуется с данными о негативной роли цитокина в патогенезе заболевания за счет подавления им активности T-reg клеток и активации апоптоза тиреоцитов. ROC-анализ установил критическое значение для TNFa (> 22 пг/мл), при этом точность маркера составила 0,988; прогностическая ценность — 1,0; чувствительность — 0,976; специфичность — 1,0, что позволяет рекомендовать данный маркер для оценки активности аутоиммунного процесса в дебюте АИТ. Показатели TGF-P1 обратно коррелировали с тяжестью течения АИТ и объемом ЩЖ (r = - 0,61; р < 0,01),
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
а между TGF-ß1 и IL-22 обнаружена сильная прямая связь (г = 0,75; р < 0,01), что согласуется с данными о влиянии TGF-ß1 на процессы фиброзирования ЩЖ. IL-22 был в 3 раза выше показателей группы контроля и его уровень прямо коррелировал с тяжестью течения АИТ (г = 0,51; р < 0,01) и обратно - с ТТГ (г = - 0,50; р < 0,05). Полученное при ROC-анализе критическое значение TGF-ß1 ( < 18 пг/мл) прогностически значимо (1,0), чувствительность маркера составила 1,0; специфичность 0,78, что с высокой вероятностью позволяет использовать значение TGF-ß1 для прогноза прогрессирования фиброза тканей ЩЖ в дебюте АИТ Высокий системный уровень IL-8 (по данным ROC-анализа > 42 пг/мл, чувствительность 0,99; специфичность 1,0; прогностическая ценность 1,0) может являться дополнительным маркером сохранности функционирующего тиреоидного эпителия при АИТ, а динамическое снижение цитокина через 3 или 6 месяцев наблюдения было прогностически неблагоприятным фактором, ассоциированным с нарастанием гипофункции ЩЖ при манифестном и субклиническом течении АИТ (г = 0,55; р < 0,05). При анализе корреляций, между показателями сывороточных значений IL-8 и ТТГ в дебюте АИТ установлена средняя обратная связь (г = -0,585; г < 0,05), что логически согласуется с выше представленными данными.
Выводы. При АИТ параллельное нарастание показателей IL-6, IL-10, TNFa, TNFa sRI, TNFa sRII и IL-17 может служить критерием прогрессирования аутоиммунного воспаления ЩЖ и активации апоптоза тиреоцитов. Нарастающие в динамике уровни TNFa и его растворимых рецепторов при динамическом снижении исходно высокого уровня IL-8 и сохранении низкого TGF-ß1 — прогностически неблагоприятный фактор течения АИТ, свидетельствующий о прогрессировании фиброза тканей ЩЖ с последующим нарастанием ее гипофункции. Это может служить предиктором старта гормональной заместительной терапии ТГ при субклиническом течении гипотиреоза, а также в случаях беременности при АИТ
ИММУННЫЙ ОТВЕТ, ИНДУЦИРУЕМЫЙ Т-КЛЕТОЧНОЙ ВАКЦИНАЦИЕЙ, У БОЛЬНЫХ С ПРОГРЕССИРУЮЩЕЙ ФОРМОЙ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА
Иванова И.П., Шишков А.А.
Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
Установлено, что аутоиммунные Т-хелперные Th1-и ТИ17-клетки, специфичные к миелин-ассоцииро-ванным антигенам, играют ведущую роль в патогенезе рассеянного склероза (РС). Продукция аутоантиген-ре-активными Т-клетками провоспалительных цитокинов (IFNy, IL-2, TNFa) привлекает в очаг воспаления эф-фекторные цитотоксические клетки (макрофаги, CD8+ Т-клетки и др.) и, таким образом, запускает в ЦНС воспалительный, миелин-деструктивный процесс. Очевидно, что иммунотропное лечение РС должно быть направлено на инактивацию аутоиммунных Т- и B-лимфоцитов и подавление, осуществляемой иммунокомпетентными клетками, продукции провоспалительных медиаторов. Одним из наиболее перспективных подходов к патогенетическому лечению РС базируется на иммунизации пациента аутоиммунными Т-лимфоцитами. Ранее показано, что Т-вакцинация способна индуцировать генера-
цию антиидиотипических CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, стимулировать функциональную активность регулятор-ных CD4+CD25+Т-клеток и индуцировать синтез антиидиотипических антител. Целью настоящего исследования стала оценка иммунологической эффективности метода поликлональной Т-клеточной вакцинации в лечении прогрессирующей формы РС.
