CC BY
24
ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
ностью. По сути, это новый универсальный инструмент для оценки любого искривления ШОП в статике и динамике, причем в конкретных цифрах [5].
5. Использование данного метода исследования при легкой ХТ дает достоверные и точные данные, которые можно использовать как для объективизации изменений и уточнения диагноза, так и для подбора медикаментозного и реабилитационного лечения больных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барраль, Ж. П. Травма. Остеопатический подход / Ж. П. Барраль, А. Кробьер. - Иваново: МИК, 2003. - С. 335.
2. Белова, А. Н. Вертеброневрологические проявления хлыстовой травмы шеи / А. Н. Белова // Журн. невропатол. и психиатрии им. С. С. Корсакова. - 2004. - № 4. - С. 37-38.
3. Корнилов, Н. В. Социальное значение травм и заболеваний опорно-двигательной системы / Н. В. Корнилов [и др.] // Анналы травматол. ортопед. - 1996. - № 4. - С. 5-8.
4. Левин, О. С. Неврологические осложнения хлыстовой травмы / О. С. Левин, Г. В. Макаров // Невролог. журн. - 2002. -С. 46-53.
5. Пустовойтенко, В. Т. Функциональное рентгенологическое исследование шейного отдела позвоночника с использованием угла аксиса / В. Т. Пустовойтенко [и др.]; РНПЦ травматол. и ортопедии. - Минск, 2010.
6. Скоромец, А. А. Мануальная терапия при остеохондрозе и спондилоартрозе: рук-во для врачей / А. А. Скоромец. - СПб.: Алга-Фонд, 2002. - С. 29-78.
7. Цивьян, Я. Л. Лучевая диагностика при травме шейного отдела позвоночника / Я. Л. Цивьян [и др.]. - 1996. - С. 36-45.
РЕЗЮМЕ
Д. В. Глухова
Применение метода измерения угла аксиса при легкой хлыстовой травме шейного отдела позвоночника
Изложены и представлены анатомические особенности шейного отдела позвоночника (ШОП), обсуждаются методы рен-
УА, установленный при легкой XT (острый и подострый период)
Период XT Стандартное положение головы при легкой XT (n (%))
Гиперлордоз (УА 30 28°) Сглаженный лордоз (УА 13 19°) Выпрямление лордоза (УА 10 11°) Всего
Острый Подострый Итого 3 (17,6 %) 1(4 %) 4 (9,52 %) 12 (70,6 %) 22(88 %) 34 (80,95 %) 2 (11,8 %) 2(8 %) 4 (9,52 %) 17 (100 %) 25(100 %) 42 (100 %)
тгенологическои диагностики статико-динамических расстройств ШОП как в норме, так и при легкой хлыстовой травме. Подчеркивается, что применение метода измерения угла аксиса (УА) - это новый универсальный инструмент для оценки любого искривления ШОП в статике и динамике, причем в конкретных цифрах. Этот метод исследования дает достоверные и точные данные, которые можно использовать как для объективизации изменений и уточнения диагноза, так и для динамического наблюдения при подборе медикаментозного и реабилитационного лечения у больных с травматическим повреждением позвоночника. К рекомендуемым методам диагностики относится стандартная шейная спондилография, применение метода измерения УА.
Ключевые слова: статико-динамические нарушения, легкая хлыстовая травма шейного отдела, метод измерения угла аксиса с помощью рентгенометрии.
SUMMARY
Д. V. Glukhoua
Axis angle measurement in light cervical whiplash
The author describes the anatomical features of the cervical spine (CS) and X-ray diagnostic methods in static and dynamic disorders in the CS. It is emphasized that axis angle measurement is a universal new tool for assessment of any CS static and dynamic distortion in specific figures. This method provides reliable and accurate data that can be used for objectification of the changes and confirmation of the diagnosis and for selection of medical and rehabilitation treatment of the patients with traumatic spinal injuries. The recommended methods of diagnosis include standard cervical spondylography, and measurement the angle of axis.
