CC BY
18
© Коллектив авторов, 2022
Талаев В.Ю., Воронина Е.В., Светлова М.В., Заиченко И.Е., Бабайкина О.Н.
Эффекты взаимодействия циркулирующих CD4+CСR6+-Т-клеток с В-лимфоцитами
Федеральное бюджетное учреждение науки «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 603950, г. Нижний Новгород, Российская Федерация
Резюме
Введение. Хемокиновый рецептор ССЯ6 экспрессируется на части зрелых циркулирующих СБ4+СВ45КО+-Т-лимфоцитов и дает им потенциальную возможность мигрировать в пейеровы бляшки, воспаленную слизистую желудочно-кишечного тракта и кожу. В группу СБ4+СБ45КО+ССК6+-Т-лимфоцитов крови входят клетки с различными функциями, в частности провоспалительные Т-хелперы-17 (ТИ17) и ТЫ, а также противовоспалительные регуляторные РохР3+-Т-клетки. Кроме того, в эту группу лимфоцитов входит небольшое количество клеток с фенотипом фолликулярных Т-хелперов (фТЪ) -профессиональных стимуляторов гуморального иммунного ответа.
Цель исследования - оценить способность СБ4+ССЯ6+-Т-клеток крови оказывать помощь В-лимфоцитам, а также ответную реакцию субпопуляций ТЪ на взаимодействие с В-клетками.
Материал и методы. Выделяли общий пул СБ4+-Т-клеток, СБ4+СБ45КО+ССК6+-Т-клетки или наивные ТИ (нТЪ) из крови взрослых здоровых доноров, культивировали их с аллогенными В-лимфоцитами и оценивали продукцию иммуноглобулинов и реакцию Т-клеток.
Результаты. Показано, что зрелые СБ4+ССК6+-Т-клетки стимулируют продукцию ^М и в смешанной культуре Т- и В-лимфоцитов сильнее, чем общий пул СБ4+-Т-клеток или нТИ. Взаимодействие СБ4+ССЯ6+-Т-клеток с В-лимфоцитами приводит к экспансии ТИ17 и ТЫ/ТЫ7 в культуре без заметного прироста количества ТИ1 и фТИ. В то же время нТИ или неразделенные СБ4+-Т-клетки, активированные контактом с аллоген-ными В-лимфоцитами, преимущественно дифференцируются в фТИ-подобные клетки.
Заключение. СБ4+ССЯ6+-Т-клетки эффективно оказывают помощь В-лимфоцитам, что сопровождается экспансией ТИ17 и ТЫ/ТЫ7, но не ТИ1 и фТИ.
Ключевые слова: иммунный ответ; фолликулярные Т-хелперы; Т-хелперы-17; В-клетки; продукция антител
Статья получена 15.03.2022. Принята в печать 05.05.2022.
Для цитирования: Талаев В.Ю., Воронина Е.В., Светлова М.В., Заиченко И.Е., Бабайкина О.Н. Эффекты взаимодействия циркулирующих СБ4+ССЯ6+-Т-клеток с В-лимфоцитами. Иммунология. 2022; 43 (3): 266-276. БО1; https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-3-266-276
Финансирование. Исследование поддержано РФФИ, проект № 18-015-00028.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Дизайн исследования, написание статьи - Талаев В.Ю.; очистка, культивирование и окраска клеток - Воронина Е.В.; очистка клеток, проточная цитометрия - Светлова М.В.; культивирование и окраска клеток, ИФА - Заиченко И.Е.; культивирование клеток, ИФА - Бабайкина О.Н.
Для корреспонденции
Талаев Владимир Юрьевич -доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией клеточной иммунологии ФБУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, Нижний Новгород, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1993-0622
Talayev V.Yu., Voronina E.V., Svetlova M.V., Zaichenko I.Ye., Babaykina O.N.
Effects of interaction between circulating CD4+CCR6+ T cells and B-lymphocytes
Academician I.N. Blokhina Nizhny Novgorod Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology of Russian Federal Consumer Rights Protection and Human Health Control Service, 603950, Nizhny Novgorod, Russian Federation
Abstract
Introduction. The chemokine receptor CCR6 is expressed on a portion of mature circulating CD4+CD45RO+-T-lymphocytes and gives them the potential to migrate into Peyer's patches, inflamed gastrointestinal mucosa, and skin. The group of CD4+CD45RO+CCR6+ blood T-lymphocytes includes cells with various functions, in particular, pro-inflammatory T-helper-17 (Th17) and Th1, as well as anti-inflammatory FoxP3+ regulatory T cells. In addition, this group includes a small number of cells with the phenotype of follicular T-helper cells (fTh), professional stimulators of the humoral immune response.
The aim of the study was to evaluate the ability of blood CD4+CCR6+ T cells to help B-lymphocytes, as well as the response of T-helper subgroups to interaction with B cells.
Material and methods. Total pool of CD4+ T cells, CD4+CD45RO+CCR6+ T cells, or naive T-helper cells (nTh) were isolated from the blood of healthy adult donors, cultured with al-logeneic B lymphocytes, and immunoglobulin production and T cell response were evaluated.
Results. It has been shown that mature CD4+CCR6+ T cells stimulate the production of IgM and IgG in mixed culture of T and B lymphocytes more strongly than nTh or total pool of CD4+ T cells. The interaction of CD4+CCR6+ T cells with B lymphocytes led to the expansion of Th17 and Th1/Th17 cells in culture without a noticeable increase in the number of Th1 and fTh cells. At the same time, nTh or undivided CD4+ T cells, activated by contact with allo-geneic B lymphocytes, preferentially differentiate into fTh-like cells.
Conclusion. CD4+CCR6+ T cells effectively help B-lymphocytes, which is accompanied by the expansion of Th17 and Th1/Th17 cells, but not Th1 and fTh cells.
Keywords: immune response; follicular T-helper cells; T-helper-17 cells; B cells; antibody production
Received 15.03.2022. Accepted 05.05.2022.
For citation: Talayev V.Yu., Voronina E.V., Svetlova M.V., Zaichenko I.Ye., Babaykina O.N. Effects of interaction between circulating CD4+CCR6+ T cells and B-lymphocytes. Immunologiya. 2022; 43 (3): 266-76. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2022-43-3-266-276
Funding. The study was supported by RFBR, project No. 18-015-00028. Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors contribution. Study design, article writing - Talayev V.Yu.; purification, cultivation and staining of cells -Voronina E.V.; cell purification and flow cytometry - Svetlova M.V.; cultivation and staining of cells, ELISA -Zaichenko I.Ye.; cell cultivation, ELISA - Babaykina O.N.
