CC BY
11УДК: 617.723 - 002:617 - 07
ФАКТОРЫ РИСКА РЕЦИДИВИРОВАНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА У ПАЦИЕНТОВ С HLA-B27-АССОЦИИРОВАННЫМ
ПЕРЕДНИМ УВЕИТОМ
Копаенко А. И., Иванова Н. В.
Кафедра офтальмологии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского», 295051, бульвар Ленина, 5/7, Симферополь, Россия.
Для корреспонденции: Копаенко Анна Ивановна доктор медицинских наук, доцент кафедры офтальмологии Медицинской академии имени С.И. Георгиевского, ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», e-mail: [email protected]
For correspondence: Anna I. Kopaenko, MD, Associate Professor of the Department of ophthalmology, Medical Academy named after S.I. Georgievsky of Vernadsky CFU, e-mail: [email protected]
Information about authors
Kopaenko A. I. http://orcid.org/0000-0002-0084-4268 Ivanova N. V. http://orcid.org/0000-0002-3527-4728
РЕЗЮМЕ
В работе представлены результаты обследования 54 больных (56 глаз) с первой атакой HLA-B27-ассоциированного переднего увеита (ПУ). Пациенты были под наблюдением три года и затем были разделены на две группы. В первую группу (нерецидивирующих ПУ) были включены больные, у которых в течение трех лет не наблюдалось рецидивов воспаления, во вторую группу (рецидивирующих ПУ) -больные, у которых на протяжении трех лет были рецидивы заболевания. Пациентам было проведено офтальмологическое, биохимическое и иммунологическое обследование. У пациентов в группе рецидивирующих ПУ определено повышение средних уровней ЦИК на 30%, эндогенной интоксикации на 10%, уменьшение ЛПС-связывающего потенциала гранулоцитов и моноцитов на 17% и 11%, среднего уровня анти-ЛПС-IgM на 25% по сравнению с нерицидивирующими ПЭУ.
Ключевые слова: передние эндогенные увеиты; рецидивы; биохимические и иммунологические показатели.
RISK FACTORS OF INFLAMMATORY PROCESS RECURRENCES IN PATIENTS WITH HLA-B27-ASSOCIATED ANTERIOR UVEITIS
Kopaenko А. I., Ivanova N. V.
Medical Academy named after S.I. Georgievsky of Vernadsky CFU, Simferopol, Russian Federation
SUMMARY
The results of the observation of 54 patients (56 eyes) with the first attack of HLA-B27-associated anterior uveitis (AU) are presented. The patients were followed for three years and then divided into two groups. Into the first group (non-recurrent AU) those patients were included who within three years did not have recurrence of inflammation; into the second group (recurrent AEU) - the patients who had AU recurrence within three years. Biochemical and immunological investigations were conducted for all patients. It was established that the patients in the second group had increased average levels of circulating immune complexes and endogenous intoxication - by 30% and 10% correspondingly, decreased average levels of LPS-binding capacity of granulocytes and monocytes - by 17% and 11% correspondingly, decreased average level of anti-LPS-IgM - by 25% compared to the indications for the patients of the first group.
Key words: anterior endogenous uveitis; recurrence; biochemical and immunological indexes.
Передние эндогенные увеиты (ПУ) составляют 5-15% в структуре глазной патологии. Они приводят к нетрудоспособности больных молодого возраста [1; 2; 3]. По данным исследователей, у 46-60% больных ПУ выявляется человеческий лейкоцитарный антиген В27 (human leukocyte antigen, HLA-B27) главного комплекса гистосов-местимости. Ассоциация между HLA-B27 и ПУ является одной из наиболее сильной среди HLA-ассоциированных заболеваний, что отмечено в работах отечественных и зарубежных ученых. ПУ у больных, которые являются носителями HLA-B27 называют ^А-В27-положительным или ЩА-В27-ассоциированным ПУ [1; 4; 5]. По
данным исследований в 40-60 % случаев ИЬА-Б27-ассоциированные ПУ носят рецидивирующий характер [3; 4; 5; 6]. Прогнозирование течения увеитов является важным фактором достижения стойкого клинического излечения и высоких функциональных показателей, поскольку повторные рецидивы заболевания приводят к развитию необратимых анатомо-морфологических изменений [7]. Во время проведения основного комплексного курса лечения необходимо прогнозировать дальнейшее течение заболевания для обоснования характера и длительности лечения, которое может предотвратить рецидивы [7]. При прогнозировании рецидивов в настоящее время большое вни-
2018, том 21, № 3
мание уделяется изменениям иммунного статуса пациента [7; 8]. Несмотря на многочисленные исследования биохимических и иммунологических критериев рецидивирования ПУ, сдвиги в системе антиэндотоксинового иммунитета, которые могут приводить к рецидивам воспаления, при ПУ до сих пор остается недостаточно изученным. Хотя показана роль как гуморального, как и клеточного антиэндотоксинового иммунитета в патогенезе ПУ [1; 9; 10].