Key words: static-dynamic disorders, light cervical whiplash, roentgenometry method for measuring of the axis angle.
© А. О. Романов, Т. В. Беляева, Е. В. Эсауленко, 2011 г. УДК 616.36-004+616.36-002]-02:575
А. О. Романов, Т. В. Беляева, Е. В. Эсауленко
ЗНАЧЕНИЕ ИММУНОГЕНЕТИ-ЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В РАЗВИТИИ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ, АССОЦИИРОВАННОГО С ВИРУСОМ ГЕПАТИТА С
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова
ВВЕДЕНИЕ
Хронический гепатит С (ХГС) характеризуется развитием фиброза печени, темпы прогрессирования которого среди больных неодинаковы [8, 13]. Для больных ХГС чрезвычайно важно своевременно определить вероятность развития терминальной стадии цирроза печени и его декомпенсации. Прогрессиро-вание заболевания связано преимущественно не с вирусологическими факторами, а с особенностями макроорганизма [1, 5]. Среди наиболее перспективных областей исследования ИСУ-инфекции в этом направлении - изучение роли иммуногенетических факторов в инициации, развитии и исходах цирроза печени [10, 12].
ХГС относится к мультифакторным заболеваниям [2], в патогенезе которых важную роль играет взаимодействие иммуногенетических механизмов и внешних факторов (вирус, интоксикации). Выбор генов-кандидатов для проведения исследования определяется знаниями молекулярных механизмов заболевания, структуры гена, функции белкового продукта, получаемого в результате его транскрипции, и той роли, которую он имеет в патогенезе.
Для изучения роли наследственных факторов получил широкое распространение ассоциативный анализ, предполагающий сравнение распространения аллелей среди больных и здоровых - «случай (присутствует фенотип заболевания) - контроль(фенотип заболевания отсутствует)». Появились сведения, что полиморфизмы генов, кодирующих синтез опсонинов, факторов хемотаксиса и фиброгенеза, могут влиять на про-грессирование ХГС [2].
Опубликованные к настоящему времени результаты включают исследование одного или нескольких полиморфизмов в отдельности и не содержат сведений по комбинированному анализу, включающему определение связи генотипа как совокупности ряда аллелей полиморфизмов и исхода заболевания. Представляется вероятным, что именно сочетание нескольких дефектов иммунитета, обусловленных наличием полиморфизмов одновременно в нескольких генах, белковые продукты которых вовлечены в патогенез ХГС, оказывает влияние на течение хронической вирусной инфекции.
Гены RNASEL, MBL, MCP-1, CTLA-4 и TGF-ß1 кодируют синтез белков, участвующих в иммунных реакциях. Замена нуклеотидов в области полиморфных участков ДНК этих генов приводит к изменению свойств, скорости синтеза и процессинга их белковых продуктов, что, в свою очередь, ведет к изменению характера иммунного ответа на вирусную инфекцию.
Данные о влиянии функциональных полиморфизмов RNASEL и CTLA-4 на течение ХГС отсутствуют. Опубликованы единичные работы, посвященные анализу полиморфизмов MBL, TGF-ß 1 и MCP-1, результаты которых противоречивы [6, 11, 14, 15, 17].
Цель исследования - оценить вклад полиморфизмов генов RNASEL, MBL, MCP-1, CTLA-4 и TGF-ß 1, кодирующих синтез белков иммунного ответа, в развитие цирротической стадии хронического вирусного гепатита С.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Обследованные группы составили больные хроническим вирусным гепатитом С, находившиеся на стационарном и амбулаторном лечении в Городской инфекционной больнице № 30 им. С. П. Боткина. Диагноз «ХГС» верифицировали обнаружением в крови пациентов антител к HCV методом иммунофермент-ного анализа и РНК HCV методом полимеразной цеп-
ной реакции. Длительность инфекции составила шесть месяцев и более.