For correspondence
Vladimir Yu. Talayev -MD, PhD, Professor, Head of the Laboratory of Cellular Immunology, Academician I.N. Blokhina Nizhny Novgorod SRIEM of Rospotrebnadzor, Nizhny Novgorod, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1993-0622
Введение
СБ4+ССК6+-клетки крови - это относительно малочисленная группа зрелых СБ45КО+-Т-лимфоцитов, объединенных способностью к направленной миграции в пейеровы бляшки, воспаленную слизистую желудка и кишечника, а также в кожу. Такое направление миграции определяется продукцией в этих тканях хемокина ССЬ20 - лиганда рецептора ССЯ6 [1-4]. В функциональном отношении СБ4+ССЯ6+-Т-лимфоциты крови являются гетерогенной группой и состоят из представителей различных субпопуляций. Из клеток с про-воспалительными свойствами в состав СБ4+ССЯ6+-Т-лимфоцитов входят практически все циркулирующие ТЫ7, часть циркулирующих ТЫ, а также ТЫ ЛЬ 17 [5, 6], которые демонстрируют смешанные свойства двух первых субпопуляций: экспрессируют мастер-регулятор созревания ТЫ7 ядерный фактор ЯОКу^ хе-мокиновый рецептор ССЯ6 и ключевой ТЫ7-цитокин интерлейкин-17А (ИЛ-17А) одновременно с мастер-регулятором ТЫ Т-Ье^ хемокиновым рецептором СХСЯЗ и ключевым ТЫ-цитокином интерфероном-у (ИФН-у) [7]. Также в состав СБ4+ССЯ6+-Т-лимфоцитов входит часть циркулирующих зрелых регуляторных БохР3+-
Т-клеток (Трег), отвечающих за подавление иммунного ответа и воспаления [8]. Кроме того, малая часть СВ4+СБ45КО+ССК6+-Т-лимфоцитов крови в норме экспрессирует рецептор CXCR5, причем при гастрите и язвенной болезни, ассоциированной с Helicobacter pylori, доля CXCR5+-клеток в этой группе лимфоцитов увеличивается [9]. Экспрессия рецептора CXCR5 характерна для фолликулярных Th-клеток (фТС) и обеспечивает локализацию этих Т-хелперов в В-клеточных зонах лимфоидных органов, где продуцируется ли-ганд рецептора CXCR5 - хемокин CXCL13. Как известно, фТЪ являются профессиональными стимуляторами гуморального иммунного ответа. Они участвуют в формировании зародышевых центров фолликулов, поддерживают пролиферацию распознавших антиген В-лимфоцитов и защищают их от апоптоза, управляют дифференцировкой В-клеток в долгоживущие плазма-циты и В-клетки иммунной памяти, а также стимулируют переключение изотипов антител и созревание их аффинитета [10-14]. Следует отметить, что определенную помощь В-лимфоцитам могут оказывать не только общеизвестные стимуляторы гуморального ответа,
такие как фТИ и ТИ2, но и другие СБ4+-Т-клетки. Так, классические стимуляторы клеточного иммунного ответа ТИ1 могут усиливать продукцию ^М, IgA, IgG1, и IgG3 человека [15], хотя повышенная активность ТИ1 ведет к угнетению гуморального иммунного ответа и даже к гибели В-лимфоцитов [16]. Созревающие в слизистой БохР3+-Трег могут стимулировать локальную продукцию ^А, угнетая при этом продукцию IgG [17-19]. Наконец ТИ17 могут стимулировать синтез ^М, IgG и ^А [20] и продуцировать ИЛ-21, который также является ключевым цитокином фТИ [13]. К тому же ТИ17 демонстрируют выраженную пластичность: в различных условиях они могут частично или полностью утрачивать свои свойства и превращаться в ТИ1/ ТИ17, ТЫ, Трег [7, 21, 22] и фТИ [23]. Так, в модели на мышах с мечеными ТИ17, у которых ген флуоресцентного белка УЕР экспрессируется одновременно с геном 1117А, показано, что ТИ17, мигрировавшие в пейеровы бляшки кишечника, могут приобретать фенотип фТИ, причем деплеция ТИ17 подавляет продукцию ^А в ответ на поступающий из кишечника антиген [23]. В модели ТИ17-индуцированного экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита ТИ17 в оболочках мозга в условиях тесного контакта с В-лимфоцитами экс-прессируют Вс1-6 - ключевой ядерный фактор фТИ, и стимулируют формирование эктопической лимфоидной ткани, приобретение В-клетками фолликулярного фенотипа и переключение изотипов антител [24]. В данной работе мы оценили способность СБ4+СБ45КО+ССК6+-Т-клеток крови оказывать помощь В-лимфоцитам и попытались идентифицировать вовлеченные в этот процесс субпопуляции ССЯ6+-Т-хелперов. Показано, что циркулирующие СБ4+СБ45КО+ССК6+-Т-клетки стимулируют продукцию антител в аллогенной смешанной культуре Т- и В-лимфоцитов сильнее, чем наивные Т-хелперы или неразделенные циркулирующие СБ4+-Т-клетки, причем взаимодействие зрелых СБ4+ССЯ6+-Т-клеток с В-лимфоцитами приводит к экспансии ТИ17 и ТЫ/ТЫ7 в культуре без заметного прироста уровня Вс1-6 и количества клеток с фенотипом фТИ.
Материал и методы
Характеристика доноров. В исследовании в качестве доноров периферической (венозной) крови приняли участие 25 здоровых добровольцев от 25 до 58 лет. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора (протокол № 1 от 12 февраля 2020 г.) и проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого». Письменное информированное согласие было получено от каждого донора перед забором крови.
Магнитная сепарация. Мононуклеарные клетки периферической крови (МНПК) выделяли из гепари-низированной крови доноров центрифугированием над слоем Диаколл-1077 (ДиаМ, Россия). Общий пул
СБ4+-Т-клеток, HTh и B-клетки выделяли из МНПК магнитной сепарацией с негативной селекцией, используя наборы EasySep Human CD4+ Т Cell Isolation Kit, EasySep Human Naïve CD4+ T Cell Isolation Kit и EasySep Human B Cell Enrichment Kit (StemCell Technologies, Канада), в соответствии с инструкциями производителя. CD4+CCR6+-Т-клетки выделяли из общего пула очищенных CD4+-T-лимфоцитов магнитной сепарацией с позитивной селекцией, используя отдельные реагенты из набора EasySep Human Th17 Cell Enrichment Kit (StemCell Technologies, Канада), как описано ранее [6]. Для этого CD4+-T-клетки в изотоническом фосфатном солевом буфере (PBS) с 2 % инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) (PAA Laboratories, Австрия) и 1 мМ этилендиамин-тетрауксусной кислоты (ЭДТА) инкубировали 5 мин при комнатной температуре с EasySep Human CCR6+ Positive Selection Cocktail II (StemCell Technologies, Канада), способным связывать CCR6 с магнитными бусами. Затем к клеткам добавляли магнитные бусы EasySep Releasable RapidSpheres (StemCell Technologies, Канада) и инкубировали 5 мин. Объем суспензии доводили до 2,5 мл и отделяли связавшиеся с бусами клетки на магните EasySep (StemCell Technologies, Канада). Ре-суспендировали полученные клетки в PBS с 2 % ЭТС и 1 мМ ЭДТА и вновь разделяли на магните для избавления от остатков CCR6--клеток. Затем отделяли магнитные бусы от поверхности клеток с помощью EasySep Release Buffer (StemCell Technologies, Канада) и удаляли свободные бусы с помощью магнита. Полученные клетки дважды отмывали и ресуспендировали в среде RPMI-1640 (Gibco, Великобритания) с 10 % ЭТС. Чистоту клеток оценивали с помощью лазерной проточной цитометрии (см. ниже).