Целью данной работы являлся анализ частоты рецидивов у больных ПУ, биохимических и иммунологических факторов риска рецидивирования процесса, на основе изучения состояния эндоток-синового иммунитета, уровней циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и эндогенной интоксикации.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В исследование было включено 54 больных (56 глаз) с НЬЛ-Б27-ассоциированным ПУ с первой атакой увеита. Пациенты были под наблюдением три года и затем были разделены на две группы. В первую группу (нерецидивирующих ПУ) были включены больные, у которых в течение трех лет не наблюдалось рецидивов воспаления, во вторую группу (рецидивирующих ПУ) - больные, у которых на протяжении трех лет были зафиксированы рецидивы заболевания. Возраст пациентов был от 16 до 70 лет (в среднем 41,6±9,8 лет). Большинство больных (79%) составили лица трудоспособного возраста. Мужчин было 30 (56%), женщин - 24 (44%). В контрольную группу вошло 97 практически здоровых лиц соответствующего пола и возраста. У 24 больных (43%) с HLA-B27-ассоциированным ПУ имелись системные заболевания, которые также связаны с носительством HLA-B27 [4].
Клинические и иммунологические параметры исследовались у пациентов при первом обращении, а затем каждые 3 месяца. Наряду с традиционными лабораторными исследованиями у пациентов определяли уровень эндогенной интоксикации [11; 12], содержание ЦИК в крови [13], фагоцитарную активность гранулоцитов периферической крови [14], уровни сывороточных антиэндотоксиновых антител (анти-ЛПС-IgA, анти-ЛПС-IgM и анти-ЛПС-IgG) [15]. Экспрессию CD14 на гранулоцитах и моноцитах периферической крови и эндотоксин-связывающий потенциал этих клеток определяли методом проточной лазерной цитофлюориметрии, используя в качестве флуоресцентных зондов мо-ноклональные антитела анти-CDH, конъюгиро-ванные с фикоэритрином (анти-CDH-PE IOTest; Immunotech Coulter Co., France) и коньюгат липо-полисахарида E. coli K235 с флюоресцеинизотио-цианатом (ЛПС-ФИТЦ) [16]. В отличие от МКА,
применение коньюгата ЛПС-ФИТЦ дает возможность выявлять весь репертуар эндотоксин-связы-вающих рецепторов клеточной поверхности, не занятых лигандом и находящихся в функционально активном состоянии [17].
Статистическую обработку количественных данных проводили методами вариационной статистики с вычислением типических значений (среднее арифметическое, медиана) и показателей изменчивости (ошибка среднего, ошибка медианы). Для сравнения количественных признаков в случае нормального закона распределения применяли критерий Стьюдента. В случае отличного от нормального закона распределения парное сравнение независимых выборок производили с использованием U-критерия Манна-Уитни (MannWhitney test). Все результаты оценивали при заданном граничном уровне ошибки первого рода (а) не выше 5% - р<0,05 (статистическая значимость не ниже 95%).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Из 54 пациентов, включенных в исследование у 21 больного (39%) в течение трех лет были отмечены рецидивы (2 группа), у 33 пациентов (61%) в течение данного периода рецидивов не наблюдалось (1 группа). При этом среднее количество рецидивов в год в этой группе пациентов было 1,87±0,19.
Результаты иммунологического и биохимического обследования в группах пациентов с ПУ представлены в таблице 1. Средний уровень ЦИК в 1 и 2 группе больных ПУ был соответственно на 17% и 47% выше, чем у лиц контрольной группы (p<0,05). При этом в группе пациентов, в которой наблюдались рецидивы, содержание ЦИК было на 30% выше, чем в группе нерецидивирующих ПУ (p<0,05). Среднее содержание молекул средней массы, которые являются маркером эндогенной интоксикации, определенное при длине волны 280 нм (МСМ280), у больных 1 и 2 группы было повышено соответственно на 8% (p<0,05) и 18% (p<0,05) относительно этого же показателя для контрольной группы (p<0,05), что указывает на наличие эндогенной интоксикации у пациентов с ПЭУ При сравнении МСМ280 между группами пациентов отмечено повышение среднего уровня МСМ280 у больных рецидивирующими ПУ на 10% по сравнению с нерецидивирующими ПЭУ (p<0,05).
