CC BY
8
УДК 619:611.82:619:612.1
Стибель В.В., д.вет.н., професор © Секретарюк К.В., д.б.н., професор
Данко М.М., к.б.н., доцент Сварчевський О.А., к.вет.н., доцент Лье1еський нацюнальний ушеерситет еетеринарног медицины та бютехнологт
iмет С.З. Гжицького
ПОШКОДЖЕННЯ ДНК КЛ1ТИН К1СТКОВОГО МОЗКУ ЗА ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АСКАРОЗУ
Анотащя. Проееденими до^дженнями естаноелено, що метаболти личинок Ascaris suum тд час теазп еикликають зростання одноланцюгоеих розриеiе, лужно-лабыьних сайтiе ядерноï молекули ДНК, апоптичних клтин у тсткоеому мозку експериментальних теарин
Ключовi слова: генотоксичтсть, цитотоксичтсть, апоптичш клтини, ДНК-комет, личинки Ascaris suum
Вступ. Личинки Ascaris suum тд час м^раци здатш викликати збшьшення числа соматичних кл^ин з аберащями, мжроядрами у лiмфоцитах периферично1 кровi експериментальних тварин [1]. Встановлено, що екскреторно-секреторш видшення аскариЫв, а також гомогенати нематод та швазшних яець виявляють мутагенну дiю i можуть шдукувати геннi мутацiï як за типом змщення рамки зчитування, так i за типом замши пар основ на штамах Salmonella typhimurium ТА-98 i ТА-100 [2]. Враховуючи наведене вище, проведення дослiджень у такому напрямку е актуальним i мае теоретичне i практичне значення.
Мета. Метою нашоï роботи було вивчення можливоï генотоксичноï i цитотоксичноï дiï метаболiтiв личинок Ascaris suum на клтини кiсткового мозку швазованих тварин.
Матер1ал i методика. Дослщження проведене на 24 мишах-самцях лiнiï СВА масою 16-18 г. Тварин роздшили на 4 групи по 6 особин у кожнш Мишей першо1' групи заражали в кщькость 5 iнвазiйних яець, другое' - 10 яець, третьо1' - 20 швазшних яець Ascaris suum на 1 г маси тша тварини. Мишi четвертоï групи слугували шгактним - контролем. Сумiш яець у 2% крохмальному гелi iз по^бною концентрацiею в об'емi 0,2 мл вводили тваринам за допомогою металевого зонду. Контрольнiй групi щурiв вводили 2% крохмальний гель в об'емi 0,2 мл. Забiй контрольних i заражених тварин проводили шляхом декаттаци на 7-у, 14-у, 21-у, 28-у доби вщ початку швази за слабкого ефiрного наркозу. У мишей видiляли стегновi кiстки, одержували з них клiтиннi суспензiï кюткового мозку. Метод ДНК-комет проводили за N.P. Singh et al. [3] у модифкаци В. Hellman et al. [4].
Результати дослщження. При застосуванш методу ДНК-комет у кктковому мозку контрольних тварин, за розвитку експериментального
© Стибель В.В., Секретарюк К.В., Данко М.М., Сварчевський О. А., 2008
246
аскарозу, протягом дослщу "момент хвоста" коливався в межах вщ 0,14±0,1 до 0,20±0,18%, а вщсоток апоптичних клггин кл^ин варшвав вiд 2,1±0,96 до 3,0±0,86 (Рис.1, 2). У заражених мишей у кшькосп 5 iнвазiйних яець аскариав на 1 г маси тiла тварини при дослщженш кiсткового мозку на 7-му добу експерименту „момент хвоста" перевищував у 3,4 рази рiвень контрольно! групи мишей. Вщсоток апоптичних кл^ин на 7-му добу дослщу перевищував контрольний показник у 1,9 рази. При збшьшенш кшькосп зараження до 10 швазшних яець аскаришв на 1 г маси тша тварини „момент хвоста" кл^ин кiсткового мозку iнвазованих тварин на 7-му добу дослщжень був вищим у 7,7 i 2,3 рази, вщповщно, до показника контрольно! грут мишей, заражених у кшькосп 5 iнвазiйних яець аскарисiв на 1 г маси тша тварини.