Смешанные культуры Т- и В-клеток. CD4+-T-клетки, н1Ъ или CD4+CCR6+-T-клетки высевали с алло-генными B-лимфоцитами в 96-луночные круглодонные планшеты (Costar, США) в среде RPMI-1640 с 10 % ЭТС. Кроме того, высевали контрольные монокультуры всех используемых клеток. B-клетки высевали по 2,5 • 105 клеток на лунку, T-клетки - по 5 • 104 клеток на лунку. Конечный объем во всех лунках составлял 200 мкл. Культуры инкубировали 5 сут при 37 °C и 5 % CO2. Затем клетки из культур собирали для анализа фенотипа с помощью лазерной проточной цитометрии. Среду из культур также собирали и оценивали в ней концентрацию общего IgG и IgM с помощью наборов «IgG общий-ИФА-БЕСТ» и «IgM общий-ИФА-БЕСТ» (Вектор-Бест, Россия) в соответствии с инструкциями производителя.
Фенотипический анализ. Для контроля эффективности магнитной сепарации аликвоты свежевыделен-ных Т-клеток ресуспендировали в PBS с 0,09 % NaN3 и окрашивали флуоресцентно меченными моноклональ-ными антителами (МкАт) к молекулам CD4 (клон ЛТ4, Сорбент, Россия), CD45RO (UCHL1, BioLegend, США), CD196/CCR6 (R6H1, eBioscience, США) или CD45RA (2H4-RD1, Beckman Coulter, США) в течение 20 мин при 4 °C. Очищенные В-клетки в аналогичных условиях окра-
Рис. 1. Репрезентативные результаты контроля чистоты клеток, выделенных магнитной сепарацией
А - СВ4+-Т-клетки; Б - нТН; В - СВ4+ССК6+-Т-клетки; Г - В-клетки. Указана доля целевых групп от общего количества клеток.
э
98,9 %
R2
é
CD4
t
á
I.;:--'
в
D
C
1
■ft .. Wi-.t'-il- - i.' 98,5 % R2
->- CD4
©
99,4 %
R2 J
->-CD4
90,5 % R3
->- CD45RO
99,0 %
->-CD19
шивали МкАт к молекулам CD45 и CD19 (SJ25C1, BD Biosciences, США). Затем клетки отмывали, фиксировали в 1 % растворе параформальдегида (Sigma, США) и анализировали на проточном цитофлуориметре FACSCalibur (BD Biosciences, США), гейтируя лимфоциты по показателям прямого и бокового светорассеивания (FSC/SSC).
Клетки из смешанных и контрольных культур отмывали, ресуспендировали в PBS с 0,09 % NaN3 и окрашивали МкАт к молекулам CD4 (ЛТ4, Сорбент, Россия), CD45RO (UCHL1, BioLegend, США), CD185/ CXCR5 (MU5UBEE, eBioscience, США), CD197/CCR7 (3D 12, eBioscience, USA). В отдельных экспериментах также использовались МкАт к молекулам CD278/ ICOS, CD279/PD-1 и CD134/OX-40 (eBioscience, США). Для оценки экспрессии ядерного фактора Bcl-6 клетки окрашивали МкАт к CD4 и CXCR5, фиксировали и пер-меабилизировали с помощью набора FoxP3 Fixation Permeabilization Kit (eBioscience, США) в соответствии с инструкциями производителя и, затем, окрашивали МкАт к Bcl-6 (BCL-UP, eBioscience, США). Анализ проводили на проточных цитофлуориметрах FACSCalibur или FACSCanto II (BD Biosciences, США). Клетки последовательно выделяли в общий гейт лимфоцитов и лимфобластов, в гейт CD4+-клеток, а затем разделяли клетки этого гейта на малые лимфоциты и лимфобла-сты. Квадранты для каждого типа гейтированных клеток устанавливали по контролям окрашивания, допуская присутствие < 0,35 % клеток в любом квадранте, соответствующем отсутствующему в контроле антителу.
Оценка внутриклеточных цитокинов. В 5-суточ-ные смешанные культуры Т- и В-клеток и в контрольные монокультуры Т-клеток вносили по 25 нг/мл форбол-12-миристат-13-ацетата (ФМА) (Serva, Германия), 1 мкг/мл иономицина (Sigma, США) и 5 мкг/мл брефел-дина А (BioLegend, США). Культуры инкубировали 4 ч при 37 °C и 5 % CO2, затем клетки собирали, отмывали и окрашивали МкАт к СD4 (ЛТ4, Сорбент, Россия) и CD19 (HIB19, eBioscience, США). После этого клетки фиксировали в 200 мкл 4 % параформальдегида, отмывали 0,1 % раствором сапонина (Sigma, США), ресуспендировали в 100 мкл 0,1 % сапонина и окрашивали МкАт к ИФН-у (4S.B3, eBioscience, США) и ИЛ-17А (eBio64DEC17, eBioscience, США). Анализ проводили на проточном цитофлуориметре FACSCalibur, оценивая количество ИФН-у+- и ИЛ-17А+-клеток в гейте CD4+CD19--клеток.
Статистический анализ. Вариационные ряды проверяли на соответствие нормальному распределению и проводили анализ с помощью зависимого /-теста Стьюдента для парных образцов. При множественном сравнении использовали поправку Бонферрони. Данные представлены как среднее значение ± ошибка среднего.
Результаты
Взаимодействие Т- и В-клеток исследовали в смешанных культурах, состоящих из В-лимфоцитов и различных групп Т-лимфоцитов, выделенных из крови взрослых здоровых доноров. Для засева культур использовали общий пул СБ4+-Т-клеток (рис. 1А), СВ4+СБ45КА+СБ45КО-наивные Т-лимфоциты (рис. 1Б) и СБ19+-В-лимфоциты (рис. 1Г) с чистотой > 95 %. Кроме того, из состава СБ4+-Т-лимфоцитов выделяли группу ССЯ6+-клеток. Поскольку выраженной экспрессией ССЯ6 обладают исключительно зрелые Т-клетки, конечный продукт сепарации содержал зрелые СБ4+СБ45КО+ССК6+-лимфоциты с чистотой > 90 % (рис. 1В).
Для оценки хелперной активности Т-клеток по отношению к В-лимфоцитам определяли общее содержание ^М и в среде 5-суточных смешанных культур и сравнивали с концентрацией иммуноглобулинов в контрольных монокультурах В-лимфоцитов. Показано, что все использованные группы СБ4+-Т-клеток эффективно усиливают продукцию ^М и ^в, однако наибольшее усиление продукции антител этих изотипов наблюдалось в смешанных культурах с СБ4+ССЯ6+-Т-клетками (рис. 2).
Для оценки вовлечения отдельных субпопуляций ССЯ6+-Т-хелперов в процесс взаимодействия с В-лимфоцитами мы оценили изменения содержания отдельных групп Т-клеток в смешанной культуре СБ4+ССЯ6+-Т-клеток и В-лимфоцитов и сравнили с изменениями состава смешанных культур В-лимфоцитов с нТИ или с общим пулом СБ4+-Т-клеток. Показано, что совместное культивирование Т- и В-клеток вызывало трансформацию существенной части лимфоцитов в крупные бластные клетки, практически отсутствующие в контрольных монокультурах (рис. ЗА).