У пациентов с ПУ обеих групп отмечалось значительное повышение содержания СРБ. Так средний уровень СРБ у больных 1 и 2 группы был соответственно повышен в 3,3 и 7 раза по сравнению с показателями контрольной группы (p<0,01), при этом в группе рецидивирующих ПУ средний уровень СРБ был в 2,2 раза выше, чем в группе не-рецидивирующих ПУ (p<0,05).
Таблица 1
Уровни ЦИК, молекул средней массы, СРБ, фагоцитоза и общих иммуноглобулинов в сыворотке крови в группах больных с HLA-B27-ассоциированным ПУ и контрольной группе (М±m)
Показатели 1 группа(нере-цидивирующие ПУ) (п=33) 2 группа(рецидивирующие ПУ) (п=21) Контрольная группа (п=97)
ЦИК (усл.ед.) 14,9±2,3 р<0,05 р1<0,05 18,7±2,2 р<0,05 р,<0,05 12,7±1,6
Молекулы средней массы (усл. ед.) 260 нм 0,075±0,004 р>0,05 р1>0,05 0,082±0,003 р>0,05 р,>0,05 0,071±0,004
280 нм 0,138±0,005 р>0,05 р1<0,05 0,154±0,004 р<0,05 р,<0,05 0,128±0,006
СРБ (мг/л.) 8,8±2,4 р<0,01 р1<0,05 18,9±3,5 р<0,001 р,<0,05 2,7±0,7
Фагоцитоз Фагоцитарный индекс (% клеток) 20,40±2,62 р<0,05 р,>0,05 19,31±1,96 р<0,05 р,>0,05 25,5±3,9
Фагоцитарное число Интенсивность свечения УЕ 7,16±0,4 р>0,05 р,>0,05 6,98±0,37 р>0,05 р,>0,05 6,9±0,4
1д А, г/л 2,2±0,1 р>0,05 р,>0,05 1,9±0,1 р>0,05 р,>0,05 2,0±0,1
1д М, г/л 2,1±0,2 р>0,05 р,>0,05 1,9±0,1 р>0,05 р,>0,05 1,8±0,1
1д С, г/л 11,8±0,3 р>0,05 12,2±0,4 р>0,05 10,8±0,3
Примечание: р - уровень статистической значимости различий соответствующих показателей по сравнению с контрольной группой; р1 - уровень статистической значимости различий соответствующих показателей между 1 и 2 группой.
При исследовании интенсивности фагоцитоза гранулоцитов периферической крови, определено снижение фагоцитарного индекса в 1 и 2 группе соответственно на 20% и 24% по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Однако отличия между группами были статистически незначимыми. Средний уровень общих иммуноглобулинов в группах пациентов с НЬЛ-Б27-ассоциированным ПУ статистически значимо не отличался от показателей контрольной группы, хотя прослеживалась тенденция к повышению 1дО.
Результаты определения антиэндотоксинового статуса больных НЬЛ-Б27-ассоциированным ПУ представлены в таблице 2.
2018, том 21, № 3
Таблица 2
Уровни сывороточных антиэндотоксиновых антител и эндотоксин-связывающий потенциал лейкоцитов в группах больных HLA-B27-ассоциированным ПУ и лиц контрольной группы (M±m)
Показатели 1 группа (нере-цидивирующие ПЭУ) (п=33) 2 группа(рецидивирующие ПЭУ) (п=21) Контрольная группа (п=97)
Сывороточные антиэндотоксиновые антитела (усл. ед. оптич. плотн.) Анти-ЛПС-1дА 0,454±0,054 р<0,05 р1 >0,05 0,467±0,047 р<0,05 р,>0,05 0,356±0,029
Анти-ЛПС-1дМ 0,210±0,029 р<0,05 р,<0,05 0,128±0,023 р<0,05 р,<0,05 0,331±0,024
Анти-ЛПС-1дС 0,312±0,056 р>0,05 р1>0,05 0,305±0,067 р>0,05 р1>0,05 0,348±0,021
CD14, усл. ед. флуор. Моноциты 20,49±1,46 р<0,05 р1 >0,05 18,32±1,41 р<0,05 р,>0,05 29,75±1,76
Гранулоциты 0,78±0,04 р<0,05 р1 >0,05 0,75±0,04 р<0,05 р,>0,05 0,88±0,05
ЭТ-связывающий потенциал, усл. ед. флуор Моноциты 1,66±0,12 р<0,05 р1<0,05 1,3±0,11 р<0,05 р,<0,05 2,11±0,15
Гранулоциты 1,05±0,04 р<0,05 р1<0,05 0,91±0,05 р<0,05 р1<0,05 1,23±0,06
Примечание: р - уровень статистической значимости различий соответствующих показателей по сравнению с контрольной группой; р1 - уровень статистической значимости различий соответствующих показателей между 1 и 2 группой.