% 2,5 -| 2 -1,5 -1 -0,5 -0
21
28
доби
7
□ Контроль □ Кшькють - 5 я./г В Кшькють - 10 я./г □ Кiлькiсть - 20 я./г
Рис. 1. „Момент хвоста" клггин кчсткового мозку мишей, заражених 1нваз1йними яйцями аскарнпв
% 10 -|
8
6
4
2
0
г!1
7
Г
1
21
□ Контроль и Кшыисть - 5 я./г
в Кшьккть - 10 я./г ш Кшьккть - 20 я./г
доби
Рис. 2. Апоптичш клггини к1сткового мозку мишей, заражених швазшними яйцями аскаримв
247
Вщсоток апоптичних кл^ин у 2,8 рази перевищував piBeHb показники контрольное' групи i у 1,5 рази був бшьшим, шж при кшькост зараження 5 iнвазiйних яець аскариав на 1 г маси тша тварини. У заражених мишей у кшькост 20 iнвазiйних яець аскариЫв на 1 г маси тша тварини „момент хвоста" та вщсоток апоптичних кл^ин значно перевищував показники контрольное' групи (Р<0,05). До 14-ï доби дослiду „момент хвоста" та вщсоток апоптичних кл^ин при кшькост зараження 5 та 10 iнвазiйних яець аскариав на 1 г маси тша тварини майже не змшювався, порiвняно з 7-ю добою дослiду. При кшькост зараження 20 iнвазiйних яець аскариЫв на 1 г маси тша тварини „момент хвоста" був вищим вщ показника контрольно1 групи у 14 разiв (Р<0,01), вiдсоток апоптичних клггин вiдповiдно у 4,5 рази (Р<0,05). До 21-ï доби при кшькост зараження 5 iнвазiйних яець аскариЫв на 1 г маси тша тварини „момент хвоста" був вищим вщ показника контрольноï' групи у 1,8 рази, вщсоток апоптичних кл^ин - у 1,3 рази, вщповщно. При кшькосп зараження 10 iнвазiйних яець аскариЫв на 1 г маси тiла тварини, також виявлена тенденщя до зниження, однак „момент хвоста" перевищував величини контрольно'' групи у 5,7 рази, вщсоток апоптичних кл^ин був вищим вщ контролю у 2,1 рази. У заражених мишей у кшькост 20 швазшних яець аскариЫв на 1 г маси тша тварини „момент хвоста" до 21-ï доби швази був вищим у 8,2 рази, порiвняно з величинами контрольно'' групи, вщсоток апоптичних кл^ин перевищував показник на початку експерименту у 3,1 рази. До 28-ï доби швази встановлено зниження вищезгаданих показниюв, проте вони перевищували контрольш величини.
Висновки. 1. Метаболии личинок аскариЫв володшть генотоксичною i цитотоксичною дiею на соматичш тканини хазяïна, викликають зростання одноланцюгових розривiв, лужно-лабiльних сайтiв ядерноï молекули ДНК, апоптичних клiтин в юстковому мозку.
2. Генотоксичний вплив метаболтв личинок аскарисiв на соматичш клтини хазяïна зростае при збшьшенш кiлькостi введеного бюлопчно-iнвазiйного матерiалу при зараженнi.
Л1тература
1. Стибель В.В. Змши в еритроцитах периферичноï кровi бiлих нелiнiйних щурiв у разi застосування мiкроядерного тесту за аскарозу. // Вкник Днiпропетровського ДАУ. - Днiпропетровськ.- 2005, №1 - С. 92-95.
2. Стибель В.В. Оцшка мутагенноï дiï Ascaris suum в тест Еймса. // Проблеми екологи ветеринарноï медицини Житомирщини: Науковi статтi мiжнародноï науково - виробничоï конференций - Житомир: „Полiсся", 2005. - С. 172-175.
3. Singh N., McCoy M., Tice R., Schneider E. A Simple Technique for quantification of low levels of DNA damage in individual cells // Exp. Cell Research. - 1988.- Vol. 175. - P. 184-191.
4. Hellman В., Vaghef H., Friis L., Edling C. Alkaline single cell gel electrophoresis of DNA fragments in biomonitoring for genotoxicity: an
248
introductory study on healthy human volunteers // Int. Arch. Occup. Environ. Health. - 1997. - Vol. 69.- P.185-192.
Summary
Stybel V.V., Doc. Sc. (Vet. Med.), professor Sekretariuk K.V., Doc. Sc. (Biol.), professor Danco M.M., Kand. Sc. (Biol.), docent Svarchevskij O.A., Kand. Sc. (Vet. Med.), docent Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named
after S.Z.Gzhytskyj
DAMAGE OF DNA OF CAGES OF MARROW FOR EXPERIMENTAL OF
ASCAROSIS
It is set by the conducted researches, that metabolites larvae of Ascaris suum during an invasion cause growth of single - strand breaks, alkali-labile sites of nuclear molecule of DNA, apoptotic cages, in marrow of animals which were added to the experiment.
Cmammx nadiumna do peda^ii 19.09.2008
249