Группу 1 составили 76 больных c цирротической стадией ХГС. У всех больных этой группы имели место гепатоспленомегалия и асцит, определяемые паль-паторно и подтвержденные данными ультразвукового исследования органов брюшной полости, желтуха, гипербилирубинемия, варикозное расширение вен пищевода II-III степени (по данным фиброгастродуоде-носкопии). Группу 2 составили 88 больных ХГС без проявлений отечно-асцитического синдрома. У пациентов отсутствовали HBsAg, антитела класса IgM к HAV.
Мужчины, употреблявшие более 30 г алкоголя в день, и женщины, употреблявшие более 20 г алкоголя в день, были исключены из исследования, так как установлено, что эти дозы вызывают токсическое поражение ткани печени [12].
Контрольную группу составили 122 здоровых доноров, находящихся на учете в отделении переливания крови НИИ АГ им. Д. О. Отта РАМН, сопоставимых по полу и возрасту с основной группой.
ДНК экстрагировали из слюны (1 мл), хранившейся при -20оС до использования, методом J. J. Doule (1990). Для идентификации полиморфизма + 1385G/A гена RNASEL использовали метод анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ) с созданием искусственного сайта рестрикции для эндонук-леазы Msp20 I. Полиморфизмы генов +1385G/A RNASEL, +230G/A MBL, -2518A/G MCP-1, +49A/G CTLA-4, +29T/C TGF-beta1 идентифицировали методом ПЦР-ПДРФ в соответствии с опубликованными методиками [3, 9, 16, 18]. Фрагменты ДНК разделяли электрофоретически в 8 %-м полиакриламидном геле, окрашивали бромидом этидия и идентифицировали в проходящем ультрафиолетовом свете.
Выявленное распределение частот генотипов проверяли на отклонение от равновесия Харди-Вайнбер-га с использованием критерия %2. Достоверность различий частот генотипов и аллелей в сравниваемых группах определяли с помощью %2 с учетом поправки Йетса и точного критерия Фишера. Статистически значимым считали различие при величине р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Индивидуальный анализ не выявил достоверных отличий в распределении частот генотипов и аллелей полиморфизмов генов RNASEL, MBL, CTLA-4 и TGF-ß 1 между обследованными группами.
Встречаемость комбинаций изученных полиморфизмов приведены в таблице. Распределение компаунд-ных гетерозигот по вариантным аллелям генов RNASEL, MBL, MCP-1, CTLA-4 и TGF-ß 1, несущих генотип +1385 GA RNASEL/+230 GA MBL/-2518 AG MCP-1/+49 AG CTLA-4/+29 TC TGF-в 1, при сравне-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
нии с компаундными гомозиготами по нормальным аллелям в группе больных c цирротической стадией ХГС и группе больных ХГС без проявлений отечно-асцитического синдрома значительно отличалось (p= 0,008), в то же время не было достоверного отличия при сравнении первой и контрольной групп, а также второй и контрольной группы (p=0,19 и p=0,35 соответственно).
Сходные результаты получены при сопоставлении встречаемости композитного вариантного генотипа +1385 GA(AA) RNASEL/+230 GA(AA) MBL/-2518 AG(GG) MCP-1/+49 AG(GG) CTLA-4/ +29 TC(CC) TGF-ß1, суммирующего не только гетерозиготные, но и монозиготные генотипы полиморфизмов генов RNASEL, MBL, CTLA-4, MCP-1, TGF-ß 1. Отличие частот в первой и второй группах достигало еще более значительного уровня (p=0,0009), сравнение данных первой и второй групп с контрольной группой не выявило достоверного отличия (p=0,10 и p=0,13 соответственно). Особо обращает на себя внимание факт отсутствия лиц с таким генотипом среди больных ХГС без проявлений отечно-асцитического синдрома.
Распределение композитного вариантного генотипа в обследованных группах свидетельствует о том, что хроническая вирусная инфекция способствует «рекрутированию» лиц, несущих вариантные аллели всех изученных полиморфизмов, в когорту, характеризующуюся развитием декомпенсированного цирроза печени.