Анализ фенотипа лимфобластов показал, что в реакцию бласттрансформации в смешанных культурах с любыми группами Т-хелперов были вовлечены как СБ19+-В-клетки (данные не приведены), так и СБ4+-Т-
2-
IgM
0
HTh Все Th CCR6+-Th
■ Монокультура Т-клеток
i
HTh
IgG
ñ
Все Th
CCR6+-Th
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
□ IgM E3 IgG
HTh
Все Th
□ Монокультура В-клеток О Смешанная культура В- и Т-клеток
CCR6+-Th
Рис. 2. Концентрация ^М и IgG в среде культур СБ4+-Т-клеток и В-лимфоцитов и кратность увеличения концентрации ^М или IgG в смешанных культурах Т- и В-лимфоцитов по сравнению с контрольными монокультурами В-клеток (индекс стимуляции - ИС)
Для засева смешанных культур использовали нТЬ (п = 6), общий пул СБ4+-Т-клеток (все ТЬ, п = 19), а также зрелые СВ4+ССК6+-Т-клетки (ССЯ6+-ТЬ, п = 19), полученные из тех же проб крови, что и общий пул СБ4+-Т-клеток. * -р < 0,03; ** - р < 0,01; *** - р < 0,0002 при сравнении действия СВ4+ССК6+-Т-клеток и неразделенных СБ4+-Т-клеток в парном 1-тесте.
2
6
*
4
1
0
клетки (рис. 3Б). Исходя из опыта предшествующих работ [25], мы предположили, что в 5-суточной культуре практически все Т-клетки, вовлеченные в процесс активации и созревания, будут иметь увеличенный размер и при цитометрическом анализе окажутся в гейте лимфо-бластов. Оценка экспрессии маркера зрелых Т-клеток СБ45ЯО в смешанных культурах с нТИ и с общим пулом СБ4+-Т-клеток подтвердила это предположение. Наиболее ярко связь бласттрансформации и феноти-пического созревания проявлялась в культурах с нТИ. В момент засева культур практически все эти незрелые клетки были лишены СБ45ЯО (рис. 1Б) и не изменяли своего фенотипа в контрольных монокультурах в течение 5 сут культивирования (рис. 3В). В смешанных культурах большинство не вступивших в реакцию и, соответственно, оставшихся незрелыми клеток оказались локализованы в гейте малых лимфоцитов, а практически все созревшие СБ45КО+-клетки оказались в гейте Т-лимфобластов. В смешанных культурах с общим пулом СБ4+-Т-клеток (исходно включающим существенную часть зрелых клеток) различия были менее выражены, но достоверный прирост экспрессии СБ45ЯО также наблюдался лишь среди Т-лимфобластов в смешанных культурах (рис. 3 В). Таким образом, Т-клетки, созревающие в этих смешанных культурах, при проточной цитометрии локализуются в гейте лимфобластов, тогда как степень зрелости малых лимфоцитов остается близкой к исходной. По-видимому, малые лимфоциты смешанных культур являются клетками, которые не смогли распознать аллельные варианты антигенов В-лимфоцитов своими Т-клеточными рецепторами и вступить в процесс активации и созревания. В связи с этим индуцированные В-клетками изменения мы искали в гейте Т-лимфобластов, тогда как малые Т-лимфоциты в смешанных культурах с нТИ или с об-
щим пулом СБ4+-Т-клеток рассматривались нами как своеобразный внутренний отрицательный контроль в дополнение к монокультуре Т-клеток.
При использовании зрелых ССЯ6+-Т-хелперов установить прирост степени зрелости было невозможно (рис. 3В), поскольку до засева все эти клетки уже были зрелыми (рис. 1В). В экспериментах с этими культурами поиск изменений проводился как в гейте малых лимфоцитов, так и в гейте лимфобластов (при анализе содержания фТИ) или в общем гейте лимфоцитов и лимфобластов (при определении содержания продуцентов цитокинов).
Анализ экспрессии хемокиновых рецепторов на Т-лимфоцитах показал, что в смешанных культурах нТИ с В-лимфоцитами малые Т-лимфоциты сохраняют фенотип незрелых Т-клеток CCR7+CXCR5-, тогда как Т-лимфобласты преимущественно приобретают фенотип CCR7CXCR5+, характерный для фТИ (рис. 4 А). Меньшее количество Т-лимфобластов приобретает фенотип CCR7CXCR5-, характерный для других типов зрелых Т-хелперов. Следует отметить, что CXCR5+-фТИ-подобные лимфобласты, созревающие из нТИ в смешанных культурах, также демонстрировали другие фенотипические признаки фТИ: высокие уровни экспрессии молекул ICOS, OX-40 и PD-1, тогда как малые Т-лимфоциты в тех же культурах обладали низким уровнем экспрессии этих молекул (рис. 4Г).
Индуцированное В-клетками созревание фТИ-подобных клеток также регистрировалось в смешанных культурах с общим пулом CD4+-T-клеток, о чем можно судить по росту доли CCR7-CXCR5+-клеток среди Т-лимфобластов по сравнению с малыми Т-лимфоцитами контрольных и смешанных культур (рис. 4Б). Кроме того, в этих смешанных культурах регистрировалось значительное количество
Т-лимфобластов с фенотипом CCR7+CXCR5+, характерным для циркулирующих фТИ или пре-фТИ. В то же время количество клеток с фенотипом CCR7CXCR5-среди Т-лимфобластов было ниже, чем среди малых Т-лимфоцитов.
При взаимодействии В-клеток и зрелых CCR6+^-хелперов достоверного прироста содержания CCR7-CXCR5+-фТh-подобных клеток не наблюдалось ни среди Т-лимфобластов, ни среди малых Т-лимфоцитов смешанных культур по сравнению с контрольной монокультурой CCR6+-Т-хелперов (рис. 4В). В смешанных культурах среди Т-лимфобластов наблюдался лишь небольшой прирост исходно малочисленных незрелых CCR7+CXCR5--клеток и CCR7+CXCR5+-пре-фТh, однако наиболее многочисленной группой Т-клеток как среди лимфобластов, так и среди малых лимфоцитов являлись CCR7-CXCR5--эффекторы.
Полученные результаты подтверждаются анализом экспрессии репрессора транскрипции Bcl-6, критически необходимого для созревания фТИ. Содержание Т-хелперов, одновременно экспрессирующих CXCR5 на мембране и Bcl-6 в ядре, существенно увеличивалось среди Т-лимфобластов в смешанных культурах, созданных из В-клеток и нТИ (рис. 5А, Б). Небольшой и недостоверный рост доли CXCR5+Bcl-6+-клеток наблюдался среди лимфобластов в смешанных культурах с общим пулом CD4+-T-клеток. В культурах со зрелыми CCR6+-Т-хелперами CXCR5+Bcl-6+-Т-клетки практически отсутствовали как среди лимфобластов, так и среди малых лимфоцитов (рис. 5Б).