Средней уровень анти-ЛПС-1дЛ в обеих группах пациентов с ПУ был в 1,3 раза выше, чем в контрольной группе (р<0,05), что свидетельствует о повышении антигенной нагрузки. В 1 и 2 группах пациентов с ПУ средней уровень анти-ЛПС-1дМ был соответственно ниже в 1,6 и 2,6 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05). В группе рецидивирующих ПУ среднее содержание анти-ЛПС-1дМ было на 25% ниже, чем в группе нереци-дивирующих ПУ (р<0,05). В 1 и 2 группе пациентов с ПЭУ средней уровень экспрессии СБ14 был соответственно снижен на моноцитах на 31% и 38%; на гранулоцитах - на 11% и 15%, по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Достоверных различий между группами больных при оценке уровней экспрессии СБ14 на моноцитах и гранулоцитах не было.
Средний уровень эндотоксин-связывающего потенциала моноцитов у пациентов 1 и 2 групп был соответственно ниже соответственно на 21% и 38% по сравнению с этими показателями для контрольной группы (р<0,05). Также у больных ПУ 1 и 2 группы отмечено снижение среднего уровня эн-дотоксин-связывающего потенциала гранулоцитов на 15% и 26% по сравнению с контрольной группой (р<0,05). У пациентов 2 группы средний уровень эндотоксин-связывающего потенциала моноцитов и гранулоцитов был соответственно ниже на 17% и 11%, чем у больных 1 группы (р<0,05).
ОБСУЖДЕНИЕ
Данные, полученные в ходе исследования, подтверждают результаты предыдущих работ, которые выявили выраженные сдвиги биохимического и
иммунологического статуса у пациентов с рецидивирующим ПУ Так, средний уровень ЦИК, молекул средней массы (они являются маркером интенсивности эндогенной интоксикации) и СРБ был повышен в обеих группах пациентов с ПУ Однако, в группе больных с рецидивирующими ПУ, эти показатели были соответственно на 30%, 10% и 2,2 раза выше, по сравнению с показателями в группе нерецидивирующих ПУ (р<0,05).
Последние эпидемиологические и клинические исследования доказывают роль эндотоксина грамотрицательных бактерий в эпиопатогенезе ПУ В связи с этим представлялось обоснованным изучить в сравнении состояние антиэндотоксино-вого иммунитета у больных рецидивирующими и нерецидивирующими ПУ [1, 9, 10]. В ходе исследования определено, что в группе рецидивирующих ПУ среднее содержание анти-ЛПС-1дМ было на 25% ниже, чем в группе нерецидивирующих ПУ (р<0,05). Учитывая, что наибольшим протек-тивным эффектом по отношению к эндотоксину, который преодолел иммунный барьер кишечника и попал в системный кровоток, обладают именно анти-ЛПС-1дМ, пониженное содержание анти-ЛПС-1дМ можно рассматривать как неблагоприятный фактор для рецидивирования увеита.
У пациентов 2 группы средний уровень эндо-токсин-связывающего потенциала моноцитов и гранулоцитов был соответственно ниже на 17% и 11%, чем у больных 1 группы (р<0,05). Снижение количества эндотоксин-связывающих рецепторов, которые находятся в активном состоянии, может быть связано со снижением их экспрессии или с тем, что они заняты лигандом. Последнее обстоятельство может быть обусловлено перегрузкой рецепторного аппарата большими количеством ЛПС, молекулы которого потенциально способны блокировать ЛПС-связывающие рецепторы, делая их недоступными для взаимодействия с флюоресцентным зондом. В связи с этим снижение эндоток-син-связывающего потенциала моноцитов и грану-лоцитов можно расценивать как неблагоприятный прогностический признак.