Белковым продуктам изученных генов принадлежит большое значение в развитии иммунного ответа на вирусную инфекцию.
Вариантный аллель A полиморфизма +1385G/A гена RNASEL обуславливает снижение в три раза активности рибонуклеазы L - основного элемента внутриклеточного противовирусного механизма [7, 19].
Наследование мутантного аллеля A полиморфизма +230 G/A первого экзона гена MBL, который связан с заменой монокарбоновой аминокислоты глицина на дикарбоновую аминокислоту аспарагин в кол-лагеноподобном домене белка MBL и обуславливает конформационные изменения, приводящие к изменению четвертичной структуры молекулы и нарушению процесса взаимодействия с N-ацетилглюкозамином и маннозой, содержащихся в составе гликопротеинов Е1 и Е2 на поверхности вирусных частиц, приводит к ухудшению механизма элиминации вируса. Сказанное согласуется с данными о снижении вероятности устойчивого вирусологического ответа у гомо- и гетерозигот по мутантному аллелю А [9].
Репликация вирусного генома в гепатоцитах индуцирует синтез MCP-1 - ключевого фактора в процессе
Встречаемость комбинированных генотипов полиморфизмов генов MCP-1 -2518 A/G, TGF- 1 +29 T/C и CTLA-4 +49A/G у больных ХГС и в контрольной группе
Генотип Больные c цирротической стадией ХГС, N ( %) Больные ХГС, N ( %) Контрольная группа, N ( %)
+ 1385 GG RNASEL +230 GG MBL -2518 AA MCP-1 +49 AA CTLA-4 +29 TT TGF- 1 1 (1) 11 (12) 5 (4)
+ 1385 GA RNASEL +230 GA MBL -2518 AG MCP-1 +49 AG CTLA-4 +29 TC TGF- 1 3 (3) 0 (0) 1 (1)
+1385 GA(AA) RNASEL +230 GA(AA) MBL -2518 AG(GG) MCP-1 +49 AG(GG) CTLA-4 +29 TC(CC) TGF- 1 5 (6) 0 (0) 2 (2)
миграции моноцитов и Т-лимфоцитов в инфицированные ткани. Биаллельный полиморфизм -2518 A/G в по-моторной области влияет на степень экспрессии гена MCP-1, аллель G связан с более высоким уровнем продукции MCP-1 по сравнению с аллелем А [16].
TGF-ß1 является основным индуктором эпители-ально-мезенхимальной трансформации. Главными продуцентами этого цитокина являются макрофаги, а также паренхиматозные клетки печени, экспрессия гена TGF-ß 1 в которых усиливается на фоне репликации вируса. Полиморфизм в позиции +29 T/C гена TGF-ß 1 обуславливает замену лейцина на пролин, что связано с увеличением секреции белка в 2,8 раза [18].
Дальнейшее развитие клеточной иммунной реакции вызывает активацию Т-хелперов первого типа, которая в значительной степени детерминирована генетически. Аллели гена CTLA-4, несущие A или G в позиции +49 первого экзона, соответствуют треонину или аланину в лидерном пептиде молекулы CTLA-4 . Аллель G характеризуется снижением контроля над пролиферацией Т-клеток [3].
Таким образом, сочетание генетически неблагоприятных вариантов генов, кодирующих факторы внутриклеточного (рибонуклеаза L) и внеклеточного (MBL) звеньев врожденного иммунитета, может влиять на развитие цирроза при ХГС вследствие снижения эффективности противовирусного ответа.
Наряду с этим, сочетание в генотипе больных хроническим вирусным гепатитом С вариантных аллелей генов CTLA-4, MCP-1 и TGF-ß 1, чьи белковые продукты являются критическими для межклеточного взаимодействия, способствует тому, что воспалительная реакция протекает более интенсивно и риск развития цирротической стадии заболевания повышается.