Анализ способности Т-хелперов к продукции цито-кинов после поликлональной активации ФМА и иономи-цином показал, что контакт CCR6+^h с В-лимфоцитами увеличивает долю продуцентов ИЛ-17А среди Т-клеток смешанной культуры (рис. 5В). Эти клетки принадлежали к субпопуляции Th17 с фенотипом ИФН-уИЛ-17А+, а также к исходно малочисленной группе Th1/ Th17, одновременно продуцирующих ИЛ-17А и ИФН-у. В то же время доля Th1 с фенотипом ИФН-у+ИЛ-17А-при контакте CCR6+^h с В-лимфоцитами существенно не изменялась.
Обсуждение
CD4+^h осуществляют помощь В-клеткам при индукции гуморального иммунного ответа на тимус-зависимые антигены в ходе непосредственных межклеточных взаимодействий. При этом В-клетка на молекулах главного комплекса гистосовместимости класса II (МНС11) представляет ОТ4+-Т-лимфоциту фрагменты антигенного материала, собранного при интернализа-ции мембранных иммуноглобулиновых рецепторов, и активирует Т-лимфоцит, распознавший представленный антигенный эпитоп. В свою очередь, активированный Т-хелпер стимулирует В-клетку к размножению и созреванию в продуцирующий антитела плазма-цит. При этом важную роль во взаимодействии Ти В-лимфоцитов играют пары костимулирующих мембранных молекул ICOS/ICOSL и CD40/CD40L, а также
Э
30 п
25-
3 20-
| 15
s
5-
□ Т без В И Т с В
i
>- FSC
л Е-S
л Е-
100-, 9080706050403020100-
Э
л f-
oi
C C
Fi i
XX
i
нТЬ Все ТЬ ССЯ6+-ТЬ
□ Малые Т-лимфоциты из монокультуры
¡3 Малые Т-лимфоциты из смешанной культуры
□ Т-лимфобласты из смешанной культуры
Рис. 3. Бласттрансформация Т-клеток при взаимодействии с В-лимфоцитами
А - схема гейтирования малых лимфоцитов (гейт Р1) и лимфо-бластов (гейт Р2); Р9 - общий гейт лимфоцитов и лимфо-бластов. Клетки из монокультуры СВ4+ССК6+-Т-клеток (верхний график) и из смешанной культуры СВ4+ССК6+-Т-и В-клеток (нижний график); Б - доля СВ4+-лимфобластов от всех СВ4+-клеток в культурах нТЬ, общего пула СВ4+-Т-клеток (все ТЬ) и зрелых СВ4+ССК6+Т-клеток (ССЯ6+-ТЬ), которые росли в монокультуре (Т без В), или в смешанной культуре с В-клетками (Т с В); В - доля зрелых СВ45ЯО+-клеток среди СВ4+ малых лимфоцитов и СВ4+-лимфобластов в тех же культурах. Тип Т-клеток, использованных для засева культур, обозначен под графиками; тип анализируемых клеток -в легенде. * -р<0,05; ** - р<0,001 в парном 1-тесте с поправкой Бонферрони.
цитокины, в первую очередь ИЛ-21 [12, 26, 27], который могут продуцировать как фТЬ, так и Th17. Предполагается, что в условиях аллогенной смешанной культуры Т-хелперы взаимодействуют с В-клетками аналогичным образом, однако вместо распознавания чужеродного антигенного пептида на MHCII, Т-лимфоцит распознает аллельные варианты MHCII аллогенных В-лимфоцитов. В данной работе использовали аллогенную смешанную культуру для исследования взаимодействия CCR6+-Th
а
л*
0
а
'УП'У
80605
40200-
lb
tt [Ь
Э
нТЬ
jiáÉL
¿i
8060-
t 40 Í
200
Э
Все Th
80605
40200-
э
CCR6+-Th
jail
Я
CCR7+ CCR7-
CCR7+ CCR7-
CCR7+ CCR7-
CCR7+ CCR7-
CCR7+ CCR7-
CCR7+ CCR7-
□ Малые Т-лимфоциты из монокультуры 0 Малые Т-лимфоциты из смешанной культуры □ Т-лимфобласты из смешанной культуры
Малые Т-лимфоциты, монокультура
и О
C
2 Рч
Малые Т-лимфоциты,
Т-лимфобласты,
смешанная культура
-Щ
смешанная культура
о
й
о -
> i m
y:é
! :.уЩ fev
■ Г . r/ílfrf- ............
->- CXCR5
Рис. 4. Содержание CCR7+CXCR5--, CCR7-CXCR5+-, CCR7+CXCR5+- и CCR7-CXCR5--клеток среди малых СБ4+-димфоцитов и CD4+-лимфобластов в культурах, созданных из нТЪ (А), общего пула CD4+-T-клеток (Б) или зрелых CD4+CCR6+-T-клеток (В), росших в монокультуре или в смешанной культуре с B-лимфоцитами
Набор хемокиновых рецепторов указан под графиками, тип анализируемых клеток - в легенде. Достоверные отличия от показателей монокультуры (* - p < 0,05; ** - p < 0,001) и лимфобластов от малых лимфоцитов смешанной культуры (f - p < 0,05; ff p < 0,001) в парном Т-тесте с поправкой Бонферрони. Пример экспрессии CXCR5, CCR7, ICOS, PD-1 и 0X40 на С04+-клетках в монокультуре нТЬ и в смешанной культуре нТЬ с В-клетками (Г)
CXCR5- CXCR5+ CXCR5+CXCR5
CXCR5- CXCR5+ CXCR5+CXCR5
CXCR5- CXCR5+ CXCR5+CXCR5
с В-лимфоцитами. Показано, что зрелые CCR6+-Тh крови обладают выраженной способностью стимулировать В-лимфоциты к продукции антител, причем хелперная активность этих клеток больше, чем у нТЪ и общего пула циркулирующих СБ4+-Т-лимфоцитов.
Как уже отмечалось выше, зрелые CD4+CСR6+-Т-клетки объединены способностью к миграции в слизистые оболочки и кожу, но гетерогенны по субпопу-ляционному составу. В частности, в эту группу входят ТЫ7, ТЫ, регуляторные Т-клетки и немногочисленные
фТЫподобные клетки, причем ТЫ7 обладают выраженной пластичностью и могут репрограммироваться, т. е. утрачивать свои свойства и приобретать свойства других субпопуляций [7, 21-23]. Известно, что диффе-ренцировка различных групп Т-хелперов определяется антиген-презентирующими дендритными клетками и спектром цитокинов Т-клеточной зоны лимфоид-ных органов. Исключением является созревание фТ^ которое, по крайней мере на конечном этапе, требует взаимодействия с В-клетками в зоне смешанного рас-
Э
Малые Т-лимфоциты, монокультура
Малые Т-лимфоциты, смешанная культура Т-лимфобласты, смешанная культура
ло р
т н
£
0 %
¡te..;. K'.iNi . yï'-
12 1 1086420-
0,12 %
у>* f'fv
0,32 %
SflBtv''
; $
fr».....•........