Клинические и лабораторные исследования проводились в соответствии с протоколом, утвержденным Ученым советом и Этическим комитетом Института клинической иммунологии СО РАМН. От каждого больного, участвующего в исследовании, было получено информированное согласие. В исследование было включено 39 больных (10 мужчин и 29 женщин) с церебро-спиналь-ной формой и вторично-прогрессирующим течением РС в возрасте от 23 до 54 лет. Способ приготовления индивидуальной Т-клеточной вакцины описан нами ранее. Схема иммунотерапевтического лечения Т-клеточной вакциной включала в себя 4 еженедельных подкожных вакцинации и последующие вакцинации с интервалом в 1 месяц в течение 2 лет. Для оценки антиген-индуцирован-ного пролиферативного ответа МНК (на основной белок миелина) использовался стандарный метод по включению [3Н] тимидина. Количественное содержание цито-кинов — №N7, Ш-4, ГЬ-10, ГЬ-17 и ГЬ-18 в образцах сыворотки крови оценивали иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест-наборов компании «Вектор-Бест». Для оценки относительного количества цитокин-продуцирующих клеток памяти использовали меченные Рег СР МА к CD4 и CD8 и конъюгированные с АРС МА к СD45RO. 1Шу- и Ш-4 - продуцирующие Т-клетки оценивали с помощью FITC МА к ШЫу и РЕ МА к ГЬ-4 (все реактивы еВ^шепсе, США). Процент позитивных от общего числа лимфоцитов клеток определяли на иммуноцитометре FACS СаИЬиг.
В нашем исследовании проведение Т-клеточной вакцинации сопровождалось значительным, более чем двукратным снижением пролиферативного ответа монону-клеарных клеток периферической крови на миелиновый антиген (5416±965 имп/мин до и 2479± 614 имп/мин после лечения), что может свидетельствовать об уменьшении функциональной активности миелин-реактивных лимфоцитов у этих пациентов. Также через 2 года после начала лечения у вакцинированных пациентов регистрировалось снижение уровня ШЫу (до лечения 144,0±46,7 пг/мл; после 25,2±13,0** пг/мл) и подъем уровня Ш-4 (до лечения 11,7±2,9 пг/мл; после 77,1±33,8** пг/мл) и ГЬ-10 (до лечения 4,4±1,24; после 11,7±4,0* пг/мл) в сыворотке крови, тогда как содержание ГЬ-17 и ГЬ-18 оставались на исходных значениях. Кроме того, у пациентов с РС после проведенного лечения наблюдалось достоверное снижение (в 2 раза) числа 1КМу-продуцирующих CD4+ (до лечения 8,6±3,64; после 3,72±1,23* (здесь и далее указан % от общего числа лимфоцитов) и СD8+ (до лечения 11,1±4,23; после 5,87±1,84*) Т-клеток памяти, а также значительное снижение (в 6 раз) числа CD4+Т-клеток памяти, способных продуцировать оба цитокина (до лечения 8,69±4,91; после 1,41±1,01**), что предполагает системную перестройку функции Т-клеток в сторону противовоспалительных иммунных реакций. Наши данные указывают на значительный иммунорегу-ляторный потенциал Т-клеточной вакцинации, которая в перспективе может найти широкое применение в лечении РС и других аутоиммунных заболеваний.