Полученные результаты продемонстрировали, что изолированное влияние каждого из изученных полиморфизмов генов, белковые продукты которых вовлечены в патогенез ХГС, выражено незначительно. Это в определенной степени объясняет противоречивость публикаций о влиянии отдельных вариантов генов на формирование цирроза печени у больных ХГС. Таким образом, подтверждается представление о ХГС как о
мультифакторном заболевании и необходимости использования в исследованиях комбинированного анализа нескольких полиморфизмов генов, вовлеченных в патогенез.
Приведенные данные свидетельствуют о высокой степени достоверности использования композитного вариантного генотипа полиморфизмов генов RNASEL, MBL, CTLA-4, MCP-1 и TGF-01 для прогнозирования исхода ХГС в цирроз печени с последующей его декомпенсацией.
Вместе с тем низкая частота встречаемости этого генотипа в структуре генотипов в обследованных группах диктует необходимость расширения спектра полиморфных маркеров и проведения дальнейших исследований по изучению сочетанного влияния полиморфизмов генов иммунного ответа на течение и исход ХГС.
ЛИТЕРАТУРА
1. Cerny, A. Pathogenesis of chronic hepatitis C: immunological features of hepatic injury and viral persistence / A. Cerny, F. V. Chi-sari // Hepatology. - 1999. - № 30 (3). - P. 595-601.
2. Donaldson, P. T. Genetics of liver disease: immunogenetics and disease pathogenesis / P. T. Donaldson // Gut. - 2004. - № 53 (4). - P. 599-608.
3. Donner, H. Codon 17 polymorphism of the cytotoxic T lymphocyte antigen 4 gene in Hashimoto's thyroiditis and Addison's disease / H. Donner [et al] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1997. -№ 82 (12). - P. 4130-4132.
4. Doule, J. J. Isolation of DNA from tissue / J. J. Doule, J. L. Doule // Focus. - 1990. - № 12. - P. 13-15.
5. Friedman, S. L. Liver fibrosis - from bench to bedside / S. L. Friedman // J Hepatol. -2003. - № 38. - Suppl. 1. - P. S38-53.
6. Glas, J. The -2518 promotor polymorphism in the MCP-1 gene is not associated with liver cirrhosis in chronic hepatitis C virus infection / J. Glas [et al] // Gastroenterology. - 2004. - № 126 (7). -P. 1930-1931.
7. Han, J. Q. Sensitivity of hepatitis C virus RNA to the antiviral enzyme ribonuclease L is determined by a subset of efficient cleavage sites / J. Q. Han [et al] // J. Interferon Cytokine Res. - 2004. - № 24. -P. 664-676.
8. Marcellin, P. Fibrosis and disease progression in hepatitis C / P. Marcellin, T. Asselah, N. Boyer // Hepatology. - 2002. - № 36. -P. S47-56.
9. Matsushita, M. Hepatitis C virus infection and mutations of mannose-binding lectin gene MBL / M. Matsushita [et al] // Arch Virol. - 1998. - № 143 (4). - P. 645-651.
10. McCaughan, G. W. Fibrosis progression in chronic hepatitis C virus infection / G. W. McCaughan, J. George // Gut. - 2004. -№ 53 (3). - P. 318-321.
11. Muhlbauer, M. A novel MCP-1 gene polymorphism is associated with hepatic MCP-1 expression and severity of HCV-related liver disease / M. Muhlbauer [et al] // Gastroenterology. -2003. - № 125 (4). - P. 1085-1093.
12. NIH Consensus Statement on Management of Hepatitis C: 2002 NIH Consensus and State-of-the-Science Statements. - 2002. -Vol. 19. - № 3. - P. 30.
13. Poynard, T. Fibrosis in patients with chronic hepatitis C: detection and significance / T. Poynard, V. Ratziu, Y. Benmanov // Semin Liver Dis. - 2000. - № 20 (1). - P. 47-55.
14. Sasaki, K. Mannose-binding lectin polymorphisms in patients with hepatitis C virus infection / K. Sasaki [et al] // Scand. J. Gastroenterol. - 2000. - № 35 (9). - P. 960-965.