20,69 % шйшРг" V
щ
CXCR5
Э
а
15—1
10-
5-
нТЬ
Все ТЬ
CCR6+-Th
□ Малые Т-лимфоциты из монокультуры
□ Малые Т-лимфоциты из смешанной культуры
□ Т-лимфобласты из смешанной культуры
ИФН-у+ИЛ-17А- ИФН-у-ИЛ-17А+
□ CCR6+-Tb без В
ИФН-у+ИЛ-17А+
CCR6+-Tb с В
Рис. 5. Bcl-6 и цитокины в Т-клетках смешанных культур
А - экспрессия CXCR5 и Bcl-6 в Т-клетках монокультуры uTh и смешанной культуры нТЬ с В-клетками; Б - доля Bcl-6+CXCR5+-клеток среди малых Т-лимфоцитов и Т-лимфобластов в культурах Т- и B-клеток. По оси абсцисс - тип Т-клеток, использованных для засева культур; тип анализируемых клеток - в легенде; В - доля продуцентов цитокинов среди CD4+CD19--Т-клеток в монокультурах CD4+CCR6+-T-клеток (CCR6+-Th без В) и в смешанных культурах этих клеток с В-лимфоцитами (CCR6+-Th с В). По оси абсцисс - профиль продукции цитокинов. * -p < 0,05 в парном t-тесте с поправкой Бонферрони.
а
а
0
положения Т- и В-лимфоцитов [10, 25]. В связи с этим в данной работе мы решили определить, связана ли хел-перная активность CD4+CСR6+-Т-клеток с активацией и экспансией CCR6+^Xh или с репрограммированием других типов ТЪ в фТЪ при контакте с В-лимфоцитами. Однако фенотипический анализ смешанных культур CD4+CСR6+-Т-клеток с В-лимфоцитами не обнаружил ни роста доли клеток с фенотипом фТЪ, ни перераспределения фТЪ-подобных клеток в группу активированных клеток (Т-лимфобластов), ни роста экспрессии мастер-регулятора фТЪ Bcl-6, тогда как в смешанных культурах В-клеток с общим пулом CD4+-T-клеток или с наивными Т-хелперами фТЪ становились наиболее многочисленной группой клеток, отреагировавших бласттрансформацией на контакт с В-лимфоцитами. В то же время в смешанных культурах CD4+CCR6+-Т-клеток с В-лимфоцитами наблюдалось значительное увеличение доли Th17 и Th1/Th17, что свидетельствует о преимущественном вовлечении этих групп CСR6+-Т-клеток во взаимодействие с В-лимфоцитами и отсутствии репрограммирования Th17 в фТЪ Учитывая специфический маршрут миграции CD4+CСR6+-Т-клеток и на основании результатов, описанных в данной статье, мы предполагаем, что циркулирующие CD4+CСR6+-Т-клетки, в первую очередь Th17
и Th1/Th17, после миграции в слизистую желудочно-кишечного тракта и ассоциированные с ней лимфоид-ные органы могут участвовать в стимуляции локальной продукции антител. Кроме того, на основании полученных данных можно предположить, что экспансия субпопуляций Th17 и Th1/Th17 в ходе защитного иммунного ответа или патологической, аутоиммунной реакции может частично зависеть от взаимодействия с В-лимфоцитами. С этим предположением согласуется недавно описанное уменьшение количества Th17 в результате медикаментозной деплеции В-клеток при ревматоидном артрите [28].
Заключение
Взаимодействие зрелых CD4+CСR6+-Т-клеток крови с В-лимфоцитами in vitro приводит к значительному усилению продукции антител и экспансии Th17 и Th1/ Th17 без заметного прироста количества Th1 и фТЪ В то же время наивные ТЪ-клетки или неразделенные CD4+-Т-клетки при взаимодействии с В-лимфоцитами преимущественно дифференцируются в фТЪ-подоб-ные клетки. Полученные результаты свидетельствуют о потенциальной роли взаимодействия CD4+CCR6+-X-клеток и В-лимфоцитов в развитии гуморального иммунного ответа и поддержании субпопуляции Th17.
■ Литература
1. Wang C., Kang S.G., Lee J., Sun Z., Kim C.H. The roles of CCR6 in migration of Th17 cells and regulation of effector T-cell balance in the gut. Mucosal Immunol. 2009; 2: 173-83. DOI: https://doi.org/10.1038/mi. 2008.84
2. Villablanca E.J., Cassani B., von Andrian U.H., Mora J.R. Blocking lymphocyte localization to the gastrointestinal mucosa as a therapeutic strategy for inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 2011; 140: 1776-84. DOI: https://doi.org/10.1053/j.gastro.2011.02.015
3. Wu Y.Y., Tsai H.F., Lin W.C., Hsu P.I., Shun C.T., Wu M.S., Hsu P.N. Upregulation of CCL20 and recruitment of CCR6+ gastric infiltrating lymphocytes in Helicobacter pylori gastritis. Infect. Immun. 2007; 75: 4357-63. DOI: https://doi.org/10.1128/IAI.01660-06
4. Harper E.G., Guo C., Rizzo H., Lillis J.V., Kurtz S.E., Skorcheva I. et al. Th17 cytokines stimulate CCL20 expression in keratinocytes in vitro and in vivo: implications for psoriasis pathogenesis. J. Invest. Dermatol. 2009; 129 (9): 2175-83. DOI: https://doi.org/10.1038/jid. 2009.65
5. Singh S.P., Zhang H.H., Tsang H., Gardina P.J., Myers T.G., Nagarajan V. et al. PLZF regulates CCR6 and is critical for the acquisition and maintenance of the Th17 phenotype in human cells. J. Immunol. 2015; 194: 4350-61. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1401093
6. Талаев В.Ю., Светлова М.В., Заиченко И.Е., Воронина Е.В., Бабайкина О.Н., Неумоина Н.В., Перфилова К.М., Уткин О.В., Филатова Е.Н. Цитокиновый профиль CCR6+ Т-хелперов, выделенных из крови пациентов с язвенной болезнью, ассоциированной с H. pylori-инфекцией. Современные технологии в медицине. 2020; 12: 33-40. DOI: https://doi.org/10.17691/stm2020.12.3.04
7. Mazzoni A., Maggi L., Liotta F., Cosmi L., Annunziato F. Biological and clinical significance of T helper 17 cell plasticity. Immunology. 2019; 158 (4): 287-95. DOI: https://doi.org/10.1111/imm.13124
8. Kleinewietfeld M., Puentes F., Borsellino G., Battistini L., Rotzschke O., Falk K. CCR6 expression defines regulatory effector/ memory-like cells within the CD25+CD4+ T-cell subset. Blood. 2005; 105: 2877-86. DOI: https://doi.org/10.1182/blood-2004-07-2505
9. Талаев В.Ю., Талаева М.В., Воронина Е.В., Заиченко И.Е., Неумоина Н.В., Перфилова К.М., Бабайкина О.Н. Экспрессия хемо-киновых рецепторов на Т-хелперах крови при заболеваниях, ассоциированных с Helicobacter pylori: хроническом гастродуодените и язвенной болезни. Инфекция и иммунитет. 2019; 9: 295-303. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-2-295-303
10. Ma C.S., Deenick E.K., Batten M., Tangye S.G. The origins, function, and regulation of T follicular helper cells. J. Exp. Med. 2012; 209: 1241-53. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.20120994
11. Fazilleau N., Mark L., McHeyzer-Williams L.J., McHeyzer-Williams M.H. Follicular helper T cells: lineage and location. Immunity. 2009; 30: 324-35. DOI: https://doi.org/10.1016/j.immuni.2009. 03.003
12. McHeyzer-Williams L., Pelletier N., Mark L., Fazilleau N., McHeyzer-Williams M.G. Folicular helper T-cells as cognate regulator of B cell immunity. Curr. Opin. Immunol. 2009; 21: 266-73. DOI: https://doi. org/10.1016/j.coi.2009.05.010