Таким образом, проведенные исследования позволили выявить нарушения в биохимических и иммунологических показателях у больных ПУ, которые могут приводить к рецидивированию воспалительного процесса.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
У пациентов с рецидивирующими НЬЛ-Б27-ассоциированными ПУ определено повышение средних уровней ЦИК на 30%, эндогенной интоксикации на 10%, уменьшение ЛПС-связывающего потенциала гранулоцитов и моноцитов на 17% и 11%, снижение среднего уровня анти-ЛПС-1дМ на 25% по сравнению с группой больны нерициди-
вирующими ПУ. Определение показателей ЦИК, эндогенной интоксикации, антиэндотоксинового иммунитета у пациентов с ПУ является важным для прогнозирования характера течения воспалительного процесса.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
The authors have no conflict of interests to declare.
ЛИТЕРАТУРА
1. Копаенко А.И. Значение изменений общего и антиэндотоксинового иммунитета в патогенезе HLA-B27 ассоциированных передних эндогенных увеитов. Таврический медико-биологический вестник. 2013;16(3):94-99.
2. Савко В.В., Нарцисина Н.Н., Коновалова Н.В. и др. Эффективность препарата лонгидаза при пластических иридоциклитах туберкулезной этиологии. Офтальмологический журнал. 2007;6:4-6.
3. Agrawal R.V., Murthy S., Sangwan V. Current approach in diagnosis and management of anterior uveitis Indian J Ophthalmol. 2010;58(1):11-19. doi: 10.4103/0301-4738.58468.
4. Копаенко А.И. Клинические и иммунологические особенности ЩА-В27-ассоциированных передних увеитов. Офтальмология. Восточная Европа. 2012;1(12):46-54.
5. Paivonnsalo-Hietanen T., Vaahtoranta-Lehtonen H., Tuominen J. et al. Uveitis survey at the University eye clinic in Turku. Acta Ophthalmologica. 2009;72(4):505-12. doi: 10.1111/j. 1755-3768.1994. tb02805.x.
6. Agnani S., Choi D., Martin T.M. et al. Gender and laterality affect recurrences of acute anterior uveitis. Br J Ophthalmol. 2010;94(12):1643-47. doi: 10.1136/bjo.2009.172312.
7. Ченцова О.Б. Клинико-иммунологические критерии прогноза течения увеитов. Вестник офтальмологии. 1999;115(2):23-25.
8. Бездетко П.А., Байчук Н.Ю. Состояние Т-и В- системы иммунитета при рецидивирующих эндогенных увеитах. Офтальмологический журнал. 2001;(3):29-32.
9. Вышегуров Я.Х., Аниховская И.А., Батманов Ю.Е. и др. Кишечный эндотоксин в патогенезе воспалительной патологии глаз и антиэндоток-синовая составляющая ее лечения. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2007:112-14.
10. Misiuk-Hojlo M., Miedzybrodzki R., Grzybowski A. et al. Elevated levels of anti-endotoxin antibodies in patients with bilateral idiopathic acute anterior uveitis. Acta Ophthalmologica. 2011;89(3):283-88. doi: 10.1111/j.1755-3768.2010.01969.x.
11. Оболевский С.В., Малахова М.Я., Ершов А.Л. Диагностика стадии эндогенной интоксикации и дифференциальное применение мето-
2018, том 21, № 3
дов эфферентной терапии. Вестник хирургии. 1991;(3):95-100.
12. Ковалевский А.Н., Нифантьев О.Е. Замечания по скрининговому методу определения молекул средней массы. Лаб. дело. 1989;10:35-39.
13. Гриневич Ю.А., Каменец Л.Я. Основы клинической иммунологии опухолей. Киев: Здоровье; 1986:56-57.
14. Гордиенко А.И., Белоглазов В.А., Химич Н.В. Метод определения поглинальной активности нейтрофилов и моноцитов периферической крови. Информационное письмо про нововведение в системе здравоохранения. К.: Укрмедпатентинформ; 2009.
15. Гордиенко А.И., Бакова А.А., Химич Н.В. и др. Уровни естественных антител к липополиса-харидам энтеробактерий у постоянных доноров республики Крым. Иммунология и аллергология. 2003;(4):31-36.