15. Suzuki, S. Transforming growth factor-beta-1 genetic polymorphism in Japanese patients with chronic hepatitis C virus infection / S. Suzuki [et al] // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2003. -№ 18 (10). - P. 1139-1143.
16. Szalai, C. Involvement of polymorphisms in the chemokine system in the susceptibility for coronary artery disease (CAD). Coincidence of elevated Lp(a) and MCP-1 -2518 G/G genotype in CAD patients / C. Szalai [et al] // Atherosclerosis. - 2001. - № 158 (1). - P. 233-239.
17. Wang, H. Transforming growth factor-beta1 gene polymorphisms are associated with progression of liver fibrosis in Caucasians with chronic hepatitis C infection / H. Wang [et al] // World J. Gastroenterol. - 2005. - № 11 (13). - P. 1929-1936.
18. Wood, N. A. Identification of human TGF-beta1 signal (leader) sequence polymorphisms by PCR-RFLP / N. A. Wood [et al] // J. Immunol. Methods. - 2000. - № 234 (1-2). - P. 117-122.
19. Xiang, Y. Effects of RNase L mutations associated with prostate cancer on apoptosis induced by 2',5'-oligoadenylates / Y. Xiang [et al] // Cancer Res. - 2003. - № 60. - P. 6795-6801.
РЕЗЮМЕ
Д. О. Романов, Т. В. Беляева, Е. В. Эсауленко
Значение иммуногенетических факторов в развитии цирроза печени, ассоциированного с вирусом гепатита С
Цирроз печени является основным осложнением инфекции, вызванной вирусом гепатита С, темпы прогрессирования которого у разных больных неодинаковы. Полиморфизмы генов иммунного ответа могут оказывать значительное влияние на скорость прогрессирования и исход инфекции. Полиморфизмы генов + 1385G/A RNASEL, +230G/A MBL, -2518A/G MCP-1, +49A/ G CTLA-4, +29T/C TGF-beta1 идентифицировали методом ЦЦ^-ЦД^Ф у 76 больных c цирротической стадией хронического вирусного гепатита С (ХГС), 88 больных c хроническим вирусным гепатитом С без клинико-биохимических и инструментальных признаков цирроза печени. Контрольную группу составили 122 здоровых донора. Pезультаты исследования свидетельствуют, что наследование композитного генотипа +1385 GA(AA) RNASEL/+230 GA(AA) MBL/-2518 AG(GG) MCP-1/+49 AG(GG) CTLA-4/+29 TC(CC) TGF-P1, обуславливающего синтез имму-норегуляторных протеинов, оказывает влияние на формирование цирроза печени при хронической HCV -инфекции.
Ключевые слова: хронический гепатит С, цирроз печени, полимеразная цепная реакция, полиморфизмы.
SUMMARY
Д. O. Romanov, T. V. Belyaeva, E. V. Esaulenko
Immunogenetic factors in the development of HCV-related liver cirrhosis
Liver cirrhosis is the major consequence of HCV infection and its rate of development varies between individuals. Functional polymorphisms in genes controlling the host immune response can play an important role in determining infection outcome. Polymorphisms + 1385G/A RNASEL, +230G/A MBL, -2518A/G MCP-1, +49A/G CTLA-4, +29T/C TGF-beta 1, were analyzed by PCR-RFLP techniques in 76 patients with cirrhosis due to chronic HCV infection and 88 patients with chronic hepatitis C. The control group comprised 122 healthy, unrelated blood donors. The results suggest that inheritance of the composite +1385 GA(AA) RNASEL/+230 GA(AA) MBL/-2518 AG(GG) MCP-1/+49 AG(GG) CTLA-4/+29 TC(CC) TGF-в! genotype, which appears to affect the immunoregulatory proteins production, may be associated with HCV-related liver cirrhosis.
Key words: chronic hepatitis C, liver cirrhosis, polymerase chain reaction, polymorphisms.