13. Wang C., Hillsamer P., Kim C.H. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T cell subsets. BMC Immunol. 2011; 12: 53. DOI: https://doi.org/10.1186/1471-2172-12-53
14. Crotty S. Follicular helper CD4 T cells (TFH). Annu. Rev. Immunol. 2011; 29: 621-63. DOI: https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-031210-101400
15. Annunziato F., Romagnani S. Heterogeneity of human effector CD4+ T cells. Arthritis Res. Ther. 2009; 11: 257. DOI: https://doi. org/10.1186/ar2843
16. Mosmann T.R., Coffman R.L. Two types of mouse helper T-cell clone: implicationsfor immune regulation. Immunol. Today. 1987; 8: 223-7. DOI: https://doi.org/10.1016/0167-5699(87)90171-X
17. Tsuji M., Komatsu N., Kawamoto S., Suzuki K., Kanagawa O., Honjo T., Hori S., Fagarasan S. Preferential generation of follicular B helper T cells from Foxp3+ T cells in gut Peyer's patches. Science. 2009; 323: 1488-92. DOI: https://doi.org/10.1126/science.1169152
18. Cong Y., Feng T., Fujihashi K., Schoeb T.R., Elson C.O. A dominant, coordinated T regulatory cell-IgA response to the intestinal microbiota. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2009; 106: 19 256-61. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.0812681106
19. Dullaers M., Li D., Xue Y., Ni L., Gayet In., Morita R., Ueno H., Palucka K.A., Banchereau J., Oh S. A T cell-dependent mechanism for the induction of human mucosal homing immunoglobulin A-secreting plasmablasts. Immunity. 2009; 30: 120-9. DOI: https://doi.org/10.1016/j. immuni.2008.11.008
20. Annunziato F., Cosmi L., Santarlasci V. et al. Phenotypic and functional features of human Th17 cells. J. Exp. Med. 2007; 204: 1849-61. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.20070663
21. Damsker J.M., Hansen A.M., Caspi R.R. Th1 and Th17 cells: adversaries and collaborators. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2010; 1183: 211-21. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2009.05133.x
22. Murphy K.M., Stockinger B. Effector T cell plasticity: flexibility in the face of changing circumstances. Nat. Immunol. 2010; 11: 674-80. DOI: https://doi.org/10.1038/ni.1899
23. Hirota К., Turner J., Villa M., Duarte J.H., Demengeot J., Steinmetz O.M., Stockinger B. TH17 cell plasticity in Peyer's patches is responsible for induction of T cell-dependent IgA responses. Nat. Immunol. 2013; 14: 372-9. DOI: https://doi.org/10.1038/ni.2552
24. Hartlehnert M., Borsch A.L., Li X., Burmeister M., Gerwien H., Schafflick D. et al. Bcl6 controls meningeal Th17-B cell interaction in murine neuroinflammation. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2021; 118: e2023174118. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.2023174118
25. Талаев В.Ю., Плеханова М.В., Воронина Е.В., Бабайкина О.Н. Созревание Т-фолликулярных хелперов in vitro. Иммунология. 2015; 36 (6): 336-43.
26. Бязрова М.Г, Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Васильева Ю.В., Прилипов А.Г, Филатов А.В. Стимуляция В-лимфоцитов человека in vitro с помощью HH-21/CD40L и их характеристика. Иммунология. 2020; 41 (6): 501-10. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-6-501-510
27. Астахова Е.А., Фролов Е.А., Шилкина А.Б., Бязрова М.Г, Латышева Е.А., Латышева Т.В., Филатов А.В. Стимуляции В-клеток в системе ИЛ-21/CD40L в норме и у пациентов с общей вариабельной иммунной недостаточностью. Иммунология. 2021; 41 (6): 631-40. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-631-640
28. Bounia C.A., Liossis S.C. B cell depletion treatment decreases Th17 cells in patients with rheumatoid arthritis. Clin. Immunol. 2021; 233: 108877. DOI: https://doi.org/10.1016/j.clim.2021.108877
и References
1. Wang C., Kang S.G., Lee J., Sun Z., Kim C.H. The roles of CCR6 in migration of Th17 cells and regulation of effector T-cell balance in the gut. Mucosal Immunol. 2009; 2: 173-83. DOI: https://doi.org/10.1038/mi.2008.84
2. Villablanca E.J., Cassani B., von Andrian U.H., Mora J.R. Blocking lymphocyte localization to the gastrointestinal mucosa as a therapeutic strategy for inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 2011; 140: 1776-84. DOI: https://doi.org/10.1053/j.gastro.2011.02.015
3. Wu Y.Y., Tsai H.F., Lin W.C., Hsu P.I., Shun C.T., Wu M.S., Hsu P.N. Upregulation of CCL20 and recruitment of CCR6+ gastric infiltrating lymphocytes in Helicobacter pylori gastritis. Infect. Immun. 2007; 75: 4357-63. DOI: https://doi.org/10.1128/IAI.01660-06
4. Harper E.G., Guo C., Rizzo H., Lillis J.V., Kurtz S.E., Skorcheva I., et al. Th17 cytokines stimulate CCL20 expression in keratinocytes in vitro and in vivo: implications for psoriasis pathogenesis. J. Invest. Dermatol. 2009; 129 (9): 2175-83. DOI: https://doi.org/10.1038/jid. 2009.65
5. Singh S.P., Zhang H.H., Tsang H., Gardina P.J., Myers T.G., Nagarajan V., et al. PLZF regulates CCR6 and is critical for the acquisition and maintenance of the Th17 phenotype in human cells. J. Immunol. 2015; 194: 4350-61. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1401093
6. Talaev V.Yu., Svetlova M.V., Zaichenko I.E., Voronina E.V., Ba-baykina O.N., Neumoina N.V., et al. Cytokine profile of CCR6+ T-helpers
isolated from the blood of patients with peptic ulcer associated with Helicobacter pylori infection. Sovremennye tekhnologii v meditsine. 2020; 12: 33-40. DOI: https://doi.org/10.17691/stm2020.123.04
7. Mazzoni A., Maggi L., Liotta F., Cosmi L., Annunziato F. Biological and clinical significance of T helper 17 cell plasticity. Immunology. 2019; 158 (4): 287-95. DOI: https://doi.org/10.1111/imm.13124
8. Kleinewietfeld M., Puentes F., Borsellino G., Battistini L., Rotzschke O., Falk K. CCR6 expression defines regulatory effector/ memory-like cells within the CD25+CD4+ T-cell subset. Blood. 2005; 105: 2877-86. DOI: https://doi.org/10.1182/blood-2004-07-2505
9. Talaev V.Y., Talaeva M.V., Voronina E.V., Zaichenko I.Y., Neu-moina N.V., Perfilova K.M., Babaykina O.N. Chemokine receptor expression on peripheral blood T-helper cells in Helicobacter pylori-associated diseases: chronic gastroduodenitis and peptic ulcer disease. Infektsiya i immunitet. 2019; 9: 295-303. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-2-295-303 (in Russian)
10. Ma C.S., Deenick E.K., Batten M., Tangye S.G. The origins, function, and regulation of T follicular helper cells. J. Exp. Med. 2012; 209: 1241-53. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.20120994