16. Гордиенко А.И., Белоглазов В.А., Химич Н.В. Метод определения эндотоксин-связываю-щих рецепторов на моноцитах и гранулоцитах периферической крови. Информационное письмо про нововведение в системе здравоохранения. К.: Укрмедпатентинформ; 2010.
17. Гордиенко А.И. Улучшенный метод получения флуоресцентного зонда для определения липополисахарид-связывающих рецепторов методом проточной лазерной цитофлуориметрии. Таврический медико-биологический вестник. 2007;10(4):156-60.
REFERENCES
1. Kopayenko A.I. Importance of changes in general and antiendotoxin immunity in pathgenesis of HLA-B27-associated anterior uveitis. Tavricheskiy Mediko-Biologicheskiy Vestnik. 2013;16(3):94-9. (In Russ).
2. Savko V.V., Narcisina N.N., Konovalova N.V. Effectiveness of lonhidaze in tuberculosis etiology plastic iridocyclitis. Oftal'mologicheskii zhurnal. 2007; 6:4-6. (In Russ).
3. Agrawal R.V., Murthy S., Sangwan V. Current approach in diagnosis and management of anterior uveitis Indian J Ophthalmol. 2010;58(1):11-19. doi: 10.4103/0301-4738.58468.
4. Kopayenko A.I. Clinical and immunological features of HLA-B27-associated anterior uveitis. Ophthalmology. Eastern Europe. 2012;1(12):46-54. (In Russ).
5. Paivonnsalo-Hietanen T., Vaahtoranta-Lehtonen H., Tuominen J. et al. Uveitis survey at the University eye clinic in Turku. Acta Ophthalmologica. 2009;72(4):505-12. doi: 10.1111/j. 1755-3768.1994. tb02805.x.
6. Agnani S., Choi D., Martin T.M. et al Gender and laterality affect recurrences of acute anterior uveitis. Br J Ophthalmol. 2010;94 (12):1643-47. doi: 10.1136/bjo.2009.172312.
7. Chencova O.B. Clinical and immunological criteria for the prognosis of uveitis. Vestnik oftal'mologii. 1999;115(2):23-25. (In Russ).
8. Bezdetko P.A., Baychiuk N.U. Condition of the T-and B-system of immunity in recurrent endogenous uveitis. Oftal'mologicheskii zhurnal. 2001;3:29-32.
9. Vishegurov Y.H., Anihovskaya I.A., Batmanov U.E. Intestinal endotoxin in the pathogenesis of inflammatory pathology of the eye and antiendotoxic component of its treatment. Patologicheskaya fiziologiya i eksperimental'naya terapiya. 2007:112-14. (In Russ).
10. Misiuk-Hojlo M., Miedzybrodzki R., Grzybowski A. et al. Elevated levels of anti-endotoxin antibodies in patients with bilateral idiopathic acute anterior uveitis. Acta Ophthalmologica. 2011;89(3):283-88. doi: 10.1111/j.1755-3768.2010.01969.x.
11. Obolevskii S.V., Malakhova M.Y., Ershov A.L. Diagnosis of the stage of endogenous intoxication and differential application of efferent therapy. Vestnik khirurgii. 1991;(3):95-100. (In Russ).
12. Kovalevskii A.N., Nifant'ev O.E. Remarks on the screening method for the determination of mediummass molecules. Laboratornoe delo. 1989;10:35-39. (In Russ).
13. Grinevich Y.A., Kamenets L.Y. Basics of clinical immunology of tumors. Kiev: Zdorov'e; 1986:56-57. (In Russ).
14. Gordienko A.I., Beloglazov V.A., Khimich N.V. Method for determination of neutrophils and monocytes peripheral bloodi. Information letter about innovation in the health care system. K.: Ukrmedpatentinform; 2009. (In Russ).
15. Gordienko A.I., Bakova A.A., Khimich N.V. Levels of natural antibodies to enterobacteria lipopolysaccharides in constant donors of the Republic of Crimea. Immunologiya i allergologiya. 2003;(4):31-36. (In Russ).
16. Gordienko A.I., Beloglazov V.A., Khimich N.V. Method for the determination of endotoxin-binding receptors on monocytes and peripheral blood granulocytes. Information letter about innovation in the health care system. K.: Ukrmedpatentinform; 2010. (In Russ).
17. Gordienko A.I. Improved method of obtaining a fluorescent probe for determining lipopolysaccharide-binding receptors by flow laser cytofluorimetry. Tavricheskiy Mediko-Biologicheskiy Vestnik. 2007;10(4):156-60. (In Russ).