11. Fazilleau N., Mark L., McHeyzer-Williams L.J., McHeyzer-Wil-liams M.H. Follicular helper T cells: lineage and location. Immunity. 2009; 30: 324-35. DOI: https://doi.org/10.1016/j.immuni.2009.03.003
12. McHeyzer-Williams L., Pelletier N., Mark L., Fazilleau N., McHeyzer-Williams M.G. Folicular helper T-cells as cognate regulator of B cell immunity. Curr. Opin. Immunol. 2009; 21: 266-73. DOI: https://doi. org/10.1016/j.coi.2009.05.010
13. Wang C., Hillsamer P., Kim C.H. Phenotype, effector function, and tissue localization of PD-1-expressing human follicular helper T cell subsets. BMC Immunol. 2011; 12: 53. DOI: https://doi.org/10.1186/1471-2172-12-53
14. Crotty S. Follicular helper CD4 T cells (TFH). Annu. Rev. Immunol. 2011; 29: 621-63. DOI: https://doi.org/10.1146/annurev-immu-nol-031210-101400
15. Annunziato F., Romagnani S. Heterogeneity of human effector CD4+ T cells. Arthritis Res. Ther. 2009; 11: 257. DOI: https://doi. org/10.1186/ar2843
16. Mosmann T.R., Coffman R.L. Two types of mouse helper T-cell clone: implicationsfor immune regulation. Immunol. Today. 1987; 8: 223-7. DOI: https://doi.org/10.1016/0167-5699(87)90171-X
17. Tsuji M., Komatsu N., Kawamoto S., Suzuki K., Kanagawa O., Honjo T., Hori S., Fagarasan S. Preferential generation of follicular B helper T cells from Foxp3+ T cells in gut Peyer's patches. Science. 2009; 323: 1488-92. DOI: https://doi.org/10.1126/science.1169152
18. Cong Y., Feng T., Fujihashi K., Schoeb T.R., Elson C.O. A dominant, coordinated T regulatory cell-IgA response to the intestinal micro-biota. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2009; 106: 19 256-61. DOI: https://doi. org/10.1073/pnas.0812681106
19. Dullaers M., Li D., Xue Y., Ni L., Gayet In., Morita R., Ueno H., Palucka K.A., Banchereau J., Oh S. A T cell-dependent mechanism for the induction of human mucosal homing immunoglobulin A-secreting plas-mablasts. Immunity. 2009; 30: 120-9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.im-muni.2008.11.008
20. Annunziato F., Cosmi L., Santarlasci V., et al. Phenotypic and functional features of human Th17 cells. J. Exp. Med. 2007; 204: 1849-61. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.20070663
21. Damsker J.M., Hansen A.M., Caspi R.R. Th1 and Th17 cells: adversaries and collaborators. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2010; 1183: 211-21. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2009.05133.x
22. Murphy K.M., Stockinger B. Effector T cell plasticity: flexibility in the face of changing circumstances. Nat. Immunol. 2010; 11: 674-80. DOI: https://doi.org/10.1038/ni.1899
23. Hirota K., Turner J., Villa M., Duarte J.H., Demengeot J., Steinmetz O.M., Stockinger B. TH17 cell plasticity in Peyer's patches is responsible for induction of T cell-dependent IgA responses. Nat. Immunol. 2013; 14: 372-9. DOI: https://doi.org/10.1038/ni.2552
24. Hartlehnert M., Borsch A.L., Li X., Burmeister M., Gerwien H., Schafflick D., et al. Bcl6 controls meningeal Th17-B cell interaction in murine neuroinflammation. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2021; 118: e2023174118. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.2023174118
25. Talaev V.Yu., Plekhanova M.V., Voronina E. V., Babaykina O.N. Maturation of T follicular helper cells in vitro. Immunologiya. 2015; 36 (6): 336-43 (in Russian)
26. Byazrova M.G., Astakhova E.A., Spiridonova A.B., Vasil'eva Yu.V., Prilipov A.G., Filatov A.V IL-21/CD40L stimulation of human B-lympho-cytes in vitro and their characteristics. Immunologiya. 2020; 41 (6): 501-10. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-6-501-510 (in Russian)
27. Astakhova E.A., Frolov E.A., Shilkina A.B., Byazrova M.G., Latysheva E.A., Latysheva T.V., Filatov A.V Stimulation of B cells in the IL-21/CD40L system in healthy donors and in patients with common variable immunodeficiency. Immunologiya. 2021; 41 (6): 631-40. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-631-640 (in Russian)
28. Bounia C.A., Liossis S.C. B cell depletion treatment decreases Th17 cells in patients with rheumatoid arthritis. Clin. Immunol. 2021; 233: 108877. DOI: https://doi.org/10.1016/j.clim.2021.108877
Сведения об авторах
Талаев Владимир Юрьевич - д-р мед. наук, проф., зав. лаб. клеточной иммунологии ФБУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, Нижний Новгород, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1993-0622
Воронина Елена Викторовна - канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. клеточной иммунологии ФБУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, Нижний Новгород, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1801-9693
Светлова Мария Владимировна - канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаб. клеточной иммунологии ФБУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, Нижний Новгород, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-4097-6780
Authors' information
Vladimir Yu. Talayev - MD, PhD, Prof., Head of the Cellular Immunology Lab., Academician I.N. Blokhina NNSRIEM of Rospotrebnadzor, Nizhny Novgorod, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1993-0622
Elena V. Voronina - PhD, Researcher of the Cellular Immunology Lab., Acad. I.N. Blokhina NNSRIEM of Rospotreb-nadzor, Nizhny Novgorod, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1801-9693
Maria V. Svetlova - PhD, Senior Researcher of the Cellular Immunology Lab., Academician I.N. Blokhina NNSRIEM of Rospotrebnadzor, Nizhny Novgorod, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-4097-6780
Заиченко Ирина Евгеньевна - канд. биол. наук, вед. науч. сотр. лаб. клеточной иммунологии ФБУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, Нижний Новгород, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-5063-3111
Бабайкина Ольга Николаевна - канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаб. клеточной иммунологии ФБУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, Нижний Новгород, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-4527-6134
Irina Ye. Zaichenko - PhD, Leader Researcher of the Cellular Immunology Lab., Acad. I.N. Blokhina NNSRIEM of Rospotrebnadzor, Nizhny Novgorod, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-5063-3111
Olga N. Babaykina - PhD, Senior Researcher of the Cellular Immunology Lab., Academician I.N. Blokhina NNSRIEM of Rospotrebnadzor, Nizhny Novgorod, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-4527-6134
